Characterization of the ligand-binding site of the serotonin 5-HT3 receptor: the role of glutamate residues 97, 224, AND 235.

Ligand-gated ion channels of the Cys loop family are receptors for small amine-containing neurotransmitters. Charged amino acids are strongly conserved in the ligand-binding domain of these receptor proteins. To investigate the role of particular residues in ligand binding of the serotonin 5-HT3AS receptor (5-HT3R), glutamate amino acid residues at three different positions, Glu97, Glu224, and Glu235, in the extracellular N-terminal domain were substituted with aspartate and glutamine using site-directed mutagenesis. Wild type and mutant receptor proteins were expressed in HEK293 cells and analyzed by electrophysiology, radioligand binding, fluorescence measurements, and immunochemistry. A structural model of the ligand-binding domain of the 5-HT3R based on the acetylcholine binding protein revealed the position of the mutated amino acids. Our results demonstrate that mutations of Glu97, distant from the ligand-binding site, had little effect on the receptor, whereas mutations Glu224 and Glu235, close to the predicted binding site, are indeed important for ligand binding. Mutations E224Q, E224D, and E235Q decreased EC50 and Kd values 5-20-fold, whereas E235D was functionally expressed at a low level and had a more than 100-fold increased EC50 value. Comparison of the fluorescence properties of a fluorescein-labeled antagonist upon binding to wild type 5-HT3R and E235Q, allowed us to localize Glu235 within a distance of 1 nm around the ligand-binding site, as proposed by our model.

La quête du consentement éclairé en médecine comme construction sociale [The application of informed consent in medicine as social construction].

The aim of this article is to propose an anthropological point of view about informed consent in medicine. This quest for legitimacy should be read as a relational and social construction. In the heart of clinical complexity we find on one side various techniques employed by the medical community to validate research and to obtain the consent of patients. On the other side patients offer plural and subjective answers due to the doctor patient hierarchical and long relationship. Between constraints and freedoms, informed consent brings to light social relation.

Most residues on the floor of the antigen binding site of the class I MHC molecule H-2Kd influence peptide presentation.

A panel of 15 single alanine substitutions on the floor of the peptide binding groove of the murine class I histocompatibility molecule H-2Kd has been analyzed. All but two mutant molecules were expressed on the cell surface, and were tested for peptide binding and presentation to specific cytotoxic T lymphocytes. Eleven out of 13 mutant molecules appeared to be functionally altered. Five of the substituted residues were involved in the presentation of all peptides tested. Three participated in the presentation of certain peptides but not others. Three other residues participated in epitope formation through indirect interactions. Only two mutations had no detectable effect.

Quand la pornographie fait violence... réflexions sur les méfaits de la pornographie sur la construction de la sexualité adolescente

Dans notre pratique auprès des adolescents engagés dans des agirs sexuels violents, la consommation de pornographie est fréquemment convoquée dans le parcours de ces sujets à la découverte de la sexualité. Si bien sûr, tous les adolescents qui visionnent ces images ne commettent pas de tels actes, ce constat préoccupant nous invite à nous interroger sur les effets ou plutôt les méfaits de la pornographie sur l'investissement du corps sexué et sur la construction de la sexualité. Outre une réflexion sur l'impact de l'image dans son caractère obscène et à la suite des travaux de G. Bonnet (2003, Le Défi à la pudeur. Quand la pornographie devient l'initiation sexuelle des jeunes), nous montrerons en quoi la pornographie constitue une forme de violence, parfois jusqu'au traumatisme. Ce danger auquel les adolescents sont (sur)exposés, notamment par le biais d'Internet, pourrait en effet favoriser un clivage (que nous retrouvons systématiquement dans la problématique des violences sexuelles) entre corps érotique et corps sexué. La consommation de pornographie s'apparenterait davantage à l'incorporation de la sexualité génitale marquant ainsi l'échec de l'introjection de la génitalité au moment de l'adolescence. Ne devient-elle pas alors un ersatz de la pulsion de mort ? en tant qu'elle isole le sujet dans une activité auto-pseudo-érotique, retirant à la sexualité sa fonction de lien et par là même ouvrant le champ au déchaînement de toutes formes de violence.

Recurrent dominant mutations affecting two adjacent residues in the motor domain of the monomeric kinesin KIF22 result in skeletal dysplasia and joint laxity.

Spondyloepimetaphyseal dysplasia with joint laxity, leptodactylic type (lepto-SEMDJL, aka SEMDJL, Hall type), is an autosomal dominant skeletal disorder that, in spite of being relatively common among skeletal dysplasias, has eluded molecular elucidation so far. We used whole-exome sequencing of five unrelated individuals with lepto-SEMDJL to identify mutations in KIF22 as the cause of this skeletal condition. Missense mutations affecting one of two adjacent amino acids in the motor domain of KIF22 were present in 20 familial cases from eight families and in 12 other sporadic cases. The skeletal and connective tissue phenotype produced by these specific mutations point to functions of KIF22 beyond those previously ascribed functions involving chromosome segregation. Although we have found Kif22 to be strongly upregulated at the growth plate, the precise pathogenetic mechanisms remain to be elucidated.

La construction argumentative des émotions dans les débats parlementaires français sur l'abolition de la peine de mort

Ce travail se situe au carrefour de la rhétorique, des théories de l'argumentation et de la linguistique du discours : il s'intéresse aux modalités diverses selon lesquelles une émotion peut être sémiotisée par un locuteur, et cela dans le cadre spécifique d'un discours de type argumentatif. Le questionnement vise à reprendre à nouveaux frais le concept rhétorique de pathos et porte, de façon générale, sur les rapports complexes qui unissent l'argumentation, d'une part, et l'émotion, d'autre part. L'hypothèse développée a trait à ce que l'on peut appeler l'argumentabilité des émotions. Les locuteurs ne font pas seulement « appel » à l'émotion dans le but d'accroître l'efficacité d'une argumentation visant à établir le bien-fondé d'une opinion ou l'opportunité d'une action : ils peuvent aussi, dans certains cas, chercher à argumenter pour ou contre l'émotion elle-même. Ils s'efforcent alors de formuler les raisons pour lesquelles il convient ou, au contraire, il ne convient pas d'éprouver cette émotion. La construction de l'émotion est dite « argumentative », dans le sens où l'émotion en vient à constituer l'objet même de l'argumentation : l'effort argumentatif des locuteurs porte moins sur des dispositions à croire et à agir que sur des dispositions à ressentir. Parler de l'« argumentabilité » des émotions, c'est insister sur le fait - essentiel, mais rarement relevé - que les émotions donnent elles aussi prise aux opérations argumentatives que l'on recense traditionnellement (mise en doute quant à la légitimité, justification ou, au contraire, tentative de réfutation). Ce travail ne vise pas seulement à apporter une contribution théorique aux études sur l'argumentation : il entend aussi mettre en pratique l'analyse argumentative sur un corpus de textes. Il s'agit des comptes-rendus écrits des principaux débats parlementaires français relatifs à l'abolition de la peine de mort (1791, 1848, 1908 et 1981). Bien qu'il s'échelonne sur une période de près de deux siècles, ce corpus présente une forte cohésion, dans la mesure où les textes qui le composent traitent d'un même thème et appartiennent à un même genre de discours. Cette cohésion est essentielle, dans la mesure où elle autorise une pratique raisonnée de la comparaison en diachronie : l'enjeu est de décrire l'évolution des stratégies argumentatives à travers le temps. Observé sur une longue durée, le pathos que développent les parlementaires favorables ou au contraire hostiles à l'abolition présente des visages multiples. On cherche à décrire aussi rigoureusement que possible la logique qui, lors de chaque débat, préside à la construction d'émotions comme la peur, la pitié, l'indignation ou encore la honte.

Database construction and Peptide identification strategies for proteogenomic studies on sequenced genomes.

Since the advent of high-throughput DNA sequencing technologies, the ever-increasing rate at which genomes have been published has generated new challenges notably at the level of genome annotation. Even if gene predictors and annotation softwares are more and more efficient, the ultimate validation is still in the observation of predicted gene product( s). Mass-spectrometry based proteomics provides the necessary high throughput technology to show evidences of protein presence and, from the identified sequences, confirmation or invalidation of predicted annotations. We review here different strategies used to perform a MS-based proteogenomics experiment with a bottom-up approach. We start from the strengths and weaknesses of the different database construction strategies, based on different genomic information (whole genome, ORF, cDNA, EST or RNA-Seq data), which are then used for matching mass spectra to peptides and proteins. We also review the important points to be considered for a correct statistical assessment of the peptide identifications. Finally, we provide references for tools used to map and visualize the peptide identifications back to the original genomic information.