Serum hyperglycosylated human chorionic gonadotropin to predict the gestational outcome in in vitro fertilization/intracytoplasmic sperm injection pregnancies.

Hyperglycosylated human chorionic gonadotropin (H-hCG) is secreted by the placenta in early pregnancy. Decreased H-hCG levels have been associated with abortion in spontaneous pregnancy. We retrospectively measured H-hCG and dimeric hCG in the sera of 87 in vitro fertilization patients obtained in the 3 weeks following embryo transfer and set the results in relation to pregnancy outcome. H-hCG and dimeric hCG were correlated (r(2) = 0.89), and were significantly decreased in biochemical pregnancy (2 microg/l and 18 IU/l, respectively) compared to early pregnancy loss (22 microg/l and 331 IU/l) and ongoing pregnancy (32 microg/l and 353 IU/l). Only H-hCG tended to discriminate between these last two groups.

The role of Receptor Activator of NFKB Ligand (RANKL) in mammary gland development

Abstract : The female reproductive hormones estrogen, progesterone and prolactin control postnatal breast development and are important to breast carcinogenesis. The mechanisms by which they elicit proliferation and morphogenesis remain poorly understood. Using the mouse as a model to study the molecular mechanisms through which hormones elicit morphogenetic changes in the mammary gland in vivo, we found the Receptor Activator of NFκB Ligand, a Tumor Necrosis Factor family member, to be strongly induced by progesterone. Recent publications suggested that hormone dependant RANKURANK signals are involved in the terminal differentiation of mammary gland alveolar buds into lobulo-alveolar structures competent for lactation. I show that in the absence of epithelial RANKL a distinct earlier stage of mammary gland development, side branch formation, is blocked. RANKL acts as a major mediator downstream of progesterone; it is required for progesterone-induced paracrine proliferation and completely rescues the mutant phenotype when ectopically expressed in progesterone receptor (PR) KO mammary epithelia. RANKL is not required for cell autonomous division of estrogen receptor alpha (ERa) /PR positive cells. Cyclin D1, previously implicated as a mediator of RANKL, is not affected by ablation of RANKL and is not required for RANKL-induced paracrine proliferation but for the cell autonomous proliferation. Gene expression arrays to find specific RANKL downstream targets have identified Id4, ElfS and one secreted metalloprotease (Adamtsl8) as potential candidates validated by Q-RT-PCR. Interestingly, Id4 and Adamtsl8 are expressed by the myoepithelial cells. Their expression additionally coincides with RANKL mRNA expression at mid pregnancy, possibly implying a functional contribution of both genes to RANKL mediated sidebranch formation. ElfS in contrast, is found to be strongly expressed by the end of pregnancy supporting recent findings of a prolactin mediated regulation. As for RANKL, this gene was in particular induced in luminal cells. Taken together, I report that progesterone is the major proliferative stimulus in the adult mammary gland eliciting proliferation of ERaJPR positive cells by a cell autonomous, cyclin D1-dependent and a paracrine RANKL-dependent mechanism. My work moreover suggests, that RANKL acts as a major orchestrator affecting different downstream mediators, through which progesterone exerts its effects concomitantly on different cellular compartments. Résumé : Les hormones sexuelles telles que l'oestrogène, la progestérone et la prolactine contrôlent le développement postnatal du sein et sont impliquées dans la cazcinogenèse. Les mécanismes par lesquels elles induisent la prolifération et la morphogénèse demeurent incompris. En utilisant la souris comme modèle, J'ai trouvé que le ligand activateur du récepteur de NFκB, une protéine de la famille du facteur de nécrose des tumeurs, peut être fortement induit par la progestérone. Les publications récentes ont suggéré que cette protéine est nécessaire à la fin de la grossesse, quand les cellules sécrétrices du lait apparaissent. Par des techniques de transplantation d'épithélium, je montre contrairement aux études précédentes, qu'en l'absence de RANKL dans l'épithélium une partie distincte du développement mammaire, la formation de branches latérales, est bloquée. La progestérone agit de manière pazacrine par l'intermédiaire de 12ANKL pour induire la prolifération tandis que la mort cellulaire n'est pas affectée. De plus, l'injection d'une protéine recombinante RANKL dans une souris mutante pour le récepteur à la progestérone induit la prolifération des cellules épithéliales en l'absence de grossesse ; la surexpression de RANKL dans ces mêmes mutants mène à une réversion complète du phénotype. Mes expériences démontrent que la progestérone induit deux types distincts de prolifération. Un premier type direct dans laquelle les cellules positives au récepteur à la progestérone prolifèrent. Cette division cellulaire est alors indépendante de RANKL mais dépendante de la cycline D1. Le second type de prolifération est induit par un mécanisme pazacrine et dépend de RANKL mais pas de la cycline D1. Ici, les cellules négatives au récepteur à la progestérone prolifèrent. Pour détecter des gènes cibles de la voie de signalisation du RANKL, un profil d'expression des gènes a été généré. Les facteurs de transcription Id4, EIf5 et une métalloprotéase sécrétée (Adamtsl8) ont été identifiés en tant que cibles potentielles. D'autres analyses de validation démontrent qu'Id4, Adamtsl8, RANKL mais pas E1f5 sont fortement exprimés au cours de la grossesse, coïncidant avec la formation de branchements latéraux induit par progestérone. EIf5 s'est avéré être exprimé vers la fin de la grossesse appuyant des résultats récents proposant une régulation par la prolactine. Le système canalaire mammaire se compose de couches cellulaires: une couche interne de cellules luminales et une externe de cellules myoépithéliale. Les expériences génétiques d'expression ont révélé que RANKL. et E1f5 sont exprimés dans la partie luminale tandis qu'Id4 et Adamtsl8 sont dans les cellules myoépithéliales. En conclusion, je prouve que la progestérone est le stimulus principal induisant la prolifération dans la glande mammaire d'adulte. Deux mécanismes de prolifération sont impliqués: l'un direct dépendant de la cycline Dl et l'autre paracrine dépendant de RANKI.. Mon travail suggère par ailleurs que RANKL agit en tant que médiateur important, par lequel la progestérone exerce ses effets sur différents compartiments cellulaires tels que la coordination de la prolifération des cellules épithéliales avec la réorganisation de la matrice extracellulaire et de la membrane basale exigées pour la morphogénèse du système canalaire latéral.

Direct mapping of 19F in 19FDG-6P in brain tissue at subcellular resolution using soft X-ray fluorescence

Low energy x-ray fluorescence (LEXRF) detection was optimized for imaging cerebral glucose metabolism by mapping the fluorine LEXRF signal of 19 F in 19 FDG, trapped as intracellular 19 F-deoxyglucose-6-phosphate ( 19 FDG-6P) at 1μm spatial resolution from 3μm thick brain slices. 19 FDG metabolism was evaluated in brain structures closely resembling the general cerebral cytoarchitecture following formalin fixation of brain slices and their inclusion in an epon matrix. 2-dimensional distribution maps of 19 FDG-6P were placed in a cytoarchitectural and morphological context by simultaneous LEXRF mapping of N and O, and scanning transmission x-ray (STXM) imaging. A disproportionately high uptake and metabolism of glucose was found in neuropil relative to intracellular domains of the cell body of hypothalamic neurons, showing directly that neurons, like glial cells, also metabolize glucose. As 19 F-deoxyglucose-6P is structurally identical to 18 F-deoxyglucose-6P, LEXRF of subcellular 19 F provides a link to in vivo 18 FDG PET, forming a novel basis for understanding the physiological mechanisms underlying the 18 FDG PET image, and the contribution of neurons and glia to the PET signal.

Downregulation of endotoxin-induced uveitis by intravitreal injection of vasoactive intestinal Peptide encapsulated in liposomes.

PURPOSE: To reestablish the immunosuppressive microenvironment of the eye, disrupted by ocular inflammation during endotoxin-induced uveitis (EIU), by means of intravitreal injection of vasoactive intestinal peptide (VIP) in saline or encapsulated in liposomes, to increase its bioavailability and efficiency. METHODS: EIU was induced in Lewis rats by subcutaneous injection of lipopolysaccharide (LPS). Simultaneously, animals were intravitreally injected with saline, saline/VIP, VIP-loaded liposomes (VIP-Lip), or unloaded liposomes. EIU severity and cellular infiltration were assessed by clinical examination and specific immunostaining. VIP concentration was determined in ocular fluids by ELISA. Ocular expression of inflammatory cytokine and chemokine mRNAs was detected by semiquantitative RT-PCR. Biodistribution of rhodamine-conjugated liposomes (Rh-Lip) was analyzed by immunohistochemistry in eyes and regional cervical lymph nodes (LNs). RESULTS: Twenty-four hours after intravitreal injection of VIP-Lip, VIP concentration in ocular fluids was 15 times higher than after saline/VIP injection. At that time, EIU clinical severity, ocular infiltrating polymorphonuclear leukocytes (PMNs), and, to a lesser extent, ED1(+) macrophages, as well as inflammatory cytokine and chemokine mRNA expression, were significantly reduced in VIP-Lip-injected rats compared with rats injected with saline/VIP, unloaded liposomes, or saline. Rh-Lip was distributed in vitreous, ciliary body, conjunctiva, retina, and sclera. It was internalized by macrophages and PMNs, and VIP colocalized with liposomes at least up to 14 days after injection. In cervical LNs, resident macrophages internalized VIP-Rh-Lip, and some adjacent lymphocytes showed VIP expression. CONCLUSIONS: VIP was efficient at reducing EIU only when formulated in liposomes, which enhanced its immunosuppressive effect and controlled its delivery to all tissues affected by or involved in ocular inflammation.

New evidence of neuroprotection by lactate after transient focal cerebral ischaemia: extended benefit after intracerebroventricular injection and efficacy of intravenous administration.

BACKGROUND: Lactate protects mice against the ischaemic damage resulting from transient middle cerebral artery occlusion (MCAO) when administered intracerebroventricularly at reperfusion, yielding smaller lesion sizes and a better neurological outcome 48 h after ischaemia. We have now tested whether the beneficial effect of lactate is long-lasting and if lactate can be administered intravenously. METHODS: Male ICR-CD1 mice were subjected to 15-min suture MCAO under xylazine + ketamine anaesthesia. Na L-lactate (2 µl of 100 mmol/l) or vehicle was administered intracerebroventricularly at reperfusion. The neurological deficit was evaluated using a composite deficit score based on the neurological score, the rotarod test and the beam walking test. Mice were sacrificed at 14 days. In a second set of experiments, Na L-lactate (1 µmol/g body weight) was administered intravenously into the tail vein at reperfusion. The neurological deficit and the lesion volume were measured at 48 h. RESULTS: Intracerebroventricularly injected lactate induced sustained neuroprotection shown by smaller neurological deficits at 7 days (median = 0, min = 0, max = 3, n = 7 vs. median = 2, min = 1, max = 4.5, n = 5, p < 0.05) and 14 days after ischaemia (median = 0, min = 0, max = 3, n = 7 vs. median = 3, min = 0.5, max = 3, n = 7, p = 0.05). Reduced tissue damage was demonstrated by attenuated hemispheric atrophy at 14 days (1.3 ± 4.0 mm(3), n = 7 vs. 12.1 ± 3.8 mm(3), n = 5, p < 0.05) in lactate-treated animals. Systemic intravenous lactate administration was also neuroprotective and attenuated the deficit (median = 1, min = 0, max = 2.5, n = 12) compared to vehicle treatment (median = 1.5, min = 1, max = 8, n = 12, p < 0.05) as well as the lesion volume at 48 h (13.7 ± 12.2 mm(3), n = 12 vs. 29.6 ± 25.4 mm(3), n = 12, p < 0.05). CONCLUSIONS: The beneficial effect of lactate is long-lasting: lactate protects the mouse brain against ischaemic damage when supplied intracerebroventricularly during reperfusion with behavioural and histological benefits persisting 2 weeks after ischaemia. Importantly, lactate also protects after systemic intravenous administration, a more suitable route of administration in a clinical emergency setting. These findings provide further steps to bring this physiological, commonly available and inexpensive neuroprotectant closer to clinical translation for stroke.

Severe ischemia of the hand following intra-arterial promazine injection: effects of vasodilation, anticoagulation, and local thrombolysis with tissue-type plasminogen activator.

Promazine hydrochloride was injected accidentally in the antecubital artery of a 42-year-old woman, resulting in severe ischemia of the second and third fingers of her right hand which lasted for four days before she was hospitalized. Vasodilation by combining axillary plexus block and intravenous sodium nitroprusside did not improve ischemia and local thrombolysis was performed using recombinant tissue-type plasminogen activator (50 mg over 8 hours), resulting in normalization of digital pressure in one of the two affected fingers. The outcome was favourable and amputation could be avoided.

Outcome after proximal femoral fractures during primary total hip replacement by the direct anterior approach.

BACKGROUND: The literature suggests that intraoperative fractures of the greater trochanter and the metaphysis are increased with uncemented stems and the direct anterior approach. This study aims to determine the incidence and assess the functional and radiological outcome after such fractures. METHODS: 484 consecutive total hip replacements (THR) (64 ± 12 years) were analyzed. We treated trochanteric fractures conservatively without any further denuding, and secured metaphyseal fissures with cerclages. Postoperative X-rays and at the latest follow-up were compared to assess secondary fracture displacement and stem subsidence. Western Ontario and McMaster Universities Arthritis Index (WOMAC) scores after 1 year were analyzed. For each patient sustaining a fracture, two patients without fractures were matched in terms of age, body mass index and gender. RESULTS: 13 (2.7 %, 5 male, 68 ± 9 years) patients with intraoperative fractures of the greater trochanter (n = 8) or the metaphysis (n = 5) were analyzed. Consolidation was observed in 7/8 patients sustaining a trochanteric fracture while secondary displacement of the fragment occurred in one case. Stem subsidence was observed in 2/5 cases (5 and 7 mm). Patients who sustained a fracture showed a trend towards poorer WOMAC scores at 1 year postoperatively, compared to patients without fractures. A significantly increased joint stiffness was also observed. CONCLUSION: The intraoperative fracture risk in this series of THR through a direct anterior approach was 2.7 %. Trochanteric fractures do heal without primary fixation. Metaphyseal fractures heal well if immediately stabilized with a cerclage.

The direct effects of tacrolimus and cyclosporin A on isolated human islets: A functional, survival and gene expression study.

The use of immunosuppressive drugs in transplanted patients is associated with the development of diabetes, possibly due to β-cell toxicity. To better understand the mechanisms leading to post-transplant diabetes, we investigated the actions of prolonged exposure of isolated human islets to therapeutical levels of tacrolimus (Tac) or cyclosporin A (CsA). Islets were isolated from the pancreas of multiorgan donors by enzymatic digestion and density gradient centrifugation. Functional, survival and molecular studies were then performed after 4 days of incubation with therapeutical concentrations of Tac or  CsA. Glucose-induced insulin secretion was significantly decreased in Tac, but not in CsA exposed islets, which was associated with a reduction of the amount of insulin granules as shown by electron microscopy. The percentage of apoptotic β-cells was higher in Tac than CsA exposed islets. Microarray experiments followed by Gene Set Enrichment Analysis revealed that gene expression was more markedly affected upon Tac treatment. In conclusion, Tac and CsA affect features of beta-cell differently, with several changes occurring at the molecular level.

Study of the incorporation and the anti-tumour efficacy of radio-iododeoxyuridine according to the cellular cycle and in presence of synthesis inhibitor of thymidine

Résumé La iododeoxyuridine (IdUrd), une fois marqué au 123I ou au 125I, est un agent potentiel pour des thérapies par rayonnements Auger. Cependant, des limitations restreignent son incorporation dans l'ADN. Afin d'augmenter celle-ci, différents groupes ont étudié la fluorodeoxyuridine (FdUrd), qui favorise l'incorporation d'analogue de la thymidine, sans toutefois parvenir à une toxicité associé plus importante. Dans notre approche, 3 lignées cellulaires de glioblastomes humains et une lignée de cancer ovarien ont été utilisées. Nous avons observé, 16 à 24 h après un court pré-traitement à la FdUrd, un fort pourcentage de cellules s'accumulant en phase S. Plus qu'une accumulation, c'était une synchronisation des cellules, celles-ci restant capables d'incorporer la radio-IdIrd et repartant dans le cycle cellulaire. De plus, ces cellules accumulées après un pré-traitement à la FdUrd étaient plus radio-sensibles. Après le même intervalle de 16 à 24 h suivant la FdUrd, les 4 lignées cellulaires ont incorporé des taux plus élevés de radio-IdUrd que sans ce prétraitement. Une corrélation temporelle entre l'accumulation des cellules en phase S et la forte incorporation de radio-IdUrd a ainsi été révélée 16 à 24 h après pré-traitement à la FdUrd. Les expériences de traitement par rayonnements Auger sur les cellules accumulées en phase S ont montré une augmentation significative de l'efficacité thérapeutique de 125I-IdUrd comparé aux cellules non prétraitées à la FdUrd. Une première estimation a permis de déterminer que 100 désintégrations de 125I par cellules étant nécessaires afin d'atteindre l'efficacité thérapeutique. De plus, p53 semble jouer un rôle dans l'induction directe de mort cellulaire après des traitements par rayonnements Auger, comme indiqué par les mesures par FACS d'apoptose et de nécrose 24 et 48 h après le traitement. Concernant les expériences in vivo, nous avons observé une incorporation marquée de la radio-IdUrd dans l'ADN après un pré-traitement à la FdUrd dans un model de carcinomatose ovarienne péritonéale. Une augmentation encore plus importante a été observée après injection intra-tumorale dans des transplants sous-cutanés de glioblastomes sur des souris nues. Ces modèles pourraient être utilisés pour de plus amples études de diffusion de radio-IdUrd et de thérapie par rayonnement Auger. En conclusion, ce travail montre une première application réussie de la FdUrd afin d'accroître l'efficacité de la radio-IdUrd par traitements aux rayonnements Auger. La synchronisation des cellules en phase S combinée avec la forte incorporation de radio-IdUrd dans l'ADN différées après un pré-traitement à la FdUrd ont montré le gain thérapeutique attendu in vitro. De plus, des études in vivo sont tout indiquées après les observations encourageantes d'incorporation de radio-IdUrd dans les models de transplants sous-cutanés de glioblastomes et de tumeurs péritonéales ovariennes. Summary Iododeoxyuridine (IdUrd), labelled with 123I or 125I, could be a potential Auger radiation therapy agent. However, limitations restrict its DNA incorporation in proliferating cells. Therefore, fluorodeoxyuridine (FdUrd), which favours incorporation of thymidine analogues, has been studied by different groups in order to increase radio-IdUrd DNA incorporation, however therapeutic efficacy increase could not be reached. In our approach, 3 human glioblastoma cell lines with different p53 expression and one ovarian cancer line were pre-treated with various FdUrd conditions. We observed a high percentage of cells accumulating in early S phase 16 to 24 h after a short and non-toxic FdUrd pre-treatment. More than an accumulation, this was a synchronization, cells remaining able to incorporate radio-IdUrd and re-entering the cell cycle. Furthermore, the S phase accumulated cells post FdUrd pre-treatment were more radiosensitive. After the same delay of 16 to 24 h post FdUrd pre-treatment, the 4 cell lines were incorporating higher rates of radio-IdUrd compared with untreated cells. A time correlation between S phase accumulation and high radio-IdUrd incorporation was therefore revealed 16 to 24 h post FdUrd pre-treatment. Auger radiation treatment experiments performed on S phase enriched cells showed a significant increase of killing efficacy of 125I-IdUrd compared with cells not pre-treated with FdUrd. A first estimation indicates further that about 100 125I decays were required to reach killing in the targeted cells. Moreover, p53 might play a role on the direct induction of cell death pathways after Auger radiation treatments, as indicated by differential apoptosis and necrosis induction measured by FACS 24 and 48 h after treatment initiation. Concerning in vivo results, we observed a marked DNA incorporation increase of radio-IdUrd after FdUrd pre-treatment in peritoneal carcinomatosis in SCID mice. Even higher incorporation increase was observed after intra-tumoural injection of radio-IdUrd in subcutaneous glioblastoma transplants in nude mice. These tumour models might be further useful for diffusion of radio-IdUrd and Auger radiation therapy studies. In conclusion, these data show a first successful application of thymidine synthesis inhibition able to increase the efficacy of radio-IdUrd Auger radiation treatment. The S phase synchronization combined with a high percentage DNA incorporation of radio-IdUrd delayed post FdUrd pre-treatment provided the expected therapeutic gain in vitro. Further in vivo studies are indicated after the observations of encouraging radio-IdUrd uptake experiments in glioblastoma subcutaneous xenografts and in an ovarian peritoneal carcinomatosis model.

Bunch frequency multiplication by RF injection into an isochronous ring

La collaboration CLIC (Compact LInear Collider, collisionneur linéaire compact) étudie la possibilité de réaliser un collisionneur électron-positon linéaire à haute énergie (3 TeV dans le centre de masse) et haute luminosité (1034 cm-2s-1), pour la recherche en physique des particules. Le projet CLIC se fonde sur l'utilisation de cavités accélératrices à haute fréquence (30 GHz). La puissance nécessaire à ces cavités est fournie par un faisceau d'électrons de basse énergie et de haute intensité, appelé faisceau de puissance, circulant parallèlement à l'accélérateur linéaire principal (procédé appelé « Accélération à Double Faisceau »). Dans ce schéma, un des principaux défis est la réalisation du faisceau de puissance, qui est d'abord généré dans un complexe accélérateur à basse fréquence, puis transformé pour obtenir une structure temporelle à haute fréquence nécessaire à l'alimentation des cavités accélératrices de l'accélérateur linéaire principal. La structure temporelle à haute fréquence des paquets d'électrons est obtenue par le procédé de multiplication de fréquence, dont la manipulation principale consiste à faire circuler le faisceau d'électrons dans un anneau isochrone en utilisant des déflecteurs radio-fréquence (déflecteurs RF) pour injecter et combiner les paquets d'électrons. Cependant, ce type de manipulation n'a jamais été réalisé auparavant et la première phase de la troisième installation de test pour CLIC (CLIC Test Facility 3 ou CTF3) a pour but la démonstration à faible charge du procédé de multiplication de fréquence par injection RF dans un anneau isochrone. Cette expérience, qui a été réalisée avec succès au CERN au cours de l'année 2002 en utilisant une version modifiée du pré-injecteur du grand collisionneur électron-positon LEP (Large Electron Positron), est le sujet central de ce rapport. L'expérience de combinaison des paquets d'électrons consiste à accélérer cinq impulsions dont les paquets d'électrons sont espacés de 10 cm, puis à les combiner dans un anneau isochrone pour obtenir une seule impulsion dont les paquets d'électrons sont espacés de 2 cm, multipliant ainsi la fréquence des paquets d'électrons, ainsi que la charge par impulsion, par cinq. Cette combinaison est réalisée au moyen de structures RF résonnantes sur un mode déflecteur, qui créent dans l'anneau une déformation locale et dépendante du temps de l'orbite du faisceau. Ce mécanisme impose plusieurs contraintes de dynamique de faisceau comme l'isochronicité, ainsi que des tolérances spécifiques sur les paquets d'électrons, qui sont définies dans ce rapport. Les études pour la conception de la Phase Préliminaire du CTF3 sont détaillées, en particulier le nouveau procédé d'injection avec les déflecteurs RF. Les tests de haute puissance réalisés sur ces cavités déflectrices avant leur installation dans l'anneau sont également décrits. L'activité de mise en fonctionnement de l'expérience est présentée en comparant les mesures faites avec le faisceau aux simulations et calculs théoriques. Finalement, les expériences de multiplication de fréquence des paquets d'électrons sont décrites et analysées. On montre qu'une très bonne efficacité de combinaison est possible après optimisation des paramètres de l'injection et des déflecteurs RF. En plus de l'expérience acquise sur l'utilisation de ces déflecteurs, des conclusions importantes pour les futures activités CTF3 et CLIC sont tirées de cette première démonstration de la multiplication de fréquence des paquets d'électrons par injection RF dans un anneau isochrone.<br/><br/>The Compact LInear Collider (CLIC) collaboration studies the possibility of building a multi-TeV (3 TeV centre-of-mass), high-luminosity (1034 cm-2s-1) electron-positron collider for particle physics. The CLIC scheme is based on high-frequency (30 GHz) linear accelerators powered by a low-energy, high-intensity drive beam running parallel to the main linear accelerators (Two-Beam Acceleration concept). One of the main challenges to realize this scheme is to generate the drive beam in a low-frequency accelerator and to achieve the required high-frequency bunch structure needed for the final acceleration. In order to provide bunch frequency multiplication, the main manipulation consists in sending the beam through an isochronous combiner ring using radio-frequency (RF) deflectors to inject and combine electron bunches. However, such a scheme has never been used before, and the first stage of the CLIC Test Facility 3 (CTF3) project aims at a low-charge demonstration of the bunch frequency multiplication by RF injection into an isochronous ring. This proof-of-principle experiment, which was successfully performed at CERN in 2002 using a modified version of the LEP (Large Electron Positron) pre-injector complex, is the central subject of this report. The bunch combination experiment consists in accelerating in a linear accelerator five pulses in which the electron bunches are spaced by 10 cm, and combining them in an isochronous ring to obtain one pulse in which the electron bunches are spaced by 2 cm, thus achieving a bunch frequency multiplication of a factor five, and increasing the charge per pulse by a factor five. The combination is done by means of RF deflecting cavities that create a time-dependent bump inside the ring, thus allowing the interleaving of the bunches of the five pulses. This process imposes several beam dynamics constraints, such as isochronicity, and specific tolerances on the electron bunches that are defined in this report. The design studies of the CTF3 Preliminary Phase are detailed, with emphasis on the novel injection process using RF deflectors. The high power tests performed on the RF deflectors prior to their installation in the ring are also reported. The commissioning activity is presented by comparing beam measurements to model simulations and theoretical expectations. Eventually, the bunch frequency multiplication experiments are described and analysed. It is shown that the process of bunch frequency multiplication is feasible with a very good efficiency after a careful optimisation of the injection and RF deflector parameters. In addition to the experience acquired in the operation of these RF deflectors, important conclusions for future CTF3 and CLIC activities are drawn from this first demonstration of the bunch frequency multiplication by RF injection into an isochronous ring.<br/><br/>La collaboration CLIC (Compact LInear Collider, collisionneur linéaire compact) étudie la possibilité de réaliser un collisionneur électron-positon linéaire à haute énergie (3 TeV) pour la recherche en physique des particules. Le projet CLIC se fonde sur l'utilisation de cavités accélératrices à haute fréquence (30 GHz). La puissance nécessaire à ces cavités est fournie par un faisceau d'électrons de basse énergie et de haut courant, appelé faisceau de puissance, circulant parallèlement à l'accélérateur linéaire principal (procédé appelé « Accélération à Double Faisceau »). Dans ce schéma, un des principaux défis est la réalisation du faisceau de puissance, qui est d'abord généré dans un complexe accélérateur à basse fréquence, puis transformé pour obtenir une structure temporelle à haute fréquence nécessaire à l'alimentation des cavités accélératrices de l'accélérateur linéaire principal. La structure temporelle à haute fréquence des paquets d'électrons est obtenue par le procédé de multiplication de fréquence, dont la manipulation principale consiste à faire circuler le faisceau d'électrons dans un anneau isochrone en utilisant des déflecteurs radio-fréquence (déflecteurs RF) pour injecter et combiner les paquets d'électrons. Cependant, ce type de manipulation n'a jamais été réalisé auparavant et la première phase de la troisième installation de test pour CLIC (CLIC Test Facility 3 ou CTF3) a pour but la démonstration à faible charge du procédé de multiplication de fréquence par injection RF dans un anneau isochrone. L'expérience consiste à accélérer cinq impulsions, puis à les combiner dans un anneau isochrone pour obtenir une seule impulsion dans laquelle la fréquence des paquets d'électrons et le courant sont multipliés par cinq. Cette combinaison est réalisée au moyen de structures déflectrices RF qui créent dans l'anneau une déformation locale et dépendante du temps de la trajectoire du faisceau. Les résultats de cette expérience, qui a été réalisée avec succès au CERN au cours de l?année 2002 en utilisant une version modifiée du pré-injecteur du grand collisionneur électron-positon LEP (Large Electron Positon), sont présentés en détail.