56 resultados para Lectinas de Ligação a Manose

em Repositório Institucional da Universidade de Aveiro - Portugal


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As galactomananas das infuses de caf apresentam atividade imunoestimuladora in vitro, sendo esta atividade semelhante das mananas acetiladas extradas de Aloe vera. As galactomananas presentes no resduo de caf tambm possuem atividade imunoestimuladora in vitro quando so parcialmente acetiladas. Como as galactomananas so o componente maioritrio do resduo de caf e como o caf um produto de largo consumo a nvel mundial, o reaproveitamento deste resduo como fonte de galactomananas com atividade imunoestimuladora deve ser considerado. Esta dissertao procura dar resposta a duas questes: 1. Quais so as estruturas das galactomananas responsveis pela atividade imunoestimuladora destes polissacardeos; e 2. Como que as galactomananas podem ser extradas quantitativamente do resduo de caf de modo a serem solveis em gua temperatura ambiente e, assim, poderem ser utilizadas como ingredientes alimentares com atividade imunoestimuladora. A questo 1 foi respondida pela caracterizao estrutural de quatro galactomananas, de trs origens: a) as galactomananas das infuses de caf e do resduo que apresentaram atividade imunoestimuladora; b) a galactomanana da goma de alfarroba (LBG), que no apresentou atividade imunoestimuladora; e c) a manana acetilada de Aloe vera, que apresentou atividade imunoestimuladora. Estes polissacardeos foram submetidos anlise de acares e de ligaes glicosdicas e a hidrlise por endo--D- (14)-mananase. Os fragmentos de oligossacardeos mais pequenos foram ainda analisados por espetrometria de massa por ionizao de electrospray e espetrometria de massa tandem. As galactomananas das infuses de caf, do resduo de caf e do Aloe vera apresentaram grau de ramificao e peso molecular semelhantes, enquanto as galactomananas da LBG apresentaram grau de ramificao e de polimerizao maiores. Todas as galactomananas apresentaram resduos de arabinose como ramificao. O grau de acetilao das galactomananas da LBG foi vestigial enquanto as galactomananas do Aloe vera apresentaram um grau de acetilao de 2,08; para as galactomananas do resduo de caf o grau de acetilao foi de 0,98 e para as infuses foi de 0,08. A localizao dos grupos acetilo foi irregular em todos os polmeros. Os resultados obtidos permitem inferir que baixos nveis de ramificao, cadeias pequenas e alguma acetilao parecem promover a atividade imunoestimuladora atribuda s galactomananas. Para responder questo 2, foi testada uma metodologia que envolveu a torra do resduo de caf a 160 C e a 220 C e a sua extrao com gua quente e com solues de 4 M NaOH temperatura de 20, 60 e 120 C. A torra do resduo a 160 C e a extrao sequencial permitiu extrair 56% das galactomananas presentes no resduo de caf e, simultaneamente, 54% das arabinogalactanas. As galactomananas mantiveram a sua estrutura caraterstica de polissacardeo acetilado composto por uma cadeira principal de resduos de manose em ligação -(14) e resduos de Gal e Ara nas cadeias laterais. A 220 C, as galactomananas foram parcialmente degradadas e o rendimento de extrao foi muito menor do que a 160 C. No entanto, mesmo a esta temperatura as galactomananas apresentaram resduos acetilados e a presena de pentoses nas cadeias laterais, o que permite inferir a elevada resistncia destes polissacardeos temperatura e aos reagentes alcalinos. De forma a melhor compreender a estabilidade trmica das galactomananas do resduo de caf e a influncia que a presena de arabinogalactanas pode ter na sua estabilidade, foi feita uma anlise termogravimtrica aos polissacardeos extrados do resduo de caf assim como a polissacardeos relacionados estruturalmente com estes, como a celulose, a galactomanana de LBG e a goma arbica, uma arabinogalactana. As galactomananas so termicamente estveis durante 3 h a 200 C, enquanto as arabinogalactanas so estveis a 180 C. De acordo com os perfis dos termogramas obtidos, e pelo clculo das energias de ativao da degradao trmica, o resduo de caf apresenta uma estabilidade trmica menor do que a galactomanana, possivelmente devido presena de arabinogalactanas. Apesar de no se ter verificado alteraes no termograma da galactomanana do caf submetida a um tratamento trmico de 200 C durante 3 h, verificam-se alteraes estruturais que envolvem a formao de novas ligaes glicosdicas, nomeadamente, a formao de resduos de manose ligados em O-2 e em O-6, reaes de transglicosilao, despolimerizao, formao de resduos de anidro-hexoses no terminal redutor e isomerizao manose-glucose. Estas alteraes promovem a solubilizao das galactomananas. Os resultados obtidos permitem propor que o resduo de caf possa ser submetido a uma torra seguida de extrao com reagentes alcalinos a quente para obteno das galactomananas com rendimentos elevados. Estes polissacardeos podem tornar-se solveis em gua aps tratamento trmico a 200 C, permitindo assim a sua utilizao em formulaes alimentares, nomeadamente, por preparao de compostos acetilados com baixos nveis de ramificao e cadeias pequenas de modo a promover a sua atividade imunoestimuladora.

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Helicobacter pylori is a bacterial pathogen that affects more than half of the worlds population with gastro-intestinal diseases and is associated with gastric cancer. The cell surface of H. pylori is decorated with lipopolysaccharides (LPSs) composed of three distinct regions: a variable polysaccharide moiety (O-chain), a structurally conserved core oligosaccharide, and a lipid A region that anchors the LPS to the cell membrane. The O-chain of H. pylori LPS, exhibits unique oligosaccharide structures, such as Lewis (Le) antigens, similar to those present in the gastric mucosa and are involved in interactions with the host. Glucan, heptoglycan, and riban domains are present in the outer core region of some H. pylori LPSs. Amylose-like glycans and mannans are also constituents of some H. pylori strains, possibly co-expressed with LPSs. The complexity of H. pylori LPSs has hampered the establishment of accurate structure-function relationships in interactions with the host, and the design of carbohydrate-based therapeutics, such as vaccines. Carbohydrate microarrays are recent powerful and sensitive tools for studying carbohydrate antigens and, since their emergence, are providing insights into the function of carbohydrates and their involvement in pathogen-host interactions. The major goals of this thesis were the structural analysis of LPSs from H. pylori strains isolated from gastric biopsies of symptomatic Portuguese patients and the construction of a novel pathogen carbohydrate microarray of these LPSs (H. pylori LPS microarray) for interaction studies with proteins. LPSs were extracted from the cell surface of five H. pylori clinical isolates and one NCTC strain (26695) by phenol/water method, fractionated by size exclusion chromatography and analysed by gas chromatography coupled to mass spectrometry. The oligosaccharides released after mild acid treatment of the LPS were analysed by electrospray mass spectrometry. In addition to the conserved core oligosaccharide moieties, structural analyses revealed the presence of type-2 Lex and Ley antigens and N-acetyllactosamine (LacNAc) sequences, typically found in H. pylori strains. Also, the presence of O-6 linked glucose residues, particularly in LPSs from strains 2191 and NCTC 26695, pointed out to the expression of a 6-glucan. Other structural domains, namely ribans, composed of O-2 linked ribofuranose residues were observed in the LPS of most of H. pylori clinical isolates. For the LPS from strain 14382, large amounts of O-3 linked galactose units, pointing to the occurrence of a galactan, a domain recently identified in the LPS of another H. pylori strain. A particular feature to the LPSs from strains 2191 and CI-117 was the detection of large amounts of O-4 linked N-acetylglucosamine (GlcNAc) residues, suggesting the presence of chitin-like glycans, which to our knowledge have not been described for H. pylori strains. For the construction of the H. pylori LPS microarray, the structurally analysed LPSs, as well as LPS-derived oligosaccharide fractions, prepared as neoglycolipid (NGL) probes were noncovalently immobilized onto nitrocellulosecoated glass slides. These were printed together with NGLs of selected sequence defined oligosaccharides, bacterial LPSs and polysaccharides. The H. pylori LPS microarray was probed for recognition with carbohydratebinding proteins (CBPs) of known specificity. These included Le and blood group-related monoclonal antibodies (mAbs), plant lectins, a carbohydratebinding module (CBM) and the mammalian immune receptors DC-SIGN and Dectin-1. The analysis of these CBPs provided new information that complemented the structural analyses and was valuable in the quality control of the constructed microarray. Microarray analysis revealed the occurrence of type-2 Lex and Ley, but not type-1 Lea or Leb antigens, supporting the results obtained in the structural analysis. Furthermore, the H. pylori LPSs were recognised by DC-SIGN, a mammalian lectin known to interact with this bacterium through fucosylated Le epitopes expressed in its LPSs. The -fucose-specific lectin UEA-I, showed restricted binding to probes containing type-2 blood group H sequence and to the LPSs from strains CI-117 and 14382. The presence of H-type-2, as well Htype- 1 in the LPSs from these strains, was confirmed using specific mAbs. Although H-type-1 determinant has been reported for H. pylori LPSs, this is the first report of the presence of H-type-2 determinant. Microarray analysis also revealed that plant lectins known to bind 4-linked GlcNAc chitin oligosaccharide sequences bound H. pylori LPSs. STL, which exhibited restricted and strong binding to 4GlcNAc tri- and pentasaccharides, differentially recognised the LPS from the strain CI-117. The chitin sequences recognised in the LPS could be internal, as no binding was detected to this LPS with WGA, known to be specific for nonreducing terminal of 4GlcNAc sequence. Analyses of the H. pylori LPSs by SDS-PAGE and Western blot with STL provided further evidence for the presence of these novel domains in the O-chain region of this LPS. H. pylori LPS microarray was also applied to analysis of two human sera. The first was from a case infected with H. pylori (H. pylori+ CI-5) and the second was from a non-infected control.The analysis revealed a higher IgG-reactivity towards H. pylori LPSs in the H. pylori+ serum, than the control serum. A specific IgG response was observed to the LPS isolated from the CI-5 strain, which caused the infection. The present thesis has contributed to extension of current knowledge on chemical structures of LPS from H. pylori clinical isolates. Furthermore, the H. pylori LPS microarray constructed enabled the study of interactions with host proteins and showed promise as a tool in serological studies of H. pyloriinfected individuals. Thus, it is anticipated that the use of these complementary approaches may contribute to a better understanding of the molecular complexity of the LPSs and their role in pathogenesis.

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Este relatrio descreve o trabalho realizado durante um estgio na empresa Vista Alegre Atlantis. Neste estgio, propunha-se diminuir ou eliminar um problema, um defeito observado como a asa descolada numa chvena de porcelana. Atravs do estudo das fases do processo de fabrico das chvenas, que se focou na conformao das asas e na secagem, concluiu-se que se tratava de um problema na conformao, relacionado com as propriedades da pasta utilizada para a conformao, recorrendo-se a uma pasta de porcelana com propriedades diferentes. Neste trabalho apresentado o problema em estudo, o material (a porcelana), incluindo as suas propriedades, as matrias-primas e os processos utilizados para produzir as peas estudadas. Apresentam-se os procedimentos usados para estudar o material e o problema, os resultados obtidos e as concluses tiradas da discusso dos dados e observaes. Adicionalmente, apresentado trabalho relevante efetuado durante o estgio, em especial aquele relacionado com as chvenas de porcelana.

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A poluio atmosfrica constitui actualmente um grave problema ambiental cujos efeitos se fazem sentir a diversas escalas, desde os efeitos imediatos e de longo termo na sade humana e nos materiais, at fenmenos regionais, como a acificao, e fenmenos globais que durante este sculo podero alterar as condies de vida no globo. Apesar da reduo das emisses de poluentes atmosfricos, conseguida atravs do uso de combustveis mais limpos e tecnologias mais eficientes, as reas urbanas continuam a evidenciar sinais de degradao ambiental. Para ser bem sucedida a cidade deve enfrentar as trs dimenses da sustentabilidade: social, econmica e ambiental. O modo de utilizao do solo numa zona urbana uma caracterstica fundamental da cidade, com influncia directa no seu desempenho ambiental e na qualidade de vida que proporciona populao. O presente trabalho explora a ligação entre a estrutura urbana e a qualidade do ar, um dos muitos aspectos do desenvolvimento urbano sustentvel. A perspectiva histrica sobre o desenvolvimento urbano, a poluio atmosfrica e a sua interligação abordada, bem como o trabalho de investigao que tem vindo a ser conduzido na rea. A aplicao de um sistema de modelao atmosfrico a um caso de estudo idealizado demonstra a importncia da estrutura espacial da cidade na sustentabilidade urbana, mostrando que cidades compactas com usos do solo misturados promovem uma melhor qualidade do ar quando comparadas com cidades dispersas, com baixa densidade populacional. De modo a explorar a relao entre a estrutura urbana e a qualidade do ar numa zona urbana real, a regio urbana do Porto identificada como um caso de estudo adequado, e o processo de crescimento urbano nas ltimas dcadas analisado, assim como os nveis de qualidade do ar da regio. De modo a definir a configurao do sistema de modelao mais adequada para a regio de estudo, so efectuados diversos testes de sensibilidade com o modelo meteorolgico. Relativamente ao modelo de qualidade do ar, descrito e implementado um conjunto de aces de modo a melhorar o desempenho do modelo para a simulao das concentraes de poluentes na atmosfera urbana, no contexto de alteraes do uso do solo. Finalmente, so desenvolvidos e testados, atravs da aplicao do sistema de modelao, dois cenrios alternativos de desenvolvimento urbano para a rea de estudo. Estes cenrios alternativos implicam diferentes emisses de poluentes e diferentes distribuies espaciais dessas emisses, e como consequncia, diferentes nveis de qualidade do ar. O estudo permite concluir que alteraes nos padres de uso do solo em reas urbanas conduzem a alteraes na meteorologia, emisses e qualidade do ar. As reas urbanas dispersas, quando comparadas com estruturas urbanas compactas so responsveis por temperaturas mais elevadas, emisses de poluentes para a atmosfera mais elevadas e maiores concentraes de poluentes.

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Nas ltimas dcadas tem-se assistido a uma preocupao crescente relativamente s possveis consequncias da exposio a compostosxenbioticos capazes de modular ou causar disrupo do sistema endcrino, os denominados Compostos Disruptores Endcrinos (CDEs). A maioria dos estudos efectuados tem-se centrado principalmente nos efeitos dos CDEs em vertebrados, enquanto que os seus efeitos em invertebrados tmsido negligenciados, embora este grupo represente mais de 95% de todas asespcies animais. Ispodes como o Porcellio scaber, combinam caractersticas associadas s mudas e aos processos reprodutivos mediados por mecanismos endcrinosconhecidos com um modo de vida terrestre, tornando-os potenciais espcies sentinela para estudos de disrupo endcrina (DE) em ambientes terrestres. Neste estudo, ispodes machos adultos, machos e fmeas juvenis e casais foram expostos a concentraes crescentes dedois CDEs, vinclozolina (Vz) e bisfenol A (BPA). Testou-se a hiptese nula que a Vz e o BPA no interferem com o desenvolvimento e reproduo deste ispode terrestre. Foi investigadaa possvel ligação entre os efeitos causados pelos compostos propostos e DE assim como a ligação a outros potenciais mecanismos de toxicidade.Parmetros como concentrao de 20-hidroxiecdisona (20E), muda, crescimento, rcios sexuais ediversos parmetros reprodutivos foram estudados. Adicionalmente, de modo a estudar os alvos moleculares destes txicos, analisou-se a expresso proteica do intestino, hepatopncreas e testculos do ispode aps exposio aos qumicos. Os resultados demonstram que a Vz e o BPA estimulam o aumento dos nveis de 20E de um modo dependente da dose. Excepo feita para a concentrao mais baixa de BPA testada (10 mg/kg solo), para a qual concentraes significativamente mais altas de 20E foram determinadas, sugerindo a ocorrncia dos efeitos de baixas doses tpicos de DE j demonstrados por outros autores. O BPA tambm distorceu o rcio sexual favorecendo asfmeas na concentrao mais baixa. A mortalidade devido ecdise incompleta foi relacionada com o hiper-ecdisonismo nas concentraes mais elevadas de Vz. Mais ainda, a Vz tende a atrasar a muda e o BPA a induzi-la. No obstante, ambos os compostos provocam toxicidade no desenvolvimento,uma vez que foi encontrada uma diminuio generalizada nos parmetros de crescimento. Os juvenis mostraram ser mais sensveis exposio aos txicos que os adultos. Estes compostos provocaram ainda toxicidade reprodutiva, com um decrscimo generalizado do output reprodutivo. A toxicidadecausada pelos ecdisterides e o seu papel na sntese de vitelogenina so alguns dos factores chave que podero influenciar negativamente a reproduo.A Vz e o BPA afectaram a expresso de protenas envolvidas nometabolismo energtico e induziram vrias respostas de stress. Interferiram ainda com protenas intimamente ligadas com o sucesso reprodutivo. Conclui-se assim,que ambos os CDEs propostos provocam toxicidade nodesenvolvimento e na reproduo de P. scaber, tendo sido evidenciada umaligação a DE. Alvos moleculares de natureza no-endcrina foram tambm revelados, atravs da expresso diferencial de algumas protenaspreviamente descritas para invertebrados aquticos e mesmo alguns vertebrados.

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Os dinoflagelados so um grupo muito diverso de protistas que possuem um conjunto de caractersticas pouco comuns. Os peridiniides so dinoflagelados com teca que formada por seis sries latitudinais de placas, incluindo a srie cingular e um anel incompleto de placas intercalares anteriores, embora as ltimas estejam ausentes em algumas espcies de Peridiniopsis. So dinoflagelados com simetria bilateral em relao ao plano apical que contem o eixo dorso-ventral. Na srie sulcal h apenas uma placa posterior que contacta com o limite ventral de duas grandes placas antapicais. Entre os peridiniides, a presena ou ausncia de um poro apical e o nmero de placas no cngulo so geralmente consideradas marcas filogenticas importantes ao nvel de gnero ou famlia. Actualmente, a definio de Peridinium Ehrenberg, o dinoflagelado mais comum de gua doce, inclui organismos com combinaes diferentes destas duas caractersticas. Trabalhos anteriores sobre a ultrastrutura e afinidade filogentica das espcies tipo de Peridinium, P. cinctum, e Peridiniopsis Lemmermann, P. borgei tambm sugerem a necessidade de reexaminar as relaes taxonmicas dos peridiniides. Esta tese combina o estudo ultrastrutural de uma seleco de espcies com hipteses filogenticas baseadas nas sequncias de LSU rDNA, para aumentar o nosso conhecimento das diferenas e afinidades dentro dos peridiniides. Tem como objectivo aumentar o nosso conhecimento das caractersticas individuais das clulas que possam levar a reconhecer sinapomorfias que possam ser usadas como marcadores dos peridiniides como um todo e dos seus subgrupos. As espcies escolhidas para exame pormenorizado foram: Peridinium palatinum Lauterborn, de um grupo com duas placas intercalares anteriores, seis placas cingulares e sem poro apical; Peridinium lomnickii Wo!oszy"ska, de um grupo com poro apical, trs placas intercalares e seis cingulares; Peridiniopsis berolinensis (Lemmermann) Bourrelly, uma espcie heterotrfica com poro apical, sem placas intercalares e com seis placas cingulares; e Sphaerodinium cracoviense Wo!oszy"ska, um membro de um gnero de formas com teca com um tipo de tabulao marginalmente peridiniide, com um suposto poro apical e quatro placas intercalares anteriores. Peridinium palatinum difere de Peridinium e Peridiniopsis tpicos, quer em caractersticas da teca, quer internas. As diferenas estimadas entre as sequncias parciais de LSU rDNA de P. palatinum e a espcie prxima P. pseudolaeve, relativamente a P. cinctum so comparativamente grandes e, juntamente com a topologia da rvore filogentica, apoiam a separao de P. palatinum e formas prximas ao nvel de gnero. Palatinus nov. gen. foi, ento, descrito com as novas combinaes Palatinus apiculatus nov. comb. (espcie tipo; sin. Peridinium palatinum), P. apiculatus var. laevis nov. comb. e P. pseudolaevis nov. comb.. As caractersticas distintivas de Palatinus incluem uma superfcie das placas lisa ou um tanto granulosa, mas no areolada, um grande pirenide central penetrado por canais citoplasmticos e de onde radiam lobos plastidiais, e a presena de uma fiada microtubular homloga de um pednculo. As clulas de Palatinus saem da teca pela zona antapicalpos- cingular. Peridinium lomnickii apresenta tabulao semelhante s formas marinhas, produtoras de quistos calcrios, do gnero Scrippsiella A.R. Loeblich. Para comparao, adicionmos novas observaes ultrastruturais de S. trochoidea. Peridinium lomnickii tem uma combinao de caractersticas diferente de Peridinium, Peridiniopsis e Scrippsiella. As hipteses filogenticas baseadas em DNA colocam P. lomnickii no mesmo ramo que Pfiesteria Steidinger et Burkholder, Tyrannodinium e outras Pfiesteriaceae, com as quais partilha um "microtubular basket" e uma ligação peculiar entre duas placas do sulco. As caractersticas distintivas do novo gnero proposto Chimonodinium gen. ined. incluem, alm da tabulao, a ausncia de pirenides, a presena de um "microtubular basket" com quatro ou cinco fiadas sobrepostas de microtbulos associados a um pequeno pednculo, um sistema pusular com tubos pusulares bem definidos ligados aos canais flagelares, e a produo de quistos no calcrios. Peridiniopsis berolinensis partilha vrias caractersticas significativas com Pfiesteria e afins, como um "microtubular basket" com a capacidade de suportar um tubo de alimentao, quimiossensibilidade para encontrar presas apropriadas, o modo de natao junto s presas e a organizao geral da clula. Hipteses filogenticas com base em LSU rDNA confirmam a afinidade entre P. berolinensis e Pfiesteria bem como a relao mais remota com a espcie tipo de Peridiniopsis, P. borgei. Estas razes justificam a proposta de Tyrannodinium gen. nov., uma nova Pfiesteriaceae que difere de outros membros do grupo por viver em gua doce e nos pormenores da tabulao. Sphaerodinium cracoviense revelou a tabulao tpica do gnero Sphaerodinium, que apresenta um nmero de placas intercalares superiores e pos-cingulares maior que o que tpico em peridiniides: 4 e 6, respectivamente. Observaes em SEM mostraram uma estrutura apical diferente da dos peridiniides, e um sulco apical numa das placas fazendo lembrar a rea apical de alguns woloszynskiides. Os pormenores do aparelho flagelar e do sistema pusular ligam o Sphaerodinium aos woloszynskiides em geral e ao gnero Baldinia em particular, mas no aos peridiniides. O volumoso estigma de S. cracoviense revelou ser extraplastidial e de um modelo nico, composto por elementos que se encontram em woloszynskiides, mas nunca encontrados anteriormente juntos. A anlise filogentica baseada nas sequncias parciais de LSU rDNA tambm sugerem uma maior proximidade de S. cracoviense com os woloszynskiides do que com os peridiniides. Futuras anlises pormenorizadas de dinoflagelados peridiniides, em especial entre os do numeroso grupo de espcies com poro apical, sero necessrias para clarificar as suas relaes taxonmicas; e a produo de descries melhoradas das caractersticas finas particulares das clulas sero um requisito para perceber a evoluo dos caracteres dos peridiniides por forma a podermos identificar marcadores filogenticos.

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Este estudo pretende ser uma contribuio para a resposta aos apelos desafiadores de diversos autores e organizaes internacionais, em particular das Naes Unidas, ao reconhecerem a importncia da educao para a sustentabilidade atravs da proposta da Dcada da Educao para o Desenvolvimento Sustentvel (2005-2014). A formao contnua de professores desenvolvida em comunidades de aprendizagem interdisciplinares, constitudas por professores de Cincias e de Filosofia, foi assumida nesta investigao com um instrumento que pode potenciar o incremento da interdisciplinaridade entre estas reas do saber e promover o desenvolvimento profissional dos professores. O estudo realizado centra-se em trs fases: Fase I Diagnstico de concepes de professores de Cincias e de Filosofia acerca da pertinncia que atribuem s interaces intergrupais (Cincias/Filosofia) como contributo para a melhoria das suas prticas pedaggicas e das aprendizagens dos alunos no mbito da educao para a sustentabilidade. Fase II Concepo e implementao de um programa de formao contnua numa comunidade de aprendizagem interdisciplinar, constituda por professores de Cincias e de Filosofia de uma escola. Fase III Avaliao das percepes dos professores/formandos sobre os impactes do programa de formao no incremento da interdisciplinaridade, na leccionao da temtica Sustentabilidade na Terra, no desenvolvimento profissional dos participantes e nas prticas de formao contnua de professores. A Fase I incide sobre o diagnstico de concepes de professores de Cincias e de Filosofia, para o qual foi concebido um questionrio, aplicado em dezoito escolas do Ex-CAE de Viseu, e ao qual responderam 185 professores. Os indicadores obtidos revelam que os professores de Cincias e de Filosofia reconhecem a relevncia das suas prprias reas disciplinares para a formao dos alunos. No entanto, a interdisciplinaridade entre as Cincias e a Filosofia escassa, apesar dos professores considerarem que pode ser til na planificao das actividades lectivas. Consideram, tambm, que pode promover a implementao de estratgias de ensino mais diversificadas e contribuir para o incremento de uma cultura de colaborao nas escolas. Os professores de Cincias e de Filosofia reconhecem que a abordagem da temtica Sustentabilidade na Terra necessita de conceitos para alm dos que so abordados individualmente nas disciplinas leccionadas e pode ser facilitada se forem implementados materiais didcticos construdos com colegas do seu e de outros grupos disciplinares. A Fase II parte das concepes diagnosticadas, dos indicadores da investigao em Didctica, das actuais perspectivas de ensino e de aprendizagem preconizadas para os Ensinos Bsico e Secundrio e de um modelo de formao reflexiva, crtica e ecolgica (Bronfenbrenner, 1979; Alarco, 1996; S-Chaves, 1997; Schn, 2000) e elabora-se um programa de formao contnua de professores de cariz interdisciplinar (Cincias e Filosofia). Este programa de formao foi implementado a vinte e quatro professores de Cincias e de Filosofia de uma Escola Secundria da regio Centro-Norte de Portugal, durante o ano lectivo de 2008/2009 e teve a durao de cinquenta horas presenciais e cinquenta horas no presenciais. Nele aprofundam-se conhecimentos no mbito da educao em Cincia e em Filosofia, promovendo a ligação entre ambas e facilitando, deste modo, a sua transposio didctica. Promove-se a articulao entre a investigao e as prticas pedaggicas e proporciona-se a anlise e o aprofundamento de temticas transversais s Cincias e Filosofia. Procura-se, deste modo, potenciar a especificidade das reas do saber envolvidas e promover o enriquecimento de perspectivas nos participantes. Das dinmicas estabelecidas emergem percursos formativos que permitem a construo de materiais didcticos, estruturados numa perspectiva construtivista de cariz interdisciplinar, para a temtica Sustentabilidade da Terra, leccionada nas disciplinas de Cincias (Ensino Bsico e Secundrio) e de Filosofia (Ensino Secundrio). Estes materiais didcticos so, posteriormente, implementados pelos professores de Cincias e Filosofia no contexto de sala de aula. Na Fase III desta investigao avaliam-se as percepes sobre os impactes do programa de formao no incremento da interdisciplinaridade entre os professores de Cincias e de Filosofia, na leccionao da temtica Sustentabilidade na Terra, no desenvolvimento profissional dos professores que nele participaram e na melhoria das prticas de formao contnua de professores. Os indicadores obtidos apontam no sentido de que o processo formativo experienciado contribuiu para: - ajudar a derrubar barreiras disciplinares existentes entre os professores de Cincias e de Filosofia; - a construo, numa lgica interdisciplinar, de materiais didcticos diversificados para a temtica Sustentabilidade na Terra, que foram reconhecidos pelos alunos como inovadores e importantes para a vivncia de aprendizagens activas e contextualizadas; - a modificao de algumas prticas pedaggicas dos professores participantes; - a identificao de potencialidades das comunidades de aprendizagem interdisciplinares na formao contnua de professores. As concluses obtidas nesta investigao levam a considerar que h necessidade de serem trilhados novos caminhos no campo da formao contnua de professores, procurando criar mecanismos de trabalho e de cooperao que permitam uma efectiva partilha de saberes e de valores entre professores de diferentes reas disciplinares, que informem novas atitudes, reais e consentneas com uma prtica pedaggica reflexiva e interdisciplinar. Deste modo, considera-se que a adopo de um modelo reflexivo de formao contnua de professores, baseado na constituio de comunidades de aprendizagem interdisciplinares, ajuda os professores a terem uma viso mais integradora dos saberes e a reconhecerem as potencialidades da interdisciplinaridade entre as Cincias e a Filosofia na melhoria das prticas pedaggicas. Pode, tambm, constituir-se como resposta aos desafios da educao no sculo XXI, facilitando o exerccio de uma cidadania de responsabilidade e participativa e apontando perspectivas para a resoluo de problemas da sociedade actual, entre os quais se incluem os relacionados com a sustentabilidade do planeta Terra.

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O presente trabalho um estudo comparativo de imagem grfica que visa analisar o estado actual do design grfico dos jornais dirios nacionais de cariz generalista Pblico, Dirio de Notcias, Jornal de Notcias, Correio da Manh e 24 Horas. Efectuada a anlise dos jornais, proposto o redesign do Jornal de Notcias, com o objectivo de aplicar as concluses obtidas de forma terica num projecto prtico. As opinies resultantes deste trabalho apresentam dois tipos de contributo: em primeiro lugar, permitem caracterizar num determinado perodo de tempo a apresentao visual das publicaes dirias e generalistas em Portugal. Em segundo lugar, contribuem para ultrapassar as solues de menor eficcia, potenciando a apresentao visual do contedo informativo das publicaes acima referidas, com o objectivo de fidelizar e aumentar o nmero de leitores e potenciar as vendas. A metodologia utilizada para a realizao da presente tese desenvolve-se em trs partes: na primeira parte, a leitura bibliogrfica, a investigao e o registo de informaes, distribuda ao longo de treze reas fundamentais para a compreenso e posterior aplicao s restantes partes; na segunda parte, o recurso a entrevistas a profissionais ligados ao design de publicaes jornalsticas, bem como a anlise de jornais dirios nacionais e estrangeiros, tendo como base os resultados obtidos pelo Poynter Institute for Media Sudies no projecto Eye-Trac Research, um dos maiores estudos realizados sobre a importncia da cor nas publicaes jornalsticas e da forma como o leitor percorre as pginas de um jornal; na terceira parte, a realizao de um projecto de redesign para o Jornal de Notcias. Na opinio de alguns especialistas, como Mario Garca e Rodrigo Fino, no futuro os jornais tero uma funo de complementaridade relativamente s restantes plataformas de informao e o pblico ser simultaneamente leitor no ecr e no papel. Nesse sentido, os designers devero encontrar novas formas de potenciar o contedo e de estabelecer graficamente meios eficazes de ligação entre as diferentes plataformas de informao. Independentemente do suporte, em papel ou no ecr, a funo do designer ser sempre a de encontrar solues mais eficazes para cada caso concreto.

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Enquadrado numa perspectiva sociocultural da investigao em Didctica de Lnguas, assumindo quer a singularidade da relao do sujeito com o saber quer as dimenses cognitivas, pessoais e sociais da linguagem escrita, este trabalho baseia-se no pressuposto de que deve estar subjacente ao processo de aprender e ensinar a escrever, numa perspectiva multifuncional e processual, o conhecimento sobre a relao dos alunos sujeitos com a escrita, em contextos escolares e extra-escolares. Partindo de uma reconfigurao do modelo de anlise da relao com a escrita, desenvolvemos um projecto de investigao que compreende uma fase extensiva e outra intensiva. Na primeira, recolhemos dados que nos conduziram a constataes sobre a escrita extra-escolar e escolar de alunos do 2 e 3 ciclos do Ensino Bsico, em escolas do distrito de Aveiro. Na segunda, empreendemos um estudo de caso, com uma turma de 7 ano, que nos permitiu conhecer a relao com a escrita dos sujeitos e, em funo disso, conceber uma oficina sobre a escrita, implementada com os sujeitos de investigao, em contexto escolar. A descrio de dimenses que configuram a complexidade de relaes com a escrita dos sujeitos levou-nos conceptualizao de trs ideais-tipo de relao com a escrita, que se constituem em modos de interpretar este fenmeno pluridimensional e instvel. Os resultados tambm evidenciam a existncia de representaes-obstculo sobre a escrita em clara ligação s prticas escriturais escolares. Encontrmos, porm, indcios de evoluo de uma relao mais positiva com o (saber) escrever; estes sugerem que dispositivos didcticos que no ignorem a perspectiva identitria de adeso escrita, conciliando-a com uma perspectiva epistmica, sero mais consequentes para uma melhoria das aprendizagens escriturais, de que a relao pessoal com a escrita inalienvel.

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O presente trabalho prope estudar alguns aspectos da modelao ecolgica na Costa Portuguesa, nomeadamente o efeito fsico na distribuio de nutrientes e biomassa fitoplanctnica. O principal propsito foi implementar e validar um modelo acoplado tridimensional fsico e ecolgico, para a costa portuguesa, e aplic-lo numa rea limitada, a norte, por Vila do Conde e a sul pela Figueira da Foz centrada na regio de Aveiro, para estudar a distribuio, vertical e horizontal, de temperatura, nutrientes e biomassa fitoplanctnica. A regio em estudo est situada na costa oeste da Pennsula Ibrica e faz parte da Regio de Afloramento do Atlntico Norte. caracterizada por condies meteorolgicas onde a predominncia e prevalncia, durante uma grande parte do ano, de ventos de norte/noroeste, constitui um dos principais elementos foradores do transporte para o largo das guas costeiras e consequente subida das guas mais frias e profundas, ricas em nutrientes. A estas condies juntam-se as boas condies de luminosidade e temperatura essenciais ao desenvolvimento fitoplanctnico, que servir de alimento s espcies marinhas. Este facto, torna esta regio, uma zona de elevada riqueza biolgica favorvel ao desenvolvimento de vrias espcies marinhas, transformando este local num ecossistema de forte produtividade. O modelo foi calibrado e validado para a rea em estudo e simulou com sucesso, a resposta do sistema situao de ventos favorveis ao afloramento costeiro para a regio em estudo. Quando comparada com dados observados, os resultados mostram que o modelo capaz de prever satisfatoriamente as distribuies superficiais e na coluna de gua: da temperatura, dos nutrientes, do oxignio e da clorofila-a. Os resultados evidenciam o crucial papel desempenhado pelos processos fsicos no aumento de fitoplncton que ocorre ao longo de uma estreita rea da costa norte portuguesa, mostrando a estreita ligação entre a distribuio costeira de fitoplncton e a distribuio costeira de temperatura, superfcie. A produtividade do fitoplncton que ocorre nas guas costeiras no s atribuda disponibilidade de nutrientes mas tambm intensidade luminosa. A luz e a intensidade dos ventos de norte/noroeste so os factores chave no controlo dos blooms de fitoplncton observados nesta regio de afloramento, sobretudo no Vero, nomeadamente na camada de mistura pouco profunda e junto nutriclina. Deste modo os modelos numricos em associao com dados in situ e imagens de satlite podero ser considerados uma excelente ferramenta para a anlise e previso de cenrios, presentes e futuros, de aces praticadas sobre o meio ambiente.

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Neste trabalho estudou-se a extraco supercrtica do leo de grainha de uva, usando dixido de carbono, e combinou-se este processo com um prtratamento enzimtico da semente para aumentar o rendimento global da extraco. A qualidade dos extractos obtidos foi avaliada pelo seu contedo em triacilglicerdeos, perfil de cidos gordos e capacidade antioxidante. Realizaram-se tambm alguns estudos exploratrios sobre a aplicao de um pr-tratamento de alta presso (HPP) grainha da uva. Adicionalmente, efectuou-se o estudo da extraco, fraccionamento e caracterizao estrutural das procianidinas da grainha da uva, bem como a avaliao da sua capacidade antioxidante. A extraco de procianidinas da grainha da uva foi efectuada sequencialmente com metanol e acetona/gua, tendo sido posteriormente fraccionadas por adio sucessiva de misturas metanol/clorofrmio progressivamente mais concentradas em clorofrmio. A caracterizao das procianidinas foi feita por HPLC-UV e LCMS, antes e depois de sujeitar as amostras a uma tilise, e tambm por ESI-MS e ESI-MS/MS. Este estudo permitiu reportar, pela primeira vez, a ocorrncia de procianidinas do tipo-A galoiladas na grainha da uva. Os resultados de HPLC-UV permitiram determinar o grau mdio de polimerizao das procianidinas e a sua composio monomrica em (+)- catequina, (-)-epicatequina e (-)-epicatequina-O-galato. Mostrou-se que a (+)- catequina o flavan-3-ol terminal mais abundante e a (-)-epicatequina predomina largamente como unidade de extenso. No caso de procianidinas do tipo A, a ligação interflavnica C2-C7 encontra-se essencialmente nas unidades terminais. O grau mdio de polimerizao das diversas fraces varia entre 1.0 e 10.8. A sua capacidade antioxidante, medida pelo mtodo espectrofotomtrico de DPPH, mostrou-se ser equivalente de uma amostra comercial de (+)-catequina usada como referncia. A partir dos graus mdios de polimerizao experimentais e das anlises de FTIR das fraces correspondentes foi possvel obter um modelo preditivo O-PLS com apenas uma varivel latente. O pr-tratamento enzimtico justificou-se pelo conhecimento existente acerca do uso de enzimas especficas que destroem parcialmente as paredes celulares. Atendendo composio das paredes celulares da grainha da uva preparou-se uma suspenso contendo protease, xilanase, pectinase e celulase. Para determinar as condies experimentais do pr-tratamento que maximizam o rendimento da extraco, estudou-se o efeito do tempo de reaco, temperatura, pH, dimetro mdio das partculas de grainha moda e a concentrao das enzimas. Os incrementos do rendimento da extraco de leo observados atingiram 163.2%. O estudo da extraco supercrtica (SFE) do leo da grainha de uva tratada e no-tratada permitiu obter as curvas de extraco correspondentes, bem com analisar a influncia das condies operatrias sobre o seu andamento. Montou-se uma instalao laboratorial onde se realizaram experincias com dixido de carbono a 160, 180, 200 e 220 bar e temperaturas de 313.15 e 323.15 K. Os rendimentos obtidos por SFE foram semelhantes aos de Soxhlet com n-hexano. As curvas de extraco medidas compreendem um primeiro perodo de extraco, onde se remove cerca de 92-97% do leo disponvel, e um segundo perodo, essencialmente difusional, com pouco impacto no rendimento final. Os vrios extractos recolhidos e o leo global obtido foram caracterizados para avaliar a sua qualidade e relacion-la com as condies operatrias de SFE. Determinaram-se o contedo total em triacilglicerdeos, o seu perfil de cidos gordos e a capacidade antioxidante (AOC). Os resultados mostraram que a AOC aumenta com a elevao da presso e, acentuadamente, com o acrscimo da temperatura. Ao longo da curva de extraco, a AOC mais pronunciada nos extractos iniciais, nomeadamente nos primeiros 30 a 40% da extraco. A modelao efectuada considerou que o leo extractvel se reparte entre clulas rompidas, predominantes na periferia da semente, e clulas intactas, mais interiores. Admitiu-se que o transporte de massa ocorre em srie, i.e. das clulas intactas para as rompidas e destas para o solvente; mostrou-se que a disperso axial era desprezvel. Os balanos materiais fase fluida e aos volumes de clulas rompidas e intactas, combinados com os fluxos interno, externo e a relao de equilbrio foram resolvidos numericamente pelo mtodo das linhas combinado com diferenas finitas atrasadas. O modelo reproduziu bem as curvas experimentais e permitiu simular curvas de eluio e os trs perfis de concentrao no leito.

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O trabalho descrito insere-se no mbito da Qumica Supramolecular e consistiu no desenvolvimento de receptores artificiais, na forma protonada ou complexada, para o reconhecimento molecular de substratos aninicos derivados de cidos carboxlicos incluindo os herbicidas PMG2-, ATCP- e 2,4-D-. Foram investigadas duas sries de anies, uma aliftica (ox2-, mal2-, suc2-, glu2-, adip2-, cit3- e cta3-) e outra aromtica (bzc-, naphc-, anthc-, pyrc-, ph2-, iph2-, tph2-, btc3-, dihyac2-, 4,4-dibzc2-, 3-nitrobzc- e 4-nitrobzc-). Foram sintetizados sete novos ligandos macrocclicos simtricos constitudos por anis aromticos piridina ou fenantrolina ligados por cadeias de poliaminas saturadas. O comportamento cido-base destes macrociclos foi investigado em soluo aquosa e as constantes de protonao correspondentes determinadas por mtodos potenciomtricos e de RMN de 1H. As propriedades de complexao destes ligandos com os ies metlicos Ni2+, Cu2+, Zn2+, Cd2+ e Pb2+ foram tambm estudadas por mtodos potenciomtricos nas mesmas condies experimentais, tendo revelado que os macrociclos de dimenso mdia so capazes de acomodar um ou dois ies metlicos. O complexo dinuclear de Cu(II) derivado do macrociclo com dois grupos piridina foi utilizado como receptor de anies carboxilato originando complexos ternrios. Todos os complexos foram caracterizados em soluo por espectroscopias de UV/vis/IVprx e de RMN. As espcies paramagnticas foram tambm caracterizadas por espectroscopia de RPE. A formao de espcies ternrias foi ainda investigada por espectrometria de massa ESI-MS e ESI-MS/MS. As estruturas cristalinas de alguns dos complexos foram determinadas por difraco de raios-X. As formas protonadas dos macrociclos foram utilizadas como receptores de uma grande variedade de anies carboxilato. O reconhecimento molecular entre os receptores e os substratos aninicos foi investigado em soluo por mtodos potenciomtricos e de espectroscopia de RMN com determinao das constantes de associao. Os agregados supramoleculares foram caracterizados no estado slido por difraco de raios-X. Finalmente as associaes supramoleculares foram estudadas em soluo por mtodos de dinmica molecular com determinao dos termos entrpicos e entlpicos das energias livres de ligação. Em resumo, nesta tese apresentam-se os resultados de estudos realizados com duas famlias de macrociclos: desde a sntese dos compostos, passando por estudos em soluo e finalizando com simulao molecular. Este estudo sistemtico atravs da conjugao de metodologias complementares permitiu caracterizar ao nvel macroscpico e microscpico as associaes moleculares.

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Os sistemas familiares multigeracionais (trs ou mais geraes vivas) passaram de raros no passado a uma realidade social cada vez mais comum na actualidade, devido ao fenmeno demogrfico de envelhecimento populacional. Este estudo pretende contribuir para o conhecimento deste sistema social, situado entre a famlia nuclear e a comunidade, procurando descrever a sua estrutura, funes e padres relacionais dos seus membros com outros familiares e com os sistemas sociais envolventes. Para tal, foi organizada uma amostra de 25 famlias multigeracionais (contendo quatro geraes), qual foi aplicada uma entrevista de genograma a um elemento das geraes intermdias e quatro entrevistas de anlise da rede social pessoal (uma por gerao), perfazendo um total de 25 entrevistas de genograma e 92 de avaliao da rede social (menos 8 do que o esperado devido a mortalidade experimental). A anlise dos dados possibilitou: 1) a aplicao do princpio de totalidade sistmica famlia multigeracional, a sua definio como um sistema social de complexidade idiossincrtica, a identificao dos subsistemas que compem o objecto de estudo (indivduo, ncleo familiar, composio familiar, gerao, linhagem), e a definio de uma tipologia familiar multigeracional (famlia unificada, dispersa e fragmentada); 2) a identificao e anlise de papis sociais desempenhados pelos indivduos no contexto familiar multigeracional especificamente relevantes neste nvel sistmico (guardio das memrias familiares, elo de ligação familiar, pronto-socorro familiar); 3) a descrio das redes sociais pessoais e a identificao das diferenas estruturais e funcionais entre indivduos pertencentes a diferentes subsistemas geracionais, que permitem reflectir sobre a evoluo da rede social ao longo das vrias fases de desenvolvimento individual e familiar; 4) um conhecimento mais aprofundado das redes sociais dos indivduos mais idosos que pertencem a famlias multigeracionais, da composio da matriz relacional percepcionada como significativa e apoios disponibilizados. Em suma, os dois primeiros captulos reflectem o esforo de desenvolvimento de um modelo heurstico para o sistema familiar multigeracional, numa perspectiva estruturalista, enquanto os dois captulos subsequentes, apoiandose conceptualmente nos anteriores, facultam um quadro das relaes entre subsistemas geracionais na actualidade, atravs de uma metodologia de anlise das redes sociais. ABSTRACT: Multigenerational family systems comprising four generations are increasingly common nowadays due to the demographic phenomenon of population aging. This study aims at a deeper understanding of this social system, placed between the nuclear family and the community, in particular by describing its structure, functions and relational patterns of its members with other members in the family and surrounding social systems. A sample of 25 multigenerational families (comprising four generations) was selected. A genogram interview was applied to a member of the middle generations, and four personal social network questionnaires were administered to one element of each generation. A total of 25 genograms and 92 social network inventories were collected (minus 8 than expected due to experimental mortality). Main findings were: 1) the application of systemic principles to the multigenerational family, which allowed us to define it as a social system of idiosyncratic complexity, involving specific subsystems (individual, family nucleus, family composition, generation, lineage), and also to define a multigenerational family typology (unified, dispersed and fragmented family); 2) the identification and analysis of social roles assumed by individuals in the multigenerational family context, that are specifically relevant in this systemic level (keeper of family memories, connecting link in the family, family first aider); 3) the description of the personal social networks and the identification of structural and functional differences among individuals belonging to different generational subsystems, which allowed for a reflection on the evolution of social networks through the various stages of individual and family development; 4) a deeper knowledge of the eldest family members social networks, i.e. the relational matrix of significant individuals and supports in oldold age. In summary, the first two chapters reflect the development of a heuristic model directed at the multigenerational family, whereas the two subsequent chapters provide a view of contemporaneous relationships between generational subsystems, through a social network analysis methodology.

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A discondroplasia da tbia (TD) em aves consiste numa anomalia do esqueleto onde existe uma falha nos processos normais da ossificao endocondral. Esta patologia caracterizada pela formao de uma cartilagem no vascularizada e no mineralizada que se estende at metfise. Uma vez que existem vrias anomalias do esqueleto em mamferos com leses semelhantes s apresentadas pela TD, este trabalho teve como objectivo a caracterizao desta patologia em termos das molculas que podem estar envolvidas no seu desenvolvimento. Assim, foi estudada a expresso das macromolculas da matriz extracelular, das enzimas degradadoras da matriz (metaloproteinases da matriz: MMPs), bem como das molculas envolvidas na proliferao e diferenciao celular, na angiognese e apoptose. A expresso gnica foi realizada, por PCR quantitativo em tempo real, em placas de crescimento normais e discondroplsicas obtidas a partir de frangos de carne (broilers) da estirpe Cobb. Os nveis proteicos de algumas MMPs foram analisados por immunoblotting e zimografia de gelatina. No presente estudo no se verificou alterao na expresso dos genes dos colagnios do tipo II, IX, X e XI, bem como do agrecano, nas leses discondroplsicas. Observou-se uma reduo acentuada nos nveis de mRNA da gelatinase-B (MMP-9), da colagenase-3 (MMP-13) e das estromalisinas -2 (MMP-10) e -3 (MMP-11), bem como nos nveis proteicos da gelatinase-A (MMP-2) e da MMP-13. Por outro lado, a MMP-7 aumentou drasticamente a expresso do seu gene. As molculas envolvidas na proliferao e diferenciao dos condrcitos, tais como a PTHrP, o Ihh, o Cbfa-1 e o Sox-9, mantiveram a sua expresso gnica nas leses. Por outro lado, o TGF- reduziu a sua expresso. A caspase-3 tambm dimimuiu a sua expresso na patologia. Em relao aos factores angiognicos, o FGF manteve a sua expresso e o VEGF aumentou significativamente nas leses. Este aumento do VEGF juntamente com o aumento da MMP-7 sugere um aumento da hipoxia nas leses. Os nossos resultados sugerem que a acumulao da cartilagem observada na discondroplasia devida a uma diminuio da protelise da matriz, resultado de uma sub-expresso das MMPs, e no de um aumento da produo das macromolculas da matriz. Desta forma, os nossos resultados sugerem que a falha na expresso e/ou activao das MMPs poder estar associada ao desenvolvimento da discondroplasia da tbia em aves. Finalmente, os nossos resultados vm suportar os resultados anteriores que sugerem uma ligação entre a expresso das MMPs e anomalias no processo de ossificao endocondral.

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Apesar de marcadas por contextos histricos e culturais distintos, possvel observar nas obras de dois dos autores mais significativos da frica do Sul e de Moambique, Zakes Mda e Mia Couto respectivamente, perspectivas semelhantes no que diz respeito recuperao das memrias histricoculturais e sua contribuio para a construo e compreenso das identidades ps-coloniais. Atravs da fico, Zakes Mda e Mia Couto combinam a ligação da Histria a factos concretos com a necessidade de revelao associada memria, criando assim espaos importantes para a discusso de algumas das mais complexas questes colocadas s identidades ps-coloniais. Para alm dos contextos polticos, culturais e histricos que caracterizam e distinguem as literaturas sul-africana e moambicana, tanto Zakes Mda como Mia Couto assumem nas suas obras a necessidade de analisar as identidades ps-coloniais contemporneas dos dois pases atravs da recuperao das suas memrias histricas.