37 resultados para Récepteur des estrogènes [Alpha] et [Bêta]
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Mmoire numris par la Direction des bibliothques de l'Universit de Montral.
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Les actions thrapeutiques des antidpresseurs, disponibles actuellement, requirent plusieurs semaines de traitement. Ce dlai est d aux adaptations des sites pr et post-synaptiques qui, respectivement, augmentent la disponibilit synaptique des monoamines srotonine et noradrnaline (5-HT et NA), et entranent les changements neuroplastiques modifiant la fonction neuronales dans les rgions limbiques. Il a t rcemment observ, chez un modle animal de dpression, que l’agoniste RS67333 des récepteurs srotoninergiques de type 5-HT4 produisait des changements comportementaux, lectrophysiologiques, cellulaires et biochimiques, tel qu’observ chez les antidpresseurs. Ces changements apparaissent seulement aprs 3 jours de traitement tandis que les antidpresseurs ncessitent souvent plusieurs semaines. De plus, l’activation des récepteurs 5-HT4 ne gnrait pas de tolrance, et cela pendant 21 jours de traitement. Seulement, les proprits de signalisation et de rgulation de ces récepteurs sont trs loin d’tres tablies. Nous avons alors voulu mieux caractriser ces deux aspects de leur fonction, en se concentrant d’avantage sur les isoformes a et b, fortement exprims dans le systme limbique. Pour cela, nous avons voulu valuer d’abord leur capacit de production d’AMPc dans un systme htrologue. Les essais d’accumulation d’AMPc dmontrent que les deux isoformes sont capables de moduler positivement et ngativement des niveaux d’AMPc en prsence de 5-HT. Par contre, la stimulation au RS67333 induit seulement une augmentation du niveau d’AMPc dans les deux cas. Ensemble, ces observations indiquent que les deux isoformes sont capables de coupler l’adnylate cyclase travers les protines Gαs et Gαi. La quantification des récepteurs internaliss a montr que l’isoforme b internalisait plus efficacement que l’isoforme a suite l’incubation la 5-HT (61 ± 3 % pour le b vs 40 ± 2 % pour le a). Les protines kinases PKA et PKC n’taient pas impliques dans cette diffrence, toutefois, la PKC a t trouve essentielle l’internalisation des deux isoformes. L’internalisation de l’isoforme b par 5-HT n’a pas t affect par la surexpression de forme inactive de GRK2 (GRK2- K220R) et a t partiellement inhib par un mutant ngative de la β-arrestine (βarr(319-418)), tandis que l’internalisation de l’isoforme a a t bloque par les deux. Ces observations indiquent que les mcanismes d’internalisation des deux isoformes du récepteur 5-HT4 les plus abondants dans le systme nerveux central sont distincts. Des comportements spcifiques chaque isoforme ont aussi t constats au niveau de la rgulation fonctionnelle suite l’exposition au RS67333, qui dsensibilise seulement l’isoforme b. D’aprs nos observations, nous avons conclu que les isoformes a et b diffrent dans leur proprits de signalisation et de rgulation. L’incapacit du RS67333 dsensibiliser l’isoforme a fournit un substrat molculaire pour les effets antidpressifs prolongs de cet agoniste dans les tudes pr-cliniques.
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Les récepteurs coupls aux protines-G (RCPGs) constituent la premire tape d’une srie de cascades signaltiques menant la rgulation d’une multitude de processus physiologiques. Dans le modle classique connu, la liaison du ligand induit un changement de conformation du récepteur qui mne sa forme active. Une fois activs, les RCPGs vont rguler l’activit d’une protine membranaire cible qui peut tre tant une enzyme qu’un canal ionique. L’interaction entre le récepteur et la cible ncessite l’intermdiaire d’une protine htrotrimrique appele « protine G », qui est active pour favoriser l’change du GDP (guanosine diphosphate) pour un GTP (guanosine triphosphate) et assurer la transduction du signal du récepteur l’effecteur. Les mcanismes molculaires menant l’activation des effecteurs spcifiques via l’activation des RCPGs par les protines G htrotrimriques sont encore plutt mconnus. Dans notre tude nous nous sommes intresss aux récepteurs FP et PAF, leurs ligands naturels, la PGF2α et le Carbamyl-PAF respectivement, et des ligands action antagoniste sur ces récepteurs. Des ligands considrs comme agonistes, sont des molcules qui interagissent avec le récepteur et induisent les mmes effets que le ligand naturel. Les antagonistes, par contre, sont des molcules qui interagissent avec le récepteur et bloquent l’action du ligand naturel en prvenant le changement conformationnel du complexe, et ils peuvent avoir une action comptitive ou non-comptitive. Nous avons tudi aussi des ligands orthostriques et allostriques du récepteur FP des prostaglandines et du récepteur PAF. Un ligand orthostrique peut se comporter comme agoniste ou antagoniste en se fixant au site de liaison du ligand (agoniste) naturel. Un ligand allostrique est un agoniste ou antagoniste se fixant un site autre que celui du ligand naturel entranant un changement de conformation ayant pour consquence soit une augmentation (effecteur positif), soit une diminution (effecteur ngatif) de l'activit du ligand naturel.
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Les cytokines jouent un rle fondamental dans la rgulation des processus biologiques via la cascade de signalisation JAK-STAT. Les « Suppressors of Cytokine Signalling » (SOCS), protines intracellulaires, inhibent la voie JAK-STAT. Plusieurs tudes supportent leur implication dans des maladies immunitaires, mais peu d’informations sont disponibles sur leur expression par les lymphocytes T humains. Nous postulons que les cytokines Interfron-β(IFN-β) et Interleukine-27 (IL-27), dotes d’un potentiel immuno-rgulateur, ont des rles bnfiques via l’induction des SOCS. L’impact de l’IFN-β et l’IL-27 sur l’expression des SOCS-1 et SOCS-3 par des cellules T CD8 et CD4 humaines a t tudi en utilisant des cellules sanguines de donneurs sains. L’expression de ces rgulateurs a t value aux niveaux de l’ARNm par qRT-PCR et protique par immunocytochimie. Les SOCS-1 et SOCS-3 ont t rapidement induits en ARNm dans les deux types cellulaires en rponse l’IFN-β ou l’IL-27 et une augmentation de l’expression a t confirme au niveau protique. Afin de mimer les thrapies base d’IFN-β, les cellules T ont t exposes chroniquement l’IFN-β. Aprs chaque ajout de cytokine les cellules T ont augment l’expression du SOCS-1, sans moduler le SOCS-3. L’IL-27 a induit les SOCS-1 et SOCS-3 prfrentiellement dans les cellules T CD8 ; ceci corrle avec des rsultats du laboratoire dmontrant une plus petite expression des récepteurs l’IL-27 par les lymphocytes T CD4 que les CD8. Notre projet a permis d’lucider l’expression des SOCS dans deux populations de cellules T et de clarifier les mcanismes d’actions de l’IFN-β et l’IL-27.
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Les scrtines peptidiques de l’hormone de croissance (GHRPs) constituent une classe de peptides synthtiques capables de stimuler la scrtion de l’hormone de croissance (GH). Cette activit est mdie par leur liaison un récepteur coupl aux protines G : le récepteur des scrtines de l’hormone de croissance (GHS-R1a), identifi subsquemment comme le récepteur de la ghrline. La ghrline est un peptide de 28 acides amins scrt principalement par les cellules de la muqueuse de l’estomac, qui exerce de nombreux effets priphriques indpendamment de la scrtion de l’hormone de croissance. Les effets indpendants de la scrtion de GH incluent, entre autres, des actions sur le contrle de la prise de nourriture, le mtabolisme nergtique, la fonction cardiaque, le systme immunitaire et la prolifration cellulaire. L’tude de la distribution priphrique des sites de liaison des GHRPs nous a permis d’identifier un second site, le CD36, un récepteur scavenger exprim dans plusieurs tissus dont le myocarde, l’endothlium de la microvasculature et les monocytes/macrophages. Le CD36 exprim la surface du macrophage joue un rle cl dans l’initiation du dveloppement de l’athrosclrose par la liaison et l’internalisation des lipoprotines de faible densit oxydes (LDLox) dans l’espace sous-endothlial de l’artre. L’hexarline, un analogue GHRP, a t dvelopp comme agent thrapeutique pour stimuler la scrtion de l’hormone de croissance par l’hypophyse. Sa proprit de liaison aux récepteurs GHS-R1a et CD36 situs en priphrie et particulirement sa capacit d’interfrer avec la liaison des LDLox par le CD36 nous ont incit valuer la capacit de l’hexarline moduler le mtabolisme lipidique du macrophage. L’objectif principal de ce projet a t de dterminer les effets de l’activation des récepteurs CD36 et GHS-R1a, par l’hexarline et la ghrline, le ligand endogne du GHS-R1a, sur la physiologie du macrophage et de dterminer son potentiel anti-athrosclrotique. Les rsultats montrent premirement que l’hexarline et la ghrline augmentent l’expression des transporteurs ABCA1 et ABCG1, impliqus dans le transport inverse du cholestrol, via un mcanisme contrl par le récepteur nuclaire PPARγ. La rgulation de l’activit transcriptionnelle de PPARγ par l’activation des récepteurs CD36 et GHS-R1a se fait indpendamment de la prsence du domaine de liaison du ligand (LBD) de PPARγ et est consquente de changements dans l’tat de phosphorylation de PPARγ. Une tude plus approfondie de la signalisation rsultant de la liaison de la ghrline sur le GHS-R1a rvle que PPARγ est activ par un mcanisme de concertation entre les voies de signalisation Gαq/PI3-K/Akt et Fyn/Dok-1/ERK au niveau du macrophage. Le rle de PPARγ dans la rgulation du mtabolisme lipidique par l’hexarline a t dmontr par l’utilisation de macrophages de souris htrozygotes pour le gne de Ppar gamma, qui prsentent une forte diminution de l’activation des gnes de la cascade mtabolique PPARγ-LXRα-transporteurs ABC en rponse l’hexarline. L’injection quotidienne d’hexarline un modle de souris prdisposes au dveloppement de l’athrosclrose, les souris dficientes en apoE sous une dite riche en cholestrol et en lipides, se traduit galement en une diminution significative de la prsence de lsions athrosclrotiques correspondant une augmentation de l’expression des gnes cibles de PPARγ et LXRα dans les macrophages pritonaux provenant des animaux traits l’hexarline. L’ensemble des rsultats obtenus dans cette thse identifie certains nouveaux mcanismes impliqus dans la rgulation de PPARγ et du mtabolisme du cholestrol dans le macrophage via les récepteurs CD36 et GHS-R1a. Ils pourraient servir de cibles thrapeutiques dans une perspective de traitement des maladies cardiovasculaires.
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Le diabte est un syndrome mtabolique caractris par une hyperglycmie chronique due un dfaut de scrtion de l’insuline, de l’action de l’insuline (sensibilit), ou une combinaison des deux. Plus d'un million de canadiens vivent actuellement avec le diabte. La prvalence de cette maladie est au moins trois fois plus leve chez les autochtones que dans la population canadienne en gnral. Notre quipe vise tudier les effets potentiellement antidiabtiques de certaines plantes mdicinales utilises par les Cris d'Eeyou Istchee (Baie James, Qubec) o l’adhrence aux traitements mdicamenteux est faible, en partie cause de la dconnection culturelle de ces derniers. Grce une approche ethnobotanique, notre quipe a identifi 17 plantes mdicinales utilises par cette population pour traiter des symptmes du diabte. Parmi ces plantes, l’extrait thanolique de Rhododendron groenlandicum (Th du Labrador) a montr un fort potentiel antidiabtique chez plusieurs lignes cellulaires, notamment les adipocytes (3T3-L1). Cette plante induit la diffrenciation adipocytaire probablement par l’activation du peroxisome proliferator-activated receptor gamma (PPAR γ). Cette stimulation amliore la rsistance l’insuline et constitue un mcanisme privilgi pour une classe de mdicaments antidiabtiques, les thiazolidinediones. Le but de la prsente tude est de valider l’efficacit et l’innocuit de R. groenlandicum in vivo, dans un modle animal de rsistance l’insuline, d’lucider les mcanismes par lesquels cet extrait exerce ses effets antidiabtiques et d’identifier les principes actifs responsables de son activit. L'isolation et l'identification des constituants actifs ont t ralises l’aide d'une approche de fractionnement guid par bioessai; en l'occurrence, l'adipognse. Cette approche, ralise dans la ligne adipocytaire 3T3-L1, a pour but de mesurer leur teneur en triglycrides. Des tudes in vivo ont t ralises sur le modle de souris DIO (diet induced obesity). L'extrait thanolique du R. groenlandicum a t incorpor la nourriture grasse (35% d’apport calorique lipidique) trois doses diffrentes (125, 250 et 500 mg / kg) sur une priode de 8 semaines. Des tissus cibles de l’insuline (foie, muscle squelettique et tissus adipeux) ont t rcolts afin de faire des analyses d’immunobuvardage de type western. La querctine, la catchine et l’picatchine ont t identifies comme tant les composs actifs responsables de l'effet antidiabtique du R. groenlandicum. Seules la catchine et l’picatchine activent l’adipognse uniquement forte concentration (125-150 M), tandis que la querctine l’inhibe. L’tude in vivo a montr que le traitement avec R. groenlandicum chez les souris DIO rduit le gain de poids de 6%, diminue l'hyperglycmie de 13% et l’insulinmie plasmatique de 65% et prvient l’apparition des statoses hpatiques (diminution de 42% de triglycride dans le foie) sans tre toxique. Les analyses d’immunobuvardage ont montr que R. groenlandicum stimule la voie de l’insuline via la phosphorylation de l’Akt et a augment le contenu protique en Glut 4 dans les muscles des souris traites. Par contre, dans le foie, le R. groenlandicum passerait par deux voies diffrentes, soit la voie insulino-dpendante par l’activation de l’AKT, soit la voie insulino-indpendante par la stimulation de l’AMPK. L’amlioration observe des statoses hpatiques chez les souris DIO traites, a t confirme par une baisse du facteur de transcription, SREBP-1, impliqu dans la lipognse de novo, ainsi qu’une diminution de l’inflammation hpatique (diminution de l’activit d’IKK α/β). En conclusion, l’ensemble de ces rsultats soutiennent le potentiel thrapeutique de Rhododendron groenlandicum et de ses composants actifs dans le traitement et la prvention du diabte de type 2. Nous avons valid l'innocuit et l'efficacit de cette plante issue de la mdecine traditionnelle Cri, qui pourrait tre un traitement alternatif du diabte de type 2 dans une population ayant une faible adhrence au traitement pharmacologique existant.
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L’inflammation est un procd complexe qui vise l’limination de l’agent causal de dommages tissulaires en vue de faciliter la rparation du tissu affect. La persistance de l’agent causal ou l’incapacit rsoudre l’inflammation mne un drglement homostatique chronique qui peut avoir une incidence sur la morbidit et la mortalit. L’athrosclrose est une condition inflammatoire chronique des vaisseaux sanguins dont l’origine est multifactorielle. L’hypertension et l’tat infectieux reprsentent respectivement des facteurs de risque classiques et mergents du dveloppement de cette maladie. Les fondements initiaux de l’inflammation font intervenir l’immunit inne, la premire ligne de dfense dont disposent les cellules pour rpondre un signal de danger. Le but de cette thse est d’examiner le rle pro-inflammatoire d’une famille de kinases essentielles l’immunit inne, soit celle des kinases de IkappaB (IKK) et des kinases IKK-related. Les kinases IKKalpha et IKKbeta forment le complexe IKK avec la molcule adaptatrice NEMO/IKKgamma. Ce complexe est charg d’effectuer la phosphorylation de l’inhibiteur de NF-kappaB, IkappaBalpha, ce qui mne sa dgradation et la libration du facteur de transcription NF-kappaB. Nous montrons que le peptide vasoactif angiotensine II (AngII) induit l’activit phosphotransfrase d’IKKbeta dans les VSMC par immunoprcipitation de NEMO puis essai kinase in vitro. Grce une approche ARN interfrence (ARNi) dirige contre IKK, nous montrons que cette kinase est responsable de la phosphorylation de p65/RelA. Nous montrons que le mcanisme d’induction de NF-kappaB par l’AngII est atypique, puisqu’il ne module pas IkappaBalpha, et montrons l’aide d’inhibiteurs pharmacologiques que l’activation de p65 est indpendante des voies MEK-ERK-RSK, PI3K et de la transactivation du récepteur de l’EGF. Les kinases IKK-related Tank-binding kinase 1 (TBK1) et IKK-i sont quant elles principalement actives suite une infection bactrienne ou virale. Ces kinases phosphorylent directement le facteur de transcription interferon regulatory factor (IRF)-3. Nous montrons que le cytomgalovirus humain, un pathogne associ l’athrosclrose, a la capacit d’induire l’activation de TBK1 dans les VSMC. L’usage d’ARNi dirig contre TBK1 et IKKi montre que les 2 kinases sont impliques dans l’activation d’IRF-3. De plus, nous montrons l’aide d’une ligne de VSMC exprimant une version dominante ngative d’IRF-3 que ce dernier est essentiel la synthse des chimiokines RANTES et IP-10, tel qu’analys par RT-PCR. Par ailleurs, il a rcemment t montr que les kinases IKK-related taient troitement lies la transformation oncognique, et que TBK1 tait pro-angiognique. Or, l’angiogense est le plus souvent module par la rponse hypoxique qui est d’ailleurs commune la majorit des processus inflammatoires. Le facteur de transcription hypoxia inducible factor (HIF)-1 module l’angiogense, l’inflammation et la survie cellulaire. Nous montrons l’aide de cellules Tbk1 et Ikbke -/- et d’une approche lentivirale que TBK1 est spcifiquement implique dans l’induction traductionnelle de HIF-1alpha en condition de stress hypoxique. L’expression de TBK1 est induite sous ces conditions, et cette kinase module la phosphorylation de ERK, RSK, Akt et TSC1. Les rsultats originaux prsents dans cette thse montrent donc que les kinases IKK et IKK-related exercent leurs actions pro-inflammatoires par des mcanismes distincts.
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Les rtinodes sont utiliss dans le traitement d’une varit de tumeurs malignes et lsions prcancreuses. Leurs effets dans des lignes cellulaires drives de tumeurs solides tel que le cancer du sein ont t tudis extensivement. Cependant, les bnfices dans le cancer du sein restent date peu clairs. Ceci est probablement du l’htrognit des tumeurs mammaires et la rponse trs variable aux effets antiprolifratifs de l’acide rtinoque. Dans les lignes cellulaires cancreuses mammaires, la rponse l’AR est fortement corrle au niveau d’expression du récepteur aux estrogènes alpha (ERα), qui rgule l’expression du gne qui encode le récepteur l’acide rtinoque alpha, RARA. Malgr cela, certaines lignes cellulaires ER-ngatives, comme la ligne HER2-positive SK-BR-3, ont t dcrites comme tant sensibles l’AR. Dans le Chapter 2: de cette thse, nous avons tudi les mcanismes de la signalisation ER-dpendante et ER-indpendante dans les cellules cancreuses mammaires. Nous avons utilis des lignes ER-ngatives et ER-positives pour dmontrer qu’une partie de la rponse l’AR est indpendante de la signalisation par ER. Nous avons identifi plusieurs gnes cibles primaires de l’AR qui ont des effets similaires l’AR quand ils sont surexprims dans des cellules mammaires cancreuses. Cette tude apporte une meilleure comprhension des mcanismes complexes qui mnent l’arrt de croissance induit par l’AR dans les cellules cancreuses mammaires. Dans le Chapitre 3, nous avons regard plus en dtails la signalisation ER-indpendante par l’AR dans des cellules ayant une amplification des gnes HER2 et RARA et nous avons identifi une synergie entre l’AR et le Herceptin dans ces cellules. Nous proposons que les gnes FOXO jouent une rle dans cette synergie. Les cellules SK BR 3, ayant une coamplification HER2/RARA, pourraient reprsenter une classe de tumeurs qui pourraient bnficier d’un traitement avec des rtinodes, en augmentent la rponse au Herceptin et potentiellement en rduisant la rsistance au Herceptin. En conclusion, les donnes prsentes dans cette thse aident mieux comprendre les mcanismes menant l’arrt de croissance induit par l’AR dans les cellules cancreuses mammaires et fournissent une application potentielle pour l’utilisation de l’AR dans le traitement du cancer du sein.
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Thse numrise par la Division de la gestion de documents et des archives de l'Universit de Montral.
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Mmoire numris par la Division de la gestion de documents et des archives de l'Universit de Montral.
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Les estrogènes confrent aux femmes une protection cardiovasculaire jusqu’ la mnopause. En effet, la perte des fonctions ovariennes engendre plusieurs dsordres du profil lipidique qui s’accompagnent d’une accumulation de triglycrides au foie appele statose hpatique. Le retrait des estrogènes perturbe de nombreuses voies de contrle de la cholestrolmie, provoquant simultanment une hypercholestrolmie et une statose hpatiques. Toutefois, ce jour, les mcanismes d’action du retrait des estrogènes sur le mtabolisme du cholestrol favorisant le stockage de triglycrides au foie demeurent imprcis. cet gard, les travaux de cette thse visaient clarifier l’ensemble des effets du retrait des estrogènes sur le mtabolisme du cholestrol pouvant mener la pathogense de la statose hpatique. Lors de la premire tude, l’ovariectomie (Ovx) chez la rate, un modle bien tabli de la statose, avait permis d’identifier la voie d’assemblage des lipoprotines trs faible densit (VLDL) comme lment contributif la statose. La voie des VLDL reliant tant galement une voie de transport du cholestrol, l’tude suivante a t ralise afin de comprendre le rle du cholestrol alimentaire sur les lipides hpatiques. Dans cette deuxime tude, le modle de la dite riche en lipides et en cholestrol (HFHC), aussi reconnu pour induire une statose hpatique, a permis d’tablir des liens troits entre le mtabolisme du cholestrol et celui des lipides hpatiques. tonnamment, de manire similaire l’Ovx, la dite HFHC perturbait la voie d’assemblage des VLDL. En outre, les donnes recueillies au cours de ces travaux indiquaient qu’une dysrgulation du mtabolisme des acides biliaires avait contribu la svrit de la statose hpatique induite par cette dite HFHC. Dans la continuit de ces deux premiers projets, nous nous sommes intresss aux effets concomitants du retrait des estrogènes et d’une dite HFHC sur la statose hpatique. De manire intressante, lorsque combins, l’Ovx et la dite HFHC potentialisaient non seulement l’accumulation de lipides hpatiques, mais galement les perturbations molculaires des voies sous-jacentes la statose, dont l’assemblage des VLDL et de la scrtion d’acides biliaires. Dans l’ensemble, les donnes prsentes dans la revue de littrature et dans les trois tudes relies cette thse indiquent qu’une dysrgulation du mtabolisme du cholestrol en rponse au retrait des estrogènes entrane des complications favorisant l’accumulation de lipides dans le foie.
