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em Cor-Ciencia - Acuerdo de Bibliotecas Universitarias de Córdoba (ABUC), Argentina
Resumo:
Las Enfermedades de Atesoramiento de Glucgeno (EAGs) tambin llamadas Glucogenosis comprenden un grupo de entidades causadas por una deficiencia enzimtica especfica relacionada con la va de sntesis o degradacin de esta macromolcula. La heterogeneidad fenotpica de los pacientes afectados dificulta la identificacin de las diferentes variantes de EAG y por ende la correcta definicin nosolgica. En el Centro de Estudio de las Metabolopatas Congnitas, CEMECO, se fueron definiendo los diferentes tipos de Glucogenosis a travs de una estrategia multidisciplinaria que integra distintos niveles de investigacin clnica y complementaria, laboratorio metablico especializado, enzimtico, histomorfolgico y de anlisis molecular. Sin embargo, en algunos enfermos, entre los que se encuentran aquellos con defectos en el sistema de la fosforilasa heptica (EAG-VI y EAG-IX), la exacta definicin nosolgica an no est resulta. La EAG-VI se refiere a un defecto en la fosforilasa heptica, enzima codificada por el gen PYGL, mientras que la EAG-IX es causada por un defecto gentico en una de las subunidades de la fosforilasa b quinasa heptica codicadas por los genes PHKA2, PHKB y PHKG2, respectivamente. El objetivo del presente trabajo es propender a la definicin nosolgica de pacientes con defectos en el sistema de la fosforilasa mediante una estrategia de anlisis molecular investigando los genes PYGL, PHKA2, PHKB y PHKG2. Los pacientes incluidos en este estudio debern ser compatibles de padecer una EAG-VI o EAG-IX sobre la base de sntomas clnicos y hallazgos bioqumicos. La metodologa incluir la determinacin de la enzima fosforilasa b quinasa en glbulos rojos y dentro del anlisis molecular la extraccin de DNA genmico a partir de sangre entera para la amplificacin por PCR de los exones ms las uniones exon/intron de los genes PHKG2 y PYGL y la extraccin de RNA total y obtencin de cDNA para posterior amplificacin de los cDNA PHKA2 y PHKB. Todos los fragmentos amplificados sern sometidos a anlisis de secuencia de nucletidos. Resultados esperados. Este trabajo, primero en Argentina, permitir establecer las bases moleculares de los defectos del sistema de la fosforilasa heptica (EAG-VI y EAG-IX). El poder lograr este nivel de investigacin traer aparejado, una oferta integrativa en el vasto captulo de las glucogenosis hepticas, con extraordinaria significacin en la prctica asistencial para el manejo, pronstico y correspondiente asesoramiento gentico. Hepatic glycogen storage diseases (GSDs) are a group of disorders produced by a deficiency in a specific protein involved in the metabolism of glycogen causing different types of GSDs. Phenotypic heterogeneity of affected patients difficult to identify the different GSD variants and therefore the correct definition of the disease. In the Centro de Estudio de las Metabolopatas Congnitas, CEMECO, were defined the different GSD types by a protocol which included complex gradual levels of clinical, biochemical, enzymatic and morphological investigation. However, in some patients, like those one with defects in the hepatic phosphorylase system (GSD-VI and GSD-IX) the exact definition of the disease has not yet been resolved. The GSD-VI is produced by a defect in the PYGL gen that encode the liver phosphorylase, while the GSD-IX is caused by a genetic defect in one of the Phosphorylase b kinase subunits, encoded by the PHKA2, PHKB and PHKG2 genes, respectively. The aim of the present study is to define the phosphorylase system defects in argentinian patients through a molecular strategy that involve the investigation of PYGL, PHKA2, PHKB and PHKG2 genes. Patients included in the present study must be compatible with a GSD-VI or GSD-IX on the bases of clinical symptoms and biochemical findings. The phosphorylase b kinase activity will be assay on in blood red cells. The molecular study will include genomic DNA extraction for the amplification of PHKG2 and PYGL genes and the total RNA extraction for amplification of the PHKA2 and PHKB cDNA by PCR. All PCR-amplified fragments will be subjected to direct nucleotide sequencing. This work, first in Argentina, will make possible to establish the molecular basis of the defects on the hepatic phosphorylase system (GSD-VI and GSD IX). To achieve this level of research will entail advance in the study of the hepatic glycogen storage disease, with extraordinary significance in the treatment, prognosis and the genetic counselling.
