6 resultados para MECANISMO REED
em Cor-Ciencia - Acuerdo de Bibliotecas Universitarias de Córdoba (ABUC), Argentina
Resumo:
Una caracterstica de los parsitos es su capacidad de adaptacin. Uno de los mecanismos que utiliza Giardia es la variacin de sus antgenos de superficie (VSP), pudiendo as evadir la respuesta inmune del husped. Esto es posible debido a que cada trofozoto expresa una sola VSP en su superficie pero frente a la respuesta del husped produce el recambio de las VSPs, evadiendo el ataque inmunolgico. Nuestro grupo de trabajo investig el mecanismo involucrado en este proceso, demostrando que la regulacin de la expresin de las VSP es mediado por un mecanismo de silenciamiento posttranscripcional. Caracterizamos las enzimas involucradas en el mismo y su localizacin. La dilucidacin del mecanismo de variacin antignica en Giardia abre las fronteras hacia la manipulacin del mismo para emplearlo en la generacin de una vacuna contra este parsito intestinal. Si se lograra inhibir la accin de enzimas claves no habra silenciamiento gnico y todos los genes que codifican VSP se traduciran en protenas, expresndose todas en la superficie del parsito posibilitando al hospedador generar una respuesta inmune protectiva que contrarreste la infeccin. En el presente proyecto se completarn los estudios relacionados al silenciamiento gnico y se explicar los antgenos utilizados en los esquemas de inmunizacin.
Resumo:
En este pedido de subsidio se presenta una nueva lnea de investigacin que se propone analizar la funcin y mecanismo de accin de la hormona melanocito concentrante (MCH) y su interrelacin con la alfa-MSH [Hormona melanocito estimulante] ya que ambos pptidos actan en forma antagnica en peces. Para cumplimentar este objetivo se propone analizar la funcin del MCH en el comportamiento de aseo excesivo y si ste pptido bloquea el efecto de alfa-MSH en esta conducta al igual que se anulan en los peces. Adems, hemos comprobado en trabajos anteriores que alfa-MSH disminuye la temperatura ante el aumento provocado por un pirgeno exgeno y tambin se han establecido los neurotransmisores (NT) involucrados. En este proyecto nos proponemos establecer el efecto de MCH y su interaccin con MSH y los NT involucrados en el proceso de termoregulacin, comportamiento de aseo excesivo y estudios de inmunidad. Adems, siguiendo con nuestra lnea de trabajo, continuamos indagando sobre los sistemas de segundos mensajeros involucrados en el mecanismo de alfa-MSH mediante estudios in vivo e in vitro, midiendo estos segundos mensajeros en zonas especficas del Sistema Nervioso Central (SNC). Investigaremos cmo estn involucrados los receptores nicotnicos y muscarnicos en la induccin de las conductas y la medicin de los segundos mensajeros AMPc e IP 3 en ncleo estriado. Con respecto a la participacin de alfa-MSH en el comienzo de la pubertad se propone: A) Establecer si la estimulacin de la liberacin de esteroides ovricos de LH, FSH y alfa-MSH estara mediada por AMPc. Para su cumplimiento se plantea realizar incubacin de ovarios prepuberales en presencia de alfa-MSH y las gonadotrofinas hipofisarias a fin de determinar las variaciones de P, E2 y AMPc liberadas al medio. B) Corroborar si existe una unin directa de alfa-MSH a las clulas ovricas para interactuar con las gonadotrofinas y por su intermedio modificar la liberacin de P. Para ello se propone determinar el porcentaje de unin del pptido marcado a clulas ovricas. C) Determinar por medio de autoradiografa, si la administracin aguda del pptido a ratas prepberes, modifica el contenido ovrico de receptores para FSH y/o LH. Se continuarn los estudios tendientes a establecer la interrelacin entre hormonas esteroideas, catecolaminas y alfa-MSH en la regulacin de la conducta sexual. Se analizar la actividad lordtica luego de la inyeccin de alfa-MSH en rea preptica y se tratar de establecer qu NT median la respuesta observada, midiendo adems el contenido del pptido en diferentes reas del SNC y liberacin de LH.
Resumo:
El objetivo general de este trabajo es aportar nuevos conocimientos en el campo de las reacciones que ocurren por transferencia electrnica (TE) e involucran radicales, radicales aniones y cationes como intermediarios, desde un punto de vista del mecanismo de reaccin, reactividad de especies reaccionantes y posibles aplicaciones en sntesis. Se realizar un estudio cuantitativo de las reacciones de reduccin de halogenuros alifticos no activados por TE fotoinducida con aniones. Se determinar el mecanismo de esta reduccin (...) y el rendimiento cuntico de la reaccin, as como su variacin con la longitud de onda. Se realizar el estudio con diferentes haloalcanos (...) y diferentes carbaniones. La oxidacin biolgica de compuestos organozufrados es muy conocida, sin embargo el mecanismo de estas reacciones slo en muy pocos casos ha sido estudiado. Las oxidaciones pueden ser de dos electrones o por TE de un electrn formado radical catin centrado en azufre. El estudio de diferentes pasos de reaccin de estos radicales cationes, (especialmente alfa-deprotonacin o fragmentacin del enlace C-S en competencia con S-oxidacin), es de utilidad para comprobar su mediacin en una dada reaccin. De esta manera se continuar con el estudio de reacciones de TE fotoasistida entre sulfuros cclicos (tiiranos sustitudos) y aceptores de electrones como tetranitrometano, determinando la distribucin de productos en funcin de la estructura del tiirano as como los pasos de reaccin de los radicales cationes de azufre as formados. En forma anexa se realizan estudios de sulfenilacin de compuestos con metilenos activos. Se conoce que los compuestos carbonlicos sulfenilados en posicin alfa son verstiles intermediarios sintticos. Hemos encontrado un nuevo y fcil mtodo de obtencin del alfa-feniltiocetonas en condiciones suaves y con excelentes rendimientos, a partir del enolato de la cetona y la N-feniltiocaprolactama en DMSO a 25 C y en 10 minutos. Se continuar con el estudio del alcance de estas reacciones de sulfenilacin determinando: la regioespecificidad de la reaccin con cetonas asimtricas; la sulfenilacin de cetonas derivadas de productos naturales; la reaccin con otros carbaniones derivados de steres, lactonas, amidas, lactamas, nitrilos, aldehdos, etc.; as como el empleo de otros agentes sulfenilantes tales como N-alquiltiocaprolactama y N-feniltioftalimida.
Resumo:
La respuesta antitumoral en individuos con cncer depende, en gran medida, de clulas del sistema inmune capaces de reconocer y eliminar las clulas tumorales. Sin embargo, los tumores tienen la capacidad de evadir la respuesta inmune a travs de diversos mecanismos como por ejemplo inducir la muerte de clulas claves del sistema inmune [1-3]. Previamente nosotros demostramos mediante un modelo in vitro que dependiendo de las condiciones de interaccin entre tumor y linfocitos (tiempo y relacin numrica), los tumores pueden inducir apoptosis o senescencia de linfocitos T provenientes de donantes sanos. Nuestros resultados son los primeros en demostrar que clulas tumorales de diversos orgenes pueden inducir senescencia de clulas T a travs de factor/s solubles. Tambin demostramos que a diferencia con los que ocurre in vivo, tanto las clulas CD4 como las CD8 son susceptibles a adquirir fenotipo de senescencia. Estudiando las implicancias que puede tener la senescencia sobre la funcionalidad de la clula T, observamos que las clulas T CD4+ y CD8+ senescentes pueden suprimir una respuesta linfoproliferativa. Si bien las clulas CD8+CD28- han sido identificadas in vivo, nosotros demostramos que clulas CD4+ CD28- tiene capacidad supresora [4]. En base a estos resultados, nuestra hiptesis es que las clulas T senescentes inducida por tumores pueden regular nuestro sistema de defensa actuando sobre la respuesta inmune adaptativa y posiblemente sobre la innata y, por consiguiente, postulamos que la senescencia de clulas T puede ser considerada como otro de los mecanismos de evasin de la respuesta inmunePlanteamos as los siguientes objetivos especficos: -Evaluar como las clulas T senescentes inducidas por tumores pueden regular la respuesta inmune.-Evaluar la participacin de mediadores solubles capaces de regular la senescencia de clulas T inducida por tumores. En la actualidad existen estrategias inmuno-teraputicas que avizoran resultados promisorios. Sin embargo, el control de clulas T inmunosupresoras permanece como unos de los grandes desafos. Nuestro proyecto proveer conocimientos sobre un fenmeno muy poco estudiado y por consiguiente muy poco valorado a la hora de disear estrategias teraputicas para la cura del cncer.
Resumo:
El Estrs de Retculo Endoplsmico (RE) es inducido por la acumulacin de protenas sin plegar en el lumen de la organela. Esto se puede observar en diversas situaciones fisio-patolgicas como durante una infeccin viral o en proceso isqumico. Adems, contribuye a la base molecular de numerosas enfermedades ya sea ndole metablico (Fibrosis qustica o Diabetes Miellitus) o neurodegenerativas como mal de Alzheimer o Parkinson (Mutat Res, 2005, 569). Para restablecer la homeostasis en la organela se activa una seal de transduccin (UPR), cuya respuesta inmediata es la atenuacin de la sntesis de protena debido a la fosforilacin de subunidad alpha del factor eucaritico de iniciacin de translacin (eIF2) va PERK. Esta es una protena de membrana de RE que detecta estrs. Bajo condiciones normales, PERK est inactiva debido a la asociacin de su dominio luminar con la chaperona BIP (Nat Cell Biol, 2000, 2: 326). Frente a una situacin de estrs, la chaperona se disocia causando desinhibicin. Recientemente, (Plos One 5: e11925) se observ, bajo condiciones de estrs, un aumento de Ca2+ citoslico y un rpido incremento de la expresin de calcineurina (CN), una fosfatasa citoslica dependiente de calcio, heterodimrica formada por una subunidad cataltica (CN-A) y una regulatoria (CN-B). Adems, CN interacciona, sin intermediarios, con el dominio citoslico de PERK favoreciendo su trans-autofosforilacin. Resultados preliminares indican que, astrocitos CNA-/- exhibieron, en condiciones basales, un mayor nmero de clulas muertas y de niveles de eIF2 fosforilado que los astrocitos CNA-/-. Hiptesis: CNA/B interacciona con PERK cuando el Ca2+ citoslico esta incrementado luego de haberse inducido Estrs de RE, lo cual promueve dimerizacin y auto-fosforilacin de la quinasa, acentundose as la fosforilacin de eIF2 e inhibicin de la sntesis de protenas. Esta activacin citoslica de PERK colaborara con la ya descrita, desinhibicin luminal llevada cabo por BIP. Cuando el Ca2+ citoslico retorna a los niveles basales, PERK fosforila a CN, reduciendo su afinidad de unin y disocindose el complejo CN/PERK. Objetivo general: Definir las condiciones por las cuales CN interacciona con PERK y regula la fosforilacin de eIF2 e inhibicin de la sntesis de protena. Objetivos especficos: I-Estudiar la diferencia de afinidades y dependencia de Ca2+, de las dos isoformas de CN ( y ) en su asociacin con PERK. Adems verificar la posible participacin de la subunidad B de CN en esta interaccin. II-Determinar si la auto-fosforilacin de PERK es diferencialmente regulada por las dos isoformas de CN. III-Discernir la relacin del estado de fosforilacin de CN con su unin a PERK. IV-Determinar efectos fisiolgicos de la interaccin de CN-PERK durante la respuesta de Estrs de RE. Para llevar a cabo este proyecto se realizarn experimentos de biologa molecular, interaccin protena-protena, ensayos de fosforilacin in vitro y un perfil de polisoma con astrocitos CNA-/- , CNA-/- y astrocitos controles. Se espera encontrar una mayor afinidad de unin a PERK de la isoforma de CN y en condiciones donde la concentracin de Ca2+ sea del orden micromolar e imite niveles del in durante un estrs. Con respecto al estado de fosforilacin de CN, debido a los resultados preliminares, donde solo se la encontr fosforilada en condiciones basales, se piensa que CN podra interactuar con mayor afinidad con PERK cuando CN se encuentre desfosforilada. Por ltimo, se espera encontrar un aumento de eIF2 fosforilado y una acentuacin de la atenuacin de la sntesis de protena como consecuencia de la mayor activacin de PERK por su asociacin con la isoforma de CN en astrocitos donde el Estrs de RE se indujo por privacin de oxigeno y glucosa. Estos experimentos permitirn avanzar en el estudio de una nueva funcin citoprotectora de CN recientemente descrita por nuestro grupo de trabajo y sus implicancias en un modelo de isquemia. The accumulation of unfolded proteins into the Endoplasmic Reticulum (ER) activates a signal transduction cascade called Unfolding Protein Response (UPR), which attempts to restore homeostasis in the organelle. (PKR)-like-ER kinase (PERK) is an early stress response transmembrane protein that is generally inactive due to its association with the chaperone BIP. During ER stress, BIP is tritrated by the unfolded protein, leading PERK activation and phosphorylation of eukaryotic initiation factor-2 alpha (eIF2alpha), which attenuates protein sntesis. If ER damage is too great and homeostasis is not restored within a certain period of time, an apoptotic response is elicited. We recently demonstrated a cytosolic Ca2+ increase in Xenopus oocytes after induce ER stress. Moreover, calcineurin A/B, a an heterotrimeric Ca2+ dependent phosphatases (CN-A/B), associates with PERK increasing its auto-phosphorylation and significantly enhancing cell viability. Preliminary results suggest that, CN-A-/- knockout astrocytes exhibit a significant higher eIF2 phosphorylated level compared to CN-A-/- astrocytes. Our working hypothesis establishes that: CN binds to PERK when cytosolic Ca2+ is initially increased by ER stress, promoting dimerization and autophosphorylation, which leads to phosphorylation of elF2 and subsequently attenuation of protein translation. When cytosolic Ca2+ returns to resting levels, PERK phosphorylates CN, reducing its binding affinity so that the CN/PERK complex dissociates. The goal of this project is to determine the conditions by which CN binding to PERK attenuates protein translation during the ER stress response and subsequently, to determine how the interaction of CN with PERK is terminated when stress is removed. To perform this project is planed to do molecular biology experiments, pull down assays, in vitro phosphorylations and assess overall mRNA translation efficiency doing a polisome profile.
Resumo:
El Estrs de Retculo Endoplsmico (RE) es inducido por la acumulacin de protenas sin plegar en el lumen de la organela. Esto se puede observar en diversas situaciones fisio-patolgicas como durante una infeccin viral o en proceso isqumico. Adems, contribuye a la base molecular de numerosas enfermedades ya sea ndole metablico (Fibrosis qustica o Diabetes Miellitus) o neurodegenerativas como mal de Alzheimer o Parkinson (Mutat Res, 2005, 569). Para restablecer la homeostasis en la organela se activa una seal de transduccin (UPR), cuya respuesta inmediata es la atenuacin de la sntesis de protena debido a la fosforilacin de subunidad alpha del factor eucaritico de iniciacin de translacin (eIF2) va PERK. Esta es una protena de membrana de RE que detecta estrs. Bajo condiciones normales, PERK est inactiva debido a la asociacin de su dominio luminar con la chaperona BIP (Nat Cell Biol, 2000, 2: 326). Frente a una situacin de estrs, la chaperona se disocia causando desinhibicin. Recientemente, (Plos One 5: e11925) se observ, bajo condiciones de estrs, un aumento de Ca2+ citoslico y un rpido incremento de la expresin de calcineurina (CN), una fosfatasa citoslica dependiente de calcio, heterodimrica formada por una subunidad cataltica (CN-A) y una regulatoria (CN-B). Adems, CN interacciona, sin intermediarios, con el dominio citoslico de PERK favoreciendo su trans-autofosforilacin. Resultados preliminares indican que, astrocitos CNA-/- exhibieron, en condiciones basales, un mayor nmero de clulas muertas y de niveles de eIF2 fosforilado que los astrocitos CNA-/-. Hiptesis: CNA/B interacciona con PERK cuando el Ca2+ citoslico esta incrementado luego de haberse inducido Estrs de RE, lo cual promueve dimerizacin y auto-fosforilacin de la quinasa, acentundose as la fosforilacin de eIF2 e inhibicin de la sntesis de protenas. Esta activacin citoslica de PERK colaborara con la ya descrita, desinhibicin luminal llevada cabo por BIP. Cuando el Ca2+ citoslico retorna a los niveles basales, PERK fosforila a CN, reduciendo su afinidad de unin y disocindose el complejo CN/PERK. Objetivo general: Definir las condiciones por las cuales CN interacciona con PERK y regula la fosforilacin de eIF2 e inhibicin de la sntesis de protena. Objetivos especficos: I-Estudiar la diferencia de afinidades y dependencia de Ca2+, de las dos isoformas de CN ( y ) en su asociacin con PERK. Adems verificar la posible participacin de la subunidad B de CN en esta interaccin. II-Determinar si la auto-fosforilacin de PERK es diferencialmente regulada por las dos isoformas de CN. III-Discernir la relacin del estado de fosforilacin de CN con su unin a PERK. IV-Determinar efectos fisiolgicos de la interaccin de CN-PERK durante la respuesta de Estrs de RE. Para llevar a cabo este proyecto se realizarn experimentos de biologa molecular, interaccin protena-protena, ensayos de fosforilacin in vitro y un perfil de polisoma con astrocitos CNA-/- , CNA-/- y astrocitos controles. Se espera encontrar una mayor afinidad de unin a PERK de la isoforma de CN y en condiciones donde la concentracin de Ca2+ sea del orden micromolar e imite niveles del in durante un estrs. Con respecto al estado de fosforilacin de CN, debido a los resultados preliminares, donde solo se la encontr fosforilada en condiciones basales, se piensa que CN podra interactuar con mayor afinidad con PERK cuando CN se encuentre desfosforilada. Por ltimo, se espera encontrar un aumento de eIF2 fosforilado y una acentuacin de la atenuacin de la sntesis de protena como consecuencia de la mayor activacin de PERK por su asociacin con la isoforma de CN en astrocitos donde el Estrs de RE se indujo por privacin de oxigeno y glucosa. Estos experimentos permitirn avanzar en el estudio de una nueva funcin citoprotectora de CN recientemente descrita por nuestro grupo de trabajo y sus implicancias en un modelo de isquemia.
