ERIC-PCR genotypic characterization of Haemophilus parasuis isolated from Brazilian swine

Haemophilus parasuis infection, known as Glässer’s disease, is characterized by fibrinous polyserositis, arthritis and meningitis in piglets. Although traditional diagnosis is based on herd history, clinical signs, bacterial isolation and serotyping, the molecular-based methods are alternatives for species-specific tests and epidemiologic study. The aim of this study was to characterize H. parasuis strains isolated from different states of Brazil by serotyping, PCR and ERIC-PCR. Serotyping revealed serovar 4 as the most prevalent (24 %), followed by serovars 14 (14 %), 5 (12 %), 13 (8 %) and 2 (2 %), whereas 40 % of the strains were considered as non-typeable. From 50 strains tested 43 (86%) were positive to Group 1 vtaA gene that have been related to virulent strains of H.parasuis. ERIC-PCR was able to type isolates tested among 23 different patterns, including non-typeable strains. ERIC-PCR patterns were very heterogeneous and presented high similarity between strains of the same animal or farm origin. The results indicated ERIC-PCR as a valuable tool for typing H. parasuis isolates collected in Brazil.

Mast cells act as phagocytes against the periodontopathogen Aggregatibacter Actinomycetemcomitans

Background: Evidence to date shows that mast cells play a critical role in immune defenses against infectious agents, but there have been no reports about involvement of these cells in eliminating periodontopathogens. In this study, the phagocytic ability of mast cells against Aggregatibacter actinomycetemcomitans compared with macrophages is evaluated. Methods: In vitro phagocytic assays were conducted using murine mast cells and macrophages, incubated with A. actinomycetemcomitans, either opsonized or not, with different bacterial load ratios. After 1 hour, cells were stained with acridine orange and assessed by confocal laser-scanning electronmicroscopy. Results: Phagocytic ability of murine mast cells against A. actinomycetemcomitans was confirmed. In addition, the percentage of mast cells with internalized bacteria was higher in the absence of opsonization than in the presence of opsonization. Both cell types showed significant phagocytic activity against A. actinomycetemcomitans. However, the percentage of mast cells with non-opsonized bacteria was higher than that of macrophages with opsonized bacteria in one of the ratios (1:10). Conclusions: This is the first report about the participation of murine mast cells as phagocytes against A. actinomycetemcomitans, mainly in the absence of opsonization with human serum. Our results may indicate that mast cells act as professional phagocytes in the pathogenesis of biofilmassociated periodontal disease

Sinais clínicos e ocorrência de anticorpos anti-Chlamydophila abortus em ovinos de São Paulo e Minas Gerais

A Chlamydophila abortus, anteriormente conhecida como Chlamydia psittaci sovovar 1, é uma bactéria Gram negativa, intracelular obrigatória. Esse micro-organismo é frequentemente encontrado em distúrbios reprodutivos em ovinos, bovinos e caprinos, sendo o aborto epizoótico dos bovinos e o aborto enzoótico dos ovinos e caprinos as manifestações mais importantes. Considerando-se o pouco material literário a respeito da clamidofilose no Brasil, a pesquisa teve como objetivo determinar a presença de anticorpos fixadores de complemento anti-Chlamydophila abortus, correlacionando os resultados obtidos com achados no exame clínico e histórico dos animais, além de alterações nos índices zootécnicos, em especial na esfera reprodutiva, tais como alto índice de repetição de cio, número elevado de abortamentos, elevado número de natimortos, entre outros. Foram testadas para prova de fixação do complemento 220 amostras de soro de ovinos, de 26 propriedades, distribuídas em 19 municípios, com relato de manifestação reprodutiva, obtendo-se 19,55% (43/220) de testes positivos para Chlamydophila abortus, com ocorrência de foco constatada de 61,53%. No geral, a titulação de anticorpos encontrada foi baixa, com título não superior a 64. A frequência de manifestação reprodutiva mais observada foi o aborto, representando 65,12% (28/43) do número total de animais soropositivos, seguido de repetição de cio juntamente com nascimento de cordeiro fraco, com frequência de 6,98% (3/ 43) e, por fim, morte neonatal com 4,65% (2/43), sendo que não houve associação significativa entre animais que foram positivos ao teste e a esses fatores.

Gram-negative osteomyelitis: clinical and microbiological profile

Introduction: Despite the growing interest in the study of Gram-negative bacilli (GNB) infections, very little information on osteomyelitis caused by GNB is available in the medical literature. Objectives and methods: To assess clinical and microbiological features of 101 cases of osteomyelitis caused by GNB alone, between January 2007 and January 2009, in a reference center for the treatment of high complexity traumas in the city of Sao Paulo. Results: Most patients were men (63%), with median age of 42 years, affected by chronic osteomyelitis (43%) or acute osteomyelitis associated to open fractures (32%), the majority on the lower limbs (71%). The patients were treated with antibiotics as inpatients for 40 days (median) and for 99 days (median) in outpatient settings. After 6 months follow-up, the clinical remission rate was around 60%, relapse 19%, amputation 7%, and death 5%. Nine percent of cases were lost to follow-up. A total of 121 GNB was isolated from 101 clinical samples. The most frequently isolated pathogens were Enterobacter sp. (25%), Acinetobacter baumannii (21%) e Pseudomonas aeruginosa (20%). Susceptibility to carbapenems was about 100% for Enterobacter sp., 75% for Pseudomonas aeruginosa and 60% for Acinetobacter baumannii. Conclusion: Osteomyelitis caused by GNB remains a serious therapeutic challenge, especially when associated to nonfermenting bacteria. We emphasize the need to consider these agents in diagnosed cases of osteomyelitis, so that an ideal antimicrobial treatment can be administered since the very beginning of the therapy. (C) 2012 Elsevier Editora Ltda. All rights reserved.

Resistência de bactérias ácido-láticas a bacteriófagos provenientes de unidades de processamento de queijo Coalho

Este trabalho teve como objetivos isolar bacteriófagos de amostras de leite, soro e queijo de Coalho e avaliar a resistência de cepas de Lactobacillus paracasei, pertencentes à Coleção de Micro-organismos de Interesse para a Agroindústria Tropical da Embrapa Agroindústria Tropical, aos fagos isolados. Posteriormente, a resistência destas cepas a fagos específicos para L. paracasei, da Coleção do Instituto de Lactología Industrial - INLAIN (Santa Fe, Argentina), também foi avaliada. As amostras para isolamento dos fagos foram obtidas em quatro unidades de processamento de queijo de Coalho, sendo duas artesanais e duas industriais, localizadas no Estado do Ceará. Para o isolamento dos bacteriófagos, foi empregado o teste de lise celular (spot), enquanto que a resistência das culturas aos fagos foi avaliada pelos testes de capacidade de produção de ácido e avaliação da turbidez. As cepas avaliadas foram resistentes aos bacteriófagos provenientes das unidades de processamento de queijo de Coalho e aos bacteriófagos da Coleção do INLAIN. Os resultados obtidos indicaram que as culturas láticas testadas, resistentes aos bacteriófagos, podem ser utilizadas na composição de fermento lático destinado à elaboração de queijo de Coalho, a partir de leite pasteurizado.

Chemical resistance of the gram-negative bacteria to different sanitizers in a water purification system

Abstract Background Purified water for pharmaceutical purposes must be free of microbial contamination and pyrogens. Even with the additional sanitary and disinfecting treatments applied to the system (sequential operational stages), Pseudomonas aeruginosa, Pseudomonas fluorescens, Pseudomonas alcaligenes, Pseudomonas picketti, Flavobacterium aureum, Acinetobacter lowffi and Pseudomonas diminuta were isolated and identified from a thirteen-stage purification system. To evaluate the efficacy of the chemical agents used in the disinfecting process along with those used to adjust chemical characteristics of the system, over the identified bacteria, the kinetic parameter of killing time (D-value) necessary to inactivate 90% of the initial bioburden (decimal reduction time) was experimentally determined. Methods Pseudomonas aeruginosa, Pseudomonas fluorescens, Pseudomonas alcaligenes, Pseudomonas picketti, Flavobacterium aureum, Acinetobacter lowffi and Pseudomonas diminuta were called in house (wild) bacteria. Pseudomonas diminuta ATCC 11568, Pseudomonas alcaligenes INCQS , Pseudomonas aeruginosa ATCC 15442, Pseudomonas fluorescens ATCC 3178, Pseudomonas picketti ATCC 5031, Bacillus subtilis ATCC 937 and Escherichia coli ATCC 25922 were used as 'standard' bacteria to evaluate resistance at 25°C against either 0.5% citric acid, 0.5% hydrochloric acid, 70% ethanol, 0.5% sodium bisulfite, 0.4% sodium hydroxide, 0.5% sodium hypochlorite, or a mixture of 2.2% hydrogen peroxide (H2O2) and 0.45% peracetic acid. Results The efficacy of the sanitizers varied with concentration and contact time to reduce decimal logarithmic (log10) population (n cycles). To kill 90% of the initial population (or one log10 cycle), the necessary time (D-value) was for P. aeruginosa into: (i) 0.5% citric acid, D = 3.8 min; (ii) 0.5% hydrochloric acid, D = 6.9 min; (iii) 70% ethanol, D = 9.7 min; (iv) 0.5% sodium bisulfite, D = 5.3 min; (v) 0.4% sodium hydroxide, D = 14.2 min; (vi) 0.5% sodium hypochlorite, D = 7.9 min; (vii) mixture of hydrogen peroxide (2.2%) plus peracetic acid (0.45%), D = 5.5 min. Conclusion The contact time of 180 min of the system with the mixture of H2O2+ peracetic acid, a total theoretical reduction of 6 log10 cycles was attained in the water purified storage tank and distribution loop. The contact time between the water purification system (WPS) and the sanitary agents should be reviewed to reach sufficient bioburden reduction (over 6 log10).

Infecções de corrente sanguínea por bactérias multirresistentes em UTI de tratamento de queimados: experiência de 4 anos

INTRODUÇÃO: O conhecimento do perfil de resistência aos antibióticos das bactérias de um nosocômio é essencial para orientar tratamento adequado dos pacientes. Isso é especialmente importante para os pacientes mais graves, já que o tratamento deve ser instituído antes do resultado das culturas. O objetivo deste estudo foi analisar o perfil das bactérias multirresistentes encontradas nas hemoculturas de pacientes admitidos na Unidade de Tratamento Intensivo (UTI) da Unidade de Queimados do Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina da Universidade de São Paulo. MÉTODO: Foram analisados 178 pacientes internados na UTI para tratamento de queimados, no período de 2009 a 2011, sendo 131 do sexo masculino, com média de idade de 29,2 anos. RESULTADOS: Entre os pacientes analisados, 80 (44,9%) apresentaram hemocultura periférica positiva, sendo 66 (82,5%) casos com bactérias multirresistentes. Em 48 pacientes, foram isoladas Staphylococcus sp., que se apresentaram resistentes à oxacilina em 33 deles. Em 11 pacientes, foram isoladas Acinetobacter baumanii, que se apresentaram resistentes a imipenem em 8 casos. Em 19 pacientes, foram isoladas Pseudomonas sp., resistentes a imipenem em 16 casos. Em 10 pacientes foram isoladas Enterobacter sp., resistentes a amicacina e ciprofloxacina em 2 casos. A presença de bactérias multirresistentes não foi associada a maior ocorrência de óbitos, porém foi verificado maior tempo de internação (52,6 dias vs. 36,3 dias para os grupos com e sem bactérias multirresistentes, respectivamente; P = 0,0306). Não foi encontrada interação significante entre superfície corpórea queimada e presença de bactérias MR. CONCLUSÕES: A presença de bactérias multirresistentes é um problema grave, tanto pela prevalência como pela morbidade e mortalidade associadas.

Validação do escore de meningite bacteriana em crianças com pleocitose em São Paulo, Brasil

Introdução. A maioria das crianças com pleocitose tem meningite viral, não bacteriana. O Escore de Meningite Bacteriana (EMB) é uma ferramenta clínica para identificar crianças com pleocitose de muito baixo risco para meningite bacteriana (MB). Crianças são consideradas de muito baixo risco para MB se, de acordo com o EMB, não tiverem nenhum dos cinco parâmetros - presença de convulsões à admissão, neutrófilos no liquor > 1000/mm3, neutrófilos no sangue >10000/mm3, coloração de Gram demonstrando bactérias e proteínas no LCR > 80 mg/dL. Objetivo. Avaliar a performance do EMB para distinguir meningite viral de bacteriana em crianças com pleocitose. Métodos. Foi realizado um estudo de coorte retrospectivo em um departamento de emergência de hospital secundário de ensino. Foram identificadas crianças entre 1 mês e 15 anos incompletos entre 2001 e 2011 com pleocitose (mais de 10 células/mm3 no liquor). Foram calculados sensibilidade, especificidade e valores preditivos positivo e negativo do EMB. Resultados. Foram identificados 497 crianças com meningite, sendo 43 (8,6%; intervalo de confiança [IC] 95% 7-13%) com MB e 454 (91,4%; IC 95% 87-93%) com meningite asséptica. Das 208 crianças de muito baixo risco para MB de acordo com o EMB, nenhuma tinha MB (sensibilidade 100%, IC 95% 92-100%; especificidade 62%, IC 95% 57- 67%; valor preditivo negativo 100%; IC 95% 98-100%). Conclusões. O EMB identificou com acurácia elevada crianças de muito baixo risco para MB. Este modelo pode ser utilizado para ajuda na diferenciação entre MB e meningite viral, principalmente em regiões com cobertura incompleta vacinal para meningococo e pneumococo.