PTEN downregulation in adipocytes promotes inflammation of adipose tissue

Background and aims: The phosphoinositide phosphatase PTEN is a potent tumor suppressor and a regulator of insulin sensitivity in peripheral tissues. In adipocytes, experimental alterations of PTEN expression modulate the sensitivity of these cells to insulin. However, virtually nothing is known about the pathophysiological regulation of endogenous PTEN in adipose tissue. Herein, we investigated in vivo and in vitro whether alterations of PTEN expression in adipocytes are associated with the metabolic syndrome and what are the functional outcomes of dysregulated PTEN expression/activity. Materials and methods: PTEN expression was examined in vivo in adipose tissue of rats and human with the metabolic syndrome. Metabolic factors mediating dysregulation of PTEN expression in adipocytes and the subsequent effects on the physiology of these cells were investigated in vitro using human CHUB-S7 preadipocytes. Results: We demonstrated that PTEN is downregulated, both at the mRNA and protein levels, in adipose tissue of diabetic/obese ZDF rats and in subcutaneous adipose tissue of obese human patients. PTEN downregulation correlated with degradation of IκBα and hyperactivation of NF-κB, a transcription factor previously described to modulate PTEN expression. The expression of SHIP2, another PtdIns(3,4,5)P3 phosphatase involved in the control of insulin sensitivity and the development of obesity, was not altered. In vitro analyses using differentiated human CHUB-S7 preadipocytes showed that PTEN downregulation is not triggered by high concentrations of glucose or fatty acids. In contrast, the pro-inflammatory cytokines IL-1α and TNFα, significantly downregulate PTEN expression. Consistent with the IL1α-dependent PTEN downregulation, long-term incubation of CHUB-S7 cells with IL-1α potentiates insulin-induced Akt and ERK1/2 signaling. We finally showed that PTEN downregulation in CHUB-S7 preadipocytes by PTEN siRNAs induced an increased secretion of the pro-inflammatory cytokines IL-1β, IL-6 and TNFα. Conclusion: Taken together, these data indicate that PTEN expression is downregulated in adipose tissue of obese/diabetic subjects, potentially via cytokine- mediated activation of the NF-κB pathway. PTEN downregulation in adipocytes might in turn worsen adipose tissue inflammation through a vicious circle by further stimulating the secretion of pro-inflammatory cytokines.

Notch 1-deficient common lymphoid precursors adopt a B cell fate in the thymus.

We have recently reported that Notch 1, a member of the Notch multigene family, is essential for the development of murine T cells. Using a mouse model in which Notch 1 is inactivated in bone marrow (BM) precursors we have shown that B cells instead of T cells are found in the thymus of BM chimeras. However, it is not clear whether these B cells develop by default from a common lymphoid precursor due to the absence of Notch 1 signaling, or whether they arise as a result of perturbed migration of BM-derived B cells and/or altered homeostasis of normal resident thymic B cells. In this report we show that Notch 1-deficient thymic B cells resemble BM B cells in phenotype and turnover kinetics and are located predominantly in the medulla and corticomedullary junction. Peripheral blood lymphocyte analysis shows no evidence of recirculating Notch1(-/)- BM B cells. Furthermore, lack of T cell development is not due to a failure of Notch1(-/)- precursors to home to the thymus, as even after intrathymic reconstitution with BM cells, B cells instead of T cells develop from Notch 1-deficient precursors. Taken together, these results provide evidence for de novo ectopic B cell development in the thymus, and support the hypothesis that in the absence of Notch 1 common lymphoid precursors adopt the default cell fate and develop into B cells instead.

Selective inhibition of JNK with a peptide inhibitor attenuates pain hypersensitivity and tumor growth in a mouse skin cancer pain model.

Cancer pain significantly affects the quality of cancer patients, and current treatments for this pain are limited. C-Jun N-terminal kinase (JNK) has been implicated in tumor growth and neuropathic pain sensitization. We investigated the role of JNK in cancer pain and tumor growth in a skin cancer pain model. Injection of luciferase-transfected B16-Fluc melanoma cells into a hindpaw of mouse induced robust tumor growth, as indicated by increase in paw volume and fluorescence intensity. Pain hypersensitivity in this model developed rapidly (<5 days) and reached a peak in 2 weeks, and was characterized by mechanical allodynia and heat hyperalgesia. Tumor growth was associated with JNK activation in tumor mass, dorsal root ganglion (DRG), and spinal cord and a peripheral neuropathy, such as loss of nerve fibers in the hindpaw skin and induction of ATF-3 expression in DRG neurons. Repeated systemic injections of D-JNKI-1 (6 mg/kg, i.p.), a selective and cell-permeable peptide inhibitor of JNK, produced an accumulative inhibition of mechanical allodynia and heat hyperalgesia. A bolus spinal injection of D-JNKI-1 also inhibited mechanical allodynia. Further, JNK inhibition suppressed tumor growth in vivo and melanoma cell proliferation in vitro. In contrast, repeated injections of morphine (5 mg/kg), a commonly used analgesic for terminal cancer, produced analgesic tolerance after 1 day and did not inhibit tumor growth. Our data reveal a marked peripheral neuropathy in this skin cancer model and important roles of the JNK pathway in cancer pain development and tumor growth. JNK inhibitors such as D-JNKI-1 may be used to treat cancer pain.

Functions of the peroxisome proliferator-activated receptor (PPAR) alpha and beta in skin homeostasis, epithelial repair, and morphogenesis.

The three peroxisome proliferator-activated receptors (PPAR alpha, PPAR beta, and PPAR gamma) are ligand-activated transcription factors belonging to the nuclear hormone receptor superfamily. They are regarded as being sensors of physiological levels of fatty acids and fatty acid derivatives. In the adult mouse skin, they are found in hair follicle keratinocytes but not in interfollicular epidermis keratinocytes. Skin injury stimulates the expression of PPAR alpha and PPAR beta at the site of the wound. Here, we review the spatiotemporal program that triggers PPAR beta expression immediately after an injury, and then gradually represses it during epithelial repair. The opposing effects of the tumor necrosis factor-alpha and transforming growth factor-beta-1 signalling pathways on the activity of the PPAR beta promoter are the key elements of this regulation. We then compare the involvement of PPAR beta in the skin in response to an injury and during hair morphogenesis, and underscore the similarity of its action on cell survival in both situations.

Characterization of GLUT8 and GLUT9, two novel glucose transporter isoforms

Summary Prevalence of type 2 diabetes is increasing worldwide at alarming rates, probably secondarily to that of obesity. As type 2 diabetes is characterized by blood hyperglycemia, controlling glucose entry into tissues from the bloodstream is key to maintain glycemia within acceptable ranges. In this context, several glucose transporter isoforms have been cloned recently and some of them have appeared to play important regulatory roles. Better characterizing two of them (GLUT8 and GLUT9) was the purpose of my work. The first part of my work was focused on GLUT8, which is mainly expressed in the brain and is able to transport glucose with high affinity. GLUT8 is retained intracellularly at basal state depending on an N-terminal dileucine motif, thus implying that cell surface expression may be induced by extracellular triggers. In this regard, I was interested in better defining GLUT8 subcellular localization at basal state and in finding signals promoting its translocation, using an adenoviral vector expressing a myc epitope-tagged version of the transporter, thus allowing expression and detection of cell-surface GLUT8 in primary hippocampal neurons and PC 12 cells. This tool enabled me to found out that GLUT8 resides in a unique compartment different from lysosomes, endoplasmic reticulum, endosomes and the Golgi. In addition, absence of GLUT8 translocation following pharmacological activation of several signalling pathways suggests that GLUT8 does not ever translocate to the cell surface, but would rather fulfill its role in its unique intracellular compartment. The second part of my work was focused on GLUT9, which -contrarily to GLUT8 - is unable to transport glucose, but retains the ability to bind glucose-derived cross-linker molecules, thereby suggesting that it may be a glucose sensor rather than a true glucose transporter. The aim of the project was thus to define if GLUT9 triggers intracellular signals when activated. Therefore, adenoviral vectors expressing GLUTS were used to infect both ßpancreatic and liver-derived cell lines, as GLUTS is endogenously expressed in the liver. Comparison of gene expression between cells infected with the GLUTS-expressing adenovirus and cells infected with a GFP-expressing control adenovirus ended up in the identification of the transcription factor HNF4α as being upregulated in aGLUT9-dependent manner. Résumé La prévalence du diabète de type 2 augmente de façon alarmante dans le monde entier, probablement secondairement à celle de l'obésité. Le diabète de type 2 étant caractérisé par une glycémie sanguine élevée, l'entrée du glucose dans les tissus depuis la circulation sanguine constitue un point de contrôle important pour maintenir la glycémie à des valeurs acceptables. Dans ce contexte, plusieurs isoformes de transporteurs au glucose ont été clonées récemment et certaines d'entre elles sont apparues comme jouant d'importants rôles régulateurs. Mieux caractériser deux d'entre elles (GLUT8 et GLUT9) était le but de mon travail. La première partie de mon travail a été centrée sur GLUT8, qui est exprimé principalement dans le cerveau et qui peut transporter le glucose avec une haute affinité. GLUT8 est retenu intracellulairement à l'état basal de façon dépendante d'un motif dileucine N-terminal, ce qui implique que son expression à la surface cellulaire pourrait être induite par des stimuli extracellulaires. Dans cette optique, je me suis intéressé à mieux définir la localisation subcellulaire de GLUT8 à l'état basal et à trouver des signaux activant sa translocation, en utilisant comme outil un vecteur adénoviral exprimant une version marquée (tag myc) du transporteur, me permettant ainsi d'exprimer et de détecter GLUT8 à la surface cellulaire dans des neurones hippocampiques primaires et des cellules PC12. Cet outil m'a permis de montrer que GLUT8 réside dans un compartiment unique différent des lysosomes, du réticulum endoplasmique, des endosomes, ainsi que du Golgi. De plus, l'absence de translocation de GLUT8 à la suite de l'activation pharmacologique de plusieurs voies de signalisation suggère que GLUT8 ne transloque jamais à la membrane plasmique, mais jouerait plutôt un rôle au sein même de son compartiment intracellulaire unique. La seconde partie de mon travail a été centrée sur GLUT9, lequel -contrairement à GLUT8 -est incapable de transporter le glucose, mais conserve la capacité de se lier à des molécules dérivées du glucose, suggérant que ce pourrait être un senseur de glucose plutôt qu'un vrai transporteur. Le but du projet a donc été de définir si GLUT9 active des signaux intracellulaires quand il est lui-même activé. Pour ce faire, des vecteurs adénoviraux exprimant GLUT9 ont été utilisés pour infecter des lignées cellulaires dérivées de cellules ßpancréatiques et d'hépatocytes, GLUT9 étant exprimé de façon endogène dans le foie. La comparaison de l'expression des gènes entre des cellules infectées avec l'adénovirus exprimant GLUT9 et un adénovirus contrôle exprimant la GFP a permis d'identifier le facteur de transcription HNF4α comme étant régulé de façon GLUT9-dépendante. Résumé tout public Il existe deux types bien distincts de diabète. Le diabète de type 1 constitue environ 10 des cas de diabète et se déclare généralement à l'enfance. Il est caractérisé par une incapacité du pancréas à sécréter une hormone, l'insuline, qui régule la concentration sanguine du glucose (glycémie). Il en résulte une hyperglycémie sévère qui, si le patient n'est pas traité à l'insuline, conduit à de graves dommages à divers organes, ce qui peut mener à la cécité, à la perte des membres inférieurs, ainsi qu'à l'insuffisance rénale. Le diabète de type 2 se déclare plus tard dans la vie. Il n'est pas causé par une déficience en insuline, mais plutôt par une incapacité de l'insuline à agir sur ses tissus cibles. Le nombre de cas de diabète de type 2 augmente de façon dramatique, probablement à la suite de l'augmentation des cas d'obésité, le surpoids chronique étant le principal facteur de risque de diabète. Chez l'individu sain, le glucose sanguin est transporté dans différents organes (foie, muscles, tissu adipeux,...) où il est utilisé comme source d'énergie. Chez le patient diabétique, le captage de glucose est altéré, expliquant ainsi l'hyperglycémie. Il est ainsi crucial d'étudier les mécanismes permettant ce captage. Ainsi, des protéines permettant l'entrée de glucose dans la cellule depuis le milieu extracellulaire ont été découvertes depuis une vingtaine d'années. La plupart d'entre elles appartiennent à une sous-famille de protéines nommée GLUT (pour "GLUcose Transporters") dont cinq membres ont été caractérisés et nommés selon l'ordre de leur découverte (GLUT1-5). Néanmoins, la suppression de ces protéines chez la souris par des techniques moléculaires n'affecte pas totalement le captage de glucose, suggérant ainsi que des transporteurs de glucose encore inconnus pourraient exister. De telles protéines ont été isolées ces dernières années et nommées selon l'ordre de leur découverte (GLUT6-14). Durant mon travail de thèse, je me suis intéressé à deux d'entre elles, GLUT8 et GLUT9, qui ont été découvertes précédemment dans le laboratoire. GLUT8 est exprimé principalement dans le cerveau. La protéine n'est pas exprimée à la surface de la cellule, mais est retenue à l'intérieur. Des mécanismes complexes doivent donc exister pour déplacer le transporteur à la surface cellulaire, afin qu'il puisse permettre l'entrée du glucose dans la cellule. Mon travail a consisté d'une part à définir où se trouve le transporteur à l'intérieur de la cellule, et d'autre part à comprendre les mécanismes capables de déplacer GLUT8 vers la surface cellulaire, en utilisant des neurones exprimant une version marquée du transporteur, permettant ainsi sa détection par des méthodes biochimiques. Cela m'a permis de montrer que GLUT8 est localisé dans une partie de la cellule encore non décrite à ce jour et qu'il n'est jamais déplacé à la surface cellulaire, ce qui suggère que le transporteur doit jouer un rôle à l'intérieur de la cellule et non à sa surface. GLUT9 est exprimé dans le foie et dans les reins. Il ressemble beaucoup à GLUT8, mais ne transporte pas le glucose, ce qui suggère que ce pourrait être un récepteur au glucose plutôt qu'un transporteur à proprement parler. Le but de mon travail a été de tester cette hypothèse, en comparant des cellules du foie exprimant GLUT9 avec d'autres n'exprimant pas la protéine. Par des méthodes d'analyses moléculaires, j'ai pu montrer que la présence de GLUT9 dans les cellules du foie augmente l'expression de HNF4α, une protéine connue pour réguler la sécrétion d'insuline dans le pancréas ainsi que la production de glucose dans le foie. Des expériences complémentaires seront nécessaires afin de mieux comprendre par quels mécanismes GLUT9 influence l'expression de HNF4α dans le foie, ainsi que de définir l'importance de GLUT9 dans la régulation de la glycémie chez l'animal entier.

IL-10 controls cystatin C synthesis and blood concentration in response to inflammation through regulation of IFN regulatory factor 8 expression.

Cystatin C (CstC) is a cysteine protease inhibitor of major clinical importance. Low concentration of serum CstC is linked to atherosclerosis. CstC can prevent formation of amyloid β associated with Alzheimer's disease and can itself form toxic aggregates. CstC regulates NO secretion by macrophages and is a TGF-β antagonist. Finally, the serum concentration of CstC is an indicator of kidney function. Yet, little is known about the regulation of CstC expression in vivo. In this study, we demonstrate that the transcription factor IFN regulatory factor 8 (IRF-8) is critical for CstC expression in primary dendritic cells. Only those cells with IRF-8 bound to the CstC gene promoter expressed high levels of the inhibitor. Secretion of IL-10 in response to inflammatory stimuli downregulated IRF-8 expression and consequently CstC synthesis in vivo. Furthermore, the serum concentration of CstC decreased in an IL-10-dependent manner in mice treated with the TLR9 agonist CpG. CstC synthesis is therefore more tightly regulated than hitherto recognized. The mechanisms involved in this regulation might be targeted to alter CstC production, with potential therapeutic value. Our results also indicate that caution should be exerted when using the concentration of serum CstC as an indicator of kidney function in conditions in which inflammation may alter CstC production.

Transcriptome of a mouse kidney cortical collecting duct cell line: effects of aldosterone and vasopressin.

Aldosterone and vasopressin are responsible for the final adjustment of sodium and water reabsorption in the kidney. In principal cells of the kidney cortical collecting duct (CCD), the integral response to aldosterone and the long-term functional effects of vasopressin depend on transcription. In this study, we analyzed the transcriptome of a highly differentiated mouse clonal CCD principal cell line (mpkCCD(cl4)) and the changes in the transcriptome induced by aldosterone and vasopressin. Serial analysis of gene expression (SAGE) was performed on untreated cells and on cells treated with either aldosterone or vasopressin for 4 h. The transcriptomes in these three experimental conditions were determined by sequencing 169,721 transcript tags from the corresponding SAGE libraries. Limiting the analysis to tags that occurred twice or more in the data set, 14,654 different transcripts were identified, 3,642 of which do not match known mouse sequences. Statistical comparison (at P < 0.05 level) of the three SAGE libraries revealed 34 AITs (aldosterone-induced transcripts), 29 ARTs (aldosterone-repressed transcripts), 48 VITs (vasopressin-induced transcripts) and 11 VRTs (vasopressin-repressed transcripts). A selection of the differentially-expressed, hormone-specific transcripts (5 VITs, 2 AITs and 1 ART) has been validated in the mpkCCD(cl4) cell line either by Northern blot hybridization or reverse transcription-PCR. The hepatocyte nuclear transcription factor HNF-3-alpha (VIT39), the receptor activity modifying protein RAMP3 (VIT48), and the glucocorticoid-induced leucine zipper protein (GILZ) (AIT28) are candidate proteins playing a role in physiological responses of this cell line to vasopressin and aldosterone.

Design of new tools to improve the efficacy of DNA-damaging drugs used in cancer therapy

Résumé Les tumeurs sont diverses et hétérogènes, mais toutes partagent la capacité de proliférer sans contrôle. Une prolifération dérégulée de cellules couplée à une insensibilité à une réponse apoptotique constitue une condition minimale pour que l'évolution d'une tumeur se produise. Un des traitements les plus utilisés pour traité le cancer à l'heure actuelle sont les chimiothérapies, qui sont fréquemment des composés chimiques qui induisent des dommages dans l'ADN. Les agents anticancéreux sont efficaces seulement quand les cellules tumorales sont plus aisément tuées que le tissu normal environnant. L'efficacité de ces agents est en partie déterminée par leur capacité à induire l'apoptose. Nous avons récemment démontré que la protéine RasGAP est un substrat non conventionnel des caspases parce elle peut induire à la fois des signaux anti et pro-apoptotiques, selon l'ampleur de son clivage par les caspases. A un faible niveau d'activité des caspases, RasGAP est clivé, générant deux fragments (le fragment N et le fragment C). Le fragment N semble être un inhibiteur général de l'apoptose en aval de l'activation des caspases. À des niveaux plus élevés d'activité des caspases, la capacité du fragment N de contrecarrer l'apoptose est supprimée quand il est clivé à nouveau par les caspases. Ce dernier clivage produit deux nouveaux fragments, N 1 et N2, qui contrairement au fragment N sensibilisent efficacement des cellules cancéreuses envers des agents chimiothérapeutiques. Dans cette étude nous avons prouvé qu'un peptide, appelé par la suite TAT-RasGAP317-326, qui est dérivé du fragment N2 de RasGAP et est rendu perméable aux cellules, sensibilise spécifiquement des cellules cancéreuses à trois génotoxines différentes utilisées couramment dans des traitements anticancéreux, et cela dans des modèles in vitro et in vivo. Il est important de noté que ce peptide semble ne pas avoir d'effet sur des cellules non cancéreuses. Nous avons également commencé à caractériser les mécanismes moléculaires expliquant les fonctions de sensibilisation de TAT-RasGAP317-326. Nous avons démontré que le facteur de transcription p53 et une protéine sous son activité transcriptionelle, nommée Puma, sont indispensables pour l'activité de TAT-RasGAP317-326. Nous avons également prouvé que TAT-RasGAP317-326 exige la présence d'une protéine appelée G3BP1, une protéine se liant a RasGAP, pour potentialisé les effets d'agents anticancéreux. Les données obtenues dans cette étude montrent qu'il pourrait être possible d'augmenter l'efficacité des chimiothérapies à l'aide d'un composé capable d'augmenter la sensibilité des tumeurs aux génotoxines et ainsi pourrait permettre de traiter de manière plus efficace des patients sous traitement chimiothérapeutiques. Summary Tumors are diverse and heterogeneous, but all share the ability to proliferate without control. Deregulated cell proliferation coupled with suppressed apoptotic sensitivity constitutes a minimal requirement upon which tumor evolution occurs. One of the most commonly used treatments is chemotherapy, which frequently uses chemical compounds that induce DNA damages. Anticancer agents are effective only when tumors cells are more readily killed than the surrounding normal tissue. The efficacy of these agents is partly determined by their ability to induce apoptosis. We have recently demonstrated that the protein RasGAP is an unconventional caspase substrate because it can induce both anti- and pro-apoptotic signals, depending on the extent of its cleavage by caspases. At low levels of caspase activity, RasGAP is cleaved, generating an N-terminal fragment (fragment N) and a C-terminal fragment (fragment C). Fragment N appears to be a general Mocker of apoptosis downstream of caspase activation. At higher levels of caspase activity, the ability of fragment N to counteract apoptosis is suppressed when it is further cleaved. This latter cleavage event generates two fragments, N1 and N2, which in contrast to fragment N potently sensitizes cancer cells toward DNA-damaging agents induced apoptosis. In the present study we show that a cell permeable peptide derived from the N2 fragment of RasGAP, thereafter called TAT-RasGAP317-326, specifically sensitizes cancer cells to three different genotoxins commonly used in chemotherapy in vitro and in vivo models. Importantly this peptide seems not to have any effect on non cancer cells. We have also started to characterize the molecular mechanisms underlying the sensitizing functions of TAT-RasGAP317-326. We have demonstrated that the p53 transcription factor and a protein under its transcriptional activity, called Puma, are required for the activity of TATRasGAP317-326. We have also showed that TAT-RasGAP317-326 requires the presence of a protein called G3BP1, which have been shown to interact with RasGAP, to increase the effect of the DNA-damaging drug cisplatin. The data obtained in this study showed that it is possible to increase the efficacy of current used chemotherapies with a compound able to increase the efficacy of genotoxins which could be beneficial for patients subjected to chemotherapy.

A role for the transcriptional repressor ICER in the molecular pathogenesis of type 2 diabetes

AbstractType 2 diabetes (T2D) is a metabolic disease which affects more than 200 millions people worldwide. The progression of this affection reaches nowadays epidemic proportions, owing to the constant augmentation in the frequency of overweight, obesity and sedentary. The pathogenesis of T2D is characterized by reduction in the action of insulin on its target tissues - an alteration referred as insulin resistance - and pancreatic β-cell dysfunction. This latter deterioration is defined by impairment in insulin biosynthesis and secretion, and a loss of β-cell mass by apoptosis. Environmental factors related to T2D, such as chronic elevation in glucose and free fatty acids levels, inflammatory cytokines and pro-atherogenic oxidized low- density lipoproteins (LDL), contribute to the loss of pancreatic β-cell function.In this study, we have demonstrated that the transcription factor Inducible Cyclic AMP Early Repressor (ICER) participates to the progression of both β-cell dysfunction and insulin resistance. The expression of this factor is driven by an alternative promoter and ICER protein represents therefore a truncated product of the Cyclic AMP Response Element Modulator (CREM) family which lacks transactivation domain. Consequently, the transcription factor ICER acts as a passive repressor which reduces expression of genes controlled by the cyclic AMP and Cyclic AMP Response Element Binding protein (CREB) pathway.In insulin-secreting cells, the accumulation of reactive oxygen species caused by environmental factors and notably oxidized LDL - a process known as oxidative stress - induces the transcription factor ICER. This transcriptional repressor hampers the secretory capacity of β-cells by silencing key genes of the exocytotic machinery. In addition, the factor ICER reduces the expression of the scaffold protein Islet Brain 1 (IB 1 ), thereby favouring the activation of the c-Jun N-terminal Kinase (JNK) pathway. This triggering alters in turn insulin biosynthesis and survival capacities of pancreatic β-cells.In the adipose tissue of mice and human subjects suffering from obesity, the transcription factor ICER contributes to the alteration in insulin action. The loss in ICER protein in these tissues induces a constant activation of the CREB pathway and the subsequent expression of the Activating Transcription Factor 3 (ATF3). In turn, this repressor reduces the transcript levels of the glucose transporter GLUT4 and the insulin-sensitizer peptide adiponectin, thereby contributing to the diminution in insulin action.In conclusion, these data shed light on the important role of the transcriptional repressor ICER in the pathogenesis of T2D, which contributes to both alteration in β-cell function and aggravation of insulin resistance. Consequently, a better understanding of the molecular mechanisms responsible for the alterations in ICER levels is required and could lead to develop new therapeutic strategies for the treatment of T2D.RésuméLe diabète de type 2 (DT2) est une maladie métabolique qui affecte plus de 200 millions de personnes dans le monde. La progression de cette affection atteint aujourd'hui des proportions épidémiques imputables à l'augmentation rapide dans les fréquences du surpoids, de l'obésité et de la sédentarité. La pathogenèse du DT2 se caractérise par une diminution de l'action de l'insuline sur ses tissus cibles - un processus nommé insulino-résistance - ainsi qu'une dysfonction des cellules β pancréatiques sécrétrices d'insuline. Cette dernière détérioration se définit par une réduction de la capacité de synthèse et de sécrétion de l'insuline et mène finalement à une perte de la masse de cellules β par apoptose. Des facteurs environnementaux fréquemment associés au DT2, tels l'élévation chronique des taux plasmatiques de glucose et d'acides gras libres, les cytokines pro-inflammatoires et les lipoprotéines de faible densité (LDL) oxydées, contribuent à la perte de fonction des cellules β pancréatiques.Dans cette étude, nous avons démontré que le facteur de transcription « Inducible Cyclic AMP Early Repressor » (ICER) participe à la progression de la dysfonction des cellules β pancréatiques et au développement de Pinsulino-résistance. Son expression étant gouvernée par un promoteur alternatif, la protéine d'ICER représente un produit tronqué de la famille des «Cyclic AMP Response Element Modulator » (CREM), sans domaine de transactivation. Par conséquent, le facteur ICER agit comme un répresseur passif qui réduit l'expression des gènes contrôlés par la voie de l'AMP cyclique et des « Cyclic AMP Response Element Binding protein » (CREB).Dans les cellules sécrétrices d'insuline, l'accumulation de radicaux d'oxygène libres, soutenue par les facteurs environnementaux et notamment les LDL oxydées - un processus appelé stress oxydatif- induit de manière ininterrompue le facteur de transcription ICER. Ainsi activé, ce répresseur transcriptionnel altère la capacité sécrétoire des cellules β en bloquant l'expression de gènes clés de la machinerie d'exocytose. En outre, le facteur ICER favorise l'activation de la cascade de signalisation « c-Jun N- terminal Kinase » (JNK) en réduisant l'expression de la protéine « Islet Brain 1 » (IB1), altérant ainsi les fonctions de biosynthèse de l'insuline et de survie des cellules β pancréatiques.Dans le tissu adipeux des souris et des sujets humains souffrant d'obésité, le facteur de transcription ICER contribue à l'altération de la réponse à l'insuline. La disparition de la protéine ICER dans ces tissus entraîne une activation persistante de la voie de signalisation des CREB et une induction du facteur de transcription « Activating Transcription Factor 3 » (ATF3). A son tour, le répresseur ATF3 inhibe l'expression du transporteur de glucose GLUT4 et du peptide adipocytaire insulino-sensibilisateur adiponectine, contribuant ainsi à la diminution de l'action de l'insuline en conditions d'obésité.En conclusion, à la lumière de ces résultats, le répresseur transcriptionnel ICER apparaît comme un facteur important dans la pathogenèse du DT2, en participant à la perte de fonction des cellules β pancréatiques et à l'aggravation de l'insulino-résistance. Par conséquent, l'étude des mécanismes moléculaires responsables de l'altération des niveaux du facteur ICER pourrait permettre le développement de nouvelles stratégies de traitement du DT2.Résumé didactiqueL'énergie nécessaire au bon fonctionnement de l'organisme est fournie par l'alimentation, notamment sous forme de sucres (glucides). Ceux-ci sont dégradés en glucose, lequel sera distribué aux différents organes par la circulation sanguine. Après un repas, le niveau de glucose sanguin, nommé glycémie, s'élève et favorise la sécrétion d'une hormone appelée insuline par les cellules β du pancréas. L'insuline permet, à son tour, aux organes, tels le foie, les muscles et le tissu adipeux de capter et d'utiliser le glucose ; la glycémie retrouve ainsi son niveau basai.Le diabète de type 2 (DT2) est une maladie métabolique qui affecte plus de 200 millions de personnes dans le monde. Le développement de cette affection est causée par deux processus pathologiques. D'une part, les quantités d'insuline secrétée par les cellules β pancréatiques, ainsi que la survie de ces cellules sont réduites, un phénomène connu sous le nom de dysfonction des cellules β. D'autre part, la sensibilité des tissus à l'insuline se trouve diminuée. Cette dernière altération, l'insulino-résistance, empêche le transport et l'utilisation du glucose par les tissus et mène à une accumulation de ce sucre dans le sang. Cette stagnation de glucose dans le compartiment sanguin est appelée hyperglycémie et favorise l'apparition des complications secondaires du diabète, telles que les maladies cardiovasculaires, l'insuffisance rénale, la cécité et la perte de sensibilité des extrémités.Dans cette étude, nous avons démontré que le facteur ICER qui contrôle spécifiquement l'expression de certains gènes, contribue non seulement à la dysfonction des cellules β, mais aussi au développement de l'insulino-résistance. En effet, dans les cellules β pancréatiques en conditions diabétiques, l'activation du facteur ICER altère la capacité de synthèse et de sécrétion d'insuline et réduit la survie ces cellules.Dans le tissu adipeux des souris et des sujets humains souffrant d'obésité, le facteur ICER contribue à la perte de sensibilité à l'insuline. La disparition d'ICER altère l'expression de la protéine qui capte le glucose, le transoprteur GLUT4, et l'hormone adipocytaire favorisant la sensibilité à l'insuline, nommée adiponectine. Ainsi, la perte d'ICER participe à la réduction de la captation de glucose par le tissue adipeux et au développement de l'insulino-résistance au cours de l'obésité.En conclusion, à la lumière de ces résultats, le facteur ICER apparaît comme un contributeur important à la progression du DT2, en soutenant la dysfonction des cellules β pancréatiques et l'aggravation de l'insulino-résistance. Par conséquent, l'étude des mécanismes responsables de la dérégulation du facteur ICER pourrait permettre le développement de nouvelles stratégies de traitement du DT2.

The cAMP response element binding protein-2 (CREB-2) can interact with the C/EBP-homologous protein (CHOP).

cAMP response element binding protein-2 (CREB-2) is a basic leucine zipper (bZIP) factor that was originally described as a repressor of CRE-dependent transcription but that can also act as a transcriptional activator. Moreover, CREB-2 is able to function in association with the viral Tax protein as an activator of the human T-cell leukemia virus type I (HTLV-I) promoter. Here we show that CREB-2 is able to interact with C/EBP-homologous protein (CHOP), a bZIP transcription factor known to inhibit CAAT/enhancer-dependent transcription. Cotransfection of CHOP with CREB-2 results in decreased activation driven by the cellular CRE motif or the HTLV-I proximal Tax-responsive element, confirming that CREB-2 and CHOP can interact with each other in vivo.

Molecular characterization of a human matrix attachment region epigenetic regulator.

Matrix attachment regions (MAR) generally act as epigenetic regulatory sequences that increase gene expression, and they were proposed to partition chromosomes into loop-forming domains. However, their molecular mode of action remains poorly understood. Here, we assessed the possible contribution of the AT-rich core and adjacent transcription factor binding motifs to the transcription augmenting and anti-silencing effects of human MAR 1-68. Either flanking sequences together with the AT-rich core were required to obtain the full MAR effects. Shortened MAR derivatives retaining full MAR activity were constructed from combinations of the AT-rich sequence and multimerized transcription factor binding motifs, implying that both transcription factors and the AT-rich microsatellite sequence are required to mediate the MAR effect. Genomic analysis indicated that MAR AT-rich cores may be depleted of histones and enriched in RNA polymerase II, providing a molecular interpretation of their chromatin domain insulator and transcriptional augmentation activities.

New pool of cortical interneuron precursors in the early postnatal dorsal white matter.

The migration of cortical γ-aminobutyric acidergic interneurons has been extensively studied in rodent embryos, whereas few studies have documented their postnatal migration. Combining in vivo analysis together with time-lapse imaging on cortical slices, we explored the origin and migration of cortical interneurons during the first weeks of postnatal life. Strikingly, we observed that a large pool of GAD65-GFP-positive cells accumulate in the dorsal white matter region during the first postnatal week. Part of these cells divides and expresses the transcription factor paired box 6 indicating the presence of local transient amplifying precursors. The vast majority of these cells are immature interneurons expressing the neuronal marker doublecortin and partly the calcium-binding protein calretinin. Time-lapse imaging reveals that GAD65-GFP-positive neurons migrate from the white matter pool into the overlying anterior cingulate cortex (aCC). Some interneurons in the postnatal aCC express the same immature neuronal markers suggesting ongoing migration of calretinin-positive interneurons. Finally, bromodeoxyuridine incorporation experiments confirm that a small fraction of interneurons located in the aCC are generated during the early postnatal period. These results altogether reveal that at postnatal ages, the dorsal white matter contains a pool of interneuron precursors that divide and migrate into the aCC.

cis- and trans-acting elements involved in reactivation of vaccinia virus early transcription.

We have previously shown that transcription from the vaccinia virus 7.5K early promoter is reactivated late in infection (J. Garcés, K. Masternak, B. Kunz, and R. Wittek, J. Virol. 67:5394-5401, 1993). To identify the sequence elements mediating reactivation, we constructed recombinant viruses harboring deletions, substitutions, or insertions in the 7.5K promoter or its flanking regions. The analysis of these viruses showed that sequences both upstream as well as downstream of the transcription initiation site contribute to reactivation of the 7.5K promoter. We tested whether reactivation could be explained by a high affinity of vaccinia virus early transcription factor to reactivated promoters. Bandshift experiments using purified protein showed that promoters which bind the factor with high affinity in general also have high early transcriptional activity. However, no correlation was found between affinity of the factor and reactivation. Interestingly, overexpression of recombinant early transcription factor in vaccinia virus-infected cells resulted in a shutdown of late transcription and in reactivation of promoters, which are normally not reactivated.

Regulation of innate immunity by signaling pathways emerging from the endoplasmic reticulum.

The innate immune system has evolved the capacity to detect specific pathogens and to interrogate cell and tissue integrity in order to mount an appropriate immune response. Loss of homeostasis in the endoplasmic reticulum (ER) triggers the ER-stress response, a hallmark of many inflammatory and infectious diseases. The IRE1/XBP1 branch of the ER-stress signaling pathway has been recently shown to regulate and be regulated by innate immune signaling pathways in both the presence and absence of ER-stress. By contrast, innate immune pathways negatively affect the activation of two other branches of the ER-stress response as evidenced by reduced expression of the pro-apoptotic transcription factor CHOP. Here we will discuss how innate immune pathways and ER-signaling intersect to regulate the intensity and duration of innate immune responses.

Ochratoxin A at nanomolar concentration perturbs the homeostasis of neural stem cells in highly differentiated but not in immature three-dimensional brain cell cultures.

Ochratoxin A (OTA), a fungal contaminant of basic food commodities, is known to be highly cytotoxic, but the pathways underlying adverse effects at subcytotoxic concentrations remain to be elucidated. Recent reports indicate that OTA affects cell cycle regulation. Therefore, 3D brain cell cultures were used to study OTA effects on mitotically active neural stem/progenitor cells, comparing highly differentiated cultures with their immature counterparts. Changes in the rate of DNA synthesis were related to early changes in the mRNA expression of neural stem/progenitor cell markers. OTA at 10nM, a concentration below the cytotoxic level, was ineffective in immature cultures, whereas in mature cultures it significantly decreased the rate of DNA synthesis together with the mRNA expression of key transcriptional regulators such as Sox2, Mash1, Hes5, and Gli1; the cell cycle activator cyclin D2; the phenotypic markers nestin, doublecortin, and PDGFRα. These effects were largely prevented by Sonic hedgehog (Shh) peptide (500ngml(-1)) administration, indicating that OTA impaired the Shh pathway and the Sox2 regulatory transcription factor critical for stem cell self-renewal. Similar adverse effects of OTA in vivo might perturb the regulation of stem cell proliferation in the adult brain and in other organs exhibiting homeostatic and/or regenerative cell proliferation.