A rapid staining-assisted wood sampling method for PCR-based detection of pine wood nematode Bursaphelenchus xylophilus in Pinus massoniana wood tissue

For reasons of unequal distribution of more than one nematode species in wood, and limited availability of wood samples required for the PCR-based method for detecting pinewood nematodes in wood tissue of Pinus massoniana, a rapid staining-assisted wood sampling method aiding PCR-based detection of the pine wood nematode Bursaphelenchus xylophilus (Bx) in small wood samples of P. massoniana was developed in this study. This comprised a series of new techniques: sampling, mass estimations of nematodes using staining techniques, and lowest limit Bx nematode mass determination for PCR detection. The procedure was undertaken on three adjoining 5-mg wood cross-sections, of 0.5 · 0.5 · 0.015 cm dimension, that were cut from a wood sample of 0.5 · 0.5 · 0.5 cm initially, then the larger wood sample was stained by acid fuchsin, from which two 5-mg wood cross-sections (that adjoined the three 5-mg wood cross-sections, mentioned above) were cut. Nematode-staining-spots (NSSs) in each of the two stained sections were counted under a microscope at 100· magnification. If there were eight or more NSSs present, the adjoining three sections were used for PCR assays. The B. xylophilus – specific amplicon of 403 bp (DQ855275) was generated by PCR assay from 100.00% of 5-mg wood cross-sections that contained more than eight Bx NSSs by the PCR assay. The entire sampling procedure took only 10 min indicating that it is suitable for the fast estimation of nematode numbers in the wood of P. massonina as the prelimary sample selections for other more expensive Bx-detection methods such as PCR assay.

Programa "Escola Segura": Contributo para a avaliação dos impactos do programa "Escola Segura" no Concelho de Portalegre

O trabalho que a seguir se apresenta incide sobre o tema Programa “Escola Segura”, mais especificamente sobre a avaliação/caracterização dos impactos do Programa “Escola Segura” no concelho de Portalegre. Este trabalho de investigação tinha, fundamentalmente, cinco grandes objetivos: - Conhecer o Programa “Escola Segura”; - Caracterizar o Programa “Escola Segura” no concelho de Portalegre; - Caracterizar a parceria no território entre a Escola e o Programa “Escola Segura”; - Verificar qual a articulação entre a Escola e o Programa “Escola Segura”; - Idênticas as relações existentes entre agentes do Programa “Escola Segura”, professores e alunos. Encontra-se dividido em duas partes. Na primeira parte, designada por “Enquadramento Teórico” serão revistas algumas das conceptualizações teóricas, as quais se encontram organizadas por três capítulos distintos: “Relação Educativa”, “Disciplina” e “Enquadramento Legal”. De salientar que neste último se inclui o Despacho Conjunto n. ° 105-A/20051, o qual estabelece o conceito, objetivos, âmbitos e estrutura do Programa “Escola Segura”, e, como tal, é desenvolvido de forma mais aprofundada, visto ser o motor, bem como o assunto principal desta investigação. A estrutura da segunda parte deste trabalho, designada por “Investigação”, assenta na existência de três capítulos: “Enquadramento Metodológico”, “Análise e Interpretação de Dados” e “Considerações Finais”. Após discutidos os principais resultados, são também apresentadas algumas recomendações e sugestões. A metodologia deste estado apresenta duas dimensões: - Uma pequena dimensão quantitativa, que caracteriza a realidade objeto de estudo (caracterização dos diferentes estabelecimentos de ensino, pertencentes ao mesmo Agrupamento, quanto ao número de alunos e professores); - Uma forte dimensão qualitativa, que tem como objetivo evidenciar a opinião, que os diferentes atores possuem do Programa “Escola Segura” (análise e interpretação de entrevistas semi-directivas e de textos). Como instrumentos de recolha de dados evidenciam-se dois: - Entrevistas semi-directivas, elaboradas de acordo com os procedimentos indicados em ESTRELA (1990), destinadas aos docentes e agentes do Programa “Escola Segura”; - Ficha de trabalho, elaborada por nós, dirigida aos alunos, que consistia na construção de um texto sobre o Programa “Escola Segura”. A recolha de informação, nomeadamente a obtida por meio de entrevistas semi-diretivas, de forma a permitir um tratamento/análise mais claro e objetivo, foi trabalhada através de grelhas de análise, por categorias. Esta análise de conteúdo foi feita de acordo com os procedimentos indicados por BARDIN (1977). Os resultados obtidos permitem constatar que o Programa “Escola Segura” se desenvolve de formas distintas, de acordo com o meio em que os estabelecimentos de ensino estão inseridos (rural ou urbano), apesar de assentar na mesma filosofia. Sendo que parte desta situação transcende, de alguma forma, os próprios agentes destacados para o Programa em estudo. /ABSTRACT - “Escola Segura” programe Thefollowing work considers the "Escola Segura" programe, specifying on it’s evaluation/characterization in the city of Portalegre. This work of investigation had, fundamentally, five major goals: - Knowing the “Escola Segura ” program; - Characterizing the “Escola Segura ” program in Portalegre; - Characterizing the partnership between the School and the “Escola Segura" program - Verifying the articulation between the School and the “Escola Segura ” Program - Identifying existing relationships between agents of the “Escola Segura” program, teachers and students. In order to do this, we divided this work in two parts: in the first part, designated by "Enquadramento Teórico ", some of the theoretical concepts are reviewed in three different chapters: “Relação Educativa”, “Disciplina” and “Enquadramento Legal ". In the last we included the Despacho Conjunto n.º 105-A/2005, which establishes the concept, objectives, ambits and structures of the previously mentioned program. As such, it was developed more extensively, for this seems to be the engine as well as the main subject of this investigation. The structure of the second part of this work, designated by "Investigação", also consists of three chapters: “Enquadramento Metodológico", “Análise e interpretação de dados" and "Considerações finais”. Finally, after discussing the main results, we will state recommendations and suggestions. The methodology of this study has two dimensions: - A small quantitative dimension, that characterizes the reality that is the study object (characterization of different schools belonging to the same Scholl Groups, in terms of numbers of students and teachers); - A strong qualitative dimension, with the purpose of stating the opinion that the different actors possess of the “Escola Segura” program (analysis and interpretation of semi-directive interviews and texts). We will focus on two instruments of data sampling: - Semi-directive interviews, elaborated in agreement with the suitable procedures in STAR (1990), destinated to teachers and agents of the “Escola Segura” Program; - A work sheet directed to the students, that we developed, which consisted in elaborating a text about the aforementioned program. Data sampling, obtained through semi-directive interviews in order to allow a clearer and more objective treatment and analysis, was developed through analysis sheets divided into categories. This content analysis was made in agreement with the suitable procedures by BARDIN (1977). The obtained results allow to verify that the “Escola Segura” program develops in distinct ways, according to which environment schools are inserted in (rural or urban), even though it is based on the same philosophy. Part of this situation even transcends, in a way, the indicated agents for the studied program

Relação homem e atmosfera sob a objectiva de novas tecnologias

Os métodos volumétricos de recolha de amostras de ar constituem os métodos dominantes atualmente para a monitorização de aeroalergenos, sendo a metodologia “Hírst” a dominante para a monitorização do pólen atmosférico. Recentemente têm surgido alguns avanços metodológicos nesta área combinando tecnologias bioquímicas e imunológicas pelo que se empreendeu este estudo a fim de comparar uma tecnologia “Ciclone”, desenvolvida no âmbito de um projeto europeu do programa LIFE (LIFE05 ENV/F/000068), com o referido método padrão quanto à eficiência de captação do pólen atmosférico e à deteção de aeroalergenos polínicos. Métodos: Foram efetuadas amostragens do conteúdo polínico atmosférico dos períodos de polinização dos anos 2006 e 2007 mediante um coletor tipo “Hirst” (Burkard® Seven Day Recording Volumetric Spore Trap®) e um coletor tipo “Ciclone” (AeoluS®, Coriolis ® da Bertin Technologies), colocados lado a lado. Foram instalados sobre uma plataforma meteorológica situada no centro da cidade de Évora, 17m acima do nível do solo. As amostras foram analisadas de acordo com os protocolos estabelecidos para cada método. De forma complementar foi realizada uma correlação dos dados obtidos com os registos de inquéritos sintomatológicos efetuados por voluntários das consultas externas de Imunoalergologia do hospital do Espírito Santo em Évora. Todos aqueles que apresentaram queixas respiratórias durante 0 período primaveril efetuaram testes cutâneos em “Prick” modificado aos aeroalergenos mais frequentes na região, a fim de se determinar o respetivo Perl de sensibilidades. Resultados: Esperou-se com este estudo testar a eficácia de uma nova metodologia para deteção e análise de bioaerossóis, comparativamente com a metodologia padrão e com a sua relação sintomatologia atópica respiratória. /ABSTRACT - Nowadays volumetric methods for bioaerosols sampling constitute the main methods to monitor the aeroallergens whereas “Hirst" methodology is the most dominant method to monitor airborne pollen. Recently some methodological advances have been introduced in this area matching biochemical and immunological technologies and so a study was accomplished in order to compare a "Cyclone” technology, developed under the scope of a European project - the LFE program -, with the mentioned standard method in terms of efficiency of airborne pollen sampling and detection of aeroallergens. Methods: Air samples from the outdoor environment were collected during the pollination period, along the year 2006 and 2007 with a "Hirst"-t3pe collector (Burkard® Seven Day Recording Volumetric Spore Trap®) and a "Cyclone"-type collector (Aeolus®, Coriolis® Bertin Technologies), placed side by side. They were installed on a meteorological platform situated at the center of Évora, 17m above ground level. Samples were analyzed according to the established protocols by each method. In a complementary way a data correlation was done between the symptomatologic inquiries fiom volunteers of the Immunoallergology external consultations at the Hospital Espírito Santo, in Évora. Everyone declaring breathing complaints during the spring season had done modified skin 'Trick" tests to the most usual aeroallergens of the region Results: It is waited from this study to test the efficiency of a new methodology for detection and analysis of bioaerossols, comparatively with the standard methodology and and its relation with the atopic simptomatologic breathing