8 resultados para E3
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Dissertation presented to obtain the Ph.D degree in Molecular Biology
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RESUMO: O vrus chikungunya (CHIKV) um vrus de RNA, com invlucro, da famlia Togaviridae, transmitido por mosquitos Aedes spp. Distribudo por largas regies de frica e sia, causa grandes epidemias de artrite grave. A semelhana de sintomas com outras doenas como a dengue e a malria e a persistncia de IgM especficas, dificultam o diagnstico da infeo por CHIKV. A deteo no sangue de E3, uma glicoprotena viral secretada, a incluir num ensaio imunoenzimtico poder melhorar o diagnstico nos pases onde as tcnicas de biologia molecular so de difcil acesso. Para testar a utilidade de E3 num ensaio de diagnstico, esta dever ser expressa em quantidade, purificada e usada para produo de anticorpos especficos. Para expressar E3 numa forma solvel, suscetvel de ser purificada num nico passo cromatogrfico sem proteases, recorreu-se estratgia da fuso com o domnio de ligao quitina (CBD)-intena (IMPACT System, NEB). A sequncia codificadora de E3 foi amplificada a partir de RNA viral, clonada em pTYB21 e expressa em E. coli como uma protena de fuso insolvel de 64 kDa. A expresso a 12C induzida por IPTG 0,1 mM aumentou a solubilidade de CBD-intena-E3. A aplicao de lisados celulares em colunas de quitina originou a reteno de CBD-intena-E3 na matriz. Porm, a autoclivagem da intena na coluna, induzida com reagentes tiol, foi pouco eficiente e mesmo a protena E3 separada no eluiu da coluna. E3 foi ainda expressa em E. coli com uma cauda de seis histidinas (E3[His]6) por clonagem no vetor pET28b(+). Lisados celulares aplicados em colunas de nquel permitiram a eluio de uma protena de 9 kDa, compatvel com a massa molecular estimada para E3[His]6, ainda que com outros contaminantes proteicos. A identidade da protena de 9 kDa ser confirmada pela induo de anticorpos com esta preparao e reatividade daqueles com clulas infetadas com CHIKV.----------------ABSTRACT: Chikungunya virus (CHIKV) is an enveloped, positive strand RNA virus belonging to the family Togaviridae. Transmitted by Aedes spp mosquitoes, CHIKV causes large epidemics of severe arthritogenic disease in Africa and Asia and represents a serious threat in countries where vectors are present. Symptoms similarity with other diseases, e.g. dengue and malaria, along with CHIKV IgM persistence turns accurate CHIKV diagnosis a difficult task in low-income countries. Detection of E3, a small secreted viral glycoprotein, to be included in an immunoenzymatic test was envisaged as a possible improvement in CHIKV diagnosis. To test the diagnostic value of E3, recombinant E3 should be expressed and purified to generate antibodies. In order to express CHIKV E3 in a soluble form amenable to purification by a single step affinity chromatography, the chitin binding domain (CBD)-intein fusion strategy without proteases (IMPACT System, NEB) was employed. The E3 coding sequence was amplified from viral RNA, cloned in pTYB21 and expressed in E. coli ER2566 as an insoluble 64 kDa CBD-intein-E3 fusion protein. Solubility was partially achieved by lowering the expression temperature to 12C and the inducer (IPTG) concentration to 0.1 mM. Clarified cell lysate loaded onto a chitin column allowed ligation of the fusion protein but the intein-mediated cleavage efficiency was low and E3 failed to elute from the column as demonstrated by SDS-PAGE. E3 was further expressed with a six histidine tag, E3[His]6, employing the pET System (Novagen). E3[His]6 was expressed in E. coli Rosetta (30C, 0.4 mM IPTG) as a 9 kDa protein. Soluble cell extracts in 20-40 mM imidazole, applied onto a nickel column and eluted with 500 mM imidazole yielded a protein preparation enriched in the 9kDa protein. The 9 kDa will be used as antigen to generate antibodies that upon reaction with CHIKV infected cells will confirm its identity.
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Dissertao apresentada para obteno do Grau de Doutor em Biologia Especialidade Biologia Molecular pela Universidade Nova de Lisboa, Faculdade de Cincias e Tecnologia. A presente dissertao foi preparada no Departamento de Bacteriologia do Laboratrio Nacional de Investigao Veterinria
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Dissertao para obteno do Grau de Mestre em Gentica Molecular e Biomedicina
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Na pea BN Esp E3/39-23 (o prefixo remete para o esplio de Fernando Pessoa na Biblioteca Nacional de Lisboa; deixarei de o usar em todas as referncias s cotas), em texto que pe problemas fixao de que agora no curaremos, datado, ou ao menos datvel, de 1912, Pessoa escreveu assim: Sombr<a>/o a tinta preta\. Explico, para o que descodificarei os smbolos usados na Edio Crtica de Femando Pessoa: depois de uma primeira campanha, em que escreveu Sombra, no caso a tinta vermelha. Pessoa, agora a tinta preta, sobreps ao a um o. (Admito, mas no interessa isso agora, que a operao fosse induzida por um acrescento, esse a lpis roxo, havido num verso anterior que estava lacunar.) A sobreposio no parece ser mera melhoria de caligrafia, que redefinisse o desenho de letra mal sada primeira, um o falhado em a que fosse preciso vincar de novo no devido o, ou, por outras palavras, no se trata de retoque de graftica, mas mudana de ordem grafmica. sem dvida uma sombra que o poeta quis transformar em sotiho (como o verso todo Com os olhos de [...] fito o Mundo, esto afastadas as formas, em outra situao alegveis, sonha, para a primeira campanha, ou, para a segunda campanha, sombra).
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Dissertao para obteno do Grau de Doutor em Ambiente
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Os consumidores exercem influncia no comportamento do sector elctrico pela variao da procura de electricidade rede. A teoria econmica e as estatsticas dos ltimos anos sugerem que os consumidores reagem aos preos da electricidade, seja atravs dos usos que fazem da electricidade e na seleco de energias alternativas, seja pela tomada de deciso de investimento em eficincia energtica e em autoconsumo. Indirectamente, a procura de electricidade rede dos consumidores afecta o preo da venda da electricidade atravs das actualizaes da tarifa para o ano seguinte. Apesar disso, raramente as polticas energticas ou as previses da procura so informadas com modelos de desempenho econmico de procura dinmica. Os objectivos da tese so desenvolver conceptualmente um modelo de simulao do sistema elctrico considerando explicitamente a reaco e deciso dos consumidores face ao preo da electricidade; desenvolver informaticamente um Sistema de Suporte Deciso (SSD) sobre o modelo de simulao e explor-lo com o caso estudo do sistema elctrico portugus. O modelo tem uma abordagem de simulao dinmica. Conceptualmente, o modelo de simulao e o SSD so desenhados para permitir dois modos de aplicao: a) um modo interactivo, equivalente a um jogo entre os vrios agentes (Estado como legislador/regulador; sector da produo, transporte e distribuio; e sector do consumo final com enfoque na indstria, famlias e servios) ou b) um modo parametrizado assumindo comportamentos prdefinidos e tomadas de deciso de certos agentes para ensaiar opes de um utilizador. No mbito da tese o modelo foi explorado apenas no modo parametrizado para ensaiar opes de polticas pblicas no sector energtico, em especial sistemas de incentivos, pr-definindo comportamentos dos agentes com tomada de deciso dos produtores e consumidores. Os cenrios testados para o caso de estudo portugus sugerem que devem existir mais incentivos ao investimento em eficincia energtica e menos subsidiao de preo de venda da electricidade: em todos os domnios, a reduo do desperdcio energtico melhor do que existirem preos artificialmente baixos. este tipo de opes de poltica que melhor cumprem objectivos de uso racional de energia, proteco ambiental e reduo de custos globais para os consumidores e para os contribuintes. A anlise dos cenrios sugere tambm que existe um potencial aliciante de poupana energtica no sector do consumo final, que est longe de ser aproveitado. Verifica-se tambm que a tomada de deciso em autoconsumo reduz os investimentos em eficincia energtica, obtendo-se menor reduo do desperdcio energtico. O papel dos consumidores importante. Um preo claro pode ajudar a consumir, a preservar e a investir.
