21 resultados para oligotiofeni politiofeni tiofeni S-monossido tiofeni S,S-diossido celle solari BHJ
em Université de Lausanne, Switzerland
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Rsum L'accident vasculaire crbral sensoriel pur est un des syndromes lacunaires, d l'occlusion de petits vaisseaux crbraux, souvent dans le cadre d'une lsion intressant le noyau ventro-caudal du thalamus. Il produit un hmisyndrome sensitif pur, et parfois un syndrome douloureux se dveloppe distance de l'vnement aigu. Afin d'tudier la rcupration fonctionnelle dans le cortex somatosensoriel (SI) aprs une telle lsion dans le thalamus, un modle de lsion excitotoxique a t dvelopp dans le systme somatosensoriel de la souris adulte, caractris par la prsence de formations cytoarchitectoniques dans SI appeles "tonneaux". Chacun de ces tonneaux correspond la reprsentation corticale d'une vibrisse du museau. L'activit mtabolique a t mesure dans SI diffrents intervalles aprs la lsion, l'aide de doxyglucose marqu radioactivement. Dans les deux premiers jours suivant celle-ci, l'activit mtabolique diminue de manire importante dans toutes les couches corticales, avec une atteinte plus marque dans la couche IV, principale projection des axones thalamo-corticaux. Une rcupration de l'activit mtabolique se produit ensuite, d'autant plus marque que le dlai aprs la lsion est grand. Cette rcupration s'observe dans toutes les couches coticales, les couches I et Vb rcuprant plus rapidement que les couches II, III, IV, Va et VI. Cinq semaines aprs la lsion, l'absence des vibrisses correspondant la partie daffrente de SI diminue l'activit mtabolique corticale de 32% et dmontre l'activation par la priphrie de cette partie de l'corce, malgr la perte des axones thalamo-corticaux provenant du noyau ventro-caudal. Des expriences de traage rtrograde ont montr une augmentation des projections intracorticales sur la partie daffrente de l'corce, en particulier de longue distance, ainsi que des projections interhmisphriques, mais n'ont pas permis de mettre en vidence de nouvelle projection thalamique, indiquant une origine corticale la rcupration fonctionnelle observe. Abstract To study the degree and time course of the functional recovery in the somatosensory cortex (SI) after an excitotoxic lesion in the adult mouse thalamus, metabolic activity was determined in SI at various times points post lesion. Immediately after the lesion, metabolic activity in the thalamically deafferented part of SI was at its lowest value but increased progressively at subsequent time points. This was seen in all cortical layers, however, layers I and Vb recover more rapidly than layers II, III, IV, Va and VI. Removal of the mystacial whiskers corresponding to the deafferented area, 5 weeks after cortical recovery, produced a subsequent 32% drop in metabolic activity, demonstrating peripheral sensory activation of this part of the cortex. Tracing experiments revealed that the deafferented cortex did not receive a novel thalamic input, but cortico-cortical and contralateral barrel cortex projections to this area were reinforced. We conclude that the cortical functional recovery after a thalamic lesion is, at least partially, due to modified cortico-cortical and callosal projections to the deafferented cortical area.
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Rsum : Les progrs techniques de la spectromtrie de masse (MS) ont contribu au rcent dveloppement de la protomique. Cette technique peut actuellement dtecter, identifier et quantifier des milliers de protines. Toutefois, elle n'est pas encore assez puissante pour fournir une analyse complte des modifications du protome corrles des phnomnes biologiques. Notre objectif tait le dveloppement d'une nouvelle stratgie pour la dtection spcifique et la quantification des variations du protome, base sur la mesure de la synthse des protines plutt que sur celle de la quantit de protines totale. Pour cela, nous volions associer le marquage puls des protines par des isotopes stables avec une mthode d'acquisition MS base sur le balayage des ions prcurseurs (precursor ion scan, ou PIS), afin de dtecter spcifiquement les protines ayant intgr les isotopes et d'estimer leur abondance par rapport aux protines non marques. Une telle approche peut identifier les protines avec les plus hauts taux de synthse dans une priode de temps donne, y compris les protines dont l'expression augmente spcifiquement suite un vnement prcis. Nous avons tout d'abord test diffrents acides amins marqus en combinaison avec des mthodes PIS spcifiques. Ces essais ont permis la dtection spcifique des protines marques. Cependant, en raison des limitations instrumentales du spectromtre de masse utilis pour les mthodes PIS, la sensibilit de cette approche s'est rvle tre infrieure une analyse non cible ralise sur un instrument plus rcent (Chapitre 2.1). Toutefois, pour l'analyse diffrentielle de deux milieux de culture conditionns par des cellules cancreuses humaines, nous avons utilis le marquage mtabolique pour distinguer les protines d'origine cellulaire des protines non marques du srum prsentes dans les milieux de culture (Chapitre 2.2). Paralllement, nous avons dvelopp une nouvelle mthode de quantification nomme IBIS, qui utilise des paires d'isotopes stables d'acides amins capables de produire des ions spcifiques qui peuvent tre utiliss pour la quantification relative. La mthode IBIS a t applique l'analyse de deux lignes cellulaires cancreuses compltement marques, mais de manire diffrencie, par des paires d'acides amins (Chapitre 2.3). Ensuite, conformment l'objectif initial de cette thse, nous avons utilis une variante pulse de l'IBIS pour dtecter des modifications du protome dans des cellules HeLa infecte par le virus humain Herpes Simplex-1 (Chapitre 2.4). Ce virus rprime la synthse des protines des cellules htes afin d'exploiter leur mcanisme de traduction pour la production massive de virions. Comme prvu, de hauts taux de synthse ont t mesurs pour les protines virales dtectes, attestant de leur haut niveau d'expression. Nous avons de plus identifi un certain nombre de protines humaines dont le rapport de synthse et de dgradation (S/D) a t modifi par l'infection virale, ce qui peut donner des indications sur les stratgies utilises par les virus pour dtourner la machinerie cellulaire. En conclusion, nous avons montr dans ce travail que le marquage mtabolique peut tre employ de faon non conventionnelle pour tudier des dimensions peu explores en protomique. Summary : In recent years major technical advancements greatly supported the development of mass spectrometry (MS)-based proteomics. Currently, this technique can efficiently detect, identify and quantify thousands of proteins. However, it is not yet sufficiently powerful to provide a comprehensive analysis of the proteome changes correlated with biological phenomena. The aim of our project was the development of ~a new strategy for the specific detection and quantification of proteom variations based on measurements of protein synthesis rather than total protein amounts. The rationale for this approach was that changes in protein synthesis more closely reflect dynamic cellular responses than changes in total protein concentrations. Our starting idea was to couple "pulsed" stable-isotope labeling of proteins with a specific MS acquisition method based on precursor ion scan (PIS), to specifically detect proteins that incorporated the label and to simultaneously estimate their abundance, relative to the unlabeled protein isoform. Such approach could highlight proteins with the highest synthesis rate in a given time frame, including proteins specifically up-regulated by a given biological stimulus. As a first step, we tested different isotope-labeled amino acids in combination with dedicated PIS methods and showed that this leads to specific detection of labeled proteins. Sensitivity, however, turned out to be lower than an untargeted analysis run on a more recent instrument, due to MS hardware limitations (Chapter 2.1). We next used metabolic labeling to distinguish the proteins of cellular origin from a high background of unlabeled (serum) proteins, for the differential analysis of two serum-containing culture media conditioned by labeled human cancer cells (Chapter 2.2). As a parallel project we developed a new quantification method (named ISIS), which uses pairs of stable-isotope labeled amino acids able to produce specific reporter ions, which can be used for relative quantification. The ISIS method was applied to the analysis of two fully, yet differentially labeled cancer cell lines, as described in Chapter 2.3. Next, in line with the original purpose of this thesis, we used a "pulsed" variant of ISIS to detect proteome changes in HeLa cells after the infection with human Herpes Simplex Virus-1 (Chapter 2.4). This virus is known to repress the synthesis of host cell proteins to exploit the translation machinery for the massive production of virions. As expected, high synthesis rates were measured for the detected viral proteins, confirming their up-regulation. Moreover, we identified a number of human proteins whose synthesis/degradation ratio (S/D) was affected by the viral infection and which could provide clues on the strategies used by the virus to hijack the cellular machinery. Overall, in this work, we showed that metabolic labeling can be employed in alternative ways to investigate poorly explored dimensions in proteomics.
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Cette tude examine deux copies de la "Vie et Passion de Jsus Christ" conserves par la Cinmathque suisse avec une premire proccupation de type philologique qui conduit prendre la mesure de l'autonomisation de chacun des "tableaux" composant le film et de l'htrognit de ce dernier. Puis les constats mis propos du support matriel sont articuls avec une rflexion d'ordre esthtique qui dgage l'importance de l'"effet-tableau" inscrivant cette production filmique dans une gnalogie plus large. Le cinma tant alors le lieu de convergences entre diverses sries culturelles, l'article envisage les liens entre la production Path et une pratique jusqu'ici peu discute dans ce contexte, celle du tableau vivant. This article is a study of two copies of the "Life and Passion of Jesus Christ" held at the Cinemathque suisse. Our first, broadly philological, concern is to recognise the degree of autonomy of each of the "tableaus" that make up the film, thus establishing the latter's heterogeneous composition. Secondly, adopting a more aesthetic approach, we discuss the importance of the tableau-effect, placing this kind of film production in a wider genealogical context. Given that cinema was at the time a meeting place for different cultural sequences, this article the examines the links between Pathe films and the "tableau vivant", a practice that until now has been rarely discussed in this regard.
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Introduction:L'incidence annuelle du cancer de l'ovaire en Suisse est de 600 cas, il touche principalement les femmes ges de plus de 60 ans. Le cancer de l'ovaire est aujourd'hui la 1re cause de mortalit par cancer gyncologique chez la femme. Le but de notre recherche, est de crer une base de donnes de toutes lespatientes atteintes d'un cancer de l'ovaire et hospitalises au CHUV pour la prise en charge de leur maladie.Cette tude rtrospective monocentrique nous permettra en premier lieu d'analyser les caractristiques decette tumeur prsentes par les patientes, les traitements instaurs pour traiter ce cancer et les taux dercidives et de survie des patientes en fonction de ces variables.Mthodologie:Analyse rtrospective de 147 patientes diagnostiques d'un cancer de l'ovaire et hospitalises au CHUV entreseptembre 2001 et mars 2010 pour la prise en charge de leur tumeur ovarienne. Utilisation du programme informatique ARCHIMED qui contient les dossiers mdicaux de toutes les patientes inclues dans l'tude et cration de 2 bases des donnes. La 1re base de donnes regroupe l'ensemble des patientes de l'tude ycompris les tumeurs type borderline, la 2me base de donnes concerne uniquement les patientes ayant rcidiv de leur tumeur. Les tumeurs bnignes ont t exclues de l'tude.Rsultats:La probabilitde survie 1 an chez les patientes avec un cancer de l'ovaire, tous stades FIGO et prises encharge confondus, hospitalises au CHUV est de 88,04% (95% CI = 0.7981-‐0.9306), 3 ans la probabilit de survie est de 70,4% (95% CI = 0.5864-‐0.7936), et plus de 5 ans, elle est de 60% (95% CI = 0.4315-‐0.6859).Nous avons compar le taux de survie en fonction du stade FIGO de la tumeur ovarienne et nous avons observ une diffrence significative de survie entre les stades FIGO prcoces et les stades avancs (Pvaleur=0.0161).En plus d'une intervention chirurgicale, les patientes atteintes d'un cancer de l'ovaire sont normalement traites par une chimiothrapie. Dans notre tude, 70 patientes ont bnfici d'une chimiothrapie; untraitement adjuvant a t donn dans 78 % des cas (N = 55), un traitement noadjuvant a t administr chez 22% des patientes (N=15). Le type combin carboplatine-‐taxane est la chimiothrapie la plus frquente (75%). Au total sur l'tude, 66 patientes sur les 147 (44%) ont rcidiv de leur tumeur. En ce quiconcerne leur prise en charge, 46% des patientes ont reu une chimiothrapie unique comme du gemzar, cealyx ou taxotre aprs leur rcidive. Une cytorduction secondaire a galement t effectue chez 33% de ces patientes ayant une rcidive. Nous avons galement tudi l'intervalle de temps entre la date de larcidive et celle du dcs. Parmi les 28 patientes dcdes chez les rcidives, 10 d'entre-‐elles (36%) ont survcu moins d'un an une fois la rcidive diagnostique, 8 (28%) patientes ont survcu jusqu' 2 ans, etles 10 (36%) autres patientes ont survcu de 2 5 ans. En ce qui concerne le taux de mortalit; 39 patientes sur les 147 tudies sont dcdes pendant la priode d'observation, soit 26% des cas. La tumeurtype borderline, prsente une prolifration pithliale atypique sans invasion dans le stroma et reprsente10 20% de toutes les tumeurs ovariennes. Dans notre tude, 41 patientes sont porteuses de cette tumeur(28%) et la moyenne d'ge est de 49 ans. En ce qui concerne leur prise en charge, l'intervention chirurgicalela plus frquente, soit 23% des cas, est l'annexectomie unilatrale, qui reste une attitude conservative pources patientes dsirant prserver leur fertilit. 6 patientes prsentant ce type de tumeur ont rcidiv, soit 14% des cas, avec une progression pelvienne, et 3 de ces 6 patientes sont dcdes. Dans notre analyse, on observe que la probabilit de vivre plus longtemps que 1an pour les patientes ayant une tumeur borderline est de 93,8% (95% CI= 0.6323-‐ 0.9910), 3 ans elle est galement de 93,8% (95% CI = 0.6323-‐0.9910) et 5 ans elle est de 78,1% (95% CI = 0.3171-‐0.9483). Nous n'avons pas observ dediffrence de survie dans notre tude entre les patientes prsentant une tumeur borderline et le non‐borderline . (Pvaleur=0.3301)
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Certaines dgnrescences rtiniennes sont engendres par des mutationsgntiques et conduisent la perte des cellules photosensibles, lesphotorcepteurs (cnes et/ou btonnets), et donc la ccit (Roy et al., 2010).La prvalence est de 1/3000 chez les Caucasiens. Les Rtinites Pigmentaires(RP) en composent la majorit des cas, suivent l'Amaurose congnitale deLeber et la maladie de Stargardt. Il n'y a pas une mutation type associs unemaladie mais diverses mutations peuvent aboutir une dgnrescence de lartine. Tout comme le reste du systme nerveux central, la rtine lse n'a pasles capacits de se rgnrer. Un objectif du traitement est de ralentir ladgnrescence de la rtine dans le but de la stabiliser. La thrapie gniqueconstitue actuellement la seule approche thrapeutique mme de traiter lesdgnrescences rtiniennes d'origine gntique. Elle consiste utiliser un virusmodifi, qui n'a plus les capacits de se reproduire, appel vecteur pour ciblercertaines cellules afin d'ajouter un gne sain ou d'inhiber un gne malade. Lesvirus associs l'adnovirus (AAV) et les Lentivirus (LV) sont les 2 principauxtypes de virus utiliss en thrapie gnique en ophtalmologie. D'autres vecteursexistent, comme les adnovirus et le virus de l'anmie infectieuse quine. Destudes de thrapie gnique effectues chez l'homme avec le vecteur AAV ontdmontr une sensible amlioration des fonctions visuelles (acuit visuelle,champ visuel, pupillomtrie et le dplacement dans un environnement avec unelumire tamise) chez des patients atteints d'Amaurose congnitale de Leber(Maguire et al., Ali et al., Hauswirth et al., Bennett et al.). Le vecteur utilis aucours de ce travail est un LV, qui a pour avantage de pouvoir transporter degrands gnes. Lorsque ce vecteur est pseudotyp avec une enveloppe VSVG, iltransduit (transfrer un gne qui sera fonctionnel dans la cellule cible) bienl'pithlium pigmentaire rtinien (ncessaire la survie et la fonction desphotorcepteurs). Afin de changer le tropisme du vecteur, celui test dans cettetude contient une enveloppe de type Mokola qui cible efficacement les cellulesgliales du cerveau et donc probablement aussi les cellules de Müller de la rtine.Le but court terme est de transformer gntiquement ces cellules pour leurfaire scrter des molcules favorisant la survie des photorcepteurs. Pourrvler la cellule cible par le vecteur, le gne qui sera exprim dans les cellulestransduites code pour la protine fluorescente verte 2 (GFPII) et n'a pas defonction thrapeutique. Aprs avoir produit le virus, deux types de souris ont tinjectes : des souris dpourvues du gne de la rhodopsine appeles Rho -/- etdes souris sauvages appeles C57BL6. Les souris Rho -/- ont t choisies entant que modle de dgnrescence rtinienne et les souris C57BL6 en tant quecomparatif. Les souris Rho -/- et C57BL56 ont t injectes entre le 2me et le3me mois de vie et sacrifies 7 jours aprs. Des coupes histologiques de la rtineont permis de mesurer et comparer pour chaque oeil, les distances detransduction du RPE et de la neurortine (= toute la rtine sauf le RPE). Ladistance sur laquelle le RPE est transduit dtermine la taille de la bulled'injection alors que la distance sur laquelle la neurortine est transduitedtermine la capacit du vecteur diffuser dans la rtine. Les rsultats montrentune expression plus importante de la GFPII dans le RPE que dans la neurortinechez les souris Rho -/- et C57BL6. Les principales cellules transduites auniveau de la neurortine sont, comme attendu, les cellules de Müller. Lorsquel'on compare les proportions de neurortine et de RPE transduites, on constatequ'il y a globalement eu une meilleure transduction chez les souris Rho -/-que chez les souris C57BL6. Cela signifie que le vecteur est plus efficace pourtransduire une rtine dgnre qu'une rtine saine. Pour dterminer quels typesde cellules exprimaient la GFPII, des anticorps spcifiques de certains types decellules ont t utiliss. Ces rsultats sont similaires ceux d'autres tudeseffectues prcdemment, dont celle de Calame et al. en 2011, et tendent prouver que le vecteur lentiviral avec l'enveloppe Mokola et le promoteur EFsest idal pour transduire avec un gne thrapeutique des cellules de Müller dansdes rtines en dgnrescence.
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Methicillin resistant Staphylococcus aureus (MRSA) bacteria have emerged in the early 1980's in numerous health care institutions around the world. The main transmission mechanism within hospitals and healthcare facilities is through the hands of health care workers. Resistant to several antibiotics, the MRSA is one of the most feared pathogens in the hospital setting since it is very difficult to eradicate with the standard treatments. There are still a limited number of anti-MRSA antibiotics but the first cases of resistance to these compounds have already been reported and their frequency is likely to increase in the coming years. Every year, the MRSA infections result in major human and financial costs, due to the high associated mortality and expenses related to the required care. Measures towards a faster detection of resistant bacteria and establishment of appropriate antibiotic treatment parameters are fundamental. Also as part as infection prevention, diminution of bacteria present on the commonly touched surfaces could also limit the spread and selection of antibiotic resistant bacteria. During my thesis, projects were developed around MRSA and antibiotic resistance investigation using innovative technologies. The thesis was subdivided in three main parts with the use of atomic force microscopy AFM for antibiotic resistance detection in part 1, the importance of the bacterial inoculum size in the selection of antibiotic resistance in part 2 and the testing of antimicrobial surfaces creating by sputtering copper onto polyester in part 3. In part 1 the AFM was used two different ways, first for the measurement of stiffness (elasticity) of bacteria and second as a nanosensor for antibiotic susceptibility testing. The stiffness of MRSA with different susceptibility profiles to vancomycin was investigated using the stiffness tomography mode of the AFM and results have demonstrated and increased stiffness in the vancomycin resistant strains that also paralleled with increased thickness of the bacterial cell wall. Parts of the AFM were also used to build a new antibiotic susceptibility-testing device. This nano sensor was able to measure vibrations emitted from living bacteria that ceased definitively upon antibiotic exposure to which they were susceptible but restarted after antibiotic removal to which they were resistant, allowing in a matter of minute the assessment of antibiotic susceptibility determination. In part 2 the inoculum effect (IE) of vancomycin, daptomycin and linezolid and its importance in antibiotic resistance selection was investigated with MRSA during a 15 days of cycling experiment. Results indicated that a high bacterial inoculum and a prolonged antibiotic exposure were two key factors in the in vitro antibiotic resistance selection in MRSA and should be taken into consideration when choosing the drug treatment. Finally in part 3 bactericidal textile surfaces were investigated against MRSA. Polyesters coated after 160 seconds of copper sputtering have demonstrated a high bactericidal activity reducing the bacterial load of at least 3 logio after one hour of contact. -- Au cours des dernires dcennies, des bactries multirsistantes aux antibiotiques (BMR) ont merg dans les hpitaux du monde entier. Depuis lors, le nombre de BMR et la prvalence des infections lies aux soins (IAS) continuent de crotre et sont associs une augmentation des taux de morbidit et de mortalit ainsi qu' des cots levs. De plus, le nombre de rsistance diffrentes classes d'antibiotiques a galement augment parmi les BMR, limitant ainsi les options thrapeutiques disponibles lorsqu'elles ont lies a des infections. Des mesures visant une dtection plus rapide des bactries rsistantes ainsi que l'tablissement des paramtres de traitement antibiotiques adquats sont primordiales lors d'infections dj prsentes. Dans une optique de prvention, la diminution des bactries prsentes sur les surfaces communment touches pourrait aussi freiner la dissmination et l'volution des bactries rsistantes. Durant ma thse, diffrents projets incluant des nouvelles technologies et voluant autour de la rsistance antibiotique ont t traits. Des nouvelles technologies telles que le microscope force atomique (AFM) et la pulvrisation cathodique de cuivre (PCC) ont t utilises, et le Staphylococcus aureus rsistant la mticilline (SARM) a t la principale BMR tudie. Deux grandes lignes de recherche ont t dveloppes; la premire visant dtecter la rsistance antibiotique plus rapidement avec l'AFM et la seconde visant prvenir la dissmination des BMR avec des surfaces cres grce la PCC. L'AFM a tout d'abord t utilis en tant que microscope sonde locale afin d'investiguer la rsistance la vancomycine chez les SARMs. Les rsultats ont dmontr que la rigidit de la paroi augmentait avec la rsistance la vancomycine et que celle-ci corrlait aussi avec une augmentation de l'paisseur des parois, vrifie grce la microscopie lectronique. Des parties d'un AFM ont t ensuite utilises afin de crer un nouveau dispositif de test de sensibilit aux antibiotiques, un nanocapteur. Ce nanocapteur mesure des vibrations produites par les bactries vivantes. Aprs l'ajout d'antibiotique, les vibrations cessent dfinitivement chez les bactries sensibles l'antibiotique. En revanche pour les bactries rsistantes, les vibrations reprennent aprs le retrait de l'antibiotique dans le milieu permettant ainsi, en l'espace de minutes de dtecter la sensibilit de la bactrie un antibiotique. La PCC a t utilise afin de crer des surfaces bactricides pour la prvention de la viabilit des BMR sur des surfaces inertes. Des polyesters finement recouverts de cuivre (Cu), connu pour ses proprits bactricides, ont t produits et tests contre des SARMs. Une mthode de dtection de viabilit des bactries sur ces surfaces a t mise au point, et les polyesters obtenus aprs 160 secondes de pulvrisation au Cu ont dmontr une excellente activit bactricide, diminuant la charge bactrienne d'au moins 3 logio aprs une heure de contact. En conclusion, l'utilisation de nouvelles technologies nous a permis d'voluer vers de mthodes de dtection de la rsistance antibiotique plus rapides ainsi que vers le dveloppement d'un nouveau type de surface bactricide, dans le but d'amliorer le diagnostic et la gestion des BMR.
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Summary The best described physiological function of low-density lipoproteins (LDL) is to transport cholesterol to target tissues. LDL deliver their cholesterol cargo to cells following their interaction with the LDL receptor. LDL, when their vascular concentrations increase, have also been implicated in pathologies such as atherosclerosis. Among the cell types that are found in blood vessels, endothelial and smooth muscle cells have dominated cellular research on atherosclerotic mechanisms and LDL activation of signaling pathways, while very little is known about adventitial fibroblast activation caused by elevated lipoprotein levels. Since fibroblasts participate in wound repair and since it has recently been recognized that fibroblasts may play pivotal roles in vascular remodeling and repair of injury, we assessed whether lipoproteins affect fibroblast function. We have found that LDL specifically mediate the activation of a class of mitogen-activated protein kinases (MAPKs): the p38 MAPKs. The activation of this pathway in turn modulates cell shape by promoting lamellipodia formation and extensive cell spreading. This is of particular interest because it provides a mechanism by which LDL can promote wound healing or vessel wall remodeling as observed during the development of atherosclerosis. In order to understand the molecular mechanisms by which LDL induce p38 activation we searched for the component in the LDL particle responsible for the induction of this pathway. We found that cholesterol is the major component of lipoprotein particles that mediates their ability to stimulate the p38 MAPK pathway. Furthermore, we investigated the cellular mechanisms underlying the ability of LDL to induce cell shape changes and whether this could participate in wound repair. Our recent data demonstrates that the capacity of LDL to induce fibroblast spreading relies on their ability to stimulate IL-8 secretion, which in turn leads to accelerated wound healing. LDL-induced IL-8 production and subsequent wound closure are impaired upon inhibition of the p38 MAPK pathway indicating that the LDL-induced spreading and accelerated wound sealing rely on the ability of LDL to stimulate IL-8 secretion in a p38 MAPK-dependent manner. Therefore, regulation of fibroblast shape and migration by lipoproteins may be relevant to atherosclerosis that is characterized by increased LDL-cholesterol levels, IL-8 production and extensive remodeling of the vessel wall. Rsum: La fonction physiologique des lipoprotines faible densit (LDL) la mieux dcrite est celle du transport du cholestrol aux tissus cibles. Les LDL livrent leur cargaison de cholestrol aux cellules aprs leur interaction avec le rcepteur au LDL. Une concentration vasculaire des LDL augment est galement implique dans le dveloppement de l'athrosclrose. Parmi les types de cellule prsents dans les vaisseaux sanguins, les cellules endothliales et les cellules du muscle lisse ont domin la recherche cellulaire sur les mcanismes athrosclrotiques et sur l'activation par les LDL des voies de signalisation intracellulaire. A l'inverse peu de choses sont connues sur l'activation des fibroblastes de l'adventice par les lipoprotines. Puisqu'il a t rcemment reconnu que les fibroblastes peuvent jouer un rle central dans la remodlisation vasculaire et la rparation tissulaire, nous avons tudi si les lipoprotines affectent la fonction des fibroblastes. Nous avons constat que les LDL activent spcifiquement une classe de protines kinases: les p38 MAPK (mitogen-activated protein kinases). L'activation de cette voie module son tour la forme de la cellule en favorisant la formation de lamellipodes et l'agrandissement des cellules. Cela a un intrt particulier car il fournit un mcanisme par lequel les LDL peuvent promouvoir la cicatrisation ou la remodlisation des parois vasculaires comme observs lors du dveloppement de l'athrosclrose. Pour comprendre les mcanismes molculaires par lesquels les LDL provoquent l'activation des p38 MAPK, nous avons cherch identifier les composants dans la particule de LDL responsables de l'induction de cette voie. Nous avons constat que le cholestrol est l'lment principal des particules de lipoprotine qui contrle leur capacit stimuler la voie des p38 MAPK. En outre, nous avons examin les mcanismes cellulaires responsables de la capacit des LDL induire des changements dans la forme des cellules. Nos donnes rcentes dmontrent que la capacit des LDL induire l'agrandissement des cellules, ainsi que leur aptitude favoriser la cicatrisation, reposant sur leur capacit stimuler la scrtiond'IL-8. La production d'IL-8 induite par les LDL est bloque par l'inhibition de la voie p38 MAPK, ce qui indique que l'talement des cellules induit par les LDL ainsi que l'acclration de la cicatrisation sont lis la capacit des LDL stimuler la scrtion d'IL8 via l'activation des p38 MAPK. La rgulation de la forme et de la migration des fibroblastes par les lipoprotines peuvent donc participer au dveloppement de l'athrosclrose qui est caractrise par l'augmentation des niveaux de production de LDL-cholestrol et d'IL-8 ainsi que par une remodlisation augmente de la paroi du vaisseau.
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Rsum. Mon travail s'articule en deux parties, chacune forme de deux chapitres, consacres successivement au faire et l'tre, pour passer sans cesse du medicus faber au medicus sapiens, deux identits en interaction constante, pour une mdecine des confins de la vie qui se veut responsable. I. La question du faire pour la mdecine des confins de la vie. -Le premier chapitre sera ddi la dmesure, l'hybris de notre mdecine moderne. L'action de Promthe, par le feu donn, me permettra d'acqurir le savoir, la science ncessaire un artisanat d'honnte homme. Il s'agit de faire juste car, sans cela, la mdecine est une imposture. Inverser les priorits, privilgier la culture de l'tre au dtriment des comptences du faire, risque bien de dboucher sur la tromperie d'un pseudo tre qui recouvre une incomptence coupable. Mais la foi dans le faire seul, dans une action dtache d'une rflexion critique prenant en compte l'tre, mne l'hybris, la dmesure de l'homme qui se croit et se proclame Dieu. Et nous voici ainsi mens face Nmsis, la vengeance qui punit l'hybris. -Dans le deuxime chapitre, cette action, y compris dans sa tendance la dmesure, l'hybris, se verra plonge dans l'utilitarisme qui imprgne la pense occidentale moderne et oriente tout notre contexte moral objectif, ce bruissement ambiant d'ides qui baigne et inflchit notre rflexion quotidienne. Nous verrons, dans le chapitre ddi cette grammaire thique, que lorsqu'il s'agit de donner au plus grand nombre le plus de bonheur possible, les patients des confins de la vie se trouvent toujours du ct des perdants, des sacrifis du bonheur. Cette part de mon travail me permettra de poser les principes de l'utilitarisme et d'en critiquer tant les fondements que les applications dans le cadre de la mdecine des confins de la vie. Puis la politique, qui gre les affaires de la Cit, entrera en jeu et l'tai de pnurie, de diffrence entre les besoins rels ou ressentis et les ressources, donnera un cadre contraignant cette rflexion communautaire. J'examinerai de manire critique diverses facettes des solutions proposes par la pense utilitariste puis chercherai avec John Rawls et Antigone la manire la plus sage d'atteindre, selon le mot de Ricoeur, une vie bonne avec et pour les autres dans une socit juste. II : La question de l'tre pour la mdecine des confins de la vie -Dans le troisime chapitre, consacr la dignit, je tenterai de cerner cette ide pour le patient des confins de la vie, et j'aborderai cette notion par deux chemins complmentaires et convergents : le temps congel et le trou de dignit. Je m'interrogerai tout d'abord, rflchissant quelque instant propos de l'embryon congel, sur le temps fig de celui qui, dans la dmence, n'a plus ni hier ni demain. Suspendu dans un prsent qui s'ternise, il chappe la mortalit et l'humaine condition jusqu' ce que la mort le surprenne, de l'extrieur de lui-mme. Pour rinscrire le patient dans sa temporalit, pour lui rendre sa mortalit propre et reconstruire ainsi son statut d'tre humain, sa dignit, il nous faudra faire appel ce que je nomme la contagion temporelle. Elle est le fait de l'entourage du patient, de celles et ceux qui forment son contexte, la famille et les proches comme les professionnels. Puis j'examinerai plusieurs significations du mot dignit, en particulier la dignit dite ontologique, lie l'tre, et celle que l'on peut dire conditionnelle, relative divers attributs, comme le paratre ou la raison, dont l'homme peut tre ou non pourvu. Entre ces deux dignits se creuse le trou de dignit toujours menaant car il comporte l'ide d'une brisure, d'une frontire entre les hommes, qui distingue et spare entre les humains, leur attribuant une valeur. Cette valeur rifie l'homme et menace ainsi la dignit de chacun. Le patient des confins de la vie, qu'il soit gar dans l'intemporalit ou dans le trou de dignit, doit tre imprativement maintenu dans la communaut comme dans la continuit de sa propre vie jusqu' ce que sa propre mort marque l'achvement de son propre chemin. Ce devoir, pour celles et ceux qui cheminent avec lui, de prs ou de loin, chappe au particulier et au circonstanciel pour acqurir un statut normatif, catgorique et universel. -Dans le quatrime chapitre, deux philosophes nous permettront d'aspirer le trou de dignit jusqu' le rendre virtuel. Avec Martin Buber, nous examinerons le rapport Je-Cela et la relation Je-Tu dans le contexte particulier des interactions qui unissent le patient des confins de sa vie et son mdecin. Puis il nous faudra bien raliser que cette relation se trouve mise en danger dans les Je-Tu briss par la dmence ou l'tat confusionnel. Comment, dans les confins de la vie, maintenir la relation lorsque Tu n'en veut ou n'en peut plus ? Emmanuel Levinas, et le visage de l'autre qui m'oblige et m'en rend responsable absolument, viendra la rescousse, nous permettant ainsi d'viter au patient des confins la perte de son ultime dignit dans la Shoah intime qui le menace dans ce temps de la vie. Cette thse va donc parcourir un chemin qui partant du faire ne pourra que me mener un questionnement sur l'tre. Il s'agit d'un travail d'homme actif qui a pour but, dans ma trajectoire de vie, de donner un sens mon artisanat du soin. Nous verrons donc que le faire, l'acte, ne pourra que se montrer complmentaire de l'tre, de la dignit et que ces deux approches tisseront et entremleront leurs brins dans ce tapis chatoyant de la vie, de celle, de celui, qu'r en atteint les confins, comme de la mienne.
Resumo:
Partant de la rception internationale du film Le Roman d'un tricheur de Sacha Guitry dans laquelle la voix du cinaste est frquemment rapproche de celle du "bonimenteur" de l'poque muette, cette tude examine les particularits de ce film en termes de positionnement du narrateur over par rapport aux images et par rapport au spectateur. Une filiation est pose entre ce film et Providence de Resnais au niveau des manifestations de l'oralit: l aussi, le narrateur occupe la place d'instigateur du monde filmique et de spectateur des images qu'il commente.
Resumo:
Les thrapies du cancer, comme la radiothrapie et la chimiothrapie, sont couramment utilises mais ont de nombreux effets secondaires. Ces thrapies invasives pour le patient ncessitent d'tre amliores et de nombreuses avances ont t faites afin d'adapter et de personnaliser le traitement du cancer. L'immunothrapie a pour but de renforcer le systme immunitaire du patient et de le rediriger de manire spcifique contre la tumeur. Dans notre projet, nous activons les lymphocytes Invariant Natural Killer T (iNKT) afin de mettre en place une immunothrapie innovatrice contre le cancer. Les cellules iNKT sont une unique sous-population de lymphocytes T qui ont la particularit de runir les proprits de l'immunit inne ainsi qu'adaptative. En effet, les cellules iNKT expriment leur surface des molcules prsentes aussi sur les cellules tueuses NK, caractristique de l'immunit inne, ainsi qu'un rcepteur de cellules T (TCR) qui reprsente l'immunit adaptative. Les cellules iNKT reconnaissent avec leur TCR des antignes prsents par la molcule CD1d. Les antignes sont des protines, des polysaccharides ou des lipides reconnus par les cellules du systme immunitaire ou les anticorps pour engendrer une rponse immunitaire. Dans le cas des cellules iNKT, l'alpha-galactosylceramide (αGC) est un antigne lipidique frquemment utilis dans les tudes cliniques comme puissant activateur. Aprs l'activation des cellules iNKT avec l'αGC, celles-ci produisent abondamment et rapidement des cytokines. Ces cytokines sont des molcules agissant comme des signaux activateurs d'autres cellules du systme immunitaire telles que les cellules NK et les lymphocytes T. Cependant, les cellules iNKT deviennent anergiques aprs un seul traitement avec l'αGC c'est dire qu'elles ne peuvent plus tre ractives, ce qui limite leur utilisation dans l'immunothrapie du cancer. Dans notre groupe, Stirnemann et al ont publi une molcule recombinante innovante, compose de la molcule CD1d soluble et charge avec le ligand αGC (αGC/sCD1d). Cette protine est capable d'activer les cellules iNKT tout en vitant l'anergie. Dans le systme immunitaire, les anticorps sont indispensables pour combattre une infection bactrienne ou virale. En effet, les anticorps ont la capacit de reconnatre et lier spcifiquement un antigne et permettent l'limination de la cellule qui exprime cet antigne. Dans le domaine de l'immunothrapie, les anticorps sont utiliss afin de cibler des antignes prsents seulement par la tumeur. Ce procd permet de rduire efficacement les effets secondaires lors du traitement du cancer. Nous avons donc fusionn la protine recombinante αGC/CD1d un fragment d'anticorps qui reconnat un antigne spcifique des cellules tumorales. Dans une tude prclinique, nous avons dmontr que la protine αGC/sCD1d avec un fragment d'anticorps dirig contre la tumeur engendre une meilleure activation des cellules iNKT et entrane un effet anti-tumeur prolong. Cet effet anti-tumeur est augment compar une protine αGC/CD1d qui ne cible pas la tumeur. Nous avons aussi montr que l'activation des cellules iNKT avec la protine αGC/sCD1d-anti-tumeur amliore l'effet anti- tumoral d'un vaccin pour le cancer. Lors d'expriences in vitro, la protine αGC/sCD1d-anti- tumeur permet aussi d'activer les cellules humaines iNKT et ainsi tuer spcifiquement les cellules tumorales humaines. La protine αGC/sCD1d-anti-tumeur reprsente une alternative thrapeutique prometteuse dans l'immunothrapie du cancer. - Les cellules Invariant Natural Killer T (iNKT), dont les effets anti-tumoraux ont t dmontrs, sont de puissants activateurs des cellules Natural Killer (NK), des cellules dendritiques (DC) et des lymphocytes T. Cependant, une seule injection du ligand de haute affinit alpha-galactosylceramide (αGC) n'induit une forte activation des cellules iNKT que durant une courte priode. Celle-ci est alors suivie d'une longue phase d'anergie, limitant ainsi leur utilisation pour la thrapie. Comme alternative prometteuse, nous avons montr que des injections rptes d'αGC charg sur une protine recombinante de CD1d soluble (αGC/sCD1d) chez la souris entranent une activation prolonge des cellules iNKT, associe une production continue de cytokine. De plus, le maintien de la ractivit des cellules iNKT permet de prolonger l'activit anti-tumorale lorsque la protine αGC/sCD1d est fusionne un fragment d'anticorps (scFv) dirig contre la tumeur. L'inhibition de la croissance tumorale n'est optimale que lorsque les souris sont traites avec la protine αGC/sCD1d-scFv ciblant la tumeur, la protine αGC/sCD1d-scFv non-approprie tant moins efficace. Dans le systme humain, les protines recombinantes αGC/sCD1d-anti-HER2 et anti-CEA sont capables d'activer et de faire prolifrer des cellules iNKT partir de PBMCs issues de donneurs sains. De plus, la protine αGC/sCD1d-scFv a la capacit d'activer directement des clones iNKT humains en l'absence de cellules prsentatrices d'antignes (CPA), contrairement au ligand αGC libre. Mais surtout, la lyse des cellules tumorales par les iNKT humaines n'est obtenue que lorsqu'elles sont incubes avec la protine αGC/sCD1d-scFv anti- tumeur. En outre, la redirection de la cytotoxicit des cellules iNKT vers la tumeur est suprieure celle obtenue avec une stimulation par des CPA charges avec l'αGC. Afin d'augmenter les effets anti-tumoraux, nous avons exploit la capacit des cellules iNKT activer l'immunit adaptive. Pour ce faire, nous avons combin l'immunothrapie NKT/CD1d avec un vaccin anti-tumoral compos d'un peptide OVA. Des effets synergiques ont t obtenus lorsque les traitements avec la protine αGC/sCD1d-anti-HER2 taient associs avec le CpG ODN comme adjuvant pour la vaccination avec le peptide OVA. Ces effets ont t observs travers l'activation de nombreux lymphocytes T CD8+ spcifique de la tumeur, ainsi que par la forte expansion des cellules NK. Les rponses, inne et adaptive, leves aprs le traitement avec la protine αGC/sCD1d-anti-HER2 combine au vaccin OVA/CpG ODN taient associes un fort ralentissement de la croissance des tumeurs B16- OVA-HER2. Cet effet anti-tumoral corrle avec l'enrichissement des lymphocytes T CD8+ spcifiques observ la tumeur. Afin d'tendre l'application des protines αGC/sCD1d et d'amliorer leur efficacit, nous avons dvelopp des fusions CD1d alternatives. Premirement, une protine αGC/sCD1d dimrique, qui permet d'augmenter l'avidit de la molcule CD1d pour les cellules iNKT. Dans un deuxime temps, nous avons fusionn la protine αGC/sCD1d avec un scFv dirig contre le rcepteur 3 du facteur de croissance pour l'endothlium vasculaire (VEGFR-3), afin de cibler l'environnement de la tumeur. Dans l'ensemble, ces rsultats dmontrent que la thrapie mdie par la protine recombinante αGC/sCD1d-scFv est une approche prometteuse pour rediriger l'immunit inne et adaptive vers le site tumoral. - Invariant Natural Killer T cells (iNKT) are potent activators of Natural Killer (NK), dendritic cells (DC) and T lymphocytes, and their anti-tumor activities have been well demonstrated. However, a single injection of the high affinity CD1d ligand alpha-galactosylceramide (αGC) leads to a strong but short-lived iNKT cell activation followed by a phase of long-term anergy, limiting the therapeutic use of this ligand. As a promising alternative, we have demonstrated that when αGC is loaded on recombinant soluble CD1d molecules (αGC/sCD1d), repeated injections in mice led to the sustained iNKT cell activation associated with continued cytokine secretion. Importantly, the retained reactivity of iNKT cell led to prolonged antitumor activity when the αGC/sCD1d was fused to an anti-tumor scFv fragments. Optimal inhibition of tumor growth was obtained only when mice were treated with the tumor-targeted αGC/CD1d-scFv fusion, whereas the irrelevant αGC/CD1d-scFv fusion was less efficient. When tested in a human system, the recombinant αGC/sCD1d-anti-HER2 and -anti-CEA fusion proteins were able to expand iNKT cells from PBMCs of healthy donors. Furthermore, the αGC/sCD1d-scFv fusion had the capacity to directly activate human iNKT cells clones without the presence of antigen-presenting cells (APCs), in contrast to the free αGC ligand. Most importantly, tumor cell killing by human iNKT cells was obtained only when co- incubated with the tumor targeted sCD1d-antitumor scFv, and their direct tumor cytotoxicity was superior to the bystander killing obtained with αGC-loaded APCs stimulation. To further enhance the anti-tumor effects, we exploited the ability of iNKT cells to transactivate the adaptive immunity, by combining the NKT/CD1d immunotherapy with a peptide cancer vaccine. Interestingly, synergistic effects were obtained when the αGC/sCD1d- anti-HER2 fusion treatment was combined with CpG ODN as adjuvant for the OVA peptide vaccine, as seen by higher numbers of activated antigen-specific CD8 T cells and NK cells, as compared to each regimen alone. The increased innate and adaptive immune responses upon combined tumor targeted sCD1d-scFv treatment and OVA/CpG vaccine were associated with a strong delay in B16-OVA-HER2 melanoma tumor growth, which correlated with an enrichment of antigen-specific CD8 cells at the tumor site. In order to extend the application of the CD1d fusion, we designed alternative CD1d fusion proteins. First, a dimeric αGC/sCD1d-Fc fusion, which permits to augment the avidity of the CD1d for iNKT cells and second, an αGC/sCD1d fused to an anti vascular endothelial growth factor receptor-3 (VEGFR-3) scFv, in order to target tumor stroma environment. Altogether, these results demonstrate that the iNKT-mediated immunotherapy via recombinant αGC/sCD1d-scFv fusion is a promising approach to redirect the innate and adaptive antitumor immune response to the tumor site.
Resumo:
Les interactions pithlio-msenchymateuses jouent un rle important dans le contrle du dveloppement normal de la peau, son homostasie et sa tumorigense. Les fibroblastes dermiques (DFs) reprsentent la catgorie cellulaire la plus abondante dans le stroma et leur rle est de plus en plus considr. En ce qui concerne particulirement la tumorigense, des facteurs diffusibles produits par les fibroblastes entourant les tumeurs pithliales, appels 'fibroblastes associs au cancer (CAF)', interagissent au niveau de l'inflammation implique directement ou indirectement dans la signalisation paracrine, entre le stroma et les cellules piliales cancreuses. Le risque de cancer de la peau augmente de faon exponentielle avec l'ge. Comme un lien probable entre les deux, la snescence des fibroblastes rsulte de la production du scrtome favorisant la snescence (SMS), un groupe de facteurs diffusibles induisant une stimulation paracrine de la croissance, l'inflammation et le remodelage de la matrice. De faon fort intressante, l'induction de ces gnes est aussi une caractristique des CAFs. Cependant, le lien entre les deux vnements cellulaires snescence et activation des CAFs reste en grande partie inexplor. L'ATF3 (Activating Transcription Factor 3) est un facteur de transcription induit en rponse au stress, dont les fonctions sont hautement spcifiques du type cellulaire. Bien qu'il ait t dcouvert dans notre laboratoire en tant que promoteur de tumeurs dans les kratinocytes, ses fonctions biologique et biochimique dans le derme n'ont pas encore t tudies. Rcemment, nous avons constat que, chez la souris, l'abrogation de la voie de signalisation de Notch/CSL dans les DFs, induisait la formation de tumeurs kratinocytaires multifocales. Ces dernires proviennent de la cancrisation en domaine, un phnomne associ une atrophie du stroma, des altrations de la matrice et de l'inflammation. D'autres tudes ont montr que CSL agissait comme un rgulateur ngatif de gnes impliqus dans snescence des DFs et dans l'activation des CAFs. Ici, nous montrons que la suppression ou l'attnuation de l'expression de ATF3 dans les DFs induit la snescence et l'expression des gnes lis aux CAFs, de faon similaire celle dclenche par la perte de CSL, tandis que la surexpression de ATF3 supprime ces changements. Nous mettons l'hypothse que ATF3 joue un rle suppresseur dans l'activation des CAFs et dans la progression des tumeurs kratinocytaires, en surmontant les consquences de l'abrogation de la voie de signalisation Notch/CSL. En concordance avec cette hypothse, nous avons constat que la perte de ATF3 dans les DFs favorisait la tumorignicit des kratinocytes via le contrle ngatif de cytokines, des enzymes de la matrice de remodelage et de protines associes au cancer, peut-tre par liaison directe des effecteurs de la voie Notch/CSL : IL6 et les gnes Hes. Enfin, dans les chantillons cliniques humains, le stroma sous-jacent aux lsions prcancreuses de kratoses actiniques montre une diminution significative de l'expression de ATF3 par rapport au stroma jouxtant la peau normale. La restauration de l'expression de ATF3 pourrait tre utilise comme un outil thrapeutique en recherche translationnelle pour prvenir ou rprimer le processus de cancrisation en domaine. - Epithelial-mesenchymal interactions play an important role in control of normal skin development, homeostasis and tumorigenesis. The role of dermal fibroblasts (DFs) as the most abundant cell type in stroma is increasingly appreciated. Especially during tumorigenesis, fibroblasts surrounding epithelial tumors, called Cancer Associated Fibroblasts (CAFs), produce diffusible factors (growth factors, inflammatory cytokines, chemokines and enzymes, and matrix metalloproteinases) that mediate inflammation either directly or indirectly through paracrine signaling between stroma and epithelial cancer cells. The risk of skin cancer increases exponentially with age. As a likely link between the two, senescence of fibroblasts results in production of the senescence-messaging-secretome (SMS), a panel of diffusible factors inducing paracrine growth stimulation, inflammation, and matrix remodeling. Interestingly, induction of these genes is also a characteristic of Cancer Associated Fibroblasts (CAFs). However, the link between the two cellular events, senescence and CAF activation is largely unexplored. ATF3 is a key stress response transcription factor with highly cell type specific functions, which has been discovered as a tumor promoter in keratinocytes in our lab. However, the biological and biochemical function of ATF3 in the dermal compartment of the skin has not been studied yet. Recently, we found that compromised Notch/CSL signaling in dermal fibroblasts (DFs) in mice is a primary cause of multifocal keratinocyte tumors called field cancerization associated with stromal atrophy, matrix alterations and inflammation. Further studies showed that CSL functions as a negative regulator of genes involved in DFs senescence and CAF activation. Here, we show that deletion or silencing of the ATF3 gene in DFs activates senescence and CAF-related gene expression similar to that triggered by loss of CSL, while increased ATF3 suppresses these changes. We hypothesize that ATF3 plays a suppressing role in CAF activation and keratinocyte tumor progression, overcoming the consequences of compromised Notch/CSL signaling. In support of this hypothesis, we found that loss of ATF3 in DFs promotes tumorigenic behavior of keratinocytes via negative control of cytokines, matrix-remodeling enzymes and cancer-associated proteins, possibly through direct binding to Notch/CSL targets, IL6 and Hes genes. On the other hand, in human clinical samples, stromal fields underlying premalignant actinic keratosis lesions showed significantly decreased ATF3 expression relative to stroma of flanking normal skin. Restoration of ATF3, which is lost in cancer development, may be used as a therapeutic tool for translational research to prevent or suppress the field cancerization process.
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Rsum : Contexte clinique et objectifs: l'intubation oro-trachale peut tre plus difficile chez les patients obses morbides (index de masse corporelle BMI > 35 kg/m2) que chez les patients non-obses. Rcemment, de nouveaux instruments permettant une intubation assiste au moyen d'une camra ont t dvelopps. Notre exprience pratique avec la vidolaryngoscopie nous a conduit l'hypothse que celle-ci pourrait amliorer la vision laryngoscopique chez cette population spcifique et de ce fait faciliter l'intubation. Le but de cette tude tait donc d'valuer le bnfice du vidolaryngoscope sur le grade de laryngoscopie chez le patient obse morbide. Rsultats : le grade laryngoscopique fut abaiss de manire significative avec le vidolaryngoscope compar la vision directe avec un laryngoscope standard. Lorsque le grade laryngoscopique tait plus grand que 1 la laryngoscopie directe, il fut dans la grande majorit des cas (93% des patients) abaiss avec le vidolaryngoscope. Chez les 7 % restant, le grade laryngoscopique resta identique. Conclusions : chez le patient obse morbide, l'utilisation du vidolaryngoscope amliore de manire significative la visualisation du larynx et de ce fait facilite l'intubation. Une application systmatique de ce procd pourrait donc permettre de rduire l'incidence d'une intubation difficile ainsi que ses consquences chez cette population de patients. Summary : Background and objective: Tracheal intubation may be more difficult in morbidly obese patients (body mass index >35 kgM-2) than in the non-obese. Recently, new video-assisted intubation devices have been developed. After some experience with videolaryngoscopy, we hypothesized that it could improve the laryngoscopic view in this specific population and therefore facilitate intubation. The aim of this study was to assess the benefit of a videolaryngoscope on the grade of laryngoscopy in morbid obesity. Methods: We studied 80 morbidly obese patients undergoing bariatric surgery. They were randomly assigned to one of two groups. One group was intubated with the help of the videolaryngoscope and in the control group the screen of the videolaryngoscope was hidden to the intubating anaesthesiologist. The primary end-point of the study was to assess in both groups the Cormack and Lehane direct and indirect grades of laryngoscopy. The duration of intubation, the number of attempts needed as well as the minimal SPO2 reached during the intubation process were measured. Results: Grade of laryngoscopy was significantly lower with the videolaryngoscope compared with the direct vision (P < 0.001). When the grade of laryngoscopy was higher than one with the direct laryngoscopy (n = 30), it was lower in 28 cases with the videolaryngoscope and remained the same only in two cases (P < 0.001). The minimal SPO2 reached during the intubation was higher with the videolaryngoscope but it did not reach statistical significance. Conclusions: In morbidly obese patients, the use of the videolaryngoscope significantly improves the visualization of the larynx and thereby facilitates intubation.
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Aujourd'hui, les problmes des maladies infectieuses concernent l'mergence d'infections difficiles traiter, telles que les infections associes aux implants et les infections fongiques invasives chez les patients immunodprims. L'objectif de cette thse tait de dvelopper des stratgies pour l'radication des biofilms bactriens (partie 1), ainsi que d'tudier des mthodes innovantes pour la dtection microbienne, pour l'tablissement de nouveaux tests de sensibilit (partie 2). Le traitement des infections associes aux implants est difficile car les biofilms bactriens peuvent rsister des niveaux levs d'antibiotiques. A ce jour, il n'y a pas de traitement optimal dfini contre des infections causes par des bactries de prvalence moindre telles que Enterococcus faecalis ou Propionibacterium acns. Dans un premier temps, nous avons dmontr une excellente activit in vitro de la gentamicine sur une souche de E. faecalis en phase stationnaire de croissance Nous avons ensuite confirm l'activit de la gentamicine sur un biofilm prcoce en modle exprimental animal corps tranger avec un taux de gurison de 50%. De plus, les courbes de bactricidie ainsi que les rsultats de calorimtrie ont prouv que l'ajout de gentamicine amliorait l'activit in vitro de la daptomycine, ainsi que celle de la vancomycine. In vivo, le schma thrapeutique le plus efficace tait l'association daptomycine/gentamicine avec un taux de gurison de 55%. En tablissant une nouvelle mthode pour l'valuation de l'activit des antimicrobiens vis--vis de micro-organismes en biofilm, nous avons dmontr que le meilleur antibiotique actif sur les biofilms P. acns tait la rifampicine, suivi par la penicilline G, la daptomycine et la ceftriaxone. Les tudes conduites en modle exprimental animal ont confirm l'activit de la rifampicine seule avec un taux de gurison 36%. Le meilleur schma thrapeutique tait au final l'association rifampicine/daptomycine avec un taux de gurison 63%. Les associations de rifampicine avec la vancomycine ou la levofloxacine prsentaient des taux de gurisons respectivement de 46% et 25%. Nous avons ensuite tudi l'mergence in vitro de la rsistance la rifampicine chez P. acns. Nous avons observ un taux de mutations de 10"9. La caractrisation molculaire de la rsistance chez les mutant-rsistants a mis en vidence l'implication de 5 mutations ponctuelles dans les domaines I et II du gne rpoB. Ce type de mutations a dj t dcrit au pralable chez d'autres espces bactriennes, corroborant ainsi la validit de nos rsultats. La deuxime partie de cette thse dcrit une nouvelle mthode d'valuation de l'efficacit des antifongiques base sur des mesures de microcalorimtrie isotherme. En utilisant un microcalorimtre, la chaleur produite par la croissance microbienne peut tre-mesure en temps rel, trs prcisment. Nous avons valu l'activit de l'amphotricine B, des triazols et des chinocandines sur diffrentes souches de Aspergillus spp. par microcalorimtrie. La prsence d'amphotricine Β ou de triazole retardait la production de chaleur de manire concentration-dpendante. En revanche, pour les chinochandines, seule une diminution le pic de flux de chaleur a t observ. La concordance entre la concentration minimale inhibitrice de chaleur (CMIC) et la CMI ou CEM (dfinie par CLSI M38A), avec une marge de 2 dilutions, tait de 90% pour l'amphotricine B, 100% pour le voriconazole, 90% pour le pozoconazole et 70% pour la caspofongine. La mthode a t utilise pour dfinir la sensibilit aux antifongiques pour d'autres types de champignons filamenteux. Par dtermination microcalorimtrique, l'amphotricine B s'est avr tre l'agent le plus actif contre les Mucorales et les Fusarium spp.. et le voriconazole le plus actif contre les Scedosporium spp. Finalement, nous avons valu l'activit d'associations d'antifongiques vis--vis de Aspergillus spp. Une meilleure activit antifongique tait retrouve avec l'amphotricine B ou le voriconazole lorsque ces derniers taient associs aux chinocandines vis--vis de A. fumigatus. L'association chinocandine/amphotricine B a dmontr une activit antifongique synergique vis--vis de A. terreus, contrairement l'association chinocandine/voriconazole qui ne dmontrait aucune amlioration significative de l'activit antifongique. - The diagnosis and treatment of infectious diseases are today increasingly challenged by the emergence of difficult-to-manage situations, such as infections associated with medical devices and invasive fungal infections, especially in immunocompromised patients. The aim of this thesis was to address these challenges by developing new strategies for eradication of biofilms of difficult-to-treat microorganisms (treatment, part 1) and investigating innovative methods for microbial detection and antimicrobial susceptibility testing (diagnosis, part 2). The first part of the thesis investigates antimicrobial treatment strategies for infections caused by two less investigated microorganisms, Enterococcus faecalis and Propionibacterium acnes, which are important pathogens causing implant-associated infections. The treatment of implant-associated infections is difficult in general due to reduced susceptibility of bacteria when present in biofilms. We demonstrated an excellent in vitro activity of gentamicin against E. faecalis in stationary growth- phase and were able to confirm the activity against "young" biofilms (3 hours) in an experimental foreign-body infection model (cure rate 50%). The addition of gentamicin improved the activity of daptomycin and vancomycin in vitro, as determined by time-kill curves and microcalorimetry. In vivo, the most efficient combination regimen was daptomycin plus gentamicin (cure rate 55%). Despite a short duration of infection, the cure rates were low, highlighting that enterococcal biofilms remain difficult to treat despite administration of newer antibiotics, such as daptomycin. By establishing a novel in vitro assay for evaluation of anti-biofilm activity (microcalorimetry), we demonstrated that rifampin was the most active antimicrobial against P. acnes biofilms, followed by penicillin G, daptomycin and ceftriaxone. In animal studies we confirmed the anti-biofilm activity of rifampin (cure rate 36% when administered alone), as well as in combination with daptomycin (cure rate 63%), whereas in combination with vancomycin or levofloxacin it showed lower cure rates (46% and 25%, respectively). We further investigated the emergence of rifampin resistance in P. acnes in vitro. Rifampin resistance progressively emerged during exposure to rifampin, if the bacterial concentration was high (108 cfu/ml) with a mutation rate of 10"9. In resistant isolates, five point mutations of the rpoB gene were found in cluster I and II, as previously described for staphylococci and other bacterial species. The second part of the thesis describes a novel real-time method for evaluation of antifungals against molds, based on measurements of the growth-related heat production by isothermal microcalorimetry. Current methods for evaluation of antifungal agents against molds, have several limitations, especially when combinations of antifungals are investigated. We evaluated the activity of amphotericin B, triazoles (voriconazole, posaconazole) and echinocandins (caspofungin and anidulafungin) against Aspergillus spp. by microcalorimetry. The presence of amphotericin Β or a triazole delayed the heat production in a concentration-dependent manner and the minimal heat inhibition concentration (MHIC) was determined as the lowest concentration inhibiting 50% of the heat produced at 48 h. Due to the different mechanism of action echinocandins, the MHIC for this antifungal class was determined as the lowest concentration lowering the heat-flow peak with 50%. Agreement within two 2-fold dilutions between MHIC and MIC or MEC (determined by CLSI M38A) was 90% for amphotericin B, 100% for voriconazole, 90% for posaconazole and 70% for caspofungin. We further evaluated our assay for antifungal susceptibility testing of non-Aspergillus molds. As determined by microcalorimetry, amphotericin Β was the most active agent against Mucorales and Fusarium spp., whereas voriconazole was the most active agent against Scedosporium spp. Finally, we evaluated the activity of antifungal combinations against Aspergillus spp. Against A. jumigatus, an improved activity of amphotericin Β and voriconazole was observed when combined with an echinocandin. Against A. terreus, an echinocandin showed a synergistic activity with amphotericin B, whereas in combination with voriconazole, no considerable improved activity was observed.
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RsumCette thse s'intresse l'impact du niveau d'ducation sur les attitudes envers les mesures de discrimination positive en faveur de la promotion professionnelle des femmes. La littrature consacre cette relation prsente des rsultats inconsistants : certains travaux ne montrent que l'ducation n'a pas d'effet sur l'accueil rserv aux mesures positives, tandis que d'autres suggrent que cette relation pourrait tre influence par la nature des mesures positives. Nos attentes s'appuient sur les thses de l'effet librateur et de l'effet reproducteur de l'ducation. Les tudes ralises dans le cadre de cette thse, menes auprs de cadres, d'employs et d'tudiants rsidant en Suisse et en Albanie, mettent en vidence un lien ngatif entre le nombre d'annes d'tudes et l'acceptation des mesures positives. Toutefois, cet effet apparat essentiellement dans le cas de la mesure favorisant l'appartenance groupale des candidates par rapport leurs caractristiques personnelles, et non pas dans le cas de la mesure s'appuyant sur les comptences et le mrite des candidates. Nos tudes mettent en vidence les mcanismes qui gnrent ces opinions : l'orientation la dominance sociale, l'adhsion aux principes mritocratiques, la reconnaissance de la discrimination subie par les femmes et le sentiment de menace gnr par la mise en place des mesures de discrimination positive. Ces tudes examinent galement la perception plus ou moins strotype des bnficiaires des mesures positives et de leur vulnrabilit aux conduites d'auto-handicap. Dans l'ensemble, les rsultats corroborent davantage la thse de l'effet reproducteur de l'ducation que celle de l'effet librateur de l'ducation.
Resumo:
Introduction Le rythmes circadiens influencent diffrents paramtres de la physiologie et de la physiopathologie cardiovasculaire. Rcemment, une relation entre la taille d'un infarctus et l'heure du jour laquelle il se produit a t suggre dans des modles exprimentaux d'infarctus du myocarde. Le but de cette tude a t de dterminer si les rythmes circadiens pouvaient influencer la gravit d'un infarctus en terme de taille et de mortalit chez les patients hospitaliss pour un infarctus du myocarde avec sus-dcalage du segment ST (STEMI) ayant bnfici d'une intervention coronarienne percutane primaire (ICPP). Mthode Chez 353 patients conscutifs admis avec un STEMI et traits par ICPP, l'heure la survenue des symptmes, le pic de cratine kinase (reflet de la taille d'un infarctus) et le suivi 30 jours ont t collects. Les patients ont t rpartis en 4 groupes en fonction de l'heure de survenue de leurs symptmes (00 :00 - 05h59, 06:00 - 11 59 12 00-17h59 et 18h00-23h59). Rsultats Aucune diffrence statistiquement significative n'a t retrouve entre les diffrents groupes en ce qui concerne les caractristiques des patients ou de leur prise en charge. Aprs analyse multivarie, nous avons mis en vidence une diffrence statistiquement significative entre les pics de cratine kinase chez les patients avec survenue des symptmes entre 00 :00 et 05:59, qui taient plus levs que les pics de cratine kinase chez les patients avec survenue des symptmes tout autre moment de la journe (augmentation moyenne de 38,4%, <0.05). A 30 jours, la mortalit des patients avec survenue des symptmes entre 00 :00 et 05:59 tait galement significativement plus lev que celle des patients avec survenue tout autre moment de la journe (p <0.05). Conclusion Notre tude dmontre une corrlation indpendante entre la taille d'un infarctus STEMI trait par ICPP et le moment de la journe o les symptmes apparaissent. Ces rsultats suggrent que ce moment devrait tre un paramtre important prendre en compte pour valuer le pronostic des patients.
