6 resultados para Citotoxidade de mediação celular Teses
em Repositório Institucional da Universidade de Aveiro - Portugal
Resumo:
Estrogens, such as 17-estradiol (E2) are essential for normal growth and differentiation of the mammary gland. There are two estrogen receptors (ERs), ER and ER which are ligand activated transcription factors. ER stimulates proliferation and is the single most powerful predictor of breast cancer prognosis and since 70% of breast cancers express ER, strategies to block this receptor are the primary breast cancer treatment. Unlike ER, the role of ER in breast cancer and its potential as alternative therapeutic target remains controversial, mainly due to the lack of correlation between results obtained in vitro and epidemiological studies. The aim of this thesis was to increase our understanding of the molecular and cellular mechanisms of estrogen signaling in normal and cancerous cells, in different cellular contexts and with focus on ER. In Paper I we characterized the effect of the flavone PD098059 - which is a commonly used MEK1 inhibitor - on activation of transcription by ER and ER. We found that the estrogenic effect of PD098059 is dose dependent in concentrations ranging from 1 10 M and that activation of transcription by ER is suppressed by the inhibitory effect of PD98059 on MEK1 at concentrations above 50 M. In agreement with its flavone nature, PD098059 had a much stronger effect on ER than on ER transcriptional activity. Therefore, use of this compound for the study of signalling events in cells expressing ER should be carefully considered. In Paper II we assessed the effect of ER agonists in vivo and administered under different conditions in vitro. In basal conditions, ER induced apoptosis; however, in vivo ER agonists stimulated proliferation and inhibited apoptosis. In vivo effects were reproduced in culture, by activation of MAPK/ERK pathway with epidermal growth factor or basement membrane extract. In addition, insulin signalling and PI3-K/AKT activation was necessary for stimulation of proliferation. These results suggest that the cellular context modulates ER activity. Manuscript presents preliminary work aimed at the set-up of a methodological strategy to isolate ERs and to identify interacting proteins in different cellular contexts and which could modulate the bi-phased effects of ER in cell growth. In conclusion, the studies presented in this thesis contribute to clarify the apparent contradictory information regarding ER function in normal and cancerous mammary epithelium and suggest that the cellular context should be considered when ER effects are studied.
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A universalizao do ensino de base de seis anos, em Cabo Verde, legitimada a partir da adopo da Lei de Bases do Sistema Educativo de 1990 veio acentuar o desequilbrio j existente entre as necessidades do sistema e o nmero de docentes qualificados. Os modelos tradicionais, presenciais, adoptados mostram-se incapazes de uma resposta eficaz seja porque a disperso territorial e populacional dificultam o acesso aos centros de formao, seja porque o ensino convencional est desfasado das realidades social, tecnolgica e geogrfica de Cabo Verde e das exigncias do mundo actual em que as novas tecnologias de informao e comunicao obrigam a uma mudana do paradigma na formao em geral. A abrangncia do tema e o seu carcter multidisciplinar levou-nos a seleccionar um tema especfico - a mediação pedaggica, em contextos de profissionalizao distncia, de professores da ilha de Santiago/Cabo Verde - que nunca foi objecto de investigao sistematizada. Utilizamos a tcnica de inqurito por questionrio dirigido a um universo de 138 formandos e 15 formadores de uma Escola de formao de professores na cidade da Praia, com o objectivo de identificar os factores que condicionam a aprendizagem dos formandos e de analisar as representaes dos respondentes relativamente ao modelo, suportes e meios de comunicao a distncia. clara a preferncia por um modelo misto de aprendizagem blended learning. Baseados nos resultados obtidos, foram definidos as linhas estruturantes e os princpios orientadores que devem subjazer elaborao de um programa de formao profissional de professores em bLearning, susceptvel de implementao em Cabo Verde. validada a tese de que o conhecimento das caractersticas, necessidades e expectativas do formando incontornvel para a identificao do modelo adequado ao perfil do formando. So referidas algumas implicaes que podero trazer contributos relevantes para a dinamizao da discusso sobre as novas abordagens de formao e procura de soluo para a problemtica de formao de professores, em Cabo Verde. O presente trabalho ambiciona ser um contributo para o debate sobre a formao de professores com recurso a mecanismos de formao distncia, alternativa pedaggica adequada especificidade do arquiplago.
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A protena precursora de amilide de Alzheimer (APP) um factor chave na doena de Alzheimer (AD). Essencialmente o processamento da APP resulta na produo de Abeta, o peptdeo txico depositado nas placas de amilide dos indivduos com AD. Ainda permanece por esclarecer se o processamento da APP afectado sob condies de stress celular, potencialmente aumentando a quantidade de Abeta produzida. Alm disso, o stress celular pode induzir alteraes moleculares, associadas AD, que podem representar marcadores moleculares teis para o diagnstico da AD. Com estas questes em mente, procurmos identificar alteraes, em resposta ao stress celular, no processamento da APP e na expresso de outras protenas. Nestes estudos de monitorizao considermos que a fosforilao proteica anormal e o stress oxidativo podem contribuir para a condio patolgica. Assim, investigmos o processamento da APP dependente da fosforilao durante o stress celular. Os dados obtidos confirmam que a secreo da APP reduzida em situaes de stress, e que o efeito idntico em linhas celulares de tipo neuronal e no neuronal. Os resultados obtidos revelam que o PMA, mesmo em situaes de stress (azida de sdio 1 mM) pode afectar o processamento da APP, aumentando a produo de sAPP (o fragmento secretado aps o processamento de APP) que pode potencialmente reduzir a produo de Abeta. A hiptese de afectar a produo de Abeta dependente da fosforilao, que por sua vez pode ter relevncia num quadro clnico, mantm-se mesmo em condies de stress. Os resultados revelaram que a induo de sAPP, aps a adio de steres de forbol, ou cido ocadeco, em condies de stress no idntica. Em contraste, sob condies controlo, tanto os steres de forbol como o cido ocadeco produzem o mesmo efeito em termos da produo de sAPP. Aparentemente estas duas vias podem ser dissociadas em condies de stress, o que de algum modo pode reflectir processamento alterado da APP em condies adversas. Nas experincias em que se analisou a expresso de outros potenciais marcadores moleculares, foram detectadas alteraes nos nveis de expresso de vrias protenas. Estes marcadores moleculares representam alvos interessantes para futura validao e potenciais candidatos para um diagnstico molecular na AD. As protenas j identificadas so importantes do ponto de vista da transduo de sinais, e incluem a PP1, a HSP70, a PARP e a prpria APP.
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Vitis vinifera L., the most widely cultivated fruit crop in the world, was the starting point for the development of this PhD thesis. This subject was exploited following on two actual trends: i) the development of rapid, simple, and high sensitive methodologies with minimal sample handling; and ii) the valuation of natural products as a source of compounds with potential health benefits. The target group of compounds under study were the volatile terpenoids (mono and sesquiterpenoids) and C13 norisoprenoids, since they may present biological impact, either from the sensorial point of view, as regards to the wine aroma, or by the beneficial properties for the human health. Two novel methodologies for quantification of C13 norisoprenoids in wines were developed. The first methodology, a rapid method, was based on the headspace solid-phase microextraction combined with gas chromatography-quadrupole mass spectrometry operating at selected ion monitoring mode (HS-SPME/GC-qMS-SIM), using GC conditions that allowed obtaining a C13 norisoprenoid volatile signature. It does not require any pre-treatment of the sample, and the C13 norisoprenoid composition of the wine was evaluated based on the chromatographic profile and specific m/z fragments, without complete chromatographic separation of its components. The second methodology, used as reference method, was based on the HS-SPME/GC-qMS-SIM, allowing the GC conditions for an adequate chromatographic resolution of wine components. For quantification purposes, external calibration curves were constructed with -ionone, with regression coefficient (r2) of 0.9968 (RSD 12.51 %) and 0.9940 (RSD of 1.08 %) for the rapid method and for the reference method, respectively. Low detection limits (1.57 and 1.10 g L-1) were observed. These methodologies were applied to seventeen white and red table wines. Two vitispirane isomers (158-1529 L-1) and 1,1,6-trimethyl-1,2-dihydronaphthalene (TDN) (6.42-39.45 g L-1) were quantified. The data obtained for vitispirane isomers and TDN using the two methods were highly correlated (r2 of 0.9756 and 0.9630, respectively). A rapid methodology for the establishment of the varietal volatile profile of Vitis vinifera L. cv. 'Ferno-Pires' (FP) white wines by headspace solid-phase microextraction combined with comprehensive two-dimensional gas chromatography with time-of-flight mass spectrometry (HS-SPME/GCxGC-TOFMS) was developed. Monovarietal wines from different harvests, Appellations, and producers were analysed. The study was focused on the volatiles that seem to be significant to the varietal character, such as mono and sesquiterpenic compounds, and C13 norisoprenoids. Two-dimensional chromatographic spaces containing the varietal compounds using the m/z fragments 93, 121, 161, 175 and 204 were established as follows: 1tR = 255-575 s, 2tR = 0,424-1,840 s, for monoterpenoids, 1tR = 555-685 s, 2tR = 0,528-0,856 s, for C13 norisoprenoids, and 1tR = 695-950 s, 2tR = 0,520-0,960 s, for sesquiterpenic compounds. For the three chemical groups under study, from a total of 170 compounds, 45 were determined in all wines, allowing defining the "varietal volatile profile" of FP wine. Among these compounds, 15 were detected for the first time in FP wines. This study proposes a HS-SPME/GCxGC-TOFMS based methodology combined with classification-reference sample to be used for rapid assessment of varietal volatile profile of wines. This approach is very useful to eliminate the majority of the non-terpenic and non-C13 norisoprenic compounds, allowing the definition of a two-dimensional chromatographic space containing these compounds, simplifying the data compared to the original data, and reducing the time of analysis. The presence of sesquiterpenic compounds in Vitis vinifera L. related products, to which are assigned several biological properties, prompted us to investigate the antioxidant, antiproliferative and hepatoprotective activities of some sesquiterpenic compounds. Firstly, the antiradical capacity of trans,trans-farnesol, cis-nerolidol, -humulene and guaiazulene was evaluated using chemical (DPPH and hydroxyl radicals) and biological (Caco-2 cells) models. Guaiazulene (IC50= 0.73 mM) was the sesquiterpene with higher scavenger capacity against DPPH, while trans,trans-farnesol (IC50= 1.81 mM) and cis-nerolidol (IC50= 1.48 mM) were more active towards hydroxyl radicals. All compounds, with the exception of -humulene, at non-cytotoxic levels ( 1 mM), were able to protect Caco-2 cells from oxidative stress induced by tert-butyl hydroperoxide. The activity of the compounds under study was also evaluated as antiproliferative agents. Guaiazulene and cis-nerolidol were able to more effectively arrest the cell cycle in the S-phase than trans,trans-farnesol and -humulene, being the last almost inactive. The relative hepatoprotection effect of fifteen sesquiterpenic compounds, presenting different chemical structures and commonly found in plants and plant-derived foods and beverages, was assessed. Endogenous lipid peroxidation and induced lipid peroxidation with tert-butyl hydroperoxide were evaluated in liver homogenates from Wistar rats. With the exception of -humulene, all the sesquiterpenic compounds under study (1 mM) were effective in reducing the malonaldehyde levels in both endogenous and induced lipid peroxidation up to 35% and 70%, respectively. The developed 3D-QSAR models, relating the hepatoprotection activity with molecular properties, showed good fit (R2LOO > 0.819) with good prediction power (Q2 > 0.950 and SDEP < 2%) for both models. A network of effects associated with structural and chemical features of sesquiterpenic compounds such as shape, branching, symmetry, and presence of electronegative fragments, can modulate the hepatoprotective activity observed for these compounds. In conclusion, this study allowed the development of rapid and in-depth methods for the assessment of varietal volatile compounds that might have a positive impact on sensorial and health attributes related to Vitis vinifera L. These approaches can be extended to the analysis of other related food matrices, including grapes and musts, among others. In addition, the results of in vitro assays open a perspective for the promising use of the sesquiterpenic compounds, with similar chemical structures such as those studied in the present work, as antioxidants, hepatoprotective and antiproliferative agents, which meets the current challenges related to diseases of modern civilization.
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A Engenharia de Tecidos um domnio multidisciplinar que combina especialistas de mltiplos domnios, no sentido de se desenvolverem substitutos biolgicos para a regenerao, reparao ou restaurao de funes de rgos ou tecidos. A estratgia mais comum em engenharia de tecidos consiste na utilizao de matrizes de suporte (scaffolds) tridimensionais, biocompatveis, biodegradveis e altamente porosos, os quais servem de substrato fsico ao processo de adeso, proliferao e diferenciao celular. O objectivo deste trabalho de investigao centrou-se na produo e caracterizao de scaffolds de PCL e de PCL com partculas de biovidro, abordando um processo de biofabricao, que teve por base o princpio da extruso. Utilizou-se para tal um equipamento patenteado pelo Centro para o Desenvolvimento Rpido e Sustentado do Produto (CDRsp) designado Bioextruder. Trata-se de um sistema concebido para a produo de matrizes com ou sem encapsulamento de clulas, de uma forma automtica, flexvel e integrada. As estruturas obtidas caracterizaram-se quanto s propriedades trmicas, qumicas, morfolgicas e mecnicas. Realizaram-se ainda, testes de bioactividade e testes de degradao in vitro. Os resultados obtidos mostram que as condies de processamento no induzem qualquer alterao no que diz respeito s propriedades trmicas e qumicas dos materiais, que o aumento do teor de biovidro conduz a uma fragmentao da matriz polimrica num perodo de tempo mais curto, que os scaffolds obtidos apresentam uma geometria bem definida e uma distribuio de poros uniforme. Demonstra-se assim, que a combinao da matriz polimrica (PCL) com o biovidro, sob a forma de scaffolds promissora para aplicaes em Engenharia de Tecidos e Medicina Regenerativa.
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Este trabalho abordou a valorizao de um subproduto da indstria de lacticnios (soro de queijo) atravs da alterao do funcionamento de processos habitualmente utilizados no contexto do tratamento biolgico. Foi avaliada a fermentao acidognica deste subproduto para maximizar a converso do seu elevado teor de matria orgnica em cidos orgnicos volteis (AOV) que actualmente so produtos com elevada procura, nomeadamente para produo de polihidroxialcanoatos (PHA). Em ensaios descontnuos e semi-contnuos foi caracterizada a produo e composio de AOV a partir de soro de queijo variando a razo food-to-microorganism (F/M) e a concentrao de alcalinidade. Recorrendo modelao dos resultados atravs de superfcies de resposta, demonstrou-se que condies de F/M = 4 gCQO g-1SSV combinadas com uma adio elevada de alcalinidade (8 g L-1 expresso como CaCO3) resultaram na converso de 72% da CQO alimentada em AOV. O acetato e o butirato foram os AOV predominantes (60%), mas elevadas razes F/M combinadas com elevadas alcalinidades promoveram o alongamento da cadeia carboxlica, tendo sido produzidos AOV de maior massa molecular (iso-valerato e n-caproato). O processo de fermentao acidognica foi posteriormente desenvolvido em modo contnuo num reactor MBBR acidognico operado a longo prazo. Cargas orgnicas entre 30 e 50 gCQO L-1d-1 permitiram obter um grau de acidificao mximo de 68% no efluente fermentado. Foi ainda demonstrado que uma adio dinmica de alcalinidade (0 4,8 g CaCO3 L-1) nestas condies estimulou a produo de AOV de cadeia mpar (propionato e n-valerato) at 42%. O efluente acidificado no processo anaerbio foi usado como substrato em reactores SBR operados para seleco de culturas microbianas mistas acumuladoras de PHA, nos quais foi aplicado um regime de alimentao dinmica em condies aerbias (fartura-fome). Estes sistemas operaram tambm a longo prazo, e demonstraram ser capazes de remover mais de 96% da CQO alimentada e simultaneamente convert-la em PHA, at 36% do peso celular seco. A velocidade de remoo de substrato (valor mximo de 1,33 gCQO g-1SSV h-1) foi proporcional ao teor de polmero acumulado, evidenciando o estabelecimento de uma fase de fome prolongada que estimulou a seleco de microrganismos com elevada capacidade de acumulao de PHA. Alm disso, o teor molar de hidroxivalerato (HV) no copolmero produzido [P(HB-co-HV)] foi directamente proporcional ao teor de AOV de cadeia mpar (propionato e n-valerato) presente no soro fermentado que serviu de substrato. Uma estratgia de operao do reactor SBR com variao da carga orgnica, aliada ao regime fartura-fome estabelecido, permitiu ainda simular a realidade dos processos de tratamento biolgico de efluentes, nos quais a composio e concentrao inicial de matria orgnica variam frequentemente. Este modo de operao do sistema estimulou notavelmente o processo de seleco de culturas acumuladoras de PHA tendo resultado num aumento da acumulao de PHA de 7% para 36%. Os resultados demonstraram com sucesso a possibilidade de valorizao do soro de queijo atravs de eco-biotecnologia, contribuindo para uma mudana de paradigma no tratamento convencional de efluentes: ao invs de serem eliminados enquanto poluentes, os componentes orgnicos presentes neste subproduto industrial podem assim ser convertidos em materiais de valor acrescentado.
