Morphobiometric and molecular characterization of Bursaphelenchus Fuchs, 1937 (Nematoda: Aphelenchoididae) species associated with Pinus pinaster Ainton in Portugal

Abstract - The genus Bursaphelenchus comprises almost 100 species mainly from the northern hemisphere, with conifers as the most important hosts. Among the various nematode species, the pine wood nematode (PWN), Bursaphelenchus xylophilus, is the casual agent of pine wilt disease (PWD), and the most important forest pest for pines worldwide, classified as an A1 quarantine organism within the European Union. In 1999 this nematode was detected for the first time in Portugal and Europa associated with maritime pine, Pinus pinaster. Following detection, a national program denominated "Programa Nacional de Luta contra o Nemátodo da Madeira do Pinheiro" (PROLUNP) was created to, among other objectives, determine the distribution of the PWN and its associated vector(s) and host(s), and therefore intensive surveys covering the entire country were conducted with thousands of wood samples and suspected insects being analyzed. This thesis presents the listing, distribution, frequency and the insects associated with Bursaphelenchus species found associated with maritime pine in Portugal, identifying and characterizing the various species by morphological, biometrical and molecular biology (ITS-RFLP and rDNA sequencing analysis) techniques. To achieve the objectives, a total of 4813 maritime pine wood samples and 3294 insects from 22 species and six families were individually analyzed. A total of nine Bursaphelenchus species were found, namely: B. antoniae, B. hellenicus, B. leoni, B. mucronatus, B. pinasteri, B. sexdentati, B. teratospicularis, B. tusciae and B. xylophilus, all of them (with the exception of B. xylophilus) being new records for Portugal. Some of the species appear to have a widespread distribution, such as B. leoni, B. teratospicularis and B. tusciae while others were very rarely found and apparently have a localized distribution range within the country, namely B. antoniae and B. mucronatus. The majority of the species is characteristic of the Mediterranean region and can also be found in countries such as Spain, Italy and Greece, reflecting the affinity of our fauna with those locations. The association of B. hellenicus and B. tusciae with maritime pine is here reported for the first time. Six of the Bursaphelenchus species were also found associated with insects, mainly from the family Scolytidae (Coleoptera). Some of these interactions were described for the first time, namely: B. hellenicus with both Ips sexdentatus and Hylurgus ligniperda, B. sexdentati with both H. ligniperda and Orthotomicus erosus and B. tusciae with H. ligniperda. The exclusive association of B. xylophilus with the cerambycid Monochamus galloprovincialis was also confirmed. The nematode's dauer juveniles were usually found in low numbers in the insect vectors (ca 10-100 per insect), although for B. xylophilus a few thousand specimens per insect were sometimes found. The location of the dauer juveniles differed according to the species, although they were more common under the elytra and wings of the adult insects. A species new to science was detected and formally described as B. antoniae, associated with Hylobius sp. (Coleoptera; Curculionidae) beetles. Morphologically, this new species is very similar to B. hylobianum, although it's distinct ITS-RFLP molecular pattern (with only the enzyme Haelll producing comparable restriction bands) and the failure of hybridization supported the two species as distinct entities. Additional phylogenetic analysis of the 18S rDNA sequence further supported the taxonomical proximity of B. antoniae with B. hylobianum. Concerning the PWN, detailed studies on the development and morphology of B. xylophilus were conducted, and comparative measurements of field-collected and laboratory-maintained populations demonstrated that nematodes from the second group displayed larger size in all morphometric parameters, which could derive from more adequate conditions of nourishment and/or temperature. Taxonomical studies on the development stages of B. xylophilus confirmed the existence of four propagative juvenile stages (J1,J2,J3 and J4), an adult stage with both sexes and two dispersal stages (jIII e jIV), with the measurements of the gonad length allowing the separation of the propagative stages. It is hoped that the acquired knowledge will be useful on future surveys of nematodes of the Bursaphelenchus genus collected from either wood material or insect vectors, and facilitate the correct distinction and identification of the various species which are now known to occur. ### Resumo - 0 género Bursaphelenchus compreende quase 100 espécies, distribuídas sobretudo nos países do hemisfério norte do globo terrestre. Embora algumas espécies já tenham sido detectadas em plantas herbáceas, os hospedeiros vegetais mais comuns deste género são as coníferas, particularmente pinheiros. 0 nemátode da madeira do pinheiro (NMP), Bursaphelenchus xylophilus, é considerado a espécie mais importante deste género uma vez que é o agente causal da doença da murchidão dos pinheiros ("pine wilt disease"). Originário dos Estados Unidos, onde não causa grande impacte, o NMP foi introduzido em alguns países da Ásia (China, Japão, Coreia e Taiwan) e mais recentemente na Europa (Portugal). Nestas regiões é responsável pela destruição de milhares de hectares de coníferas, assumindo uma elevada importância económica. Em Portugal, depois da sua detecção em 1999, associado a Pinus pinaster, foi implementado um programa nacional "Programa Nacional de Luta contra o Nemátodo da Madeira do Pinheiro" (PROLUNP) que permitiu determinar a área afectada pela praga (a sul do rio Tejo, península de Setúbal) bem como definir e implementar estratégias de controlo e prevenção da disseminação do NMP a outras zonas de Portugal. Recentemente, em Junho de 2008, foi confirmada a presença de B. xylophilus em outras regiões de Portugal levando as autoridades oficiais a definir todo o território continental como zona afectada e de restrição. As prospecções intensivas realizadas nos últimos anos incluíram a recolha e análise de milhares de amostras de madeira de pinheiro bem como de insectos associados ao pinheiro bravo conduzindo à identificação de várias espécies de Bursaphelenchus. Assim, os estudos conduzidos neste trabalho tiveram como objectivos efectuar uma caracterização morfológica, biométrica e molecular das espécies associadas a P. pinaster em Portugal bem como a sua distribuição geográfica e abundância. Os estudos biométricos foram realizados com populações extraídas directamente do meio natural. Foi ainda realizada uma pesquisa que permitiu identificar os insectos a que estão associadas essas espécies, os seus possíveis vectores. Foram analisadas no total 4813 amostras de P. pinaster e 3294 insectos (22 espécies pertencentes a seis famílias diferentes). Foram identificadas um total de nove espécies: B. antoniae n. sp., B. hellenicus, B. leoni, B. mucronatus, B. pinasteri, B. sexdentati, B. teratospicularis, B. tusciae e B. xylophilus. Foram realizados estudos morfológicos e biométricos de todas as espécies com excepção de B. mucronatus; o reduzido número de exemplares encontrados em apenas uma amostra foram utilizados para efectuar o diagnóstico molecular desta espécie (ITS-RFLP). Apesar de ter havido, sempre que possível, a confirmação molecular, na maioria dos casos a caracterização morfológica e biométrica permitiu a correcta identificação das espécies. Contudo, foi imprescindível a análise molecular em algumas amostras, nomeadamente para a identificação de B. xylophilus e B. sexdentati; dada a grande semelhança entre B. xylophilus e B. mucronatus e tendo sido encontradas algumas populações de B. xylophilus que possuíam fêmeas com cauda mucronada, foi necessária a realização da confirmação molecular. Com excepção de B. xylophilus, todas as outras espécies foram reportadas pela primeira vez em Portugal. Juntamente com B. xylophilus, B. pinasteri foi a espécie encontrada nas amostras de madeira de pinheiro com maior frequência. Algumas destas espécies como B. leoni, B. teratospicularis e B. tusciae foram reportadas em diferentes localidades do norte, centro e sul de Portugal, apresentando uma vasta distribuição geográfica; este resultado está em consonância com a forte associação destas espécies a climas mediterrânicos tal como acontece em Espanha, França, Itália e Grécia. Em oposição, espécies como B. antoniae e B. mucronatus foram encontradas apenas numa ocasião na região centro (Leiria) e norte (Figueira da Foz) do país, respectivamente. Bursaphelenchus mucronatus é igualmente pouco frequente em Espanha onde ocorre sobretudo na região norte, na Galiza. Esta espécie preferirá climas mais frios, ocorrendo com uma maior frequência nas regiões de latitude norte; esta análise é corroborada pela presença constante em países como Alemanha, Finlândia, França, Noruega, Rússia e Suécia. A nível mundial são descritas neste trabalho pela primeira vez as associações das espécies B. hellenicus e B. tusciae ao hospedeiro vegetal P. pinaster.

Mastite: importância do maneio, ambiente e animal. Plano de prevenção, controlo e impacto na quantidade e qualidade do leite

No presente relatório são caracterizadas e descritas as atividades desenvolvidas durante o estágio curricular na vertente da importância do maneio, ambiente e animal no controlo das mastites. Contempla ainda uma revisão bibliográfica e estudo de caso sobre a problemática das mastites na exploração. No estudo de caso procurou avaliar-se a influência do maneio, ambiente e animal no controlo das mastites e o impacto que estas representam na quantidade e na qualidade do leite. Foi ainda realizado estudo em 30 bovinos, identificados como animais problema, com recolha de amostras de leite para análise de antibiograma com deteção de agente. Foi implementado um plano de prevenção e controlo de mastites que consistiu na implementação de medidas de higiene e maneio dos animais, implementação de operações de rotinas de ordenha, implementação de medidas preventivas com recurso a vacinação e estabelecimentos de protocolos de tratamentos para os animais com patologias associadas às mastites. Os resultados obtidos foram muito positivos, diminuindo de forma drástica a incidência de mastites de 20% para 5% anual e consequentemente, uma melhoria considerável da quantidade de leite (22 para 33 L/vaca/dia) e na qualidade do leite (CCS <300 000 cel/mL) produzido; Abstract: Mastitis: Importance of management, environment and animal. Plan for the prevention, control and impact on the quantity and quality of milk This report characterize and describe the activities carried out during the traineeship in the aspect of the importance of management, environment and animal in the control of mastitis. There is also a literature and a case study on the problem of mastitis on the farm review. In the case study we sought to evaluate the influence of management, environment and animal in the control of mastitis and the impact that they represent in the quantity and quality of milk. A study was also carried out in 30 cattle, identified as problem animals, with milk samples for antibiotic susceptibility analysis with agent detection. It was implemented a mastitis prevention and control plan with the implementation of hygiene measures and husbandry of animals, implementation of milking routine operations, and implementing preventive measures using vaccination and treatment protocols establishment for animal diseases associated with mastitis. The results were very positive, decreasing dramatically the incidence of 20% mastitis to 5% per year and hence a considerable improvement of the quantity (22 to 33 L/cow/day) and quality ( SCC <300,000 cells/mL) of milk produced.

Prevalência de úlceras de pressão em dois hospitais portugueses: Impacto da Escala de Braden associada a um protocolo de prevenção

As úlceras de pressão constituem um importante problema de saúde pública comum a diversos cenários de cuidados, em todo o mundo, e também em Portugal, nomeadamente para a população mais idosa. O presente estudo teve como objectivos determinar o impacto da escala de Braden associada a um protocolo de prevenção de úlceras de pressão na prevalência destas lesões, assim como, monitorizar o problema das úlceras de pressão em dois hospitais portugueses, em que o Hospital A utiliza estes instrumento e o Hospital 8 não usa esses instrumentos. Foi utilizado o Instrumento de Prevalência de Úlceras de Pressão validado para Portugal na recolha dos dados. Os dados foram obtidos através da observação directa dos doentes. Foram realizadas duas avaliações com um intervalo de três meses em cada hospital. Os resultados encontrados revelaram que as úlceras de pressão constituem um problema de saúde para os dois hospitais observados. No entanto, o Hospital A apresenta menor taxa de prevalência de úlceras de pressão, menor número de úlceras de pressão mais graves, menor possibilidade de um doente adquirir uma úlcera de pressão e maior utilização de medidas preventivas. Os valores encontrados foram estatisticamente significativos para p <0,05. Confirma-se que a utilização da escala de Braden associada a um protocolo de prevenção de úlceras de pressão é uma medida eficaz na redução do número de úlceras de pressão. Para uma maior eficácia deste instrumento será importante a sua utilização como ferramenta de controlo da adequação das medidas preventivas. ABSTRACT; Pressure ulcers are an important public health problem common to several scenarios of care in the world, and also in Portugal, particularly for the elderly. This study aims to determine the impact of the Braden scale associated with a protocol for prevention of pressure ulcers in prevalence of these lesions, as well as monitor the problem of pressure ulcers in two Portuguesa hospitais, the Hospital A uses these instrument and Hospital B doesn’t. It was used the instrument of Prevalence of pressure ulcers validated for Portugal in the data collection. Data were collected through direct observation of patients. There were two assessments with an interval of three months in each hospital. The results showed that the pressure ulcers are a health problem for both hospitals observed. However, the Hospital A provides a lower prevalence rate of pressure ulcers, lower number of pressure ulcers more serious, less possibility of a patient acquiring a pressure ulcer and increased use of preventive measures. The values were statistically significant for p<0.05. lt is confirmed that the use of the Braden scale associated with a protocol for prevention of pressure ulcers is an effective measure in reducing the number of pressure ulcers. For greater efficiency will be important to use it as a tool for monitoring the adequacy of preventive measures.

Programa de vigilância ativa de abortos em explorações de pequenos ruminantes - OviCapAB

A exploração de pequenos ruminantes em Portugal, particularmente da espécie ovina, tem importância económica elevada no Baixo Alentejo, estando registadas 222 explorações, com um total de 77 863 pequenos ruminantes, na área de intervenção da Associação de Agricultores do Campo Branco (AACB). A rusticidade das raças autóctones, que suportam solos pobres e climas áridos, com longos períodos de seca, constituem um meio facilitador da subsistência das populações nesta região. Assim, qualquer alteração do estado sanitário e/ou da produtividade destes animais pode criar graves problemas no rendimento das populações rurais que vivem desta atividade. A eficácia reprodutiva destes efetivos está aquém de permitir uma rentabilidade sustentável das explorações, mas não existem dados sobre os fatores que afetam a fertilidade dos rebanhos. É do conhecimento dos médicos veterinários assistentes das explorações que a prevalência de abortos no Alentejo poderá ser elevada, mas não existe um sistema eficaz de monitorização destas perdas e de identificação dos principais agentes etiológicos envolvidos. De facto, os produtores de pequenos ruminantes têm dificuldade em registar sistematicamente as informações que permitam quantificar as perdas causadas por abortos. Acresce o facto de que alguns dos agentes etiológicos causadores de aborto são potencialmente zoonóticos, pelo que esta problemática tem consequentemente um impacto relevante na saúde pública. Uma incidência baixa de abortos por perdas naturais e esporádicas é inevitável. Alguns autores preconizam que uma taxa de abortos superior a 2% deverá ser sempre investigada. Pelo exposto, é imperativa uma quantificação rigorosa das perdas acima referidas, para que possam ser implementadas medidas de prevenção e de controlo dos abortos nestes efectivos, visando a melhoria da produtividade, rendibilidade e sustentabilidade.

AVALIAR O IMPACTO DAS NOVAS MEDIDAS DE POLÍTICA EDUCATIVA PARA O 1º CICLO DO ENSINO BÁSICO E EDUCAÇÃO DE ADULTOS NA OFERTA LOCAL DOS AMBIENTES DE APRENDIZAGEM (Anos lectivos de 2004-2005 e 2006-2007) O CASO DO CONCELHO DE GAVIÃO

Tendo como principal fio condutor a pergunta de partida (Qual o impacto das novas medidas de política educativa para o 1º Ciclo do Ensino Básico e Educação de Adultos na oferta local dos ambientes de aprendizagem?) procuramos encontrar uma resposta para a problemática na qual se centra esta investigação. A partir desta questão inicial delineámos o corpo da dissertação em duas partes: a primeira referente ao enquadramento teórico e a segunda respeitante ao estudo empírico. No âmbito do enquadramento teórico, procedemos a uma reflexão cruzada entre educação e território, no sentido de perceber as suas potenciais (inter) ligações, bem como à análise de alguns dos normativos que dão suporte legal a esta problemática, finalizando com a apresentação do campo de estudo. Ao nível do estudo empírico, seguimos uma metodologia partilhada (qualitativa/ quantitativa), apoiada essencialmente numa aproximação conceptual ao estudo de caso. Os dados recolhidos, por meio de inquérito por questionários aplicados, permitiram-nos conceber várias leituras do território: Cartografia Institucional do Concelho de Gavião e Cartografia Educacional do Concelho de Gavião referente aos anos lectivos de 2004-2005 e 2006-2007, respectivamente, dado o estudo ter decorrido ao longo de um período de três anos lectivos. Da análise dos dados disponíveis, centramos as nossas conclusões em, pelo menos, duas dimensões totalmente opostas. Por um lado, o novo paradigma de “escola a tempo inteiro” assume, actualmente, neste território um papel preponderante, devolvendo aos ambientes formais de educação uma clara liderança no que concerne à quantidade e diversidade de aprendizagens desenvolvidas; por outro, assistimos a um claro abandono das aprendizagens realizadas em espaços não formais, as quais eram dirigidas quase exclusivamente às faixas etárias mais avançadas, que agora vêm as várias possibilidades de aprender, o que quer que seja, como uma oportunidade cada vez mais distante. Face à problemática em estudo, a nossa dissertação termina com a formulação das sugestões e recomendações que nos parecem mais oportunas.

Ciúme nas relações amorosas de adolescentes: Questões de género e orientação sexual

Este estudo tem como objetivo compreender as diferenças relativamente ao ciúme nas relações amorosas de adolescentes, tendo em conta o género e a orientação sexual. Para tal, foi criado um questionário (Questionário de Ciúme nas Relações Amorosas Adolescentes - QCRAA) que pretende avaliar aspetos do ciúme presentes em relações amorosas adolescentes - Preocupação, Controlo do Comportamento e Comportamentos de Investigação e Agressão. O QCRAA foi aplicado a 316 jovens, tendo sido comparados os resultados em função do género, da orientação sexual, do nível de ensino e da estabilidade da relação amorosa. Os resultados sugerem que as raparigas possuem mais comportamentos de investigação e agressão, e que os níveis de preocupação nas relações amorosas dos/as jovens variam conforme a estabilidade da relação, sendo mais elevados quando a relação não é estável. Neste estudo serão analisados e discutidos os principais resultados obtidos, bem como as suas implicações para a intervenção psicológica na prevenção da violência nas relações amorosas.

PROJETO CONHECER E PREVENIR O VIH: INTERVENÇÃO NA UNIVERSIDADE DE ÉVORA

Portugal, no contexto da Europa Ocidental, é o 3.º país com a mais elevada taxa de incidência por infeção VIH/SIDA [i.e. 13.5/100.000 hab.] (ECDC, 2012). O reconhecimento dos efeitos positivos conseguidos através de parcerias com jovens-adultos, dão voz aos mais novos, empoderando-os na prevenção (UNFPA, 2014). O projeto-piloto de intervenção por pares é uma parceria da Escola Superior de Enfermagem S. João de Deus-Universidade de Évora com a Administração Regional de Saúde, no âmbito das políticas do Ministério da Saúde e Plano Nacional de prevenção e controlo da infeção por VIH Sida. Objetivo: Contribuir para a Prevenção do HIV-SIDA na Comunidade Académica. Método: O projeto assenta em metodologias de trabalho interdisciplinar e interpares como estratégia de promoção da saúde. Constituídas bolsas de voluntários e formados “pares de educadores”. Realizadas intervenções na Universidade de Évora que abrangeram o pessoal docente, não docente e discente. Realizados debates e jogos dobre a temática do VIH. Distribuídos preservativos e feita demonstração do correto uso do mesmo. Entre outras atividades ouve ainda a possibilidade de realizar de forma gratuito e confidencial o teste rápido do VIH. Resultados: De Fevereiro de 2013 a Maio de 2014 foram formados 54 “pares de educadores”. Das intervenções realizadas resultaram 11 debates com a presença de 522 Pessoas, a distribuição de 11017 preservativos masculinos, 950 femininos, 241 Atividades de aconselhamento individual e realização de Testes Rápidos do VIH. Conclusão: A comunidade académica, pela diversidade de papéis, idades e experiências das pessoas, constitui um grupo interessante para a realização do programa de intervenção comunitária. Considera-se pertinente a continuidade deste projeto, estando já agendadas novas intervenções para o Ano 2014/15

Avaliar o impacto das novas medidas de política educativa para o 1º ciclo do ensino básico e educação de adultos na oferta local dos ambientes de aprendizagem (Anos lectivos de 2004-2005 e 2006-2007) : o caso do Concelho de Gavião

Tendo como principal fio condutor a pergunta de partida (Qual o impacto das novas medidas de política educativa para o 1° Ciclo do Ensino Básico e Educação de Adultos na oferta local dos ambientes de aprendizagem?) procuramos encontrar uma resposta para a problemática na qual se centra esta investigação. A partir desta questão inicial delineámos o corpo da dissertação em duas partes: a primeira referente ao enquadramento teórico e a segunda respeitante ao estudo empírico. No âmbito do enquadramento teórico, procedemos a uma reflexão cruzada entre educação e território, no sentido de perceber as suas potenciais (inter) ligações, bem como à análise de alguns dos normativos que dão suporte legal a esta problemática, finalizando com a apresentação do campo de estudo. Ao nível do estudo empírico, seguimos uma metodologia partilhada (qualitativa quantitativa), apoiada essencialmente numa aproximação conceptual ao estudo de caso. Os dados recolhidos, por melo de inquérito por questionários aplicados, permitiram-nos conceber várias leituras do território: Cartografia Institucional do Concelho de Gavião e Cartografia Educacional do Concelho de Gavião referente aos anos Ietivos de 2004-2005 e 2006-2007, respetivamente, dado o estuda ter decorrido ao Iongo de um período de três anos Ietivos. Da análise dos dados disponíveis, centramos as nossas conclusões em, pelo menos, duas dimensões totalmente opostas. Por um lado, o novo paradigma de “escola a tempo inteiro” assume, atualmente, neste território um papel preponderante, devolvendo aos ambientes formais de educação uma clara liderança no que concerne à quantidade e diversidade de aprendizagens desenvolvidas; por outro, assistimos a um claro abandono das aprendizagens realizadas em espaços não formais, as quais eram dirigidas quase exclusivamente às faixas etárias mais avançadas, que agora vêm as várias possibilidades de aprender, o que quer que seja, como uma oportunidade cada vez mais distante. Face à problemática em estudo, a nossa dissertação termina com a formulação das sugestões e recomendações que nos parecem mais oportunas. /ABSTRACT - The main question of this work is: "Which is the impact of new rules of education politics and rules, in first level (6-10years old) and adult education, in local offers into learning contexts?” we look for an answer to this problematic which is the matter of our research. Throughout this question, this essay was divided into two parts: the first one refers the theoretic frame, and the second one is about the empiric study. On the theoretic frame, we made a profound consideration between education and district, in order to understand its potentials (inter) connections, as well as the analysis of some normatives, which Iegally supports this problematic, ending with a presentation of the subject. On the empiric study, our approach is a mix methodology (qualitative and quantitative one) mainly supported on the concept of the “case study” Data collected by inquiry and questionnaire, allowed us to realize several knowledge of the municipality: Institutional Cartography of Gavião's Municipality and Educational Cartography of Gavião's Municipality, it refers to the academic years 2004-2005 and 2006-2007, because the study was done during those two years. From data analyses, we centered our conclusions into, at least, two opposite ways. On one hand, a new paradigm of “full time school” (from 9:00am to 5:30pm) claims, actually, in this municipality an important rule, it restores in the formal educational environment a great control, concerning the quantity and diversity of developed learning, on the other hand, we saw a destitution of developed learning on no formal environment, which were almost exclusively direct to the elder one, now this population felt learning possibilities rather far away. Our essay ends with some suggestions and recommendations which seams to us proper into this context.