29 resultados para Ko wanko gaku.
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Eph kinases are the largest family of cell surface receptor tyrosine kinases. The ligands of Ephs, ephrins (EFNs), are also cell surface molecules. Ephs interact with EFNs and the receptors and ligands transmit signals in both directions, i.e., from Ephs to EFNs and from EFNs to Ephs. Ephs and EFNs are widely involved in various developmental, physiological pathophysiological processes. Our group and others have reported the roles of Ephs/EFNs in the immune system. To further investigate the function of EphBs/EFNBs in T cell development and responses, we generated EFNB1, EFNB2, EphB4 conditional gene knockout (KO) mice and EFNB1/2 double KO mice. In the projects using EFNB1 and EFNB2 knockout mice, we specifically deleted EFNB1 or EFNB2 in T cells. The mice had normal size and cellularity of the thymus and spleen as well as normal T cell subpopulations in these organs. The bone marrow progenitors from KO mice and WT mice repopulated the host lymphoid organs to similar extents. The activation and proliferation of KO T cells was comparable to that of control mice. Nave KO CD4 cells differentiated into Th1, Th2, Th17 and Treg cells similar to nave control CD4 cells. In EFNB2 KO mice, we observed a significant relative increase of CD4CD8 double negative thymocytes in the thymus. Flowcytometry analysis revealed that there was a moderate increase in the DN3 subpopulation in the thymus. This suggests that EFNB2 is involved in thymocyte development. Our results indicate that the functions of EFNB1 and EFNB2 in the T cell compartment could be compensated by each other or by other members of the EFN family, and that such redundancy safeguards the pivotal roles of EFNB1 and EFNB2 in T cell development and function. In the project using EFNB1/B2 double knockout (dKO) model, we revealed a novel regulatory function of EFNb1 and EFNb2 in stabilizing IL-7R expression on the T cell surface. IL-7 plays important roles in thymocyte development, T cell homeostasis and survival. IL-7R undergoes internalization upon IL-7 binding. In the dKO mice, we observed reduced IL-7R expression in thymocytes and T cells. Moreover, the IL-7R internalization was accelerated in dKO CD4 cells upon IL-7 stimulation. In T cell lymphoma cell line, EL4, over-expression of either EFNB1 or EFNB2 retarded the internalization of IL-7R. We further demonstrated compromised IL-7 signaling and homeostatic proliferation of dKO T cells. Mechanism study using fluorescence resonance energy transfer and immunoprecipitation demonstrated that physical interaction of EFNB1 and EFNB2 with IL-7R was likely responsible for the retarded IL-7R internalization. In the last project, using medullary thymic epithelial cell (mTEC)-specific EphB4 knockout mice, we investigated T cell development and function after EphB4 deletion in mTEC. EphB4 KO mice demonstrated normal thymic weight and cellularity. T cell development and function were not influenced by the EphB4 deletion. Lastly, the KO mice developed normal delayed type hypersensitivity. Overall, our results suggest that comprehensive cross interaction between Eph and EFN family members could compensate function of a given deleted member in the T cell development, and only simultaneous deletion of multiple EFNBs will reveal their true function in the immune system. In fact, such redundancy signifies vital roles of Ephs and EFNs in the immune system.
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La polyarthrite rhumatode (PR) est une maladie auto-immune chronique. Elle est caractrise par une inflammation persistante touchant de multiples petites articulations, causant douleurs, rougeurs, gonflements et dformations. Des tudes menes auprs de patients et danimaux ont dmontr que certains auto-anticorps, cytokines et enzymes tissue-dstructives sont des mdiateurs importants dans le dveloppement de la PR. Au cours des deux dernires dcennies, les traitements de fond (DMARDs en anglais) ont t dmontrs trs efficaces pour traiter la PR. D'autre part, des effets secondaires ont t rapports pour ces traitements, par exemple l'augmentation du risque d'infections opportunistes. Lobjectif de ce travail est dacqurir des connaissances sur le rle du TL1A (TNF-like molcule 1 A; TNFSF15) et son partenaire Nob1 (Pno1 ; YOR145c) dans la pathogense de la PR afin de dcouvrir de nouveaux mdicaments contre ces molcules dans l'avenir. TL1A est un membre de la famille du TNF. Il dclenche des signaux co-stimulateurs via le rcepteur de mort 3 (DR3) et induit la prolifration ainsi que la production des cytokines pro inflammatoires par les lymphocytes. Des donnes multiples suggrent l'implication de la cascade TL1A-DR3 dans plusieurs maladies auto-immunes. Donc, nous avons propos les hypothses suivantes:1) la production locale de TL1A dans les articulations est un composant dun cercle vicieux qui aggrave la PR; 2) dans la PR, la production de TL1A dans les organes lymphode augmente la production dauto-anticorps pathognique. Au cours de ce travail, nous avons dmontr que la TL1A aggrave la maladie chez les souris o larthrite a t induite par le collagne (AIC). Par ailleurs, nous avons constat que lexpression de TL1A est leve dans les tissus atteints de PR ainsi que dans les ganglions lymphatiques drainant de la souris AIC. Mcaniquement, nous avons dcouvert que la TL1A est induite par le TNF- et IL-17 produits par les cellules T in vitro. Ces rsultats montrent directement que les TL1A-DR3 jouent un rle essentiel dans la pathogense de la PR. De plus, afin de poursuivre notre tude, la TL1A a t gntiquement supprime dans les souris (TL1A KO). Nous avons montr que les souris TL1A KO nont aucune anomalie apparente et aucun dysfonctionnement du systme immunitaire dans des conditions normales. Cependant, ces souris manifestent des AIC amliores et une rduction significative des niveaux d'anticorps, anti-collagne du type II i dans le srum. Nous avons trouv que les ganglions lymphatiques de drainage (dLNs) de souris KO taient plus petites avec une cellularit infrieure comparativement aux souris WT de 14 jours aprs limmunisation. De plus, nous avons dcouvert que le DR3 a t exprim par les cellules plasmatiques dans ltape de la diffrenciation terminale et ces cellules surviennent mieux en prsence de TL1A. La conclusion de cette tude apporte des nouvelles connaissances sur le rle de TL1A qui amplifie les rponses humorales dAIC. Nous avons suggr que TL1A pourrait augmenter la rponse dinitiation d'anticorps contre collagne II (CII) ainsi que prolonger la survie des cellules plasmatiques. Une autre molcule qui nous intresse est Pno1. Des tudes antrieures menes chez la levure ont suggr que Pno1 est essentielle pour la nognse du protasome et du ribosome Le protasome tant crucial pour la diffrenciation terminale des cellules plasmatiques pendant les rponses humorales chez les mammifres, nous avons donc suppos que Pno1 joue un rle dans la production d'anticorps pathogenique dans la PR via la voie du protasome. Nous avons donc gnr des souris gntiquement modifies pour Pno1 afin dtudier la fonction de Pno1 in vivo. Cependant, une mutation non-sens dans le Pno1 provoque une ltalit embryonnaire un stade trs prcoce chez les souris. D'autre part, une rduction de 50% de Pno1 ou une surexpression de Pno1 nont aucun effet ni sur le fonctionnent des cellules T et B, ni sur les activits du protasome ainsi que sur la rponse humorale dans lAIC. Ces rsultats suggrent que Pno1 est une molcule essentielle sans redondance. Par consquent, il nest pas une cible approprie pour le dveloppement de mdicaments thrapeutiques. En conclusion, nos tudes ont rvl que la TL1A nest pas essentielle pour maintenir les fonctions du systme immunitaire dans des conditions normales. En revanche, il joue un rle critique dans la pathogense de la PR en favorisant l'inflammation locale et la rponse humorale contre des auto-antignes. Par consquent, une inhibition de la TL1A pourrait tre une stratgie thrapeutique pour le traitement de la PR. Au contraire, Pno1 est essentiel pour la fonction normale des cellules. Une dltion totale pourrait entraner des consquences graves. Il nest pas une cible approprie pour dvelopper des mdicaments de la PR.
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Introduction: Notre laboratoire a prcdemment tabli que Hoxa9 acclrait lapparition de leucmie de type B induite par E2A-PBX1. Une analyse par qRT-PCR a montr que les niveaux dARN de Flt3, une cible de Hoxa9, taient 32 fois plus levs dans les leucmies Hoxa9/E2A-PBX1 par rapport que dans les leucmies E2A-PBX1. Il est important de noter que lexpression aberrante de Flt3 est retrouve dans les leucmies ALL de type B et les AML. De plus, lactivation constitutive de Flt3 est associe un faible pronostic. Nous avons pos lhypothse que la maintenance/r-initiation des leucmies de type pr-B induites par E2A-Pbx1 est associe la prsence du rcepteur Flt3. Mthodes et Rsultats: Premirement, nous avons analys par FACS la prsence de Flt3 et mesur lexpression de Flt3 par qRT-PCR des cellules E2A-PBX1 leucmiques pr-B. Nous avons montr que les cellules leucmiques E2A-PBX1 expriment lARNm du gne Flt3. Cependant, le rcepteur ntait dtectable la surface cellulaire que dans des proportions variant de 0.3 28%. Deuximement, nous avons valu le potentiel leucmique des fractions positive et ngative pour Flt3. Toutes deux ont t capables de r-initier la leucmie environ 20 jours aprs transplantation. Des analyses par FACS ont montr quune proportion de cellules leucmiques exprimaient Flt3, incluant mme celles provenant de la fraction Flt3-. Troisimement, une stratgie de perte de fonction de Flt3 par shARN a t mise en uvre afin dexaminer le rle de la voie de signalisation de Flt3 dans les cellules leucmiques E2A-PBX1. Pour ce faire, des cellules primaires leucmiques ont t infectes, soit par le shARN anti-Flt3 soit shARN contrle, et transplantes dans des souris receveuses. Les cellules leucmiques contenant le shARN ont t capables de rgnrer la leucmie. Cependant, une proportion des cellules exprimaient toujours Flt3, ce qui indique que lefficacit des shARn ntait pas suffisante. Conclusion et Perspectives: Nos shARN ne sont pas suffisamment efficaces sur les cellules leucmiques choisies. De ce fait, nous proposons dutiliser des cellules leucmiques moins agressives tout en ralisant le mme set-up exprimental. Des transplantations dans des receveurs KO Flt3-/- seraient galement requises afin de rellement tudier limpact de la voie de signalisation Flt3 dans la r-initiation leucmique.
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L'arthrose est une maladie articulaire dgnrative, avec une pathogense inconnue. Des tudes rcentes suggrent que l'activation du facteur de transcription du rcepteur activateur de la prolifration des peroxysomes (PPAR) gamma est une cible thrapeutique pour ce maladie. Les agonistes du PPAR inhibent l'inflammation et rduisent la synthse des produits de dgradation du cartilage in vitro et in vivo. Cependant, des tudes utilisant des agonistes du PPAR nlucident pas les effets exacts mdis par ce gne complexe. En effet, certains de ces agonistes ont la capacit de rgulariser d'autres voies de signalisation indpendantes de PPAR, ainsi entranant des effets secondaires graves. Afin d'obtenir une efficacit thrapeutique avec potentiellement moins de problmes de scurit, il est donc essentiel d'lucider, in vivo, le rle exact de PPAR dans la physiopathologie OA. Mon projet de thse permettra de dterminer, pour la premire fois, le rle spcifique de PPAR in vivo dans la physiopathologie OA. Les souris utilises pour ltude avaient une dltion conditionnelle du gne PPAR dans le cartilage. Ces dernires ont t gnres en employant le systme LoxP/Cre. Pour tester cette hypothse, j'ai gnr deux types de souris avec une dltion au PPAR, (a) une suppression du gne PPAR spcifiquement dans le cartilage germinale pour l'tude de l'arthrose lie au dveloppement et l'ge et (b) la suppression inductible du gne PPAR spcifiquement dans le cartilage chez la souris adulte pour les tudes OA. Ltude prcdente dans notre laboratoire, utilisant ces souris ayant une dltion au gne PPAR germinales, montre que ces souris prsentent des anomalies du dveloppement du cartilage. J'ai galement explor si ces souris qui prsentent des dfauts prcoces du dveloppement ont toutes les modifications phnotypiques dans le cartilage au cours du vieillissement. Mes rsultats ont montr que les souris adultes, ayant une dltion au gne PPAR, ont prsenter un phnotype de l'arthrose spontane associe une dgradation du cartilage, lhypocellularit, la fibrose synoviale. Cette tude a montr que PPAR est un rgulateur essentiel pour le cartilage, et cest le manque (labsence) de ce dernier qui conduit un phnotype de l'arthrose spontane acclre (American Journal of Pathologie). A partir de ce but de l'tude, on na pas pu vrifier si ces souris prsentaient lOA spontane en raison des dfauts de dveloppement ou la suite de la dltion du gne PPAR. Pour contourner les dfauts de dveloppement, j'ai gnr des souris ayant une dltion du gne PPAR spcifiquement dans le cartilage inductible avec le systme Col2rTACre. Ces souris ont t soumises modle de la chirurgie OA (DMM: dstabilisation du mnisque mdial) et les rsultats rvlent que les souris PPAR KO ont une dgradation acclre du cartilage, une hypocellularit, une fibrose synoviale et une augmentation de l'expression des marqueurs cataboliques et des marqueurs inflammatoire. La perte de PPAR dans le cartilage articulaire est un vnement critique qui initie la dgradation de cartilage dans OA. Les tudes rcentes suggrent que le procs dautophagie, une forme de survie cellulaire programme, est altr pendant lOA et peut contribuer vers une protection diminue des cellules, rsultant la dgradation du cartilage. Jai donc explor le rle de PPAR dans la protection des cellules en dterminant leffet de manque de PPAR dans le cartilage par lexpression de mTOR (rgulateur ngatif principal dautophagie) et les gnes dautophagie durant OA. Mes rsultats ont montr que les souris KO PPAR prsentent galement une augmentation sur l'expression de mTOR et une diminution sur lexpression des marqueurs autophagiques en comparaison avec les chondrocytes articulaires isols des souris contrles OA. J'ai suggr l'hypothse que PPAR contrle la rgulation de la signalisation de mTOR/autophagie, et finalement la mort des chondrocytes et lexpression des facteurs cataboliques et les facteurs inflammatoire. Pour tester cette hypothse, jai fait la transfection des chondrocytes arthrosiques PPAR-KO avec le vecteur dexpression de PPAR pour dterminer si la restauration de l'expression de PPAR peut sauver le phnotype des cellules PPAR-KO OA. J'ai observ que la restauration de l'expression de PPAR dans les cellules PPAR-KO en prsence du vecteur d'expression PPAR, a pu considrablement rgulariser ngativement l'expression de mTOR et mettre en rgle positivement l'expression des gnes autophagiques ainsi que le sauvetage significative de l'expression du collagne de type II et laggrecan et de baisser de manire significative l'expression de marqueurs cataboliques critiques et des marqueurs inflammatoires. Pour prouver que laugmentation de la signalisation de mTOR et la diminution de l'autophagie est responsable du phnotype OA acclre observe dans les souris PPAR KO in vivo, j'ai gnr les souris doubles KO PPAR- mTOR inductible spcifique du cartilage en utilisant le systme Col2 - rtTA -Cre et soumis ces souris DMM modle de l'arthrose. Mes rsultants dmontrent que les souris avec PPAR- mTOR doubles KO ont t significativement protgs contre les OA DMM induites associes une protection significative contre la destruction du cartilage, la perte de protoglycanes et la perte de chondro-cellularit par rapport aux souris tmoins. Considrant que mTOR est un rpresseur majeur de l'autophagie, j'ai trouv que l'expression de deux marqueurs de l'autophagie critiques (ULK1 et LC3B) a t significativement plus leve dans les chondrocytes extraits les souris doubles KO PPAR-mTOR par rapport aux souris tmoins. En plus, les tudes de sauvetage in vitro en utilisant le vecteur d'expression PPAR et les tudes in vivo utilisant les souris doubles KO PPAR- mTOR montrent que PPAR est impliqu dans la rgulation de la protine signalant de mTOR/autophagie dans le cartilage articulaire. Ces rsultats contournent PPAR et sa signalisation en aval de mTOR/autophagie en tant que cibles thrapeutiques potentielles pour le traitement de l'arthrose.
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Chez les humains, un large pourcentage de leucmies mylodes et lymphodes exprime des gnes Homobox (Hox) de faon aberrante, principalement ceux du groupe des gnes Hoxa. Cette drgulation de lexpression des gnes Hox peut provenir directement des translocations impliquant des gnes Hox ou indirectement par dautres protines ayant un potentiel oncognique. De plus, plusieurs tudes indiquent que les gnes Hox jouent un rle essentiel dans l'initiation de diverses leucmies. Comprendre le fonctionnement des gnes Hox dans l'hmatopose normale est donc une condition pralable pour lucider leurs fonctions dans les leucmies, ce qui pourrait ventuellement conduire llaboration de nouveaux traitements contre cette maladie. Plusieurs tudes ont tent dlucider les rles exacts des gnes Hox dans l'hmatopose via lutilisation de souris mutantes pour un seul gne Hox. Or, en raison du phnomne de redondance fonctionnelle chez cette famille de gnes, ces tudes ont t peu concluantes. Il a t prcdemment dmontr que dans une population de cellules enrichies en cellules souches hmatopotiques (CSH), les gnes du cluster Hoxa sont plus exprims que les gnes Hox des autres clusters. Aussi, il a t tabli que les gnes du cluster Hoxb sont non essentiels lhmatopose dfinitive puisque les CSH mutantes pour les gnes Hoxb1-9 conservent leur potentiel de reconstitution long terme. En nous basant sur ces donnes, nous avons mis l'hypothse suivante : les gnes Hoxa sont essentiels pour l'hmatopose normale adulte. Pour tester notre hypothse, nous avons choisi dutiliser un modle de souris comportant une dltion pour lensemble des gnes Hoxa. Dans le cadre de cette recherche, nous avons dmontr que les CSH, les progniteurs primitifs et les progniteurs des cellules B sont particulirement sensibles au niveau d'expression des gnes Hoxa. Plus particulirement, une baisse de la survie et une diffrenciation prmature semblent tre lorigine de la perte des CSH Hoxa-/- dans la moelle osseuse. Lanalyse du profil transcriptionnel des CSH par squenage de l'ARN a rvl que les gnes Hoxa sont capables de rguler un vaste rseau de gnes impliqus dans divers processus biologiques. En effet, les gnes Hoxa rgulent lexpression de plusieurs gnes codant pour des rcepteurs de cytokine. De plus, les gnes Hoxa influencent lexpression de gnes jouant une fonction dans larchitecture de la niche hmatopotique. Lexpression de plusieurs molcules dadhsion est aussi module par les gnes Hoxa, ce qui peut affecter la relation des CSH avec la niche hmatopotique. Lensemble de ces rsultats dmontre que les gnes Hoxa sont d'importants rgulateurs de l'hmatopose adulte puisquils sont ncessaires au maintien des CSH et des progniteurs grce leurs effets sur plusieurs processus biologiques comme l'apoptose, le cycle cellulaire et les interactions avec la niche.
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La leptine circule en proportion de la masse graisseuse du corps et la transduction de son signal travers la forme longue de son rcepteur via un certain nombre de voies neurales , y compris MAPK, PI3-K ,AMPK et JAK2 - STAT3 . Il faut noter que STAT3 constitue une voie cle au rcepteur de la leptine par laquelle la leptine module l'expression des gnes impliqus dans la rgulation du bilan nergtique. La plupart des recherches ont port sur la fonction du rcepteur de la leptine au sein de l' hypothalamus, en particulier la fonction du rcepteur de la leptine dans le noyau arqu. Toutefois, les rcepteurs de la leptine sont galement exprims sur les neurones dopaminergiques de l'aire tgmentale ventrale et la leptine agit sur cette rgion du cerveau pour influencer la prise alimentaire, la motivation, la locomotion, l'anxit et la transmission de la dopamine. De plus, la leptine active la STAT3 dans les dopaminergiques et GABAergiques populations neuronales. Bien que ces rsultats contribuent notre comprhension des multiples actions de la leptine dans le systme nerveux central, il reste rsoudre les cellules et la signalisation du rcepteur de la leptine qui sont responsables des effets neurocomportementaux de la leptine dans le msencphale. Visant dterminer la contribution de la voie de signalisation STAT3 dans les neurones dopaminergiques du msencphale, nous avons gnr une ligne de souris knockout conditionnel dans lequel l'activation du gne de STAT3 sur son rsidu tyrosine 705 ( Tyr 705 ) est absent spcifiquement dans les neurones dopaminergiques. Avec l'utilisation de ce modle de souris gntique, nous avons valu l'impact de l'ablation de la signalisation STAT3 dans les neurones dopaminergiques sur un certain nombre de fonctions lies la dopamine, y compris l'alimentation, la locomotion, les comportements lis la rcompense, l'motion et la libration de dopamine dans le noyau accumbens. Fait intressant, nous avons observ un dimorphisme sexuel dans le phnotype des souris STAT3DAT-KO. L'activation de la voie de signalisation STAT3 dans les neurones dopaminergiques est responsable de l'action de la leptine dans la rduction de la locomotion, rcompense lie l'activit physique, et de l'augmentation de la libration et de la disponibilit de la dopamine chez les souris mles. Cependant, il ne module pas le comportement motionnel. D'autre part, les souris femelles STAT3DAT-KO augmentent les niveaux d'anxit et les niveaux plasmatiques de corticostrone, sans provoquer de changements de la dpression. Cependant, la perte d'activation de STAT3 dans les neurones dopaminergiques ne module pas le comportement locomoteur chez les souris femelles. Notamment, les actions de la leptine dans le msencphale pour influencer le comportement alimentaire ne sont pas mdies par l'activation de STAT3 dans les neurones dopaminergiques, considrant que les souris mles et femelles ont un comportement alimentaire normal. Nos rsultats dmontrent que la voie de signalisation STAT3 dans les neurones dopaminergiques est responsable des effets anxiolytiques de la leptine, et soutient l'hypothse que la leptine communique l'tat d'nergie du corps (i.e. la relation entre la dpense et les apports nergtiques) pour les rgions msolimbiques pour attnuer les effets de motivation et de rcompense de plusieurs comportements qui servent rhabiliter ou puiser les rserves d'nergie. En outre, ce travail souligne l'importance d'tudier la modulation de la signalisation de la leptine dans diffrente types de cellules, afin d'identifier les voies de signalisation et les mcanismes cellulaires impliqus dans les diffrentes fonctions neuro-comportementales de la leptine.
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La scoliose est la dformation de la colonne vertbrale la plus rpandue. Elle atteint 3 4% de la population pdiatrique et dans 85% des cas, aucune cause na t identifie. Ces cas sont appels idiopathiques et les symptmes apparaissent durant la pubert; do le terme de scoliose idiopathique de ladolescent (SIA). Cette pathologie atteint le plus souvent les jeunes filles, en nombre et en svrit. Ces dernires annes, plusieurs hypothses ont t proposes afin dlucider ltiologie de cette pathologie. Celles-ci ont mis de lavant diffrents facteurs gntiques, biochimiques, mcaniques, neurologiques, musculaires ou hormonaux. Plusieurs tudes ont rapport des formes familiales de scoliose, soutenant la thse dune prdisposition gntique. Nous avons dmontr que les patients souffrant de SIA prsentent un dfaut de signalisation cellulaire mdie par les protines Gi et un taux lev dostopontine (OPN) circulante. En utilisant une approche de type gne candidat, nous avons montr que la protine tyrosine phosphatase (PTP) rgule lactivit du complexe dintgrines 5/1 (rcepteur de lOPN) via la protine kinase PIPKI. Dans ce but, nous avons utilis des cultures primaires dostoblastes issues de biopsies de patients et de cas traumatiques comme sujets contrles. Les biopsies osseuses de patients ont t obtenues lors de lintervention chirurgicale partir des vertbres T3 L4, selon les diffrentes procdures. Les biopsies issues de cas traumatiques proviennent dautres types dos (tibia, crte iliaque, fmur). Les profils dexpression du gne PTPRM (codant pour la protine PTP) ont t tudis par PCR quantitative (qPCR). Les taux de protines PTP ont t analyss par immunoprcipitation suivi dun western blot. Pour valuer le rle de cette protine, nous avons bnfici dun modle murin. Machida et al. ont dmontr quil existe un taux plus lev de scoliose parmi les souris C57Bl/6 bipdes obtenues suite lamputation des membres suprieurs, sous anesthsie, cinq semaines aprs la naissance. Nous avons utilis des cultures primaires dostoblastes issues de la colonne ii vertbrale de souris C57Bl/6 bipdes, dltes du gne PTPRM (souris dites KO), afin dvaluer le niveau de signalisation cellulaire spcifique des protines Gi par un test fonctionnel: la technique de spectroscopie cellulaire di-lectrique (SCD). Selon nos donnes, 85% des souris bipdales KO pour le gne PTPRM dveloppent une scoliose (modre svre) contre 55% des souris contrles C57Bl6 bipdes. De plus, les niveaux de PTP exprime par les ostoblastes de 34 patients SIA se trouvent diminus par comparaison 17 sujets contrles. Nos tudes de souris bipdes ont montr que linactivation du gne PTPRM augmente lincidence et la svrit de la scoliose, sans pour autant affecter les taux circulant dOPN ou lexpression de ses rcepteurs. Par ailleurs, dans ce mme contexte, nous avons remarqu une augmentation de linteraction entre lOPN et lintgrine 1 en labsence du gne PTPRM. Les cellules issues de ces souris bipdes KO montrent une rduction dans leurs niveaux de signalisation cellulaire mdie par les protines Gi aprs stimulation par lOPN. Cette diminution est en grande partie rcupre aprs traitement des cellules par un siRNA spcifique de la protine PIPK1, substrat de PTP qui favorise la fixation de ligands aux intgrines. Ces tudes apportent les premires indications que la perte dexpression de PTP est implique dans le dveloppement de la SIA, en amplifiant probablement leffet inhibiteur de lOPN sur la signalisation cellulaire mdie par les protines Gi. Ces tudes permettent une meilleure comprhension de ltiologie de la SIA. Elles pourraient avoir une contribution importante dans le dveloppement futur de mthodes diagnostique et thrapeuthique dans le but d'arrete lapparition et lvolution de la maladie chez les enfants atteints.
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La dubiquitinase BAP1 ( BRCA1-Associated Protein1 ) a initialement t isole pour sa capacit de promouvoir la fonction suppressive de tumeurs de BRCA1. BAP1 est mut de manire homozygote dans plusieurs cancers (tel que le cancer du rein, de la peau, de loeil et du sein) suggrant fortement que cette dubiquitinase est un suppresseur de tumeurs. Effectivement, la surexpression de BAP1 rduit la prolifration cellulaire et la croissance tumorale dans des modles de xnogreffe de souris. Toutefois, la fonction biologique et le mcanisme daction de cette dubiquitinase restent encore marginalement connus. Ainsi, les objectifs de cette thse sont de caractriser la fonction biologique de BAP1 et de rvler les bases molculaires de sa fonction suppressive de tumeurs. Pour dterminer la fonction biologique de BAP1, nous avons immuno-purifi et identifi les protines associes BAP1, qui savrent tre principalement des facteurs et co-facteurs de transcription. Ensuite, nous avons dmontr que BAP1 est un rgulateur de la transcription. Paralllement, un autre groupe a montr que BAP1 chez la drosophile, Calypso, rgule lubiquitination de H2A et la transcription gnique. Dautre part, nos rsultats danalyse dexpression gnique globale suggrent que BAP1 jouerait un rle important dans la rponse aux dommages lADN. Effectivement, des expriences de gain et de perte de fonction (mthode de lARNi, modle de cellules KO en BAP1 et de cellules dficientes en BAP1 re-exprimant BAP1) ont rvl que cette dubiquitinase rgule la rponse aux bris double brin dADN par la recombinaison homologue. Nos rsultats suggrent que BAP1 exerce sa fonction suppressive de tumeurs en contrlant la rparation sans erreur de lADN via la recombinaison homologue. En cas dinactivation de BAP1, les cellules deviendront plus dpendantes du mcanisme de rparation par jonction d'extrmits non-homologues, qui est potentiellement mutagnique causant ainsi linstabilit gnomique. Dautres tudes seront ncessaires afin de dterminer le rle exact de BAP1 dans la transcription et de comprendre comment la drgulation de lubiquitination de H2A contribue au dveloppement du cancer. Dfinir les mcanismes de suppression tumorale est de grand intrt, non seulement pour comprendre la carcinognse mais galement pour le dveloppement de nouvelles thrapies contre cette maladie.
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La protine dchafaudage Gab1 amplifie la signalisation de plusieurs rcepteurs fonction tyrosine kinase (RTK). Entre autres, elle promeut la signalisation du VEGFR2, un RTK essentiel la mdiation de langiogense via le VEGF dans les cellules endothliales. En rponse au VEGF, Gab1 est phosphoryl sur tyrosine, ce qui rsulte en la formation dun complexe de protines de signalisation impliqu dans le remodelage du cytosquelette dactine et la migration des cellules endothliales. Gab1 est un modulateur essentiel de langiogense in vitro et in vivo. Toutefois, malgr limportance de Gab1 dans les cellules endothliales, les mcanismes molculaires impliqus dans la mdiation de ses fonctions, demeurent mal dfinis et la participation du second membre de la famille, Gab2, reste inconnue. Dans un premier temps, nous avons dmontr que tout comme Gab1, Gab2 est phosphoryl sur tyrosine, quil sassocie de faon similaire avec des protines de signalisation et quil mdie la migration des cellules endothliales en rponse au VEGF. Cependant, contrairement Gab1, Gab2 ninteragit pas avec le VEGFR2 et nest pas essentiel pour lactivation dAkt et la promotion de la survie cellulaire. En fait, nous avons constat que lexpression de Gab2 attnue lexpression de Gab1 et lactivation de la signalisation mdie par le VEGF. Ainsi, Gab2 semble agir plutt comme un rgulateur ngatif des signaux pro-angiogniques induits par Gab1. La migration cellulaire est une des tapes cruciales de langiogense. Nous avons dmontr que Gab1 mdie lactivation de la GTPase Rac1 via la formation et la localisation dun complexe protique incluant la GEF VAV2, la p120Catnine et la Cortactine aux lamellipodes des cellules endothliales en rponse au VEGF. De plus, nous montrons que lassemblage de ce complexe corrle avec la capacit du VEGF induire linvasion des cellules endothliales et le bourgeonnement de capillaires, deux phnomnes essentiels au processus angiognique. La rgulation des RhoGTPases est galement rgule par des inactivateurs spcifiques les Rho GTPases activating proteins , ou GAPs. Nous dcrivons ici pour la premire fois le rle de la GAP CdGAP dans les cellules endothliales et dmontrons son importance dans la mdiation de la signalisation du VEGF via la phosphorylation sur tyrosine de Gab1 et lactivation des RhoGTPases Rac1 et Cdc42. Ainsi, d son importance sur lactivation de voies de signalisation du VEGF, CdGAP reprsente un rgulateur crucial de la promotion de diverses activits biologiques essentielles langiogense telles que la migration cellulaire, et le bourgeonnement de capillaires in vitro et daortes de souris ex vivo. De plus, les embryons de souris CdGAP KO prsentent des hmorragies et de ldme, et ces dfauts vasculaires pourraient tre responsables de la mortalit de 44% des souris CdGAP knock-out attendues. Nos tudes amnent donc une meilleure comprhension des mcanismes molculaires induits par le VEGF et dmontrent limplication centrale de Gab1 et des rgulateurs des RhoGTPases dans la promotion de langiogense. Cette meilleure comprhension pourrait mener lidentification de nouvelles cibles ou approches thrapeutiques afin damliorer le traitement des patients souffrant de maladies associes une novascularisation incontrle telles que le cancer.
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Le cycle glycrolipides/acides gras libres (GL/FFA) est une voie mtabolique cl qui relie le mtabolisme du glucose et des acides gras et il est compos de deux processus mtaboliques appels lipogense et lipolyse. Le cycle GL/FFA, en particulier la lipolyse des triglycrides, gnre diverses molcules de signalisation pour rguler la scrtion d'insuline dans les cellules bta pancratiques et la thermogense non-frissonnante dans les adipocytes. Actuellement, les lipides provenant spcifiquement de la lipolyse impliqus dans ce processus sont mal connus. Lhydrolyse des triglycrides dans les cellules est ralise par les actions successives de la triglycride lipase adipocytaire pour produire le diacylglycrol, ensuite par la lipase hormono-sensible pour produire le monoacylglycrol (MAG) et enfin par la MAG lipase (MAGL) qui relche du glycerol et des acides gras. Dans les cellules bta, la MAGL classique est trs peu exprime et cette tude a dmontr que lhydrolyse de MAG dans les cellules est principalement ralise par l'/-Hydrolase Domain-6 (ABHD6) nouvellement identifie. Linhibition dABHD6 par son inhibiteur spcifique WWL70, conduit une accumulation des 1-MAG longues chaines satures l'intrieur des cellules, accompagne dune augmentation de la scrtion d'insuline stimule par le glucose (GSIS). Baisser les niveaux de MAG en surexprimant ABHD6 dans la ligne cellulaire bta INS832/13 rduit la GSIS, tandis quune augmentation des niveaux de MAG par le knockdown dABHD6 amliore la GSIS. L'exposition aigu des monoacylglycrols exognes stimule la scrtion d'insuline de manire dose-dpendante et restaure la GSIS supprime par un inhibiteur de lipases appel orlistat. En outre, les souris avec une inactivation du gne ABHD6 dans tous les tissus (ABHD6-KO) et celles avec une inactivation du gne ABHD6 spcifiquement dans la cellule prsentent une GSIS stimule, et leurs lots montrent une augmentation de la production de monoacylglycrol et de la scrtion d'insuline en rponse au glucose. Linhibition dABHD6 chez les souris diabtiques (modle induit par de faibles doses de streptozotocine) restaure la GSIS et amliore la tolrance au glucose. De plus, les rsultats montrent que les MAGs non seulement amliorent la GSIS, mais potentialisent galement la scrtion dinsuline induite par les acides gras libres ainsi que la scrtion dinsuline induite par divers agents et hormones, sans altration de l'oxydation et l'utilisation du glucose ainsi que l'oxydation des acides gras. Nous avons dmontr que le MAG se lie la protine damorage des vsicules appele Munc13-1 et lactive, induisant ainsi lexocytose de l'insuline. Sur la base de ces observations, nous proposons que le 1-MAG chaines satures agit comme facteur de couplage mtabolique pour rguler la scrtion d'insuline et que ABHD6 est un modulateur ngatif de la scrtion d'insuline. En plus de son rle dans les cellules bta, ABHD6 est galement fortement exprim dans les adipocytes et son niveau est augment avec l'obsit. Les souris dpourvues globalement dABHD6 et nourris avec une dite riche en gras (HFD) montrent une faible diminution de la prise alimentaire, une diminution du gain de poids corporel et de la glycmie jeun et une amlioration de la tolrance au glucose et de la sensibilit l'insuline et ont une activit locomotrice accrue. En outre, les souris ABHD6-KO affichent une augmentation de la dpense nergtique et de la thermogense induite par le froid. En conformit avec ceci, ces souris prsentent des niveaux levs dUCP1 dans les adipocytes blancs et bruns, indiquant le brunissement des adipocytes blancs. Le phnotype de brunissement est reproduit dans les souris soit en les traitant de manire chronique avec WWL70 (inhibiteur dABHD6) ou des oligonuclotides anti-sense ciblant lABHD6. Les tissus adipeux blanc et brun isols de souris ABHD6-KO montrent des niveaux trs levs de 1-MAG, mais pas de 2-MAG. L'augmentation des niveaux de MAG soit par administration exogne in vitro de 1-MAG ou par inhibition ou dltion gntique dABHD6 provoque le brunissement des adipocytes blancs. Une autre vidence indique que les 1-MAGs sont capables de transactiver PPAR et PPAR et que l'effet de brunissement induit par WWL70 ou le MAG exogne est aboli par les antagonistes de PPAR et PPAR. Ladministration in vivo de lantagoniste de PPAR GW6471 des souris ABHD6-KO inverse partiellement les effets causs par linactivation du gne ABHD6 sur le gain de poids corporel, et abolit laugmentation de la thermogense, le brunissement du tissu adipeux blanc et l'oxydation des acides gras dans le tissu adipeux brun. Lensemble de ces observations indique que ABHD6 rgule non seulement lhomostasie de l'insuline et du glucose, mais aussi l'homostasie nergtique et la fonction des tissus adipeux. Ainsi, 1-MAG agit non seulement comme un facteur de couplage mtabolique pour rguler la scrtion d'insuline en activant Munc13-1 dans les cellules bta, mais rgule aussi le brunissement des adipocytes blancs et amliore la fonction de la graisse brune par l'activation de PPAR et PPAR. Ces rsultats indiquent que ABHD6 est une cible prometteuse pour le dveloppement de thrapies contre l'obsit, le diabte de type 2 et le syndrome mtabolique.
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Linflammation fait partie des processus ractionnels de dfense dont dispose lorganisme en rponse aux agressions, assurant lintgrit de lhte. En rponse au dommage tissulaire, plusieurs mdiateurs inflammatoires interviennent dans le processus de linflammation. Lors de ces dommages, des signaux de dangers provenant de cellules endommages sont relchs dans lenvironnement tissulaire, pouvant causer des dommages cellulaires et tissulaires. Les macrophages, tout comme dautres cellules, peuvent tre activs par ces signaux de danger, menant la scrtion de molcules telles que des cytokines et des chimiokines pouvant modifier le microenvironnement tissulaire. Les insultes au tissu sain peuvent entrainer la mort cellulaire telle que lapoptose. Les molcules pouvant tre relches lors de celle-ci contribuent au microenvironnement, notamment de par linfluence de celles-ci sur le macrophage. Parmi ces mdiateurs, nous avons identifi le Milk Fat Globule-Epidermal growth factor 8 (MFG-E8), un acteur important dans la rsolution de linflammation, comme tant relch spcifiquement par les cellules apoptotiques. Nous avons mis lhypothse que le microenvironnement apoptotique tissulaire, via la relche de MFG-E8, module le phnotype du macrophage, modifiant le microenvironnement, la rponse inflammatoire ainsi que le devenir de linsulte tissulaire. Nos objectifs sont 1) de caractriser ce microenvironnement apoptotique tissulaire et la cintique de relche du MFG-E8 par les cellules apoptotiques, 2) den valuer son rle dans la modulation du phnotype du macrophage ainsi que 3) den tudier, in vivo, son influence sur lenvironnement inflammatoire et le devenir tissulaire. Dans le premier article prsent, nous avons dmontr que les cellules endothliales apoptotiques relchent le MFG-E8 de faon Caspase-3 dpendante. La stimulation des macrophages par lenvironnement conditionn par les cellules endothliales apoptotiques mne ladoption dun profil macrophagien davantage anti-inflammatoire et moindrement pro-inflammatoire. Ce phnotype est rduit par linhibition de la Caspase-3 et il dpend de la prsence de MFG-E8. De plus, le potentiel du MFG-E8 la reprogrammation du macrophage pro-inflammatoire a t dmontr via un modle exprimental de pritonite. Ce changement phnotypique mdi par MFG-E8 implique une signalisation STAT3. Ayant dmontr que les cellules pithliales apoptotiques, linstar des cellules endothliales apoptotiques, relchent elles aussi de faon apoptose-dpendante le MFG-E8, nous avons tudi plus exhaustivement un modle in vivo riche en apoptose pithliale, lobstruction urtrale unilatrale. Dans ce deuxime article prsent, nous rapportons limplication bnfique de MFG-E8 dans ce modle de pathologie rnale obstructive. Nous avons constat que la prsence ou ladministration de MFG-E8 rduit le dommage tissulaire et la fibrose. La protection confre par MFG-E8 est mdie via la modulation de lactivation de linflammasome. De plus, nos rsultats illustrent limportance du phnotype anti-inflammatoire du macrophage mdi par le MFG-E8 dans la rgulation ngative de lactivation de linflammasome rnal et du dommage tissulaire. Cette thse prsente la premire description de la relche Caspase-3-dpendante de MFG-E8 par les cellules apoptotiques. Elle dmontre galement limportance du MFG-E8 dans le microenvironnement apoptotique inflammatoire dans lattnuation du phnotype pro-inflammatoire du macrophage. De plus, nous avons dmontr son rle protecteur dans des modles in vivo de transplantation aortique et de rparation tissulaire, de mme que dans un modle de maladie rnale chronique o nous avons montr que cette protection confre par MFG-E8 est mdie par la rgulation ngative de linflammasome tissulaire. Nos rsultats suggrent ainsi que le MFG-E8 pourrait tre considr comme un interrupteur inflammatoire et ainsi comme une cible potentielle dans la modulation de maladies inflammatoires.
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L'arthrose est la maladie musculo-squelettique la plus commune dans le monde. Elle est l'une des principales causes de douleur et dincapacite chez les adultes, et elle represente un fardeau considerable sur le systeme de soins de sante. L'arthrose est une maladie de larticulation entiere, impliquant non seulement le cartilage articulaire, mais aussi la synoviale, les ligaments et los sous-chondral. Larthrose est caracterisee par la degenerescence progressive du cartilage articulaire, la formation dosteophytes, le remodelage de l'os sous-chondral, la deterioration des tendons et des ligaments et l'inflammation de la membrane synoviale. Les traitements actuels aident seulement a soulager les symptomes precoces de la maladie, cest pour cette raison que l'arthrose est caracterisee par une progression presque inevitable vers la phase terminale de la maladie. La pathogenie exacte de l'arthrose est encore inconnue, mais on sait que l'evenement cle est la degradation du cartilage articulaire. Le cartilage articulaire est compose uniquement des chondrocytes; les cellules responsables de la synthese de la matrice extracellulaire et du maintien de l'homeostasie du cartilage articulaire. Les chondrocytes maintiennent la matrice du cartilage en remplacant les macromolecules degradees et en repondant aux lesions du cartilage et aux degenerescences focales en augmentant l'activite de synthese locale. Les chondrocytes ont un taux faible de renouvellement, cest pour cette raison quils utilisent des mecanismes endogenes tels que l'autophagie (un processus de survie cellulaire et dadaptation) pour enlever les organelles et les macromolecules endommages et pour maintenir l'homeostasie du cartilage articulaire. i L'autophagie est une voie de degradation lysosomale qui est essentielle pour la survie, la differenciation, le developpement et lhomeostasie. Elle regule la maturation et favorise la survie des chondrocytes matures sous le stress et des conditions hypoxiques. Des etudes effectuees par nous et d'autres ont montre quun dereglement de lautophagie est associe a une diminution de la chondroprotection, a l'augmentation de la mort cellulaire et a la degenerescence du cartilage articulaire. Carames et al ont montre que l'autophagie est constitutivement exprimee dans le cartilage articulaire humain normal. Toutefois, l'expression des inducteurs principaux de l'autophagie est reduite dans le vieux cartilage. Nos etudes precedentes ont egalement identifie des principaux genes de lautophagie qui sont exprimes a des niveaux plus faibles dans le cartilage humain atteint de l'arthrose. Les memes resultats ont ete montres dans le cartilage articulaire provenant des modeles de larthrose experimentaux chez la souris et le chien. Plus precisement, nous avons remarque que l'expression dUnc-51 like kinase-1 (ULK1) est faible dans cartilage humain atteint de l'arthrose et des modeles experimentaux de larthrose. ULK1 est la serine / threonine proteine kinase et elle est linducteur principal de lautophagie. La perte de lexpression de ULK1 se traduit par un niveau dautophagie faible. Etant donne quune signalisation adequate de l'autophagie est necessaire pour maintenir la chondroprotection ainsi que l'homeostasie du cartilage articulaire, nous avons propose lhypothese suivante : une expression adequate de ULK1 est requise pour linduction de lautophagie dans le cartilage articulaire et une perte de cette expression se traduira par une diminution de la chondroprotection, et une augmentation de la mort des chondrocytes ce qui conduit a la degenerescence du cartilage articulaire. Le role exact de ULK1 dans la pathogenie de l'arthrose est inconnue, jai alors cree pour la premiere fois, des souris KO ULK1specifiquement dans le cartilage en utilisant la technologie Cre-Lox et jai ensuite soumis ces souris a la destabilisation du menisque medial (DMM), un modele de l'arthrose de la souris pour elucider le role specifique in vivo de ULK1 dans pathogenese de l'arthrose. Mes resultats montrent que ULK1 est essentielle pour le maintien de l'homeostasie du cartilage articulaire. Plus precisement, je montre que la perte de ULK1 dans le cartilage articulaire a cause un phenotype de larthrose accelere, associe a la degenerescence acceleree du cartilage, laugmentation de la mort cellulaire des chondrocytes, et laugmentation de l'expression des facteurs cataboliques. En utilisant des chondrocytes provenant des patients atteints de larthrose et qui ont ete transfectees avec le plasmide d'expression ULK1, je montre quULK1 est capable de reduire lexpression de la proteine mTOR (principal regulateur negatif de lautophagie) et de diminuer lexpression des facteurs cataboliques comme MMP-13 et ADAMTS-5 et COX-2. Mes resultats jusqu'a present indiquent que ULK1 est une cible therapeutique potentielle pour maintenir l'homeostasie du cartilage articulaire.
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Langiogense et laugmentation de la permabilit vasculaire sont des lments cls pour la croissance et la progression tumorale. Par consquent, de nombreux efforts sont dploys comprendre les mcanismes molculaires impliqus dans la formation et le remodelage des vaisseaux sanguins de manire identifier de nouvelles cibles thrapeutiques potentielles. De cette optique, les travaux de cette thse se sont concentrs sur la protine tyrosine phosphatase DEP-1, initialement identifie comme un rgulateur ngatif de la prolifration et de la phosphorylation du VEGFR2 lorsque fortement exprime dans les cellules endothliales. Toutefois, en utilisant une approche dARNi, il a t dmontr que via sa capacit dphosphoryler la tyrosine inhibitrice de Src (Y529), DEP-1 tait galement un rgulateur positif de lactivation de Src dans les cellules endothliales stimules au VEGF. Puisque Src joue un rle central dans la promotion de langiogense et la permabilit vasculaire, nous avons en plus dmontr que DEP-1 tait un promoteur de ces fonctions in vitro et que la tyrosine phosphorylation de sa queue C-terminale, permettant linteraction et lactivation de Src, tait requise. Les travaux de recherche prsents dans cette thse dmontrent dans un premier temps partir dune souris Dep1 KO, dont le dveloppement ne prsente aucun phnotype apparent, que la perte de lexpression de DEP-1 se traduit en une inhibition de lactivation de Src et de lun de ses substrats, la VE-Cadherine, en rponse au VEGF chez la souris adulte. Nos rsultats dmontrent donc, pour la premire fois, le rle primordial de DEP-1 dans linduction de la permabilit vasculaire et de la formation de capillaires in vivo. Consquemment, la croissance tumorale et la formation de mtastases aux poumons sont rduites due une inhibition de leur vascularisation ce qui se traduit par une diminution de la prolifration et une augmentation de lapoptose des cellules cancreuses. De faon intressante, lexpression leve de DEP-1 dans les vaisseaux sanguins tumoraux de patientes atteintes du cancer du sein corrle avec une vascularisation accrue de la tumeur. En plus du rle de DEP-1 dans la rponse angiognqiue lge adulte, nos travaux ont galement dmontr le rle important de DEP-1 lors de la vascularisation de la rtine, un modle in vivo dangiogense dveloppementale. Dans ce contexte, DEP-1 inhibe la prolifration des cellules endothliales et limite leur bourgeonnement et la complexification du rseau vasculaire rtinien en permettant lexpression adquate du Dll4, un rgulateur crucial de lorganisation de la vascularisation dveloppementale. Cette expression du Dll4 dcoulerait de la stabilisation de la -catnine par linactivation de la GSK3, un rgulateur important de la dgradation de la -catnine, en rponse au VEGF selon la voie de signalisation VEGFR2-Src-PI3K-Akt-GSK3. Ainsi, ces travaux identifient DEP-1 comme un rgulateur important de lorganisation vasculaire rtinienne. Les rles positifs de DEP-1 dans les cellules endothliales dcoulent principalement de sa capacit lier et activer la kinase Src. En plus de contribuer la rponse angiognique, Src est galement un oncogne bien caractris notamment pour sa contribution au programme invasif des cellules cancreuses mammaires. Les travaux de cette thse illustrent que DEP-1 est prfrentiellement exprime dans les cellules cancreuses mammaires invasives et quil rgule lactivation de Src, de voies de signalisation invasives et, par le fait mme, de linvasivit de ces cellules in vitro et in vivo. De faon intressante, ces observations corrlent avec des donnes cliniques o lexpression modre de DEP-1 est associe un mauvais pronostic de survie et de rechute. Ces rsultats dmontrent donc, pour la premire fois, le rle positif de DEP-1 dans lactivation de Src au niveau des cellules endothliales et des cellules cancreuses mammaires ce qui permet la rgulation du bourgeonnement endothlial, de la permabilit vasculaire, de langiogense normale et pathologique en plus de linvasion tumorale.
Resumo:
Les cellules endothliales (EC) constituent une premire barrire physique la dissmination de virus pliotropiques circulant par voie hmatogne mais leur contribution la dfense inne anti-virale est peu connue. Des dysfonctions des EC de la barrire hmato-encphalique (BMEC) et des sinusodes hpatiques (LSEC) ont t rapportes dans des neuropathologies et des hpatites aigus ou chroniques dorigine virale, suggrant que des atteintes leur intgrit contribuent la pathogense. Les srotypes de coronavirus de lhpatite murine (MHV), se diffrenciant par leur capacit induire des hpatites et des maladies neurologiques de svrit variable et/ou leur tropisme pour les EC, reprsentent des modles viraux privilgis pour dterminer les consquences de linfection des EC sur la pathogense virale. Lors dinfection par voie hmatogne, le srotype MHV3, le plus virulent des MHV, induit une hpatite fulminante, caractrise par une rponse inflammatoire svre, et des lsions neurologiques secondaires alors que le srotype moins virulent, MHV-A59, induit une hpatite modre sans atteintes secondaires du systme nerveux central (SNC). Par ailleurs, le srotype MHV3, la diffrence du MHV-A59, dmontre une capacit stimuler la production de cytokines par la voie TLR2. Les variants attnus du MHV3, les virus 51.6-MHV3 et YAC-MHV3, sont caractriss par un faible tropisme pour les LSEC et induisent respectivement une hpatite modre et subclinique. Compte tenu de limportance des LSEC dans le maintien de la tolrance hpatique et de llimination des pathognes circulants, il a t postul que la svrit de lhpatite et de la rponse inflammatoire lors dinfections par les MHV est associe la rplication virale et laltration des proprits tolrogniques et vasculaires des LSEC. Les dsordres inflammatoires hpatiques pourraient rsulter dune activation diffrentielle du TLR2, plutt que des autres TLR et des hlicases, selon les srotypes. Dautre part, compte tenu du rle des BMEC dans la prvention des infections du SNC, il a t postul que linvasion crbrale secondaire par les coronavirus est relie linfection des BMEC et le bris subsquent de la barrire hmato-encphalique (BHE). laide dinfections in vivo et in vitro par les diffrents srotypes MHV, chez des souris ou des cultures de BMEC et de LSEC, nous avons dmontr, dune part, que linfection in vitro des LSEC par le stotype MHV3, la diffrence des variants 51.6- et YAC-MHV3, altrait la production du facteur vasodilatant NO et renversait leur phnotype tolrognique en favorisant la production de cytokines et de chimiokines inflammatoires. Ces dysfonctions se traduisaient in vivo par une rponse inflammatoire incontrle et une drgulation du recrutement intrahpatique de leucocytes, favorisant la rplication virale et les dommages hpatiques. Nous avons aussi dmontr, laide de souris TLR2 KO et de LSEC dont lexpression du TLR2 a t abroge par des siRNA, que la svrit de lhpatite et de la rponse inflammatoire induite par le srotype MHV3, dpendait en partie de linduction et de lactivation prfrentielle du TLR2 par le virus dans le foie. Dautre part, la svrit de la rplication virale au foie et des dsordres dans le recrutement leucocytaire intrahpatique induits par le MHV3, et non par le MHV-A59 et le 51.6-MHV3, corrlaient avec une invasion virale subsquente du SNC, au niveau de la BHE. Nous avons dmontr que linvasion crbrale du MHV3 tait associe une infection productive des BMEC et laltration subsquente des protines de jonctions serres occludine, VE-cadhrine et ZO-1 se traduisant par une augmentation de la permabilit de la BHE et lentre conscutive du virus dans le cerveau. Dans lensemble, les rsultats de cette tude mettent en lumire limportance du maintien de lintgrit structurale et fonctionnelle des LSEC et des BMEC lors dinfections virales aiges par des MHV afin de limiter les dommages hpatiques associs linduction dune rponse inflammatoire exagre et de prvenir le passage des virus au cerveau suite une dissmination par voie hmatogne. Ils rvlent en outre un nouveau rle aggravant pour le TLR2 dans lvolution de lhpatite virale aige ouvrant la voie de nouvelles avenues thrapeutiques visant moduler lactivit inflammatoire du TLR2.
