1 resultado para Staphylococcus aureus alpha-toxin HaCat keratinocyte
em Biblioteca de Teses e Dissertações da USP
Resumo:
Este estudo avaliou a eficincia da oleuropena (OLE) (composto fenlico extrado das folhas de Oliveira) isolada e associada aos sanitizantes comerciais cido peractico 2% (APA), hipoclorito de sdio 2% (HS), perxido de hidrognio 3% (PH), digluconato de clorexidina 2% (DC), cloreto de benzalcnio 1% (CB) e iodofor 2% (IO), para inativao de clulas em suspenso e biofilmes monoespcie e multiespcie formados em superfcies de ao inoxidvel ou microplaca de poliestireno por Listeria monocytogenes (ATCC 7644), Staphylococcus aureus (ATCC 25923) e Escherichia coli (ATCC 25922), todas classificadas como fortes produtores de biofilmes. Os isolados foram semeados em caldo TSB (caldo tripticase soja), incubados (37C/24h) e corrigidos a ~108clulas/mL (escala 0,5 McFarland). Para bactrias em suspenso, a resistncia a sanitizantes foi determinada pela Concentrao Inibitria Mnima (CIM) em tubos e pelo mtodo de Disco Difuso em gar (DDA), no qual as bactrias foram plaqueadas em gar TSA contendo discos de 6mm de papel filtro embebidos nos sanitizantes. Aps a incubao, a medio dos halos de inibio foi feita com paqumetro. Para os ensaios de resistncia dos biofilmes aos compostos sanitizantes, foram utilizadas microplacas de poliestireno 96 poos, as quais foram preparadas para incubao-fixao dos biofilmes e submetidas leitura em espectrofotmetro de ELISA (600 nm). Em seguida, as placas foram lavadas com soluo salina tamponada (PBS, pH 7.4) e os sanitizantes inseridos por 1 minuto. Aps neutralizao com tiossulfato de sdio (5 minutos), as placas foram lavadas com PBS e metanol, coradas com cristal violeta 1% e coradas com cido actico glacial (33%) para nova leitura a 570nm. A eficcia da remoo do biofilme pelos sanitizantes foi comparada pelo ndice de formao de biofilme (IFB). As imagens do ao inoxidvel aps tratamento com sanitizante foram feitas atravs de Microscopia Eletrnica de Varredura (MEV) e Microscopia Confocal, para visualizar a persistncia dos biofilmes. Os valores de CIM (diluio 1:2) mostraram que OLE no teve atividade bactericida. No mtodo DDA, L. monocytogenes, foi resistente OLE, enquanto E. coli e S. aureus apresentaram resistncia intermediria. Os sanitizantes comerciais apresentaram boa atividade bactericida nos ensaios de CIM e DDA, sendo que as associaes de OLE aos sanitizantes comerciais aumentaram o efeito germicida. Nos ensaios com biofilmes em monoespcie, somente os sanitizantes comerciais, isolados ou associados com OLE, foram eficazes de reduzir o valor de BFI em microplaca de poliestireno. Em biofilmes multiespcie, OLE apresentou efeito antimicrobiano, sobretudo sobre a associao de L. monocytogenes + E. coli + S. aureus (reduo: 91,49%). Nenhum dos compostos avaliados foi capaz de inativar completamente os biofilmes nas superfcies de ao inoxidvel, uma vez que clulas viveis foram observadas aps os tratamentos com os sanitizantes, indicando persistncia dos biofilmes. Os resultados indicam que a oleuropena apresentou potencial para incrementar o efeito bactericida de sanitizantes comerciais para eliminao de biofilmes em superfcies inertes, sendo necessrios estudos para compreender os mecanismos de ao dessas combinaes.
