O ACERTO DE CONTAS DE DIDEROT COM O CETICISMO

RESUMO: Este artigo é o segundo de uma tríade que trata do diálogo, mais precisamente do envolvimento, entre a filosofia de Denis Diderot e o ceticismo. O primeiro artigo, intitulado “O jovem Diderot e o ceticismo dos Pensamentos”, foi publicado na revista Dois Pontos, em sua edição dedicada ao tema do ceticismo (cf. PIVA, 2007), e limitou-se a uma análise minuciosa do problema da postura cética nos Pensamentos filosóficos, de 1746. O presente artigo, por seu turno, examina duas questões fundamentais, desta vez em O passeio do cético ou As alamedas, de 1747, último livro em que o ceticismo é evocado com destaque pelo enciclopedista, dois anos antes de ele render-se definitivamente ao materialismo ateu: 1) a interpretação que Diderot desenvolve do ceticismo e 2) sua posição diante dele. Já o terceiro e derradeiro texto da tríade examinará – evidentemente, numa próxima oportunidade – a presença do ceticismo no pensamento diderotiano da maturidade, ou seja, no período que se inicia em 1749, com a redação da Carta sobre os cegos, quando a questão da dúvida cética passa a perder em suas obras a relevância que tinha na origem de suas reflexões, mudando, até mesmo, de registro.

Magnetic purification of biotinylated cDNA removes false priming and ensures strand-specificity of RT-PCR for enteroviral RNAs

The detection of replicative intermediate RNAs as markers of active replication of RNA viruses is an essential tool to investigate pathogenesis in acute viral infections, as well as in their long-term sequelae. In this regard, strand-specific PCR has been used widely to distinguish (-) and (+) enteroviral RNAs in pathogenesis studies of diseases such as dilated cardiomyopathy. It has been generally assumed that oligonucleotide-primed reverse transcription of a given RNA generates only the corresponding specific cDNA, thus assuring the specificity of a PCR product amplified from it. Nevertheless, such assumed strand-specificity is a fallacy, because falsely primed cDNAs can be produced by RNA reverse transcription in the absence of exogenously added primers, (cDNA(primer)(-)), and such falsely primed cDNAs are amplifiable by PCR in the same way as the correctly primed cDNAs. Using as a prototype the coxsackievirus B5 (CVB5), a (+) strand RNA virus, it was shown that cDNA(primer)(-) renders the differential detection of viral (-) and (+) RNAs by conventional PCR virtually impossible, due to gross non-specificity. Using in vitro transcribed CVB5 RNAs (+) and (-), it was shown that cDNA(primer)(-) could be removed effectively by magnetic physical separation of correctly primed biotinylated cDNA. Such strategy enabled truly strand-specific detection of RNA (-) and (+), not only for CVB5, but also for other non-polio enteroviruses. These findings indicate that previous conclusions supporting a role for the persistence of actively replicating enterovirus in the pathogenesis of chronic myocarditis should be regarded with strong skepticism and purification of correctly primed cDNA should be used for strand-specific PCR of viral RNA in order to obtain reliable information on this important subject. (C) 2009 Elsevier B.V. All rights reserved.