3 resultados para Gd2GaTaO7 : Eu3 , Bi2
em Doria (National Library of Finland DSpace Services) - National Library of Finland, Finland
Resumo:
Particulate nanostructures are increasingly used for analytical purposes. Such particles are often generated by chemical synthesis from non-renewable raw materials. Generation of uniform nanoscale particles is challenging and particle surfaces must be modified to make the particles biocompatible and water-soluble. Usually nanoparticles are functionalized with binding molecules (<i>e.g.</i>, antibodies or their fragments) and a label substance (if needed). Overall, producing nanoparticles for use in bioaffinity assays is a multistep process requiring several manufacturing and purification steps. This study describes a biological method of generating functionalized protein-based nanoparticles with specific binding activity on the particle surface and label activity inside the particles. Traditional chemical bioconjugation of the particle and specific binding molecules is replaced with genetic fusion of the binding molecule gene and particle backbone gene. The entity of the particle shell and binding moieties are synthesized from generic raw materials by bacteria, and fermentation is combined with a simple purification method based on inclusion bodies. The label activity is introduced during the purification. The process results in particles that are ready-to-use as reagents in bioaffinity. Apoferritin was used as particle body and the system was demonstrated using three different binding moieties: a small protein, a peptide and a single chain Fv antibody fragment that represents a complex protein including disulfide bridge.If needed, Eu3+ was used as label substance. The results showed that production system resulted in pure protein preparations, and the particles were of homogeneous size when visualized with transmission electron microscopy. Passively introduced label was stably associated with the particles, and binding molecules genetically fused to the particle specifically bound target molecules. Functionality of the particles in bioaffinity assays were successfully demonstrated with two types of assays; as labels and in particle-enhanced agglutination assay. This biological production procedure features many advantages that make the process especially suited for applications that have frequent and recurring requirements for homogeneous functional particles. The production process of ready, functional and watersoluble particles follows principles of green chemistry, is upscalable, fast and cost-effective.
Resumo:
Munasarjasyp, naisten vaarallisin gynekologinen syp, aiheuttaa viidenneksi eniten sypkuolemia maailmassa. Munasarjasyp todetaan Suomessa noin 500 naisella vuosittain. CA125 on glykoproteiini ja yksi ainoista kytss olevavista hyvksytyist biomerkkiaineista munasarjasyvn havaitsemiseen. CA125:n pitoisuuden normaaliraaa pidetn 0-35 U/ml. Koholla olevaa arvoa ei voi suoraan yhdist munasarjasypn, koska CA125-pitoisuus voi kohota mys maksasairauden, endometrioosin, munasarjakystan tai ovulaatiokierron takia. Diplomityn tavoitteena oli kehitt munasarjasyvn varhaiseen havaitsemiseen kohdennettu diagnostiikkatesti, joka perustui CA125-glykoproteiinin muuttuneeseen glykosylaatioon ja lektiinien hydyntmiseen sitojamolekyylein. Tyss kytettiin analyyttin neljst eri lhteest olevaa CA125:t. Lhtein olivat munasarjasyvn OVCAR3-solulinjassa tuotettu CA125, sek homogeenisesta istukkanytteest maksakirroosi ja itusolukasvain potilailta eristetty CA125. Tyss verrattiin kymment eri kasvilektiini, jotka olivat pllystetty Eu3+-nanopartikkelilla. Suurin osa tyss kytetyist kasvilektiineist tunnistivat istukka-CA125:n. Japaninsinisade agglutiniini tunnisti munasarja CA125:n. Vehnalkion agglutiniini tunnisti itusolukasvain- ja maksakirroosi CA125:n. Ristireaktion lisksi ongelmaksi muodostui korkea taustasignaali. CA125-lektiinimritys vaatii viel kehityst, jotta ristireaktio ja taustasignaalitasoa saataisiin pienennetty. Menetelmn kliininen hydynnettvyys pit viel testataan suoraa potilaiden seeruminytteist. CA125-lektiinimrityst voidaan mahdollisesti kytt CA125-immunomrityksen rinnalla tutkittaessa munasarjasyvn mahdollisuutta. Tuolloin menetelmn avulla voitaneen poissulkea mys muut pahanlaatuiset tapaukset kuten itusolukasvaimet ja maksakirroosi.
Resumo:
Keskitettyihin laboratoriotutkimuksiin verrattuna potilaan tai nytteenottopaikan lheisyydess tehtv vieritestaus on useimmiten kustannustehokkaampaa, helpompaa ja huomattavasti nopeampaa, eik testin suorittamiseen vlttmtt vaadita erityiskoulutettua henkilkuntaa. Potilaslheinen diagnostiikka on muokannut terveydenhoitoalaa siirtmll pivittisi ja rutiininomaisia mrityksi lhelle potilasta, tulosten ollessa selvill lhes vlittmsti. Nopea diagnostiikkaa saattaa mys vaikuttaa jatkohoitoptksen tekemiseen sairaalaolosuhteissa. Riittvn herkkyyden omaavien mritysjrjestelmien suunnittelu ja valmistus on kuitenkin hankalaa, lisksi valmistusmateriaalien ja kytettyjen reagenssien tasalaatuisuus ei aina ole itsestn selv. Laatuvirheet ovat yleisesti vaikeasti havaittavia sek vaikuttavat olennaisesti mrityksen suorittamiseen ja tulokseen. Mikroskaalalla materiaalien fysikaalinen kyts muuttuu, ominaisuus otettava huomioon jrjestelmi suunnitellessa. Tutkielman kokeellisessa osassa optimoitiin 107 nm:n ja 92 nm:n Eu3+-ioneja sisltvi polystyreeni-nanopartikkeleita sek kahta eri anti-TSH vasta-ainetta hydyntv heterogeeninen sandwich-tyyppinen immunomritys uudelle mritysalustalle. Tyss tarkasteltiin immunomrityksen optimaaliselle toiminnalle olennaisia asioita kuten lmptilaa mrityksen eri pisteiss, reaktiotilavuuksia ja -aikoja, puskureiden koostumuksia ja pitoisuuksia, leima-ainemri, silytysolosuhteita sek mikrofluidiikan vaikutuksia ja toimintaa tietokoneohjatulla mekaanisella ruiskujrjestelmll. Diagnostiikkakasetin reaktiokammion pesutekniikat sek pesuaineen vahvuus sek koostumus olivat mys tarkasteltavina. Nanopartikkeleiden tuottama pitkikinen fluoresenssi mitattiin reaktiokammion pinnalta Victor-levylukijalla. Haastetta tyhn toi mikrofluidiikan hallinta ja sen ominaisuudet, pasiassa nesteliike, kuplanmuodostus sek reaktiokammion onnistunut pesu. Mritys toimii teknisesti hyvin ja oikealla tavalla. Mritysaika oli 15 minuuttia. Aivan pienimpi pitoisuuksia ei kuitenkaan kyetty erottamaan taustasta. TSH-mrityksen optimointi tuotti runsaasti teknist perustietoa heterogeenisen immunomrityksen toimivuudesta kasetti-ympristss, mik helpottaa muiden samalla periaatteella toimivien mritysten kyttnottoa. Mritysjrjestelm voidaan tulevaisuudessa kytt esimerkiksi kilpirauhasen vajaa- tai liikatoiminnan havaitsemisen lisksi muun muassa sydninfarktin varhaiseen ja nopeaan toteamiseen.
