Sistemas bacterianos competentes em biotransformação humana para estudos mecanísticos e toxicológicos

Devido às limitações de sistemas in vitro atuais, existe uma necessidade de modelos celulares especializados em mimetizar propriamente a biotransformação humana. Além da aplicação destes novos sistemas na avaliação e estudo de toxicidade químicos, estes sistemas permitem o uso em estudos funcionais e mecanísticos de enzimas de biotransformação humanas. Nesta dissertação é abordado o desenvolvimento de modelos celulares competentes em enzimas de biotransformação humanas, aplicado na avaliação de um dos principais metabolitos do fármaco antirretroviral Nevirapina (NVP), como também num estudo mecanístico do importante fator proteico na biotransformação humana, a NADPH citocromo P450 oxido-redutase (CPR). NVP é frequentemente usado no tratamento de HIV-1 e tem sido associado a efeitos adversos como lesões hepáticas e erupções cutâneas severas. Evidências apontam ao envolvimento de citocromos P450 e subsequente sulfonação por sulfotransferases na formação de metabolitos reativos. Contudo, testes padrão in vitro não demonstraram evidências de mutagenicidade ou clastogenicidade. Neste estudo, utilizando uma estirpe de S. typhimurium, competente na expressão controlável e estável de sulfotransferase 1A1 (SULT1A1) humana, demonstrou-se mutagenicidade de 12-hidroxi-NVP dependente de SULT1A1. A enzima CPR está envolvida nas principais reações de biotransformação de xenobióticos, além de interagir com outras proteínas importantes com funções celulares importantes. O mecanismo pelo qual CPR doa eletrões aos seus parceiros redox não é completamente claro. Foi desenvolvido um sistema de E. coli para ser aplicado em estudos mecanísticos sobre a doação de eletrões de CPR. Este novo sistema co expressa CPR e hemeoxigenase I (HO-1) humanas, que depende importantemente de CPR, sendo sustentada por sete eletrões doados por cada ciclo enzimático. As condições de cultura foram otimizadas para níveis de expressão CPR/HO-1 aproximados à estequiometria verificada em humanos. Este modelo células foi aplicado no desenvolvimento de um ensaio de cinética de HO-1, focando-se em vários parâmetros para a sua otimização.

Proposal of a methodology for the design of the installation of turrets on aircrafts – the approach on the aerodynamic influences

The present work has its origin on the necessity of enabling a design certified company, or DOA (Design Organization Approval), to perform a modification; this modification is the installation of EO/IR (Electro-optical infrared) sensors on aircrafts. The subject of interest in this dissertation lies on the aerodynamic impact of the modification on the aircraft. The primary purpose of the present thesis is the creation of a methodology that regards the design stage of the modification. This methodology serves as guidance to the DOA design team that is assigned to the design of the modification. The methodology includes a recommendation to the certification of the modification; it contains a method intended to decide the location of the installation of the sensors on the aircraft; it also comprises of a design structure specifically adapted to the modification in study. Regarding the aerodynamic impact, it is studied the aerodynamic analysis’ tools, which allows one to relate the different stages of design to the most suited tools to each stage. A case study is performed with the purpose of not only validating the methodology which was created but also to giving a first approach to the preliminary design of the modification. As example, there are used the Lockheed Martin C-130 aircraft and the FLIR Star Safire III sensor.