1 resultado para Rubisco small subunit gene ( rbcS) Promoter
em Repositório Institucional da Universidade de Aveiro - Portugal
Resumo:
O tributilestanho (TBT) considerado um dos xenobiticos mais txicos, produzidos e deliberadamente introduzidos no meio ambiente pelo Homem. Tem sido usado numa variedade de processos industriais e subsequentemente descarregado no meio ambiente. O tempo de meia-vida do TBT em guas marinhas de vrias semanas, mas em condies de anxia nos sedimentos, pode ser de vrios anos, devido sua degradao mais lenta. Embora o TBT tenha sido descrito como sendo txico para eucariotas e procariotas, muitas bactrias podem ser resistentes a este composto. O presente trabalho teve como objetivo principal elucidar o mecanismo de resistncia ao TBT em bactrias. Para alm disso, pretendeu-se desenvolver um bioreprter para detectar TBT no ambiente. Para atingir estes objetivos foram delineadas vrias tarefas cujos principais resultados obtidos se apresentam a seguir. Vrias bactrias resistentes ao TBT foram isoladas de sedimento e gua do Porto de Pesca Longnqua (PPL) na Ria de Aveiro, Portugal. Entre estas, Aeromonas molluscorum Av27 foi selecionada devido sua elevada resistncia a este composto (concentraes at 3 mM), sua capacidade de degradar o TBT em compostos menos txicos (dibutilestanho, DBT e monobutilestanho, MBT) e tambm por usar o TBT como fonte de carbono. A. molluscorum Av27 foi caracterizada genotipica e fenotipicamente. Os fatores de virulncia estudados mostraram que esta estirpe i) possui atividade lipoltica; ii) no citotxica para clulas de mamferos, nomeadamente para clulas Vero; iii) no possui integres de classe I e II e iv) possui cinco plasmdeos com aproximadamente 4 kb, 7 kb, 10 kb, 100 kb e mais de 100 kb. Estes resultados mostraram que a estirpe Av27 no txica, aumentando assim o interesse nesta bactria para futuras aplicaes, nomeadamente na bioremediao. Os testes de toxicidade ao TBT mostraram que este composto tem um impacto negativo no crescimento desta estirpe, bem como, na densidade, no tamanho e na atividade metablica das clulas e responsvel pela formao de agregados celulares. Assim, o TBT mostrou ser bastante txico para as bactrias interferindo com a atividade celular geral. O gene Av27-sugE, que codifica a protena SugE pertencente famlia das small multidrug resistance proteins (SMR), foi identificado como estando envolvido na resistncia ao TBT nesta estirpe. Este gene mostrou ser sobreexpresso quando as clulas crescem na presena de TBT. O promotor do gene Av27-sugE foi utilizado para construir um bioreporter para detetar TBT, contendo o gene da luciferase do pirilampo como gene reprter. O bioreprter obtido rene as caractersticas mais importantes de um bom bioreprter: sensibilidade (intervalo de limite de deteco de 1-1000 nM), rapidez (3 h so suficientes para a deteo de sinal) e, possivelmente, no invasivo (pois foi construdo numa bactria ambiental). Usando sedimento recolhido no Porto de Pesca Longnqua da Ria de Aveiro, foi preparada uma experincia de microcosmos com o intuito de avaliar a capacidade de Av27 para bioremediar o TBT, isoladamente ou em associao com a comunidade bacteriana indgena. A anlise das amostras de microcosmos por PCR-DGGE e de bibliotecas de 16S rDNA revelaram que a comunidade bacteriana relativamente estvel ao longo do tempo, mesmo quando Av27 inoculada no sedimento. Para alm disso, o sedimento estuarino demonstrou ser dominado por bactrias pertencentes ao filo Proteobacteria (sendo mais abundante as Delta e Gammaproteobacteria) e Bacteroidetes. Ainda, cerca de 13% dos clones bacterianos no revelaram nenhuma semelhana com qualquer dos filos j definidos e quase 100% afiliou com bactrias no cultivveis do sedimento. No momento da concluso desta tese, os resultados da anlise qumica de compostos organoestnicos no estavam disponveis, e por essa razo no foi possvel tirar quaisquer concluses sobre a capacidade desta bactria remediar o TBT em sedimentos. Esses resultados iro ajudar a esclarecer o papel de A. molluscorum Av27 na remediao de TBT. Recentemente, a capacidade da estirpe Av27 remediar solo contaminado com TBT foi confirmada em bioensaios realizados com plantas, Brassica rapa e Triticum aestivum (Silva 2011a), e tambm com invertebrados Porcellionides pruinosus (Silva 2011B). Assim, poder-se- esperar que a bioremediao do sedimento na experincia de microcosmos tambm tenha ocorrido. No entanto, s a anlise qumica dos compostos organostnicos dever ser conclusiva. Devido dificuldade em realizar a anlise analtica de organoestnicos, um mtodo de bioensaio fcil, rpido e barato foi adaptado para avaliar a toxicidade do TBT em laboratrio, antes de se proceder anlise qumica das amostras. O mtodo provou a sua utilidade, embora tenha mostrado pouca sensibilidade quando se usam concentraes de TBT baixas. Em geral, os resultados obtidos contriburam para um melhor entendimento do mecanismo de resistncia ao TBT em bactrias e mostraram o potencial biotecnolgico de A. molluscorum Av27, nomeadamente, no que refere sua possvel aplicao na descontaminao de TBT no ambiente e tambm no desenvolvimento de bioreprteres.
