Desenvolvimento de novas ferramentas anal��ticas para a monitoriza����o da actividade da Paraoxonase 1 em amostras de plasma humano

Segundo a Organiza����o Mundial da Sa��de (OMS), as doen��as cardiovasculares (DCV) s��o a principal causa de morte nos pa��ses desenvolvidos. H�� uma necessidade urgente de m��todos eficazes para a detec����o precoce de doen��as cardiovasculares, devido �� falta de factores de risco convencionais. Os n��veis elevados de homociste��na (Hcy) no sangue, homocisteinemia, s��o um factor de risco independente bem estabelecido para DCV. De acordo com alguns autores, a convers��o metab��lica de Hcy no metabolito t��xico Hcy-Tl e subsequente N-homocisteinila����o de prote��nas induz a agrega����o e a forma����o de amiloide, contribuindo assim para a altera����es pr��aterog��nicas no sistema cardiovascular. A enzima associada �� lipoprote��na de alta densidade (HDL), paraoxonase 1 (PON1), �� capaz de hidrolisar o metabolito t��xico Hcy-Tl de volta a Hcy no soro humano, como observado em estudos recentes que indicam o papel de patog��nese em DCV da hPON1. As paraoxonases de soro (PON1, PON2 e PON3) s��o hidrolases dependentes de c��lcio, que pertencem a uma fam��lia de enzimas que exibem propriedades antioxidantes e anti-inflamat��rias. Foram identificadas tr��s actividades catal��ticas principais para PON1: (i) actividade paraoxonase, que corresponde �� convers��o hidrol��tica de paraoxon em p-nitrofenol e a dietil fosfato, (ii) a actividade arilesterase que promove a hidr��lise de ��steres arom��ticos, e a (iii) actividade de lactonase, que catalisa a hidr��lise de Hcy a Hcy-Tl, sendo considerada a actividade principal da PON1. V��rios estudos t��m relacionado estas actividades enzim��ticas a diversas patologias, o que sugere a sua potencial utilidade no diagn��stico cl��nico. Neste trabalho pretende-se desenvolver um novo m��todo electroqu��mico para a detec����o f��cil do substrato e produto resultantes da hidr��lise enzim��tica de paraoxon pela hPON1. Utilizando uma c��lula electroqu��mica constitu��da por um el��ctrodo de refer��ncia Ag /AgCl., um contra-el��ctrodo de Pt e um electrodo de trabalho de carbono v��treo, o paraoxon e p-nitrofenol foram detectados simultaneamente por voltametria de onda quadrada, numa janela de potencial de [-0,3;-1,2] V. Os resultados dos ensaios com a enzima testada a pH 7,6 e 37��C, na presen��a de paraoxon e utilizando plasma humano como uma fonte de PON1 ser��o discutidos. Usando a mesma composi����o de c��lula electroqu��mica, Hcy e Hcy-Tl foram estudados utilizando diferentes interfaces e tipos de tratamento para testar a melhor maneira poss��vel de detec����o das duas esp��cies na mesma experi��ncia electroqu��mica.

Modellus: Learning Physics with Mathematical Modelling

Tese de doutoramento em Ci��ncias da Educa����o, ��rea de Teoria Curricular e Ensino das Ci��ncias

Production and decay of Sulphur excited species in a ECRIS plasma

The most important processes for the creation of S12+ to S14+ ions excited states from the ground configurations of S9+ to S14+ ions in an electron cyclotron resonance ion source, leading to the emission of K X-ray lines, are studied. Theoretical values for inner-shell excitation and ionization cross sections, including double KL and triple KLL ionization, transition probabilities and energies for the deexcitation processes, are calculated in the framework of the multi-configuration Dirac-Fock method. With reasonable assumptions about the electron energy distribution, a theoretical K$\alpha$ X-ray spectrum is obtained, which is compared to recent experimental data.

Cavin 1 and cavin 2 roles on adipocyte cell function

Disserta����o para obten����o do Grau de Mestre em Gen��tica Molecular e Biomedicina

Diversidade gen��tica e resist��ncia natural ao Maraviroc em estirpes do v��rus da imunodefici��ncia humana Tipo 1 (HIV-1) em circula����o em utilizadores de drogas por via endovenosa na Grande Lisboa

RESUMO: O maraviroc (MVC) �� o ��nico anti-retroviral antagonista do co-receptor CCR5 licenciado e interage com as ansas transmembranares de CCR5, induzindo uma altera����o da sua conforma����o e impedindo a interac����o com gp120. O MVC �� activo apenas contra estirpes R5 de HIV-1, sendo utilizado em terapia de recurso. Neste trabalho, foi estudada a diversidade gen��tica da regi��o C2V3C3 do gene env de estirpes de HIV-1 de oxicodependentes por via endovenosa da Grande Lisboa, pesquisando-se tamb��m a presen��a de polimorfismos gen��ticos naturais. Foram utilizadas 52 amostras de plasma e para 35 destas foi amplificado por RT-nested PCR um produto de 565 pb. A an��lise filogen��tica revelou a seguinte distribui����o de gen��tipos: 23 B (incluindo, provavelmente, 2 CRF14_BG), 8 A, 3 G e 1 F1. Ap��s tradu����o, e por compara����o com a sequ��ncia consenso B, verificou-se uma elevada frequ��ncia de polimorfismos gen��ticos, sendo encontradas algumas ���assinaturas de amino��cidos��� relativas aos subtipos n��o-B. Realizou-se ainda uma pesquisa de locais de N-glicosila����o e a previs��o da utiliza����o de co-receptores (abordagem genot��pica), com recurso ��s regras 11/25 e da carga l��quida da ansa V3 e aos programas PSSM e geno2pheno[coreceptor]. Observou-se uma conserva����o gen��rica do n��mero de locais de N-glicosila����o e foram identificadas 5 sequ��ncias com tropismo X4 ou duplo. Por fim, com base na literatura, realizou-se uma pesquisa de polimorfismos gen��ticos associados a resist��ncia ao MVC presentes na ansa V3. Foi observado um n��mero elevado destas muta����es. A presen��a dos padr��es 11S+26V e 20F+25D+26V, num total de 3 sequ��ncias, �� relevante, visto estes estarem inequivocamente associados �� resist��ncia in vivo ao MVC. Apesar de n��o estar ainda definido um perfil de resist��ncia para o MVC, a presen��a das muta����es encontradas, em indiv��duos sem contacto pr��vio com o f��rmaco, trar�� implica����es relevantes na sua gest��o cl��nica, considerando a introdu����o do MVC na terapia de recurso.---------- ABSTRACT: Maraviroc (MVC) is the only CCR5 inhibitor licensed today. This drug interacts with the transmembrane helices of CCR5 co-receptor, inducing a conformation change of its extracellular loops and preventing the interaction with gp120. MVC is only active against R5 strains of HIV-1 and is currently used in salvage therapy. The genetic diversity of the env C2V3C3 region of HIV-1 strains from injecting drug users in the Greater Lisbon was studied, along with the presence of natural genetic polymorphisms. 52 plasma samples were used and the amplification by RT-nested PCR of a 565 bp-product was possible in 35 of them. The phylogenetic analysis revealed 23 sequences classified as subtype B (probably including 2 CRF14_BG), 8 A, 3 G and 1 F1. After translation, the presence of natural genetic polymorphisms was studied by comparison to a subtype B consensus. A high frequency of genetic polymorphisms was observed and significant ���amino acid signatures��� were found in association with non-B subtypes. A full characterization of the N-glycosylation sites was also performed and a coreceptor prediction (genotypic approach) was accomplished using the 11/25 and the V3 net charge rules and the programs PSSM and geno2pheno[coreceptor]. The number of N-glycosylation sites was generically preserved. Five sequences were defined as X4 or dual-tropic. Based on published data, a search for genetic polymorphisms, present in V3loop, associated to MVC resistance was finally undertaken. Several of such mutations were observed, being particularly interesting the presence of the patterns 11S+26V and 20F+25D+26V, in a total of 3 sequences, since these patterns have unequivocally been associated with MVC resistance in vivo. Although a resistance profile for MVC is not yet defined, the presence of these mutations in MVC-na��ve populations may have significant impact in their clinical management in the future, especially considering the introduction of this drug in salvage therapy.