Bursaphelenchus antoniae sp. n. (Nematoda: Parasitaphelenchidae) associated with Hylobius sp. from Pinus pinaster in Portugal

Bursaphelenchus antoniae sp. n. is described and illustrated. Dauer juveniles were isolated from the body of the large pine weevil, Hylobius sp., collected from maritime pine (Pinus pinaster) stumps, in Portugal. Bursaphelenchus antoniae sp. n. was reared and maintained in P. pinaster wood segments and on Petri dish cultures of the fungi Botrytis cinerea and Monilinia fructicola. The new species is characterised by a relatively small body length of ca 583 μm (females) and 578 μm (males), a lateral field with two incisures, presence of a small vulval flap and a conoid female tail with a rounded or pointed terminus. Males have stout spicules with a disc-like cucullus and seven caudal papillae arranged as a single midventral precloacal papilla, one precloacal pair and two postcloacal pairs. In the character of the lateral field, B. antoniae sp. n. comes close to B. abietinus, B. rainulfi and B. hylobianum, whilst spicule characters place it within the piniperdae-group sensu Ryss et al. Morphologically, B. antoniae sp. n. is closest to B. hylobianum; the spicules of these two species having flattened, wing-like, alae on the distal third of the lamina. Bursaphelenchus antoniae sp. n. is distinguished from B. hylobianum on the arrangement of the caudal papillae (two vs three pairs). ITS-RFLP profiles and the failure to hybridise support the separation of the two species. Phylogenetic analysis of the new species, based on the 18S rDNA sequence, supports the inclusion of this new species in the B. hylobianum-group sensu Braasch. Sequence analysis of the 28S rDNA D2/D3 domain did not place the new species in a definite group.

Progress in the use of scanning electron microscopy (SEM) applied to the taxonomy of the genus Bursaphelenchus (Nematoda: Parasitaphelenchidae)

The scanning electron microscope (SEM) has been a major tool in detailed morphological observations of plant parasitic nematodes during the last 30 years, efficiently complementing light microscopical (LM) studies. Nematodes are extremely difficult to observe and characterize due to their small size (aprox. 1 mm long) and paucity of morphological characters, so detailed surface observations of several organs and nematode regions are of the highest value. Among plant parasitic nematodes, one of the most devastating species is the “pinewood nematode” (PWN), Bursaphelenchus xylophilus, which has been a major problem for forest species, and in particular pines, in Asia (Japan, China, Korea) and has been recently detected in the European Union (Portugal). B. xylophilus belongs to a closely related, morphologically similar group of species, within the genus Bursaphelenchus, and designated by the “xylophilus group”. SEM has become a crucial tool in observing several genital characters of males and females, such as male genital papillae, male copulatory spicules, female vulval flap and female genital papillae.s In this presentation, we will show how SEM has been utilized to observe and characterize the shape of the vulval flap, the presence/ absence of papillae near the flap, and confirm the presence and the arrangement of the male genital papillae. LM is also used in this work to show its value as a complementary tool to SEM, in both genital characteristics and other, general, characters of the genus Bursaphelenchus, such as the male bursa and cephalic region.

Bursaphelenchus pinophilus Brzeski & Baujard, 1997 (Nematoda: Parasitaphelenchinae) associated with nematangia on Pityogenes bidentatus (Herbst, 1783) (Coleoptera: Scolytinae), from the Czech Republic

The occurrence of Bursaphelenchus species in the Czech Republic is poorly known, the first report of the genus being made by Kubátová et al. (2000) who reported the association of B. eremus with the hyphomycetous microfungus, Esteya vermicola, and the bark beetle, Scolytus intricatus, collected from Quercus robur, in central Bohemia. To date, four other species have been reported from the country, namely B. fungivorus (Braasch et al., 2002), B. hofmanni (see Braasch, 2001), B. mucronatus (see Braasch, 2001) and B. vallesianus (Gaar et al., 2006). More recently, a survey for Bursaphelenchus species associated with bark- and wood-boring insects in the Czech Republic identified B. pinophilus Brzeski & Baujard, 1997 from the Moravia region. Although this represents a new country record, it was also associated with nematangia on the hind wings of a new insect vector. A total of 404 bark- and wood-boring insects were collected from declining or symptomatic trees and screened for the presence of Bursaphelenchus. Bark and longhorn beetles were captured manually after debarking parts of the trunk displaying symptoms of insect attacks. Longhorn beetle larvae were also collected together with logs cut from the trunk. Logs were kept at room temperature in the laboratory until insect emergence. Each adult insect was individually dissected in water and examined for nematodes. All nematodes resembling dauer juveniles of Bursaphelenchus were collected and identified by molecular characterisation using a region of ribosomal DNA (rDNA) containing the internal transcribed spacer regions ITS1 and ITS2. ITS-RFLP analyses using five restriction enzymes (AluI, HaeIII, HinfI, MspI, RsaI) were performed to generate the species-specific profile according to Burgermeister et al. (2009). Species identification was also confirmed by morphological data after culture of the dauers on Botrytis cinerea Pers. ex Ft., growing in 5% malt extract agar. During this survey, only species belonging to the Curculionidae, subfamily Scolytinae, revealed the presence of nematodes belonging to Bursaphelenchus. Dauers of this genus were found aggregated under the elytra in nematangia formed at the root of the hind wings (Fig. 1). The dauers were identified from 12 individuals of Pityogenes bidentatus (Herbst, 1783) (Coleoptera: Scolytinae) collected under the bark of Pinus sylvestris trunks. Each insect carried ca 10-100 dauers. The ITS-RFLP patterns of the dauers so obtained confirmed the identification of B. pinophilus associated with this insect species. Bursaphelenchus pinophilus has been found mainly in Europe and has been reported from various countries such as Poland (Brzeski & Baujard, 1997), Germany (Braasch, 2001), and Portugal (Penas et al., 2007). The recent detection of this species associated with dead P. koraiensis in Korea (Han et al., 2009) expands its geographical distribution and potential importance. It has been found associated only with Pinus species, but very little is known about the insect vector. The bark beetle, Hylurgus ligniperda, was initially suggested as the insect vector by Pe-nas et al. (2006), although the nematode associated with this insect was later reclassified as B. sexdentati by morphological and molecular analysis (Penas et al., 2007). According to the literature, P. bidentatus has been cited as a vector of Ektaphelenchus sp. (Kakuliya, 1966) in Georgia, and an unidentified nematode species in Spain (Roberston et al., 2008). Interestingly, B. pinophilus was found in the nematangia formed at the root of the hind wings of P. bidentatus. Although this phenomenon is not so common in other Bursaphelenchus species, B. rufipennis has been found recently in such a structure on the hind wings of the insect Dendroctonus rufipennis (Kanzaki et al., 2008). Although other nematode species (e.g., Ektaphelenchus spp.) are frequently found associated within the same nematangia (see Kanzaki et al., 2008), in this particular case, only dauers of B. pinophilus were identified. The association between B. pinophilus and P. bidentatus represents the first report of this biological association and the association with the Scolytinae strengthens the tight and specific links between this group of Bursaphelenchus species and members of the Scolytinae (Ryss et al., 2005).

Morphobiometric and molecular characterization of Bursaphelenchus Fuchs, 1937 (Nematoda: Aphelenchoididae) species associated with Pinus pinaster Ainton in Portugal

Abstract - The genus Bursaphelenchus comprises almost 100 species mainly from the northern hemisphere, with conifers as the most important hosts. Among the various nematode species, the pine wood nematode (PWN), Bursaphelenchus xylophilus, is the casual agent of pine wilt disease (PWD), and the most important forest pest for pines worldwide, classified as an A1 quarantine organism within the European Union. In 1999 this nematode was detected for the first time in Portugal and Europa associated with maritime pine, Pinus pinaster. Following detection, a national program denominated "Programa Nacional de Luta contra o Nemátodo da Madeira do Pinheiro" (PROLUNP) was created to, among other objectives, determine the distribution of the PWN and its associated vector(s) and host(s), and therefore intensive surveys covering the entire country were conducted with thousands of wood samples and suspected insects being analyzed. This thesis presents the listing, distribution, frequency and the insects associated with Bursaphelenchus species found associated with maritime pine in Portugal, identifying and characterizing the various species by morphological, biometrical and molecular biology (ITS-RFLP and rDNA sequencing analysis) techniques. To achieve the objectives, a total of 4813 maritime pine wood samples and 3294 insects from 22 species and six families were individually analyzed. A total of nine Bursaphelenchus species were found, namely: B. antoniae, B. hellenicus, B. leoni, B. mucronatus, B. pinasteri, B. sexdentati, B. teratospicularis, B. tusciae and B. xylophilus, all of them (with the exception of B. xylophilus) being new records for Portugal. Some of the species appear to have a widespread distribution, such as B. leoni, B. teratospicularis and B. tusciae while others were very rarely found and apparently have a localized distribution range within the country, namely B. antoniae and B. mucronatus. The majority of the species is characteristic of the Mediterranean region and can also be found in countries such as Spain, Italy and Greece, reflecting the affinity of our fauna with those locations. The association of B. hellenicus and B. tusciae with maritime pine is here reported for the first time. Six of the Bursaphelenchus species were also found associated with insects, mainly from the family Scolytidae (Coleoptera). Some of these interactions were described for the first time, namely: B. hellenicus with both Ips sexdentatus and Hylurgus ligniperda, B. sexdentati with both H. ligniperda and Orthotomicus erosus and B. tusciae with H. ligniperda. The exclusive association of B. xylophilus with the cerambycid Monochamus galloprovincialis was also confirmed. The nematode's dauer juveniles were usually found in low numbers in the insect vectors (ca 10-100 per insect), although for B. xylophilus a few thousand specimens per insect were sometimes found. The location of the dauer juveniles differed according to the species, although they were more common under the elytra and wings of the adult insects. A species new to science was detected and formally described as B. antoniae, associated with Hylobius sp. (Coleoptera; Curculionidae) beetles. Morphologically, this new species is very similar to B. hylobianum, although it's distinct ITS-RFLP molecular pattern (with only the enzyme Haelll producing comparable restriction bands) and the failure of hybridization supported the two species as distinct entities. Additional phylogenetic analysis of the 18S rDNA sequence further supported the taxonomical proximity of B. antoniae with B. hylobianum. Concerning the PWN, detailed studies on the development and morphology of B. xylophilus were conducted, and comparative measurements of field-collected and laboratory-maintained populations demonstrated that nematodes from the second group displayed larger size in all morphometric parameters, which could derive from more adequate conditions of nourishment and/or temperature. Taxonomical studies on the development stages of B. xylophilus confirmed the existence of four propagative juvenile stages (J1,J2,J3 and J4), an adult stage with both sexes and two dispersal stages (jIII e jIV), with the measurements of the gonad length allowing the separation of the propagative stages. It is hoped that the acquired knowledge will be useful on future surveys of nematodes of the Bursaphelenchus genus collected from either wood material or insect vectors, and facilitate the correct distinction and identification of the various species which are now known to occur. ### Resumo - 0 género Bursaphelenchus compreende quase 100 espécies, distribuídas sobretudo nos países do hemisfério norte do globo terrestre. Embora algumas espécies já tenham sido detectadas em plantas herbáceas, os hospedeiros vegetais mais comuns deste género são as coníferas, particularmente pinheiros. 0 nemátode da madeira do pinheiro (NMP), Bursaphelenchus xylophilus, é considerado a espécie mais importante deste género uma vez que é o agente causal da doença da murchidão dos pinheiros ("pine wilt disease"). Originário dos Estados Unidos, onde não causa grande impacte, o NMP foi introduzido em alguns países da Ásia (China, Japão, Coreia e Taiwan) e mais recentemente na Europa (Portugal). Nestas regiões é responsável pela destruição de milhares de hectares de coníferas, assumindo uma elevada importância económica. Em Portugal, depois da sua detecção em 1999, associado a Pinus pinaster, foi implementado um programa nacional "Programa Nacional de Luta contra o Nemátodo da Madeira do Pinheiro" (PROLUNP) que permitiu determinar a área afectada pela praga (a sul do rio Tejo, península de Setúbal) bem como definir e implementar estratégias de controlo e prevenção da disseminação do NMP a outras zonas de Portugal. Recentemente, em Junho de 2008, foi confirmada a presença de B. xylophilus em outras regiões de Portugal levando as autoridades oficiais a definir todo o território continental como zona afectada e de restrição. As prospecções intensivas realizadas nos últimos anos incluíram a recolha e análise de milhares de amostras de madeira de pinheiro bem como de insectos associados ao pinheiro bravo conduzindo à identificação de várias espécies de Bursaphelenchus. Assim, os estudos conduzidos neste trabalho tiveram como objectivos efectuar uma caracterização morfológica, biométrica e molecular das espécies associadas a P. pinaster em Portugal bem como a sua distribuição geográfica e abundância. Os estudos biométricos foram realizados com populações extraídas directamente do meio natural. Foi ainda realizada uma pesquisa que permitiu identificar os insectos a que estão associadas essas espécies, os seus possíveis vectores. Foram analisadas no total 4813 amostras de P. pinaster e 3294 insectos (22 espécies pertencentes a seis famílias diferentes). Foram identificadas um total de nove espécies: B. antoniae n. sp., B. hellenicus, B. leoni, B. mucronatus, B. pinasteri, B. sexdentati, B. teratospicularis, B. tusciae e B. xylophilus. Foram realizados estudos morfológicos e biométricos de todas as espécies com excepção de B. mucronatus; o reduzido número de exemplares encontrados em apenas uma amostra foram utilizados para efectuar o diagnóstico molecular desta espécie (ITS-RFLP). Apesar de ter havido, sempre que possível, a confirmação molecular, na maioria dos casos a caracterização morfológica e biométrica permitiu a correcta identificação das espécies. Contudo, foi imprescindível a análise molecular em algumas amostras, nomeadamente para a identificação de B. xylophilus e B. sexdentati; dada a grande semelhança entre B. xylophilus e B. mucronatus e tendo sido encontradas algumas populações de B. xylophilus que possuíam fêmeas com cauda mucronada, foi necessária a realização da confirmação molecular. Com excepção de B. xylophilus, todas as outras espécies foram reportadas pela primeira vez em Portugal. Juntamente com B. xylophilus, B. pinasteri foi a espécie encontrada nas amostras de madeira de pinheiro com maior frequência. Algumas destas espécies como B. leoni, B. teratospicularis e B. tusciae foram reportadas em diferentes localidades do norte, centro e sul de Portugal, apresentando uma vasta distribuição geográfica; este resultado está em consonância com a forte associação destas espécies a climas mediterrânicos tal como acontece em Espanha, França, Itália e Grécia. Em oposição, espécies como B. antoniae e B. mucronatus foram encontradas apenas numa ocasião na região centro (Leiria) e norte (Figueira da Foz) do país, respectivamente. Bursaphelenchus mucronatus é igualmente pouco frequente em Espanha onde ocorre sobretudo na região norte, na Galiza. Esta espécie preferirá climas mais frios, ocorrendo com uma maior frequência nas regiões de latitude norte; esta análise é corroborada pela presença constante em países como Alemanha, Finlândia, França, Noruega, Rússia e Suécia. A nível mundial são descritas neste trabalho pela primeira vez as associações das espécies B. hellenicus e B. tusciae ao hospedeiro vegetal P. pinaster.

Avaliação de parâmetros respiratórios por espirometria em trabalhadores da panificação da Cidade de Portimão

Desde os tempos da Roma Antiga que se associam problemas respiratórios a trabalhadores da panificação, em parte, provocados pela inalação de substâncias de alto peso molecular como farinhas. A espirometria é uma forma simples de estudar a ventilação pulmonar na qual se obtêm informações acerca de uma possível obstrução, restrição ou situação mista. Pretendeu-se avaliar a Capacidade Vital Forçada, o Volume Expiratório Máximo no Primeiro Segundo e a respectiva razão entre eles, recorrendo à espirometria em trabalhadores da panificação da cidade de Portimão, que aceitaram participar voluntariamente no estudo. A amostra final contemplou 48 trabalhadores. Através da análise dos resultados ficou patente que os trabalhadores com mais de 1O anos de serviço sofrem alterações na função respiratória estatisticamente significativa em relação aos valores de referência (p<0,05). Pode-se, por isso, afirmar que na cidade de Portimão, existe uma relação directa, numa perspectiva a longo prazo, entre a exposição à farinha e a obstrução respiratória. ABSTRACT; Since Rome Ancient times there has been an association between respiratory problems and bakery employees, in part because of the inhalation of substances of high molecular weight such as flours. Spirometry is a simple way to study pulmonary ventilation, through which one can obtain information about a possible obstruction, restriction or mixed situation. The aim of this study is to evaluate the Forced Vital Capacity, Forced Expiratory Volume in One Second and the ratio between them, using spirometry with volunteering bakery workers in the city of Portimão. The final sample compromised 48 workers. lt was evident that individuals working more than 1O years have statistically significant changes in respiratory function (p<0,05), when compared with reference values leading to the conclusion that in the city of Portimão, there is a direct relationship, in a long-term perspective, between exposure to flour and respiratory obstruction.

Utilização de glúten de trigo na alimentação de dourada, Sparus aurata (Linnaeus, 1758)

A incorporação de fontes proteicas alternativas à farinha de peixe na alimentação de espécies piscícolas tem sido objecto de variados estudos no âmbito da nutrição animal. Neste contexto realizou-se o presente trabalho, cujo objectivo foi determinar o nível de substituição ideal de farinha de peixe por glúten de trigo na alimentação de dourada. Foram realizados dois ensaios, um de crescimento e um de digestibilidade. O ensaio de crescimento efectuou-se para determinar qual o nível máximo de substituição sem que os animais apresentassem diferenças significativas em termos de taxa de crescimento. O ensaio de digestibilidade teve como principal objectivo determinar qual das dietas testadas proporcionaria melhores valores de utilização digestiva por parte dos animais. Tendo em conta os resultados dos ensaios e as condições experimentais em que se realizaram, verificou-se que a substituição até 40% não afecta significativamente o desempenho zootécnico das douradas. ABSTRACT; The incorporation of alternative protein sources in fish diets has been the aim of many scientific experiments in animal nutrition. ln this study, the main objective was to evaluate the ideal level of wheat gluten incorporation in substitution of fishmeal in diets for gilthead sea bream (Sparus aurata L). To reach this objective, two experiments were carried out, in which growth and digestibility were studied. The aim of the growth experiment was to evaluate the maximum level of fish meal substitution by wheat gluten (20%, 40%, 60% and 80%), without affecting significantly the animals growth rate. The digestibility experiment took place to evaluate which animals presented better food utilization with the tested diets (20%, 40%, 60% and 80%). Observing the results of these two experiments, it was concluded that the substitution until 40% did not affect significantly the performance of the fishes.

O envelhecimento ativo num clube de saúde sénior - um projeto de intervenção na comunidade

Tema e referencial teórico: Atendendo ao acentuado envelhecimento da população portuguesa, o enfermeiro assume um papel crucial na promoção do Envelhecimento Ativo na comunidade. Este projeto foi implementado numa Unidade Cuidados na Comunidade, num Clube de Saúde Sénior, tendo subjacente um diagnóstico da situação. Caraterizou-se a população alvo e identificaram-se os seus interesses, contribuindo para a elaboração do plano de atividades. Objetivo: Promover o Envelhecimento Ativo num Clube de Saúde Sénior. Metodologia: Metodologia do Planeamento em Saúde. Resultados: A população alvo é constituída por 43 pessoas, maioritariamente mulheres idosas, com baixa escolaridade. Apesar de apresentarem défices quanto ao estado de saúde mental e na realização das atividades de vida, são maioritariamente independentes. O plano de atividades foi construído tendo em conta as sugestões recolhidas. Conclusões: Salienta-se a importância da promoção do Envelhecimento Ativo, como estratégia facilitadora da promoção da saúde, manutenção da independência e autonomia e participação ativa na comunidade; ABSTRACT: Theme and Theoretical: Attending the accentuated aging of the Portuguese population, Nurses assume a key role in the promotion of active ageing in the community. This project was implemented in a Unit Care in the Community, more properly in a Senior Health Club, having underlying a diagnosis of the situation. The target population has been characterized and their interests have been identified, contributing, this way to the development of the Activity Plan. Objective: Promote active ageing in a Senior Health Club Methodology: Methodology of health planning. Results: The target population consists of 43 people, mostly elderly women, with low education. Despite having deficits in them state of health and mental in the realization of life activities, mostly they are independent. The Activities’ Plan was built taking into a count the collected suggestions. Conclusion: It emphasizes the importance of active ageing promotion maintenance the independence and autonomy, and active participation on the community.

Efeito de um programa de treino em seco na postura de protração dos ombros em atletas de natação sincronizada e natação pura desportiva

Objetivo: O objetivo deste estudo foi avaliar os efeitos de um programa de treino em seco na correção da postura dos ombros em protração em jovens nadadoras de natação sincronizada e natação pura. Metodologia: Este estudo segue uma metodologia quase-experimental. A amostra foi constituída com 26 nadadoras (dos 12 aos 17 anos),as quais avaliámos antes e após a realização de 8 semanas de treino de reposicionamento escapular em conjunto com um treino de fortalecimento da cintura escapular. Em cada avaliação as atletas foram avaliadas de ambos os lados, em três variáveis (distância acromial, bordo superior e bordo inferior). Resultados: Foi observada a diminuição da distância acromial no ombro dominante e não dominante, após as 8 semanas de intervenção no trabalho fora de água. Conclusão: Concluímos que o tipo de treino efetuado é uma boa opção para a correção da postura de protração dos ombros para ambas as disciplinas aquáticas; Effect of a dry training program at shoulder protraction posture in athletes Synchronized Swimming and Swimming Abstract: Objective: The objective of this study was to understand the effects of a dry training program in correcting the posture of protraction on shoulders in young swimmers of synchronized swimming and swimming. Methodology: The sample has 26 swimmers between 12 and 17 years old, who held two initial assessments to evaluate the effect of daily training and conducted a third evaluation after 8 weeks which applied a scapular repositioning training in conjunction with a training strengthening the shoulder girdle. In each evaluation, the athletes were measured on both sides, on three variables (acromial distance, upper kibler and lower kibler) through three different positions to avoid influencing the results. Results: We observed a decrease in the distance on the acromial dominant shoulder and not dominant, after 8 weeks of intervention in the work out of the water. Conclusion : We conclude that this type of workout is a good option for the correction of protraction posture of shoulders for both aquatic disciplines.

Clínica de animais exóticos

Este relatório de estágio descreve as atividades desenvolvidas no estágio curricular e desenvolve o tema ―Inseminação artificial em Python regius‖. O estágio de seis meses foi realizado na Exoclinic – clínica veterinária de aves e exóticos, permitindo consolidar conhecimentos através da prática clínica e agregar-lhes a área da medicina de animais exóticos, dedicando especial atenção à medicina de répteis. Desenvolvem-se os casos mais frequentes: medicina preventiva nas várias classes de animais, patologia dentária em roedores e lagomorfos, doença do bico e das penas dos psitacídeos e anorexia em répteis. Na monografia aborda-se a anatomofisiologia e o comportamento reprodutivos das cobras e a sua influência no maneio reprodutivo em cativeiro, métodos de avaliação de reprodutores e técnicas de inseminação artificial. Realizou-se um ensaio prático com seis animais, realizando colheitas de sémen, avaliação de alguns parâmetros do sémen, controlo folicular por ecografia e inseminação artificial. Apresentam-se os métodos, os resultados e respetiva discussão; Abstract: Exotic animal medicine This traineeship report describes the activities during the traineeship and develops the theme "Artificial insemination in Python regius." The six-month internship was held in Exoclinic - clínica veterinária de aves e exóticos, consolidating knowledge through clinical practice and adding the medical field of exotic animals, with special attention to reptiles. The most frequent clinical cases are developed: preventive medicine in the various classes of animals, dental pathology in rodents and lagomorphs, Psittacine Beak and Feather Disease in birds and anorexia in reptile. The monograph addresses the anatomy, physiology and reproductive behavior of snakes and their influence on reproductive management in captivity, methods for reproductors selection and evaluation and artificial insemination techniques. Implementation of a field trial with six animals, performing semen crops and evaluation of some of its parameters, follicular monitoring by ultrasound and artificial insemination. Methods and results are presented and discussed.