Fixação de insectos: estudo comparativo entre formol tamponado a 10%, líquido de Bouin e Bouin Holland

Actualmente, é notável um interesse crescente relativamente ao estudo de insectos: interesses agrícolas (controlo de pragas) e interesses forenses (entomologia forense). A análise histológica destes organismos visa completar os conhecimentos já adquiridos. Objectivos gerais: obter lâminas histológicas de insectos. Objectivos específicos: determinar qual o fixador mais adequado, centrando as opções no Formol Tamponado a 10% (FT), Líquido de Bouin (LB) e Bouin Holland (BH); verificar se o processamento histológico de rotina se aplica ao estudo de insectos.

Experiências e perspectivas na educação profissional em histotecnologia

Planear e aplicar metodologias de selecção, descrição e recolha de material biológico proveniente de órgãos e tecidos humanos, colaborando activamente para o exame anatomo-patológico e elaborando relatório analítico macroscópico.

A influência da fixação na demonstração do glicogénio

A fixação é fundamental para a preservação dos tecidos e é o primeiro passo de uma técnica histológica de rotina cujo objectivo final é obter uma boa visualização das estruturas e, no caso da anatomia patológica, um diagnóstico. Algumas substâncias presentes nos tecidos, como é o caso do glicogénio, necessitam de uma solução fixadora específica capaz de prevenir a dispersão das suas moléculas, sendo a fixação do glicogénio favorecida se essa solução contiver álcool ou ácido pícrico na sua constituição. A preservação do glicogénio é fundamental porque da sua identificação podem depender diagnósticos, utilizando-se colorações histoquímicas como o Periodic Acid Schiff e o Carmim de Best para a sua visualização. Este estudo pretende comparar a qualidade da demonstração do glicogénio com PAS e Carmim de Best, em tecidos fixados com diferentes soluções fixadoras. O estudo foi efectuado a partir de cortes histológicos de fígados de porco, fixados em formol 10%, formol 10% tamponado, formol alcoólico, solução de Bouin e solução de Gendre e procedeu-se à análise estatística das avaliações feitas às lâminas. As soluções fixadoras que apresentaram melhores resultados para ambas as colorações foram o formol 10% tamponado e a solução de Gendre. Foi possível concluir que, numa fixação de 24 horas, o formol 10% tamponado pode ser utilizado com um risco mínimo de comprometer a preservação e demonstração do glicogénio. Em alternativa a esta solução fixadora, utilizada na rotina laboratorial, a solução de Gendre mostrou ser um fixador eficaz.

Influência da longevidade da solução de Verhoeff na intensidade/especificidade das fibras elásticas, em material biológico de origem suína

As fibras elásticas são responsáveis pela elasticidade e flexibilidade dos tecidos. A técnica de Verhoeff é o método mais utilizado para demonstrar a presença destas fibras, corando-as de preto. A solução de Verhoeff é exclusivamente utilizada de um modo extemporâneo, no entanto, pela revisão da literatura verificou-se que a mesma poderia ter uma maior durabilidade. O presente estudo tem como principal objectivo determinar a longevidade da solução de Verhoeff. Utilizou-se material biológico de origem suína,fixado em formol neutro tamponado a 10% e incluído em parafina. Foi avaliado um total de 33 lâminas segundo critérios de intensidade e especificidade. Os resultados obtidos provam que o tempo tem influência sobre a referida solução, levando à perda de intensidade de coloração, não se tendo registado alterações significativas a nível de especificidade. Concluiu-se que a solução de Verhoeff pode não ser uma solução descartável, encontrando-se em perfeitas condições de utilização até às 48h de repouso.

Amplificação em imunocitoquímica: estudo comparativo de sistemas de polímeros

Desde o início da utilização da imunocitoquímica em anatomia patológica, um dos objectivos tem sido detectar as quantidades mais ínfimas de antigénio, tornando-o visível ao microscópio óptico. Vários sistemas de amplificação têm sido aplicados de forma a concretizar este objectivo, tendo surgido um grupo genérico de métodos simples e que apresentam uma amplificação superior: são os denominados métodos do polímero indirecto. Tendo em conta a variedade de métodos disponíveis, os autores propõem-se comparar a sensibilidade de quatro sistemas de amplificação, que recorrem ao método do polímero indirecto com horseradish peroxidase (HRP). Foram utlizadas lâminas de diferentes tecidos fixados em formol e incluídos em parafina, nos quais se procedeu à utilização de 15 antigénios distintos. Na amplificação recorreu-se a quatro sistemas de polímero indirecto (Dako EnVision+ System K4006; LabVision UltraVision LP Detection System TL-004-HD; Novocastra NovoLink RE7140-k; Vector ImmPRESS Reagent Kit MP-7402). A observação microscópica e classificação da marcação obtida foi feita com base num algoritmo que enquadra intensidade, marcação específica, contraste e fundo num score global que pode tomar valores entre 0 e 25. Para o tratamento estatístico foi utilizado o teste oneway ANOVA com post-hoc de tukey (alfa=0.05). O melhor resultado obtido em termos de par média/desvio-padrão dos scores globais foi o do NovoLink (22.4/2.37) e o pior EnVision+ (17.43/3.86). Verificou-se ainda que existite diferença estatística entre os resultados obtidos pelo sistema NovoLink e os sistemas UltraVision (p=.004), ImmPRESS (p=.000) e EnVision+ (p=.000). Concluiu-se que o sistema que permitiu a obtenção de melhores resultados, neste estudo, foi o NovoLink.

Protocolo alternativo da técnica de Grocott

A técnica de Grocott, de grande utilidade na detecção de fungos, utiliza o ácido crómico que é tóxico, corrosivo e cancerígeno.Esta técnica é morosa, nomeadamente na actuação do agente oxidante e na impregnação com solução de prata metenamina na estufa. Foram objectivos deste trabalho substituir o ácido crómico por outro agente oxidante, de menor perigosidade, que permita marcação similar de fungos, reduzir a duração da técnica através da utilização do microondas em detrimento da estufa, testando a sua viabilidade e verificar o tempo/potência que permite melhores resultados. A amostra corresponde a fragmentos de pulmão colhidos em necrópsia. Inicialmente substituiu-se a estufa pelo microondas, tendo sido realizados 18 ensaios testando várias potências: 500W, 550W, 600W, 650W, 700W e 750W; com os tempos 1, 1.30 e 2 minutos. Posteriormente substituiu-se o ácido crómico, recorrendo a 4 agentes oxidantes (ácido periódico, ácido nítrico, ácido sulfúrico, peróxido de hidrogénio), a diferentes concentrações e sem agente oxidante. Para cada um variou-se o tempo em 1, 3, 5 e 10 minutos. Os resultados foram quantificados por três observadores segundo uma grelha de avaliação que contemplava quatro parâmetros: intensidade de marcação, percentagem de fungos marcados, marcação inespecífica de fundo e preservação morfológica. Os agentes oxidantes utilizados apresentaram bons resultados, à excepção do ácido sulfúrico. O agente oxidante alternativo de eleição é o ácido periódico devido à menor perigosidade de manipulação e ao respectivo impacto económico. A intensidade de marcação ideal foi obtida em microondas com potência de 650 Watts durante 1 minuto.

Técnico de AP integrado numa equipa de investigação

Desafios do estudo: realizar e optimizar a técnica para demonstração de MN em linfócitos de sangue periférico e células esfoliadas da mucosa bucal; screening de MN; estudo de polimorfismos. Objectivos do estudo: identificar efeitos para a saúde; comparar a frequência de MN em linfócitos do sangue periférico e em células esfoliadas da mucosa bucal dos trabalhadores expostos a FA nos laboratórios de AP –patologistas, técnicos e auxiliares com controlos.

Evaluation of staining techniques on the results of micronucleus in exfoliated oral mucosa cells

Micronuclei (MN) in exfoliated epithelial cells are widely used as biomarkers of cancer risk in humans. MN are classified as biomarkers of the break age and loss of chromosomes. They are small, extra nuclear bodies that arise in dividing cells from centric chromosome/chromatid fragments or whole chromosomes/chromatids that lag behind in anaphase and are not included in the daughter nuclei in telophase. Buccal mucosa cells have been used in biomonitoring exposed populations because these cells are in the direct route of exposure to ingested pollutant, are capable of metabolizing proximate carcinogens to reactive chemicals, and are easily and rapidly collected by brushing the buccal mucosa. The objective of the present study was to further investigate if, and to what extent, different stains have an effect on the results of micronuclei studies in exfoliated cells. These techniques are: Papanicolaou (PAP), Modified Papanicolaou, May-Grünwald Giemsa (MGG), Giemsa, Harris’s Hematoxylin, Feulgen with Fast Green counterstain and Feulgen without counterstain.

XRCC3 THR241MET polymorphism influence on nuclear buds frequency in exposed to formaldehyde

Formaldehyde (FA), also known as formalin, formal and methyl aldehydes, is a colorless, flammable, strong-smelling gas. It has an important application in embalming tissues and that result in exposures for workers in the pathology anatomy laboratories and mortuaries. Occupational exposure to FA has been shown to induce nasopharyngeal cancer and has been classified as carcinogenic to humans (group 1) on the basis of sufficient evidence in humans and sufficient evidence in experimental animals. Manifold in vitro studies clearly indicated that FA is genotoxic. FA induced various genotoxic effects in proliferating cultured mammalian cells. The cytokinesis-block micronucleus (CBMN) assay was originally developped as an ideal system form easuring micronucleus (MN), however it can also be used to measure nucleoplasmic bridges (NBP) and nuclear buds (NBUD). Over the past decade another unique mechanism of micronucleus formation, known as nuclear budding has emerged. NBUDS is considered as a marker of gene amplification and/or altered gene dosage because the nuclear budding process is the mechanism by which cells removed amplified and/excess DNA.

Genotoxicity biomarkers in occupational to formaldehyde in pathology anatomy laboratories

Formaldehyde (FA) the most simple and reactive of all aldehydes, is a colorless, reactive and readily polymerizing gas at normal temperature. It has a pungent, suffocating odour that is recognized by most human subjects at concentrations below 1ppm. According to the Report on Carcinogens, FA ranks 25th in the overall U.S. chemical production with more than 11 billion pounds (5 million tons) produced each year. Is an important industrial compound that is used in the manufacture of synthetic resins and chemical compounds such as lubricants and adhesives. It has also applications as a disinfectant, preservative and is used in cosmetics. Estimates of the number of persons who are occupationally exposed to FA indicate that, at least at low levels, may occur in a wide variety of industries. The occupational settings with most extensive use of formaldehyde is in the production of resins and in anatomy and pathology laboratories. Several studies reported a carcinogenic effect in humans after inhalation of FA, in particular an increased risk for nasopharyngeal cancer. Nowadays, the International Agency for Research on Cancer (IARC) classifies FA as carcinogenic to humans (group 1), on the basis of sufficient evidence in humans and sufficient evidence in experimental animals. Manifold in vitro studies clearly indicated that FA is genotoxic. FA induced various genotoxic effects in proliferatin cultured mammalian cells. A variety of evidence suggests that the primary DNA alterations after FA exposure are DNA-protein crosslinks. Incomplete repair of DPX can lead to the formation of mutations.

Lifestyle factors influence in the frequency in buccal micronucleus

Genomic damage is probably the most important fundamental cause of development and degenerative disease. It is also well established that genomic damage is produced by environmental exposure to genotoxins, medical procedures (e.g. radiation and chemicals), micronutrient deficiency (e.g. folate), lifestyle factors (e.g. alcohol, smoking, drugs and stress), and genetic factors such as inherited defects in DNA metabolism and/or repair. Tobacco smoke has been associated to a higher risk of development of cancer, especially in the oral cavity, larynx and lungs, as these are places of direct contact with many carcinogenic tobacco’s compounds. Alcohol is definitely a recognized agent that influence cells in a genotoxic form, been citied as a strong agent with potential in the development of carcinogenic lesions. Epidemiological evidence points to a strong synergistic effect between cigarette smoking and alcohol consumption in the induction of cancers in the oral cavity. Approximately 90% of human cancers originate from epithelial cells. Therefore, it could be argued that oral epithelial cells represent a preferred target site for early genotoxic events induced by carcinogenic agents entering the body via inhalation and ingestion. The MN assay in buccal cells was also used to study cancerous and precancerous lesions and to monitor the effects of a number of chemopreventive agents.

Effects of age and gender on peripheral lymphocyte micronucleus

Aging in humans appears to be associated with genetic instability. The cytokinesis-blocked micronucleus assay (CBMN) is a comprehensive method for measuring chromosome breakage, DNA misrepair, chromosome loss, non-disjunction, necrosis, apoptosis and cytostasis. Age and gender are the most important demographic variables affecting the micronucleus (MN) index and studies report frequencies in females being greater than those in males by a factor of 1.2 to 1.6 depending on the age group. It has been shown that a higher MN frequency directly corresponds to a decreased efficiency of DNA repair and increased genome instability.

XRCC3241 Polymorphism influence on genotoxicity biomarkers frequency in workers occupationaly exposed to formaldehyde

Formaldehyde (FA) is ubiquitous in the environment and is a chemical agent that possesses high reactivity. Occupational exposure to FA has been shown to induce nasopharyngeal cancer and has been classified as carcinogenic to humans (group 1) on the basis of sufficient evidence in humans and sufficient evidence in experimental animals. The exposure to this substance is epidemiologically linked to cancer and nuclear changes detected by the cytokinesis-block micronucleus test (CBMN). This method is extensively used in molecular epidemiology, since it determines several biomarkers of genotoxicity, such as micronucleus (biomarkers of chromosomes breakage or loss), nucleoplasmic bridges (biomarker of chromosome rearrangement, poor repair and / or telomeres fusion) and nuclear buds (biomarker of elimination of amplified DNA). The gene X-ray repair cross-complementing group 3 (XRCC3) is involved in homologous recombination repair of cross-links and chromosomal double-strand breaks and at least one polymorphism has been reported in codon 241, a substitution of a methionine for a threonine.

Effects of exposure to formaldehyde and tobacco smoking on genotoxicity biomarkers

Formaldehyde (FA) is a colour less gas widely used in the industry and hospitals as an aqueous solution, formalin. It is extremely reactive and induces various genotoxic effects in proliferating cultured mammalian cells. Tobacco smoke has been epidemiologically associated to a higher risk of development of cancer, especially in the oral cavity, larynx and lungs, as these are places of direct contact with many carcinogenic tobacco’s compounds. Approximately 90% of human cancers originate from epithelial cells. Therefore, it could be argued that oral epithelial cells represent a preferred target site for early genotoxic events induced by carcinogenic agents entering the body via inhalation and ingestion. The cytokinesis-blocked micronucleus assay (CBMN) in human lymphocytes is one of the most commonly used methods for measuring DNA damage, namely the detection of micronucleus, nucleoplasmic bridges, and nuclear buds.

Evaluation of the influence of the ADH3 ILE349VAL polymorphism in the frequency of genotoxicity biomarkers in workers exposed to formaldehyde and tobacco smoking

Formaldehyde (FA) is a colourless gas widely used in the industry and hospitals as an aqueous solution, formalin. It is extremely reactive and induces various genotoxic effects in proliferating cultured mammalian cells. Tobacco smoke has been epidemiologically associated to a higher risk of development of cancer, especially in the oral cavity, larynx and lungs, as these are places of direct contact with many carcinogenic tobacco’s compounds. Genetic polymorphisms in enzymes involved in the metabolism are very important and can make changes in the individual susceptibility to disease. Alcohol dehydrogenase class 3 (ADH3), also known as formaldehyde dehydrogenase dependent of glutathione, is the major enzyme involved in the formaldehyde oxidation, especially in the buccal mucosa. The polymorphism in study is a substitution of an isoleucine for a valine in codon 349. The cytokinesis-blocked micronucleus assay (CBMN) in human lymphocytes is one of the most commonly used methods for measuring DNA damage, namely the detection of micronucleus, nucleoplasmic bridges, and nuclear buds, classified as genotoxicity biomarkers.