199 resultados para Foie, tumeur maligne
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La radiothrapie strotaxique corporelle (SBRT) est une technique couramment employe pour le traitement de tumeurs aux poumons lorsque la chirurgie nest pas possible ou refuse par le patient. Une complication de lutilisation de cette mthode provient du mouvement de la tumeur caus par la respiration. Dans ce contexte, la radiothrapie asservie la respiration (RGRT) peut tre bnfique. Toutefois, la RGRT augmente le temps de traitement en raison de la plus petite proportion de temps pour laquelle le faisceau est actif. En utilisant un faisceau de photons sans filtre galisateur (FFF), ce problme peut tre compens par le dbit de dose plus lev dun faisceau FFF. Ce mmoire traite de la faisabilit demployer la technique de RGRT en combinaison avec lutilisation un faisceau FFF sur un acclrateur Synergy S (Elekta, Stockholm, Sude) avec une ceinture pneumatique, le Bellows Belt (Philips, Amsterdam, Pays-Bas), comme dispositif de suivi du signal respiratoire. Un Synergy S a t modifi afin de pouvoir livrer un faisceau 6 MV FFF. Des mesures de profils de dose et de rendements en profondeur ont t acquises en cuve eau pour diffrentes tailles de champs. Ces mesures ont t utilises pour crer un modle du faisceau 6 MV FFF dans le systme de planification de traitement Pinnacle3 de Philips. Les mesures ont t compares au modle laide de lanalyse gamma avec un critre de 2%, 2 mm. Par la suite, cinq plans SBRT avec thrapie en arc par modulation volumtrique (VMAT) ont t crs avec le modle 6 MV du Synergy S, avec et sans filtre. Une comparaison des paramtres dosimtriques a t ralise entre les plans avec et sans filtre pour valuer la qualit des plans FFF. Les rsultats rvlent quil est possible de crer des plans SBRT VMAT avec le faisceau 6 MV FFF du Synergy S qui sont cliniquement acceptables (les crires du Radiation Therapy Oncology Group 0618 sont respects). Aussi, une interface physique de RGRT a t mise au point pour remplir deux fonctions : lire le signal numrique de la ceinture pneumatique Bellows Belt et envoyer une commande dirradiation binaire au linac. Lactivation/dsactivation du faisceau du linac se fait par lentremise dun relais lectromcanique. Linterface comprend un circuit lectronique imprim fait maison qui fonctionne en tandem avec un Raspberry Pi. Un logiciel de RGRT a t dvelopp pour oprer sur le Raspberry Pi. Celui-ci affiche le signal numrique du Bellows Belt et donne loption de choisir les limites suprieure et infrieure de la fentre dirradiation, de sorte que lorsque le signal de la ceinture se trouve entre ces limites, le faisceau est actif, et inversement lorsque le signal est hors de ces limites. Le logiciel envoie donc une commande dirradiation au linac de manire automatique en fonction de lamplitude du signal respiratoire. Finalement, la comparaison entre la livraison dun traitement standard sans RGRT avec filtre par rapport un autre plan standard sans RGRT sans filtre dmontre que le temps de traitement en mode FFF est rduit en moyenne de 54.1% pour un arc. De la mme manire, la comparaison entre la livraison dun traitement standard sans RGRT avec filtre par rapport un plan de RGRT (fentre dirradiation de 75%) sans filtre montre que le temps de traitement de RGRT en mode FFF est rduit en moyenne de 27.3% par arc. Toutefois, il na pas t possible de livrer des traitements de RGRT avec une fentre de moins de 75%. Le linac ne supporte pas une frquence darrts leve.
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Problmatique: Le virus du papillome humain (VPH) est prsent dans prs de 50% des cancers de loropharynx. Le potentiel oncognique du VPH est encod dans les oncoprotines E6 et E7, qui agissent en modulant diffrents gnes, dont les gnes suppresseurs de tumeur p53 et pRb. Les cellules VPH positives dmontrent une altration au niveau de la signalisation de la rponse aux dommages lADN (RDA), un mcanisme de contrle dans larrt de la croissance des cellules ayant subit des dommages au niveau de leur ADN. Hypothse et objectifs : Nous croyons que les dfauts au niveau de la RDA des cancers VPH positifs peuvent tre exploits afin de sensibiliser prfrentiellement les cellules cancreuses aux traitements de radiothrapie. Cette stratgie de recherche ncessite llaboration dun modle cellulaire de carcinogense isognique pour le cancer de loropharynx que nous proposons de dvelopper et de caractriser. Ltude vise driver des lignes isogniques partir de kratinocytes primaires et cellules pithliales de loropharynx pour ensuite valider la carcinogense de notre modle in vitro & in vivo Mthodologie : Des lignes cellulaires de kratinocytes primaires et de cellules pithliales de loropharynx ont t successivement modifies par transduction afin de prsenter les mutations associes aux cancers de loropharynx induits par le VPH. Les cellules ont t modifies avec des lentivirus codants pour la tlomrase (hTERT), les oncognes E6, E7 et RasV12. Afin de valider la cancrogense in vitro de notre modle, des tudes dinvasion en matrigel et de croissance sans ancrage en agar mou ont t ralises. Les populations cellulaires transformes ont t ensuite introduites dans des souris immunodficientes afin dvaluer leur tumorognicit in vivo. Rsultats : partir des plasmides recombins construits par mthodes de clonage traditionnelle et de recombinaison Gateway , nous avons produit des lentivirus codants pour la tlomrase humaine (hTERT), les oncognes viraux E6 et E7 et loncogne Ras. Les kratinocytes primaires et cellules pithliales de loropharynx ont t infects successivement par transduction et slectionns. Nous avons valid lexpression de nos transgnes par mthode dimmunofluorescence, de Western Blot et de raction de polymrisation en chane quantitative en temps rel (qRT-PCR). Nous avons tabli trois lignes des cellules pithliales de loropharynx (HNOE) partir dchantillons tissulaires prlevs lors damygdalectomie (HNOE42, HNO45, HNOE46). Les cellules transduites avec le lentivirus exprimant le promoteur fort CMV/TO de loncogne RasV12 ont prsent un changement morphologique compatible avec une snescence prmature induite par loncogne Ras. En exprimant des quantits plus faibles du RasV12 mutant, la ligne cellulaire HEKn hTERT-E6-E7 PGK RasV12 a russi chapper la snescence induite par loncogne Ras. La population cellulaire exprimant HEKn hTERT-E6-E7-PGK RasV12 a prsent un phnotype malin en culture et ltude d'invasion, mais na pas dmontr de rsultats positifs ltude de croissance sans ancrage en agar mou ni en xnogreffe en souris immunodficientes. Conclusion : Nos rsultats dmontrent quen prsence des oncognes viraux E6 et E7, il y a un troisime mcanisme suppresseur de tumeur qui mdie la snescence induite par loncogne Ras. Nous avons identifi que la prsence de E6 seule ne suffit pas immortaliser les kratinocytes primaires humains (HEKn). Nous navons pas russi crer un modle in vitro de carcinogense pour les cancers de loropharynx induits par le VPH.
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Jusqu prsent, la metformine a principalement t employe comme mdicament contrlant lhyperglycmie des personnes atteintes de diabte de type II. Des tudes pidmiologiques ont dmontr que les personnes, prenant de la metformine, dveloppent moins de cancers. Par exemple, la prise de metformine rduit respectivement de 78% et de 46% les chances de dvelopper un cancer hpatique ou pancratique. Rcemment, il a t montr que la metformine permet de rduire le dveloppement de tumeur au niveau de la peau, suite lexposition des rayons UVB. Dans cette tude, jai dmontr que la prsence de metformine permet une meilleure survie de la levure Saccharomyces cerevisiae suite lexposition des rayons UVC ou UVA. De plus, jai dmontr que la prsence de metformine augmente le recrutement de lhistone Htz1 la chromatine. Pour une souche htz1, le niveau de survie suite lexposition aux rayons UVA est considrablement diminu. Htz1 permet le recrutement de Rad14 au site de dommages lADN faits par les rayons UV. Htz1 est donc important pour la dtection de ces sites. Enfin, le recrutement nuclaire de Rad14 en prsence de metformine a considrablement augment. En absence de Rad14, le niveau de survie suite lexposition aux rayons UVA diminue significativement. Donc, Htz1 et Rad14 sont deux protines cls dans la protection contre les rayons UV apports par la metformine. En conclusion, avec les diffrents rsultats de cette tude, il est possible de dire que la metformine permet une forme de protection contre les rayons UVC et UVA.
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Les solvants industriels, utiliss dans un grand nombre de secteurs conomiques, constituent une proccupation majeure pour les responsables de la sant et de la scurit du travail. Leurs proprits irritantes, leurs effets toxiques sur le systme nerveux et les appareils dpuration (reins, foie), leur rle dans la pollution ou leur risque dexplosion ou dincendie sont bien connus. Cet ouvrage fait le point sur la prvention des risques professionnels associs aux solvants, notamment avec lintroduction des mthodes de substitution, solvants de remplacement et procds de rechange. Aprs un rappel des effets sanitaires et environnementaux des grandes familles de solvants, de leurs utilisations et de leurs caractristiques physicochimiques, les auteurs exposent et analysent les nouveaux outils envisageables en matire de sret dutilisation des produits solvants, et de substitution en gnral, pour se concentrer ensuite sur les procds de ventilation, la protection des personnes exposes et la prvention des risques dinflammabilit des solvants en milieu de travail. Enfin, plusieurs lments pratiques compltent cet ouvrage, portant sur les fiches de donnes de scurit et autres sources dinformation pour lentreprise. Par son apport dinformations thoriques et pratiques ainsi que ses analyses mthodiques, cet ouvrage reprsente un texte de rfrence parfaitement adapt aux attentes des mdecins du travail, hyginistes et de tout professionnel impliqu dans la prvention des accidents et la protection de lenvironnement.
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Les kinines sont des peptides vasoactifs et des neuromediateurs centraux impliques dans le controle cardiovasculaire, la douleur et linflammation. Leurs actions sont relayees par deux types de recepteurs couples aux proteines G : le recepteur B2 (RB2), constitutif, et le recepteur B1 (RB1), inductible en presence de lesions tissulaires, de cytokines pro-inflammatoires, dendotoxines bacteriennes et dans certaines pathologies tel que le diabete. Le diabete sucre augmente a lechelle mondiale et son etiologie est complexe; il aggrave les infections severes et augmente la mortalite par hyperbacteriemie resistante a un controle therapeutique et une prise en charge en soins intensifs. Les deces surviennent dans la grande majorite des cas a la suite de l'apparition d'une coagulation intra- vasculaire disseminee (CIVD). Ce projet a pour but detudier le role du RB1 dans la CIVD dans un modele de diabete de type 1 induit par la streptozotocine (STZ) (Article 1) et dans linsulite (Article 2). La CIVD est produite par linjection de lipopolysaccharide (LPS, 2 mg/kg, i.p.), 4 jours apres le traitement a la STZ (65 mg/kg, i.p.). Dans le premier article, nous avons montre une augmentation significative de l'deme et de la permeabilite vasculaire par le bleu dEvans dans le rein, le poumon, le coeur et le foie chez les rats traites au LPS et/ou a la STZ, une situation qui favorise une hemoconcentration et le developpement d'un etat d'hypercoagulabilite. Nous avons aussi montre la presence d'indices de thrombus et de lesions tissulaires dans l'etude histologique ainsi quune augmentation de l'expression du RB1 dans le coeur, le rein et les plaquettes sanguines. Un traitement avec lantagoniste du RB1, le SSR240612, a corrige lapparition de ces anomalies et a rendu normale la glycemie chez les rats STZ et lhyperthermie induite par le LPS. De meme, le SSR240612 a nettement ameliore la survie des animaux. Les benefices du SSR240612 ont ete reproduits par linhibition de la iNOS avec le 1400W et de la COX-2 avec lacide niflumique, suggerant que les mediateurs de ces enzymes pro-inflammatoires agissent en aval du RB1.Dans le deuxieme article, le rat STZ est traite du jour 4 au jour 7 avec le SSR240612 (10 mg/kg/jr per os). Cet antagoniste du RB1 bloque linfiltration du pancreas par les macrophages et les lymphocytes TCD4+ qui sont porteurs du RB1. Lantagoniste previent aussi laugmentation de lexpression de la iNOS, du TNF-, du RB1 et du TRPV1 dans le pancreas des rats diabetiques. Le traitement avec lantagoniste du RB1 a limite la perte des cellules des ilots de Langerhans et a corrige lhypoinsulinemie et lhyperglycemie. Ces deux etudes mettent en lumiere un role important du RB1 dans la letalite associee au choc septique, a la thrombose et a linsulite. Par consequent, le RB1 represente une cible therapeutique prometteuse dans le traitement du diabete et de ses complications.
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Le cancer du sein est le cancer le plus frquent chez la femme. Il demeure la cause de mortalit la plus importante chez les femmes ges entre 35 et 55 ans. Au Canada, plus de 20 000 nouveaux cas sont diagnostiqus chaque anne. Les tudes scientifiques dmontrent que l'esprance de vie est troitement lie la prcocit du diagnostic. Les moyens de diagnostic actuels comme la mammographie, l'chographie et la biopsie comportent certaines limitations. Par exemple, la mammographie permet de diagnostiquer la prsence dune masse suspecte dans le sein, mais ne peut en dterminer la nature (bnigne ou maligne). Les techniques dimagerie complmentaires comme l'chographie ou l'imagerie par rsonance magntique (IRM) sont alors utilises en complment, mais elles sont limites quant la sensibilit et la spcificit de leur diagnostic, principalement chez les jeunes femmes (< 50 ans) ou celles ayant un parenchyme dense. Par consquent, nombreuses sont celles qui doivent subir une biopsie alors que leur lsions sont bnignes. Quelques voies de recherche sont privilgies depuis peu pour rduire l`incertitude du diagnostic par imagerie ultrasonore. Dans ce contexte, llastographie dynamique est prometteuse. Cette technique est inspire du geste mdical de palpation et est base sur la dtermination de la rigidit des tissus, sachant que les lsions en gnral sont plus rigides que le tissu sain environnant. Le principe de cette technique est de gnrer des ondes de cisaillement et d'en tudier la propagation de ces ondes afin de remonter aux proprits mcaniques du milieu via un problme inverse prtabli. Cette thse vise le dveloppement d'une nouvelle mthode d'lastographie dynamique pour le dpistage prcoce des lsions mammaires. L'un des principaux problmes des techniques d'lastographie dynamiques en utilisant la force de radiation est la forte attnuation des ondes de cisaillement. Aprs quelques longueurs d'onde de propagation, les amplitudes de dplacement diminuent considrablement et leur suivi devient difficile voir impossible. Ce problme affecte grandement la caractrisation des tissus biologiques. En outre, ces techniques ne donnent que l'information sur l'lasticit tandis que des tudes rcentes montrent que certaines lsions bnignes ont les mmes lasticits que des lsions malignes ce qui affecte la spcificit de ces techniques et motive la quantification de d'autres paramtres mcaniques (e.g.la viscosit). Le premier objectif de cette thse consiste optimiser la pression de radiation acoustique afin de rehausser l'amplitude des dplacements gnrs. Pour ce faire, un modle analytique de prdiction de la frquence de gnration de la force de radiation a t dvelopp. Une fois valid in vitro, ce modle a servi pour la prdiction des frquences optimales pour la gnration de la force de radiation dans d'autres exprimentations in vitro et ex vivo sur des chantillons de tissu mammaire obtenus aprs mastectomie totale. Dans la continuit de ces travaux, un prototype de sonde ultrasonore conu pour la gnration d'un type spcifique d'ondes de cisaillement appel ''onde de torsion'' a t dvelopp. Le but est d'utiliser la force de radiation optimise afin de gnrer des ondes de cisaillement adaptatives, et de monter leur utilit dans l'amlioration de l'amplitude des dplacements. Contrairement aux techniques lastographiques classiques, ce prototype permet la gnration des ondes de cisaillement selon des parcours adaptatifs (e.g. circulaire, elliptique,etc.) dpendamment de la forme de la lsion. Loptimisation des dpts nergtiques induit une meilleure rponse mcanique du tissu et amliore le rapport signal sur bruit pour une meilleure quantification des paramtres viscolastiques. Il est aussi question de consolider davantage les travaux de recherches antrieurs par un appui exprimental, et de prouver que ce type particulier d'onde de torsion peut mettre en rsonance des structures. Ce phnomne de rsonance des structures permet de rehausser davantage le contraste de dplacement entre les masses suspectes et le milieu environnant pour une meilleure dtection. Enfin, dans le cadre de la quantification des paramtres viscolastiques des tissus, la dernire tape consiste dvelopper un modle inverse bas sur la propagation des ondes de cisaillement adaptatives pour l'estimation des paramtres viscolastiques. L'estimation des paramtres viscolastiques se fait via la rsolution d'un problme inverse intgr dans un modle numrique lments finis. La robustesse de ce modle a t tudie afin de dterminer ces limites d'utilisation. Les rsultats obtenus par ce modle sont compars d'autres rsultats (mmes chantillons) obtenus par des mthodes de rfrence (e.g. Rheospectris) afin d'estimer la prcision de la mthode dveloppe. La quantification des paramtres mcaniques des lsions permet d'amliorer la sensibilit et la spcificit du diagnostic. La caractrisation tissulaire permet aussi une meilleure identification du type de lsion (malin ou bnin) ainsi que son volution. Cette technique aide grandement les cliniciens dans le choix et la planification d'une prise en charge adapte.
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Le diabte de type 2 est une maladie chronique dont lincidence est en augmentation continuelle. Le risque de dvelopper le diabte de type 2 chez les populations autochtones du Canada est de trois cinq fois plus lev que le reste de la population canadienne. La fort borale comporte plusieurs plantes mdicinales ayant un potentiel pour le traitement ou la prvention du diabte. Certaines de ces plantes font partie de la mdecine traditionnelle et alternative Crie. Des enqutes ethnobotaniques ont amen notre quipe de recherche identifier 17 extraits de plantes mdicinales utilises par les Cris dEeyou Istchee (Baie James, Qubec) pour traiter les symptmes du diabte. Parmi ces extraits, certains ont montr des activits anti-diabtiques au niveau des cellules musculaires, des adipocytes et dans des tudes in vivo ralises chez des animaux. Le but de cette thse est dlucider leffet de ces 17 plantes sur lhomostasie hpatique de glucose, didentifier lespce la plus prometteuse et isoler ces constituants actifs. De mme, le bleuet nain du genre Vaccinium angustifolium fait partie de la fort borale canadienne et est connu pour ses activits anti-diabtiques. Une biotransformation du jus de bleuet lui confre une activit antioxydante accrue et un profil biologique diffrent. Le deuxime but de cette thse est dlucider les mcanismes daction par lesquels le jus de bleuet biotransform (BJ) exerce son effet anti-diabtique et didentifier ses principes actifs. Les rsultats ont montr que trois extraits de plantes Cris se sont dmarqus par leur effet sur lhomostasie hpatique de glucose. Picea glauca exerce son effet en diminuant la production de glucose alors que Larix laricina agit en augmentant le stockage de glucose. Abies balsamea a montr le profil le plus prometteur, elle agit simultanment en diminuant lactivit de la Glucose-6-phosphatase (G6Pase) via la stimulation des voies insulino-dpendante et - indpendante et en augmentant lactivit de la Glycogne synthtase (GS) suite la phosphorylation de la Glycogne synthase kinase-3. Le fractionnement de lextrait dAbies balsamea guid par les deux bioessais a men lisolation de trois composs actifs; lacide abitique (AA), lacide dhydroabitique (DAA) et le squalne (SQ). Les principes actifs ont montr le mme mcanisme daction que lextrait brut en diminuant lactivit de la G6Pase et augmentant celle de la GS ainsi quen activant les voies de signalisation impliques. Le DAA ii sest dmarqu par son effet le plus puissant et trs comparable celui de lextrait dAbies balsamea dans toutes les expriences. De son ct le BJ a montr un effet sur la diminution de la production hpatique de glucose, laugmentation de son stockage ainsi que laugmentation de son transport dans le muscle. Son fractionnement guid par les bioessais a permis disoler sept fractions dont trois taient les plus actives. Lidentification des constituants de ces fractions actives a men isoler quatres composs phnoliques; lacide chlorognique, lacide gallique, lacide protocatchique et le catchol. Le catchol sest dmarqu avec ses effets les plus puissants en diminuant lactivit de la G6Pase, augmentant celle de la GS et en stimulant le transport de glucose dans le muscle. Les rsultats de cette thse indiquent que la diminution de la production hpatique de glucose peut sajouter au profil anti-diabtique de certaines plantes mdicinales Cries et surtout celui dA.balsamea dont les composs actifs peuvent aider dans le dveloppement de nouvelles molcules anti-diabtiques. De plus, les rsultats de cette thse ont montr que lactivit antidiabtique du BJ implique le contrle de lhomostasie de glucose au niveau du foie et du muscle. Lidentification du catchol comme principe actif avec potentiel anti-diabtique prometteur pourra servir pour des fins thrapeutiques ultrieures.
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Chez la souris, la thrapie anti-HER2 est dpendante de la prsence de cellules T CD8+IFN-+ et des rponses IFN de type I. Ces IFN sont induits par les TLRs suite la reconnaissance de signaux de danger, appels PAMPs et DAMPs. Les TLR-3 et TLR-9 sont tous deux de bons inducteurs dIFN de type I et sont galement capable dagir en synergie afin daugmenter les niveaux dIFN-, de TNF- et dIL-12. Notre hypothse fut que la stimulation de ces deux TLRs mnerait lamlioration de lactivit anti-tumorale du trastuzumab via le recrutement et lactivation des cellules immunitaires. Nos buts furent de confirmer le potentiel thrapeutique de la combinaison de lanticorps anti-HER2, de lagoniste de TLR-3, le poly(I:C), et de lagoniste de TLR-9, le CpG ODN. Des tudes in vivo et in vitro nous ont permis de dcouvrir une synergie entre ces agents qui rsulte en une cytotoxicit cible plus efficace. De plus, cette thrapie savra efficace chez des modles CD8-dpendants et CD8-indpendents. Les souris purent rejeter leur tumeur et demeurer sains plusieurs semaines aprs larrt des injections. Ces souris taient galement protges lors dun challenge, soulignant ainsi la prsence dune immunit mmoire. Nous avons aussi dcouvert que ladministration combine de trastuzumab des deux agonistes de TLRs mne des rponses systmiques. Des tudes de dpltion confirmrent que les cellules T CD8+ sont cruciales pour la protection long terme des animaux, mais que les pDC sont moins impliques que ce que lon pourrait croire. Leur absence na que modestement affect les effets de notre thrapie. loppos, les cellules NK sont dimportants mdiateurs des effets thrapeutiques. Des expriences dADCC ont rvl que le CpG ODN et poly(I:C) ont tous deux la capacit damliorer les fonctions des cellules NK, mais que la stimulation simultane des TLR-3 et TLR-9 permet de maximiser les effets bnfiques du trastuzumab. De la mme manire, laddition de CpG ODN et de poly(I:C) aux anticorps anti-HER2 a permis daugmenter les rponses pro-inflammatoires, plus spcifiquement lIFN-, le TNF-, lIP-10 et lIL-12.
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Les modifications post-traductionnelles telles que la phosphorylation, lOGlcNAcylation et lubiquitination jouent des rles critiques dans la coordination des fonctions protiques et par consquent influencent grandement de nombreux processus cellulaires. Il est noter que ces modifications sont hautement dynamiques et finement regules. Par exemple, lubiquitination peut tre rversible via laction des dubiquitinases comme le suppresseur de tumeurs BAP1. Parmis les gnes codant pour les dubiquitinases, BAP1 est la plus souvent mute dans le cancer. Des tudes rcentes ont dmontr limportance des dynamiques de modifications post-traductionnelles dans la rgulation du complexe BAP1. En plus, BAP1 forme un complexe multi-protiques contenant plusieurs rgulateurs transcriptionnels comme la protine polycomb OGT et les facteurs de transcription FOXK1 et FOXK2. OGT est une enzyme unique qui catalyze lajout dun groupement O-GlcNAc sur ses substrats afin den moduler lactivit enzymatique, les interactions protines-protines et leur localisation cellulaire. Cette modification est aussi lie au mtabolisme puisque son substrat donneur, lUDP-GlcNAc, est driv de la voie biosynthtique des hexosamines. Paralllement, FOXK1/2 ont aussi t dmontrs comme tant critiques des processus mtaboliques telles que la myogense et lautophagie. Lors de nos tudes, nous avons identifi FOXK1 comme un nouveau substrat dOGT. De plus, les niveaux dO-GlcNAcylation de FOXK1 fluctuent lors de lentre/sortie du cycle cellulaire. En outre, nous avons identifi limportance de FOXK1 dans ladipogense et observ que linteraction FOXK1/BAP1 est affecte par le mtabolisme cellulaire. En rsum, nos tudes ont rvl limportance dOGT dans la rgulation de certaines composantes du complexe BAP1, ce qui aidera la comprhension de leffet suppresseur de tumeur de BAP1 ainsi que son mcanisme d'action dans diffrents processus tel que le remodelage de la chromatine.
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La stnose valvulaire aortique (SVA) est la maladie des valves cardiaques la plus rpandue dans les pays dvelopps qui touche les personnes ges. La SVA est un processus actif caractris par des dpts de lipides, de linflammation, de la fibrose et une calcification active des feuillets qui progresse vers un paississement et durcissement de la valve aortique et une diminution de laire de la valve aortique. Nous avons mis lhypothse que la pathognse de la SVA modifie progressivement lendothlium de la valve aortique, ce qui engendre lexpression de biomarqueurs spcifiques aux tissus et la maladie. On rapporte dans cet tude, lutilisation de la technique de slection in vivo par phage display dune librairie de peptides alatoires afin de trouver de nouveaux peptides candidats qui se lieraient des biomarqueurs spcifiques la valve aortique malade dune souris. Des souris ATX (LDLr-/-;Tg(hApoB+/+)) ges atteintes de la SVA ont t utilises pour la slection in vivo dune librairie de peptides alatoires de 7 acides amins contraints ou linaires. Aprs 4 tours de criblage, on a caractris 14 phages diffrents qui ont t spars en 5 motifs consensus pour la librairie linaire et 11 phages diffrents qui reprsentent 5 diffrents motifs consensus pour la libraire de peptides contraints. La spcificit de 4 phages candidats de la librairie linaire et de 5 phages de la librairie contrainte a t tudie par limmunomarquage des peptides dintrt exprims par les phages sur les coupes de tissus de la valve aortique malade par rapport aux tissus contrles du foie, du rein, de la rate, du ventricule et du poumon. Parmi eux, 6 phages reprsentent des peptides candidats intressants qui ont besoin dtre tests davantage pour valuer leur spcificit in vivo la valve. Bien quil reste encore de la validation effectuer, les peptides candidats spcifiques trouvs peuvent reprsenter des agents molculaires dimagerie utiles ou des transporteurs dans la livraison de drogue qui ciblent la valve aortique malade.
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Le foie est un organe vital ayant une capacit de rgnration exceptionnelle et un rle crucial dans le fonctionnement de lorganisme. Lvaluation du volume du foie est un outil important pouvant tre utilis comme marqueur biologique de svrit de maladies hpatiques. La volumtrie du foie est indique avant les hpatectomies majeures, lembolisation de la veine porte et la transplantation. La mthode la plus rpandue sur la base d'examens de tomodensitomtrie (TDM) et d'imagerie par rsonance magntique (IRM) consiste dlimiter le contour du foie sur plusieurs coupes conscutives, un processus appel la segmentation. Nous prsentons la conception et la stratgie de validation pour une mthode de segmentation semi-automatise dveloppe notre institution. Notre mthode reprsente une approche base sur un modle utilisant linterpolation variationnelle de forme ainsi que loptimisation de maillages de Laplace. La mthode a t conue afin dtre compatible avec la TDM ainsi que l' IRM. Nous avons valu la rptabilit, la fiabilit ainsi que lefficacit de notre mthode semi-automatise de segmentation avec deux tudes transversales conues rtrospectivement. Les rsultats de nos tudes de validation suggrent que la mthode de segmentation confre une fiabilit et rptabilit comparables la segmentation manuelle. De plus, cette mthode diminue de faon significative le temps dinteraction, la rendant ainsi adapte la pratique clinique courante. Dautres tudes pourraient incorporer la volumtrie afin de dterminer des marqueurs biologiques de maladie hpatique bass sur le volume tels que la prsence de statose, de fer, ou encore la mesure de fibrose par unit de volume.
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Langiogense et laugmentation de la permabilit vasculaire sont des lments cls pour la croissance et la progression tumorale. Par consquent, de nombreux efforts sont dploys comprendre les mcanismes molculaires impliqus dans la formation et le remodelage des vaisseaux sanguins de manire identifier de nouvelles cibles thrapeutiques potentielles. De cette optique, les travaux de cette thse se sont concentrs sur la protine tyrosine phosphatase DEP-1, initialement identifie comme un rgulateur ngatif de la prolifration et de la phosphorylation du VEGFR2 lorsque fortement exprime dans les cellules endothliales. Toutefois, en utilisant une approche dARNi, il a t dmontr que via sa capacit dphosphoryler la tyrosine inhibitrice de Src (Y529), DEP-1 tait galement un rgulateur positif de lactivation de Src dans les cellules endothliales stimules au VEGF. Puisque Src joue un rle central dans la promotion de langiogense et la permabilit vasculaire, nous avons en plus dmontr que DEP-1 tait un promoteur de ces fonctions in vitro et que la tyrosine phosphorylation de sa queue C-terminale, permettant linteraction et lactivation de Src, tait requise. Les travaux de recherche prsents dans cette thse dmontrent dans un premier temps partir dune souris Dep1 KO, dont le dveloppement ne prsente aucun phnotype apparent, que la perte de lexpression de DEP-1 se traduit en une inhibition de lactivation de Src et de lun de ses substrats, la VE-Cadherine, en rponse au VEGF chez la souris adulte. Nos rsultats dmontrent donc, pour la premire fois, le rle primordial de DEP-1 dans linduction de la permabilit vasculaire et de la formation de capillaires in vivo. Consquemment, la croissance tumorale et la formation de mtastases aux poumons sont rduites due une inhibition de leur vascularisation ce qui se traduit par une diminution de la prolifration et une augmentation de lapoptose des cellules cancreuses. De faon intressante, lexpression leve de DEP-1 dans les vaisseaux sanguins tumoraux de patientes atteintes du cancer du sein corrle avec une vascularisation accrue de la tumeur. En plus du rle de DEP-1 dans la rponse angiognqiue lge adulte, nos travaux ont galement dmontr le rle important de DEP-1 lors de la vascularisation de la rtine, un modle in vivo dangiogense dveloppementale. Dans ce contexte, DEP-1 inhibe la prolifration des cellules endothliales et limite leur bourgeonnement et la complexification du rseau vasculaire rtinien en permettant lexpression adquate du Dll4, un rgulateur crucial de lorganisation de la vascularisation dveloppementale. Cette expression du Dll4 dcoulerait de la stabilisation de la -catnine par linactivation de la GSK3, un rgulateur important de la dgradation de la -catnine, en rponse au VEGF selon la voie de signalisation VEGFR2-Src-PI3K-Akt-GSK3. Ainsi, ces travaux identifient DEP-1 comme un rgulateur important de lorganisation vasculaire rtinienne. Les rles positifs de DEP-1 dans les cellules endothliales dcoulent principalement de sa capacit lier et activer la kinase Src. En plus de contribuer la rponse angiognique, Src est galement un oncogne bien caractris notamment pour sa contribution au programme invasif des cellules cancreuses mammaires. Les travaux de cette thse illustrent que DEP-1 est prfrentiellement exprime dans les cellules cancreuses mammaires invasives et quil rgule lactivation de Src, de voies de signalisation invasives et, par le fait mme, de linvasivit de ces cellules in vitro et in vivo. De faon intressante, ces observations corrlent avec des donnes cliniques o lexpression modre de DEP-1 est associe un mauvais pronostic de survie et de rechute. Ces rsultats dmontrent donc, pour la premire fois, le rle positif de DEP-1 dans lactivation de Src au niveau des cellules endothliales et des cellules cancreuses mammaires ce qui permet la rgulation du bourgeonnement endothlial, de la permabilit vasculaire, de langiogense normale et pathologique en plus de linvasion tumorale.
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Tout mdicament administr par la voie orale doit tre absorb sans tre mtabolis par lintestin et le foie pour atteindre la circulation systmique. Malgr son impact majeur sur leffet de premier passage de plusieurs mdicaments, le mtabolisme intestinal est souvent nglig comparativement au mtabolisme hpatique. Lobjectif de ces travaux de matrise est donc dutiliser, caractriser et dvelopper diffrents outils in vitro et in vivo pour mieux comprendre et prdire limpact du mtabolisme intestinal sur leffet de premier passage des mdicaments compar au mtabolisme hpatique. Pour se faire, diffrents substrats denzymes du mtabolisme ont t incubs dans des microsomes intestinaux et hpatiques et des diffrences entre la vitesse de mtabolisme et les mtabolites produits ont t dmontrs. Afin de mieux comprendre limpact de ces diffrences in vivo, des tudes mcanistiques chez des animaux canuls et traits avec des inhibiteurs enzymatiques ont t conduites avec le substrat mtoprolol. Ces tudes ont dmontr limpact du mtabolisme intestinal sur le premier passage du mtoprolol. De plus, elles ont rvl leffet sur la vidange gastrique du 1-aminobenzotriazole, un inhibiteur des cytochromes p450, vitant ainsi une mauvaise utilisation de cet outil dans le futur. Ces travaux de matrise ont permis damliorer les connaissances des diffrents outils in vitro et in vivo pour tudier le mtabolisme intestinal tout en permettant de mieux comprendre les diffrences entre le rle de lintestin et du foie sur leffet de premier passage.
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Lvolution dune cellule tumorale initie une tumeur solide ncessite, chaque tape, un microenvironnement favorable sa survie et sa croissance. Le microenvironnement tumoral est compar un foyer dinflammation chronique dont la composition cellulaire et molculaire est complexe. Les cellules souches msenchymateuses (CSM) reprsentent lun des principaux acteurs cellulaires prsents. Elles migrent vers les sites tumoraux o elles soutiennent linflammation, langiogense et le dveloppement tumoral en activant plusieurs voies de signalisation. Une des voies majeures qui contribuent linflammation est la voie de signalisation NF-B. Linitiation de cette voie provient de la membrane cellulaire entre autres des cavoles. Nous soumettons lhypothse que lune des cavines, protines associes aux cavoles, modulerait le phnotype inflammatoire etou migratoire dans les CSM traites la cytokine TNF- (facteur de ncrose tumorale ) en modulant la voie de signalisation NF-B. En effet, nous avons observ une rgulation la hausse de lexpression de la COX-2 (cyclooxygnase-2) et une diminution de lexpression dIB qui sont synonymes de lactivation de la voie NF-B dans les CSM que nous avons traites au TNF-. Nous avons trouv que le TNF- induit la migration des CSM, et que la rpression gnique de la Cavine-2 augmente significativement la migration des CSM traites par le TNF-. La rpression gnique de la Cavine-2 vient aussi amplifier la tubulogense dans les CSM en rponse au TNF-. Dun point de vue molculaire, la rpression gnique de la Cavine-2 a montr une trs forte amplification de l'expression protique de la COX-2 dans les CSM en rponse au TNF-. Dans ces mmes cellules o la Cavine-2 a t rprime, et suite un traitement au TNF-, le pic de phosphorylation est plus intense et la courbe de phosphorylation est plus prolonge dans le temps. Ces observations nous permettent daffirmer que la Cavine-2 a un rle rpresseur sur lexpression de COX-2. Collectivement, nos rsultats montrent que la Cavine-2 peut tre propose comme un gne suppresseur de tumeur et est de ce fait, une bonne cible thrapeutique dans les CSM qui permettraient dagir des stades prcoces du dveloppement tumoral.
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Les cellules endothliales (EC) constituent une premire barrire physique la dissmination de virus pliotropiques circulant par voie hmatogne mais leur contribution la dfense inne anti-virale est peu connue. Des dysfonctions des EC de la barrire hmato-encphalique (BMEC) et des sinusodes hpatiques (LSEC) ont t rapportes dans des neuropathologies et des hpatites aigus ou chroniques dorigine virale, suggrant que des atteintes leur intgrit contribuent la pathogense. Les srotypes de coronavirus de lhpatite murine (MHV), se diffrenciant par leur capacit induire des hpatites et des maladies neurologiques de svrit variable et/ou leur tropisme pour les EC, reprsentent des modles viraux privilgis pour dterminer les consquences de linfection des EC sur la pathogense virale. Lors dinfection par voie hmatogne, le srotype MHV3, le plus virulent des MHV, induit une hpatite fulminante, caractrise par une rponse inflammatoire svre, et des lsions neurologiques secondaires alors que le srotype moins virulent, MHV-A59, induit une hpatite modre sans atteintes secondaires du systme nerveux central (SNC). Par ailleurs, le srotype MHV3, la diffrence du MHV-A59, dmontre une capacit stimuler la production de cytokines par la voie TLR2. Les variants attnus du MHV3, les virus 51.6-MHV3 et YAC-MHV3, sont caractriss par un faible tropisme pour les LSEC et induisent respectivement une hpatite modre et subclinique. Compte tenu de limportance des LSEC dans le maintien de la tolrance hpatique et de llimination des pathognes circulants, il a t postul que la svrit de lhpatite et de la rponse inflammatoire lors dinfections par les MHV est associe la rplication virale et laltration des proprits tolrogniques et vasculaires des LSEC. Les dsordres inflammatoires hpatiques pourraient rsulter dune activation diffrentielle du TLR2, plutt que des autres TLR et des hlicases, selon les srotypes. Dautre part, compte tenu du rle des BMEC dans la prvention des infections du SNC, il a t postul que linvasion crbrale secondaire par les coronavirus est relie linfection des BMEC et le bris subsquent de la barrire hmato-encphalique (BHE). laide dinfections in vivo et in vitro par les diffrents srotypes MHV, chez des souris ou des cultures de BMEC et de LSEC, nous avons dmontr, dune part, que linfection in vitro des LSEC par le stotype MHV3, la diffrence des variants 51.6- et YAC-MHV3, altrait la production du facteur vasodilatant NO et renversait leur phnotype tolrognique en favorisant la production de cytokines et de chimiokines inflammatoires. Ces dysfonctions se traduisaient in vivo par une rponse inflammatoire incontrle et une drgulation du recrutement intrahpatique de leucocytes, favorisant la rplication virale et les dommages hpatiques. Nous avons aussi dmontr, laide de souris TLR2 KO et de LSEC dont lexpression du TLR2 a t abroge par des siRNA, que la svrit de lhpatite et de la rponse inflammatoire induite par le srotype MHV3, dpendait en partie de linduction et de lactivation prfrentielle du TLR2 par le virus dans le foie. Dautre part, la svrit de la rplication virale au foie et des dsordres dans le recrutement leucocytaire intrahpatique induits par le MHV3, et non par le MHV-A59 et le 51.6-MHV3, corrlaient avec une invasion virale subsquente du SNC, au niveau de la BHE. Nous avons dmontr que linvasion crbrale du MHV3 tait associe une infection productive des BMEC et laltration subsquente des protines de jonctions serres occludine, VE-cadhrine et ZO-1 se traduisant par une augmentation de la permabilit de la BHE et lentre conscutive du virus dans le cerveau. Dans lensemble, les rsultats de cette tude mettent en lumire limportance du maintien de lintgrit structurale et fonctionnelle des LSEC et des BMEC lors dinfections virales aiges par des MHV afin de limiter les dommages hpatiques associs linduction dune rponse inflammatoire exagre et de prvenir le passage des virus au cerveau suite une dissmination par voie hmatogne. Ils rvlent en outre un nouveau rle aggravant pour le TLR2 dans lvolution de lhpatite virale aige ouvrant la voie de nouvelles avenues thrapeutiques visant moduler lactivit inflammatoire du TLR2.
