22 resultados para Células epiteliais Teses
Resumo:
La motilidad celular orientada (o mecanismo quimiotctico de orientacin), es una respuesta celular a seales moleculares de su micro-ambiente necesaria para modular la distribucin celular en sitios especficos y con elevada precisin. Nuestra hiptesis establece que la migracin orientada de células neurales es regulada por gradientes de concentracin de molculas solubles liberadas por sus regiones "blanco". Este proyecto es continuacin del estudio de la quimiotaxis de células de cresta neural (CCN) y de neuronas ventriculares (NV) inducida respectivamente por factores difusibles de la regin del futuro ganglio ciliar y del bulbo olfatorio.En el sistema de CCN, hemos caracterizado como molculas quimiotcticas a la quimioquina Stromal Cell-Derived Factor-1, y los factores trficos Stem Cell Factor y Neurotrophic Factor-3, habiendo determinado la expresin de sus respectivos receptores CXCR4, TrkC y p75 en la poblacin de CCN mesenceflicas de ambrin de pollo. Actualmente, estamos desarrollando experimentos con el Ciliary Neurotrophic Factor y factores de la familia Bone Morphogenetic Proteins. Adems de la estrategia experimental in vitro, hemos determinado en el embrin entero la expresin de las molculas quimioatractantes mediante hibridacin in situ del ARNm y la presencia de las respectivas protenas mediante inmunocitoqumica. En el sistema de NV, estamos analizando la motilidad celular en relacin con molculas liberadas por el bulbo olfatorio. En los dos sistemas biolgicos, estamos analizando elementos de la transduccin de seales y cambios en el citoesqueleto, en ambos casos asociados con la respuesta temprana en la orientacin quimiotctica de la clula. Asimismo, en ambos sistemas biolgicos, evaluamos los efectos del etanol sobre la migracin y distribucin celular, en condiciones equivalentes a las que inducen el Sindrome Fetal Alcohlico en mamferos.En base a resultados ya obtenidos en experimentos in vitro, en la presente etapa intentaremos su caracterizacin in vivo mediante el bloqueo funcional de las molculas quimiotcticas (y/o sus receptores) sobre embriones enteros, mediante silenciamiento con ARNsi (o morfolinos especficos) mediante electroporacin, y posterior determinacin de la distribucin celular mediante marcadores especficos anti-CCN (o lipoflicos de tipo DiI).Los resultados permitirn mejorar el conocimiento del mecanismo de la migracin celular orientada y aportar al diseo de recursos diagnsticos, teraputicos o de control de anomalas embrionarias o patologas tumorales por mala distribucin celular como las Neurocristopatas, o inducidas por txicos exgenos como el Sindrome Fetal Alcohlico.
Resumo:
El cncer de mama es una de las neoplasias ms frecuentes de nuestro medio. El calcitriol y sus anlogos son una alternativa nueva al uso convencional de antiestrgenos como quimioterapia. Sin embargo, los efectos hipercalcemiantes, secundarios a su aplicacin, constituyen una limitacin para su uso. Este proyecto est orientado al conocimiento de las bases moleculares antiproliferativas del uso del calcitriol en forma conjunta con drogas que deplecionan glutatin (GSH) tales como menadiona (MEN) y DL-butionina-S,R-sulfoximina (BSO). La hiptesis que se sostiene es que MEN y BSO, al disminuir el contenido de GSH, generan estrs oxidativo el cual puede potenciar el efecto antineoplsico del calcitriol, permitiendo lograr un mayor efecto antiproliferativo con dosis menores del secoesteroide, evitndose los efectos hipercalcemiantes. El objetivo general de este proyecto es dilucidar los mecanismos moleculares de apoptosis desencadenados por calcitriol (D) y/o drogas que deplecionan GSH (MEN o BSO) sobre las células de cncer de mama MCF-7 en cultivo. Para ello, se tratarn células MCF-7 con concentraciones variables de D (en ausencia y presencia de MEN BSO) a diferentes tiempos. Se medir proliferacin celular mediante las tcnicas de incorpororacin de bromodeoxiuridina y de violeta de cristal. Se analizar el ciclo celular por medio de tcnicas de citometra de flujo. Se determinar la participacin tanto de la va intrnseca como de la va extrnseca de apoptosis. El contenido de GSH y la medicin de las actividades del sistema antioxidante se llevar a cabo con tcnicas espectrofotomtricas. La expresin proteica de diversas caspasas se analizar por Western blots y la expresin gnica por transcriptasa reversa-reaccin en cadena de la polimerasa. Adems, se desarrollarn artificialmente tumores de mama en ratas y se aplicar el tratamiento combinado midindose el efecto antitumoral mediante anlisis histolgicos. Se espera que el tratamiento combinado inhiba la proliferacin de las células MCF-7, a travs de incremento en la produccin de especies reactivas derivadas del oxgeno involucrando la participacin de las principales vas apoptticas, extrnseca e intrnseca. En consecuencia, habra desrregulacin de la funcin mitocondrial. Las defensas antioxidantes podran estar alteradas. De ocurrir as, el tamao de los tumores de mama desarrollados experimentalmente y tratados con el tratamiento combinado, estara disminuido. La importancia de este estudio consiste en la exploracin de una nueva estrategia teraputica para el tratamiento de cncer de mama.
Resumo:
El presente proyecto est dirigido a estudiar los mecanismos celulares y moleculares involucrados en la regulacin de la poblacin de lactotropas, como resultado del balance entre los procesos de proliferacin y muerte celular correlacionados con la secrecin de prolactina. Dentro de las vas de transduccin de seales involucradas se determinar la activacin de las diferentes isoformas de PKC utilizando inhibidores especficos y la participacin de la va MAPK-ERK1/2 en cultivos primarios adenohipofisarios y en la lnea tumoral GH3B6. Adems, se completar la caracterizacin morfolgica y bioqumica de los diferentes procesos de muerte celular inducidos por bromocriptina en modelos de regresin de prolactinomas. Se incorporan al presente proyecto nuevas lneas de investigacin dirigidas a estudiar la participacin de receptores estrognicos nucleares y de membrana sobre la actividad secretoria y proliferativa de células lactotropas. Se fija como objetivo la identificacin de los mismos y su translocacin intracelular en respuesta a estmulos especficos. Estas investigaciones se realizarn en cultivo primario de adenohipfisis, a nivel de microscopa electrnica y confocal. La participacin de las isoformas alfa y beta de receptores estrognicos intracelulares y de membrana en los efectos del estradiol sobre la proliferacin y secrecin de PRL se determinar mediante el uso de agonistas y antagonistas especficos en cultivo primario de adenohipfisis y de la lnea GH3B6. Un tema de actualidad es el estudio de vas de sealizacin involucradas en las acciones del estrgeno en interaccin con neuropptidos o factores de crecimiento, estableciendo la interaccin entre los receptores de membrana, adems de posibles "crosstalk" entre diferentes rutas de transduccin de seales. Como aporte a este tpico se propone estudiar los efectos genmicos y no genmicos del estradiol en interaccin con TRH o FGF-2, modulando la actividad secretoria y proliferativa de las células lactotropas. Los datos obtenidos podrn contribuir al conocimiento de nuevas estrategias utilizadas para disminuir el crecimiento de tumores, inhibiendo molculas claves como receptores de estrgenos, factores de crecimiento y algunas involucradas en las vas de sealizacin.
Resumo:
IDENTIFICACIN ZEB1 (Zinc Finger E-box Binding Homeobox) es un factor de transcripcin funcionalmente asociado con la diferenciacin de células como miocitos, neuronas, células de sostn y linfocitos T, adems de estar involucrado en la Transicin Epitelial-Mesenquimatosa (EMT) de los tumores slidos epiteliales. An no se ha revelado en profundidad la participacin de ZEB1 en los procesos de proliferacin y diferenciacin en los que participa. Estamos interesados en los mecanismos de regulacin de ZEB1 y los factores que intervienen en los procesos de diferenciacin y transformacin celular. HIPTESIS 1. Las vas de sealamiento regulan el estado de fosforilacin y la funcin de ZEB1 en la clula normal, el cual se desregulara en la clula neoplsica llevando a cambios en la funcin normal de ZEB1 y consecuentemente a metstasis. 2. IGF-1 es la seal que, en asociacin con el supresor de tumores CCN6, juega un rol causal en la regulacin de ZEB1 y esto a su vez en la metstasis del cncer de mama. OBJETIVO GENERAL: establecer el rol funcional de ZEB1, su interrelacin con otros factores y su regulacin en los procesos de diferenciacin y transformacin celular. OBJETIVOS ESPECIFICOS (incluye Materiales y Mtodos) 1. Estudiar la participacin de vas de sealizacin sobre la funcin biolgica de ZEB1 en células normales y neoplsicas. Analizaremos la participacin de seales intracelulares en la fosforilacin de ZEB1 por experimentos de ganancia/prdida de funcin de la va (por uso de inhibidores farmacologicos, mutantes silenciadoras y siRNAs), lo cual sera evaluado en EMSAs, ChIP, transfecciones, inmunofluoresc, etc. 2. Estudiar el rol de IGF-1 y CCN6 sobre la expresin y el estado de fosforilacin de ZEB1 en tumores mamarios benignos, no invasivos e invasivos y metastatizantes. A) Se estudiar la expresin y localizacin subcelular de ZEB1 en lneas celulares de cncer mamario y en xenotransplantes de ratn con variada expresin de CCN6. B) Investigar la relevancia de la fosforilacin de ZEB1 mediada por IGF-1 en el EMT por experimentos con ganancia/prdida de funcin. RESULTADOS ESPERADOS Esperamos poder delinear la/s va/s de sealizacin intracelular que fosforilan ZEB1 y as conocer sobre la regulacin del mismo. Podremos establecer algunas bases para entender la biologa bsica del cncer de mama e identificar blancos teraputicos. IMPORTANCIA Un amplio conocimiento de los factores de transcripcin y sus vas de sealamiento es necesario para el desarrollo tanto de pruebas diagnsticas como para la identificacin de nuevos blancos teraputicos para neoplasias. De modo que resulta de gran importancia clnica determinar el rol de ZEB1, sus protenas y vas reguladoras en el proceso de oncognesis. El desarrollo del proyecto prev la formacin de dos tesistas. Se continuaran colaboraciones con dos grupos extranjeros y se iniciara una tercera. ZEB1 (Zinc Finger E-box Binding Homeobox) is a transcription factor involved in cell differentiation and Epithelial Mesenchymal Transition (EMT) of epithelial tumors. We are interested in the study of mechanisms of regulation (pre and post transcriptional). S.A.1. To investigate post translational mechanisms of ZEB1 regulation in normal and cancer cells. We will analyze the involvement of intracellular signals in phosphorylation of ZEB1 by gain- and lost-of-function experiments. S.A.2. A) To determine the role of IGF-1 signaling and CCN6 in regulating the expression of hypo- and hyperphosphorylated forms of ZEB1 in benign and malignant breast cell lines and in xenograft mouse models by overexpressing and inhibiting CCN6 in breast cancer cells. B) To investigate the relevance of CCN6-mediated ZEB1 phosphorylation to EMT, breast cancer invasion and metastasis. The role of CCN6 on ZEB1 phosphorylation and regulation of E-cadherin, induction of EMT, invasion and metastasis of breast cells will be investigated using gain- and loss-of-function experiments.
Resumo:
Antecedentes: En nuestro laboratorio hemos demostrado que antgenos (Ags) de Fasciola hepatica inducen en células dendrticas murinas (CD), diferentes propiedades tolerognicas como la incapacidad por si mismos de inducir la maduracin de las células, la resistencia a la maduracin por ligandos de TLR, el incremento en la produccin de IDO y tambin la capacidad de esta estas células de dirigir la respuesta inmune hacia un perfil Th2 y T reg. Por otra parte ha sido bien documentado que CD con caractersticas tolerognicas, ya sea inmaduras o semimaduras, son tiles para reducir respuestas inflamatorias excesivas tales como las que ocurren en enfermedades autoinmunes. Adems hemos demostrado que CD tratadas con Ags del parsito en conjunto con un ligando Toll (CpG-ODN) producen altos niveles de citoquinas anti-inflamatorias (IL-10 y TGF-) bajos de citoquinas proinflamatorias (TNF, IL-6, IL-12). Hiptesis: El fenotipo semimaduro alcanzado en las CDpodra ser utilizado para reducir la inflamacin en un modelo de enfermedad autoinmune en donde existe una exacerbada respuesta Th1 y Th17, ya que la produccin elevada de IL-10 y TGF- podra inhibir o controlar estas respuestas de manera directa o a travs de la induccin de células T regulatorias. Objetivos: En este proyecto nosotros proponemos la inmunizacin de animales susceptibles (ratones DBA1/j), al desarrollo de artritis inducida por colgeno (AIC) con CD tratadas con Ags de F. hepatica en conjunto con CpG-ODN para reducir los sntomas clnicos de la enfermedad. Materiales a utilizar: En nuestro laboratorio hemos desarrollado un modelo de artritis inducida por colgeno (AIC) mediante dos inmunizaciones de ratones DBA1/j con colgeno tipo II bovino y adyuvante de Freund. El modelo permiti establecer un ndice clnico mediante la hinchazn en las patas de los animales. Doce das posteriores a la primera inmunizacin los animales sern inyectados con CD tratadas con: 1. PBS, 2.Extracto total de F.hepatica (TE) + CII, 3. CpG + CII, 4. TE+CpG+CII Se realizar la observacin macroscpica diaria, a partir de los 7 das de la 2a inmunizacin Luego del sacrificio las articulaciones de las patas se prepararn para realizar un anlisis histolgico. Se detectar en suero los niveles de anticuerpos IgG1 (perfil Th2) y de IgG2a (perfil Th1) mediante la tcnica de ELISA. Se detectar tambin el perfil de citoquinas en los ndulos drenantes por la tcnica de ELISA y adicionalmente la poblacines celulares de células T regulatorias (Treg) CD4+CD25+Foxp3 o células Tr1. Resultados esperados: Pensamos que el tratamiento de los animales que desarrollan AIC con CD semimaduras (por el tratamiento con TE y CpG), sern capaces de migrar a los rganos linfaticos y secretar TGF-be(inductora de células T reg), IL-10 (inductoras de células Tr1), IDO inhibitoria de la respuesta de Li T y promotor de células T reg, tambin podra generarse una respuesta Th2 (por la presencia de antgenos del parsito), y estas respuestas aisladas o en forma sinrgica podran inhibir las respuestas de tipo Th17 y Th1 asociadas a la patologa en esta enfermedad. Importancia del proyecto: En el desarrollo de la artritis existe un aumento de la inmunidad mediada por células, asi como de la respuesta inmune humoral hacia componentes de la matriz del cartlago. El tratamiento convencional de la artritis recae en general en el uso de inmunosupresores no-especficos, los cuales poseen una variedad de efectos adversos y la inhibicin de la respuesta inflamatoria no es especfica. En este proyecto proponemos el uso de CD tratadas con antgenos del helminto F. hepatica y CpG ligando Tol que capacita a estas células para generar una respuesta adaptativa de tipo regulatoria, til en la inhibicin de las respuestas inflamatorias como la que ocurre durante la progresin de artritis reumatoidea en un modelo experimental en ratones. We have shown that F. hepatica Ags-treated dendritic cells (DC) together with a TLRl ligand (CpG-ODN) produce high levels of anti-inflammatory cytokines (IL-10 and TGF-Beta) and low of proinflammatory cytokines (TNF, IL-6, IL -12). Hypothesis: The semimature phenotype achieved by DC, could be used to reduce inflammation in a model of autoimmune disease. The high production of IL-10 and TGF-Beta by these cells could directly or through the induction of T reg cells inhibit the inflammatory response. Objective: In this project we propose the immunization of DBA1 / j mice, susceptible to the development of collagen-induced arthritis (CIA) with F. hepatica-treated DC in conjunction with CpG-ODN to reduce clinical signs of disease. Materials: In our laboratory, we developed the CIA model by two immunizations of DBA1 / j mice with bovine type II collagen and Freund's adjuvant. The model allowed to stablish a clinical index by swelling in the legs of animals. Twelve days after the first immunization the animals are injected with DC treated with: 1. PBS 2. F.hepatica Extract (TE) + CII, 3. CpG + CII, 4. TE + CpG + CII Macroscopic observation will take place daily from 7 days of the 2nd immunization. After sacrifice the joints of the legs will be prepared for histological analysis. Serum levels of IgG1 antibodies (Th2 profile) and IgG2a (Th1 profile) will be detected by ELISA. It will also detected the cytokine profile in draining lymph nodes by ELISA and additionally the cell populations of regulatory T cells (Treg) CD4 + CD25 + Foxp3 or Tr1 cells. Expected results: We believe that the treatment of animals that had developed CIA with DC will be able to migrate to lymphatic organs and secrete TGF-B (T reg cell-inducing), IL-10 (inducing Tr1 cells), IDO (inhibitory of T cells and inducing of T reg cells) could alone or in synergy inhibit Th17-type responses and Th1 associated with the pathology in this disease.
Resumo:
El presente proyecto tiene como objetivo estudiar, a nivel celular y molecular, los mecanismos inmuno-endcrinos que participan en la proliferacin de células lactotropas normales y tumorales frente a procesos inflamatorios inducidos experimentalmente. Una particular atencin se pondr al evaluar la contribucin de IL-6 como citoquina intrahipofisaria durante el desarrollo tumoral y su rol como seal paracrina/autocrina en la senescencia hipofisaria. Debido a que agentes inflamatorios y anti-inflamatorios pueden inducir alteraciones en el crecimiento y la funcin hipofisaria, no se descartara que, en el curso de una inflamacin, como la inducida por el lipopolisacrido bacteriano LPS, puedan ocurrir modificaciones en el ndice proliferativo de las células lactotropas y/o en la secrecin de su producto hormonal, la prolactina. Dado el auge en las investigaciones referidas al campo de la modulacin inmuno-endcrina, es que planteamos investigar la participacin de TLR4, componente crucial del complejo proteico que inicia la seal LPS, en hipfisis normales y tumorales inducidas por estrgeno as como tambin en la lnea celular somatolactotrpica GH3B6. Dentro de las vas de transduccin de seales involucradas se determinar la participacin de MAPK-ERK1/2 y de PI3K asi como la contribucin de NF-kB en la regulacin del crecimiento celular inducido por IL-6/LPS mediante el uso de inhibidores especficos. La microscopa electrnica y confocal, resultarn de fundamental importancia para valorar los procesos de translocacin nuclear de NF-kB como as tambin para definir la localizacin ultraestructural de los mediadores mencionados. Adems, se valorar el mecanismo de senescencia celular hipofisaria mediante parmetros morfolgicos, bioqumicos y ultraestructurales durante el desarrollo de prolactinomas inducidos experimentalmente. Finalmente dilucidar las posibles vas de transduccin de seales que se desencadenan frente a estmulos inflamatorios/proliferativos podra explicar algunos aspectos moleculares sobre la funcin de control del ciclo celular y las limitaciones de crecimiento en adenomas hipofisarios que subyacen en la falta de progresin de estos tumores a la malignidad. The aim of the present project is to study the immuno-endocrine mechanisms involved in the proliferation of normal and tumoral lactotrophs experimentally induced by inflammatory factors. Also, the contribution of IL-6 as a paracrine / autocrine signal in the pituitary senescence will be assessed along tumor development induced by estrogen treatment. Considering that both, inflammatory and anti-inflammatory agents can modify the pituitary function, it is possible that in the course of inflammation, as induced by bacterial lipopolysaccharide LPS, some alteration may occur in the proliferative index of lactotrophs and / or in the PRL secretion. Our main objective is to investigate the cellular and molecular mechanisms involved by the activation of TLR4, a crucial component of the protein complex initiated by LPS, in normal and pathological pituitaries induced by estrogen as well as in the GH3B6 cell line. The participation of MAPK-ERK1 / 2 and PI3K signaling pathway and the contribution of NF-kB in the proliferative responses triggered by IL-6/LPS will be analyzed by using specific inhibitors. Confocal microscopy analysis is essential to assess the process of nuclear translocation of NF-kB as well as the use of electron microscopy to define the ultrastructural localization of the above mentioned mediators. In addition, the mechanisms of pituitary cell senescence will be evaluated through morphological, biochemical and ultrastructural approaches during the development of experimental prolactinomas. Finally, the elucidation of possible signal transduction pathways which are triggered by inflammatory / proliferative stimuli, would explain some molecular aspects of cell cycle control and limitations in pituitary tumor growth that underlie the lack of progress in these pituitary tumors to malignancy.
Resumo:
La infeccin de mamferos con el T. cruzi resulta en diferentes alteraciones inmunolgicas que permiten la persistencia crnica del parsito y destruccin inflamatoria progresiva del tejido cardiaco, nervioso y heptico. Los mecanismos responsables de la patologa de la enfermedad de Chagas han sido materia de intensa investigacin habindose propuesto que el dao producido en esta enfermedad puede ser consecuencia de la respuesta inflamatoria del individuo infectado y/o de una accin directa del parsito sobre los tejidos del hospedador. El propsito del presente proyecto es estudiar comparativamente, en dos cepas de ratones con diferente susceptibilidad a la infeccin y desarrollo de patologa, la participacin y los mecanismos efectores de las células supresoras mieloides (CSM) y las celulas T regulatorias inducidas por la infeccin experimental con Trypanosoma cruzi en el control de la infeccin con este protozoario y en el desarrollo de la patologa heptica siendo los objetivos especificos desarrolar: - Investigar la generacin y/o reclutamiento de células de CSM en bazo e hgado de ratones infectados con Trypanosoma cruzi y su contribucin a la desigual susceptibilidad a la infeccin y respuesta inmune desarrollada en las cepas de ratones BALB/c y C57BL/6; - Investigar la capacidad de las CSM inducidas por la infeccin con T. cruzi en bazo e hgado de ratones de ambas cepas para suprimir la respuesta de células T in vitro e indagar sobre los mecanismos de supresin utilizados; - Investigar la generacin y/o reclutamiento de células Treg durante la infeccin experimental con Trypanosoma cruzi, su participacin en la desigual susceptibilidad a la infeccin y respuesta inmune desarrollada en ambas cepas de ratones y los mecanismos de supresin utilizados. - Analizar en tejido heptico o leucocitos infiltrantes la presencia de COX2, PGE2, MMP2 y 9, IL1b, IL6, IDO, IL10 y GM-CSF capaces de inducir la expansin de las CSM; - Dilucidar si la administracin del ligando para TLR2 (Pam3CyS) previo a la infeccin de ratones C57BL/6 (en los cuales se detecta un menor nmero de CSM) es capaz de modular la respuesta inflamatoria y el dao heptico a travs de la induccin de CSM y/o T reg en hgado y bazo. La comprension de los eventos celulares y moleculares que regulan la produccin de citoquinas pro- y anti-inflamatorias y otros mediadores, as como el papel de los receptores de la inmunidad innata durante la infeccin con T. cruzi contribuir a responder interrogantes que son claves para el diseo de nuevas estrategias de intervencin inmune tendientes a preservar los mecanismos de defensa del husped. Two nonexclusive mechanisms have been proposed to explain the Chagass disease pathology: 1) The pathology of the disease seems to be consequence of the inflammatory response triggered for the parasite; or 2) The damage is produced by the parasite direct effect. Recently, we reported that TLR2, TLR4 and TLR9 (innate immune response receptors) are differentially modulated in injured livers from BALB/c (lesser liver pathology) and C57BL/6 (elevated liver pathology) mice during Trypanosoma cruzi infection. The aim of our proposal is the study of role of Myeloid-Derived Suppressor Cells (MDSC) and regulatory T cells in the control of T. cruzi infection and the infection-associated pathology. Our specific aims are: -To study the induction or recruitment of MDSC in splenn and liver of BALB/c and C57BL/6 mice and their relationship with the differential susceptibility and immune response observed in these both mice strains; - To determine the ability and the mechanisms used by the T. cruzi-induced MDSC to suppress the T cell proliferative response; -To study the induction or recruitment of Treg in liver of BALB/c and C57BL/6 mice and their relationship with the differential susceptibility and immune response observed in these both mice strains; -To analize in liver tissue or tissue infiltrating lymphocytes the activation of COX2, PGE2, MMP2 y 9, IL1b, IL6, IDO, IL10 y GM-CSF known to promote the development of MDSC; -To determine whether the treatment with Pam3CyS (TLR2 ligand) is able to modulate the liver inflammatory respose and damage througth the induction of MDSC or Treg.
