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em Repositório Institucional da Universidade de Aveiro - Portugal
Resumo:
A Doena de Alzheimer (AD) a maior doena neurodegenerativa a nvel mundial, e a principal causa de demncia na populao idosa. O processamento da protena precursora de amilide (APP) pelas - e g- secretases origina o peptdeo A, que agrega em oligmeros neurotxicos e em placas senis. Estes so eventos-chave na patognese da DA que levam rutura da neurotransmisso sinptica, morte neuronal e inflamao neuronal do hipocampo e crtex cerebral, causando perda de memria disfuno cognitiva geral. Apesar dos grandes avanos no conhecimento do papel do processamento da APP na DA, a sua funo fisiolgica ainda no foi totalmente elucidada. Os mapas de interaes protena-protena (PPI) humanos tm desempenhado um papel importante na investigao biomdica, em particular no estudo de vias de sinalizao e de doenas humanas. O mtodo dois-hbrido em levedura (YTH) consiste numa plataforma para a produo rpida de redes de PPI em larga-escala. Neste trabalho foram realizados vrios rastreios YTH com o objetivo de identificar protenas especficas de crebro humano que interagissem com a APP, ou com o seu domnio intracelular (AICD), tanto o tipo selvagem como com os mutantes Y687F, que mimetizam o estado desfosforilado do resduo Tyr-687. De facto, a endocitose da APP e a produo de A esto dependentes do estado de fosforilao da Tyr-687. Os rastreios YTH permitiram assim obter de redes protenas que interagem com a APP, utilizando como isco a APP, APPY687F e AICDY687F. Os clones positivos foram isolados e identificados atravs de sequenciao do cDNA. A maior parte dos clones identificados, 118, correspondia a sequncias que codificam para protenas conhecidas, resultando em 31 protenas distintas. A anlise de protemica funcional das protenas identificadas neste estudo e em dois projetos anteriores (AICDY687E, que mimetiza a fosforilao, e AICD tipo selvagem), permitiram avaliar a relevncia da fosforilao da Tyr-687. Trs clones provenientes do rastreio YTH com a APPY687F foram identificados como um novo transcrito da protena Fe65, resultante de splicing alternativo, a Fe65E3a (GenBank Accession: EF103274), que codifica para a isoforma p60Fe65. A p60Fe65 est enriquecida no crebro e os seus nveis aumentam durante a diferenciao neuronal de clulas PC12, evidenciando o potencial papel que poder desempenhar na patologia da DA. A RanBP9 uma protena nuclear e citoplasmtica envolvida em diversas vias de sinalizao celulares. Neste trabalho caracterizou-se a nova interao entre a RanBP9 e o AICD, que pode ser regulada pela fosforilao da Tyr-687. Adicionalmente, foi identificada uma nova interao entre a RanBP9 e a acetiltransferase de histonas Tip60. Demonstrou-se ainda que a RanBP9 tem um efeito de regulao inibitrio na transcrio mediada por AICD, atravs da interao com a Tip60, afastando o AICD dos locais de transcrio ativos. O estudo do interactoma da APP/AICD, modelado pela fosforilao da Tyr-687, revela que a APP poder estar envolvida em novas vias celulares, contribuindo no s para o conhecimento do papel fisiolgico da APP, como tambm auxilia a revelar as vias que levam agregao de A e neurodegenerao. A potencial relevncia deste trabalho relaciona-se com a descoberta de algumas interaes proteicas/vias de sinalizao que podem que podem ser relevantes para o desenvolvimento de novas estratgias teraputicas na DA.
