26 resultados para Genética da população humana Teses
em Biblioteca de Teses e Dissertações da USP
Resumo:
Entre as muitas aplicaes das tecnologias de identificao biolgica humana, esto as finalidades forenses. O objetivo desta pesquisa foi verificar frequncias allicas de Short Tandem Repeat (STR) e os parmetros estatsticos de interesse em genética de populaes e forense para desenvolver o primeiro banco de dados populacional de DNA na Faculdade de Odontologia de Bauru, Universidade de So Paulo, (FOB/USP) para futuros usos forenses. Frequncias allicas de 15 locos autossmicos e do marcador de gnero amelogenina foram determinadas utilizando amostras de 200 μL de saliva doados por 296 alunos de graduao da FOB/USP, com idade ≥ 18 anos, aps aprovao tica. Os testes laboratoriais foram feitos com kits comerciais. Resultados e parmetros estatsticos foram obtidos por meio de programas clssicos: GeneMapper-ID-X, MS Excel 2002 verso 10.6871.6870, GenAlEx 6.5 e Arlequin 3.5, comparando quatro populaes (brasileira, portuguesa, norte-americana e a população deste estudo). Os locos mais polimrficos foram D18S51 (17 alelos) e FGA (15 alelos), seguidos pelo D21S11 (13 alelos) e os menos polimrficos foram D16S539 e TH01 (7 alelos cada). A anlise comparativa com amostra da população brasileira proveniente de estudos anteriores (n > 100.000) pelo teste goodness of fit X2 index no mostrou diferenas significativas entre estes grupos (p = 0,9999). Outros parmetros estatsticos foram calculados comparando as populaes: local (deste estudo), portuguesa e norte-americana. A anlise de varincia molecular (AMOVA) entre as trs populaes, entre as pessoas da mesma população e para cada pessoa de cada população mostrou que existe uma elevada varincia individual (99%), que esta varincia mantida uniformemente entre as pessoas da mesma amostra/regio (1%) e entre as trs populaes estudadas (0%). O estudo confirmou o elevado grau de polimorfismo e a alta heterozigosidade (96,5%) da população. Houve diferena significativa quanto ao gnero (79,7% mulheres) quando comparado população brasileira em geral (50,4%), explicada pelas caractersticas do corpo discente da FOB/USP composto por 80,6% de pessoas do gnero feminino. Interessante foi a observao de uma microvariante allica no loco D18S51, fora da escada padro e da escala de abrangncia do kit, correspondente ao alelo 29, ainda no definida na base de dados internacional (STRBase, atualizada em 07/08/2015). Esta microvariante dever ser confirmada por testes familiares e sequenciamento de DNA para verificar a possibilidade de outra ocorrncia familiar ou duplicao de nucleotdeos. No futuro, os dados obtidos neste estudo devem ser incorporados ao banco de dados da população brasileira e podem ser considerados como referncia genética da população regional, ajudando a elucidar casos forenses. Aps a confirmao, a potencial nova microvariante allica contribuir para a base de dados internacional STRBase.
Resumo:
Introduo: A leishmaniose visceral (LV) um importante problema de sade pblica no Brasil, com cerca 3000 mil casos notificados anualmente. Nos ltimos anos, a LV tem ampliado sua distribuio em vrios estados do pas, associada principalmente aos processos socioambientais, antrpicos e migratrios. A LV causada pela infeco com Leishmania infantum chagasi, transmitida, principalmente, por Lutzomyia longipalpis (Diptera: Psychodidae). Este flebotomneo apresenta ampla distribuio nas Amricas, todavia, evidncias sugerem que se constitui em um complexo de espcies crpticas. A dinmica de transmisso da LV modulada por fatores ecolgicos locais que influenciam a interao entre populaes do patgeno, do vetor e dos hospedeiros vertebrados. Portanto, o estudo das variveis associadas a esta interao pode contribuir para elucidar aspectos dos elos epidemiolgicos e contribuir para a tomada de decises em sade pblica. Objetivo: Avaliar parmetros relacionados capacidade vetorial da população de Lu. longipalpis presente em rea urbana do municpio de Panorama, estado de So Paulo. Mtodos: Foram realizadas capturas mensais durante 48 meses para avaliar a distribuio espao-temporal de Lu. longipalpis e investigar a circulao de Le. i. chagasi. Tambm foram realizados os seguintes experimentos com o vetor: captura-marcao-soltura-recaptura para estimar a sobrevida da população e a durao do seu ciclo gonotrfico, a atratividade dos hospedeiros mais frequentes em reas urbanas, a proporo de repasto em co, infeco experimental e competncia vetorial. Resultados: Observou-se que no municpio de Panorama, Lu. longipalpis apresentou as frequncias mais elevadas na estao chuvosa (entre outubro e maro), maior densidade em reas com presena de vegetao e criao de animais domsticos, locais aonde tambm foi demonstrada a circulao natural de espcimes de Lu. longipalpis infectados com Le. i. chagasi. Alm disto, foi corroborado que a população de Lu. longipalpis apresentou hbito hematofgico ecltico, altas taxas de sobrevivncia e que foi competente para transmitir o agente da LV. Nos experimentos de laboratrio foi evidenciada a heterogeneidade na infeco de fmeas de Lu. longipalpis desafiadas a se alimentarem em ces comprovadamente infectados por L. i. chagasi e o rpido desenvolvimento do parasita neste vetor natural. Concluses. As observaes do presente estudo corroboram a capacidade vetora de Lu. longipalpis para transmitir a Le. i. chagasi e ressaltam a importncia da espcie na transmisso do agente etiolgico da LV. Aes de manejo ambiental, educao e promoo sade so recomendadas s autoridades municipais para diminuir o risco potencial de infeco na população humana e canina, considerando-se o elevado potencial vetor de Lu. longipalpis e a presena de condies que favorecem a interao dos componentes da trade epidemiolgica da LV.
Resumo:
Introduo: reas contaminadas por agentes qumicos perigosos em regies urbanas representam riscos importantes sade humana e ao ambiente. Vila Carioca, localizada na cidade de So Paulo, uma rea contaminada por pesticidas organoclorados considerada crtica, pela magnitude da contaminao, pela presena de pessoas residentes e pela complexidade de fontes da contaminao. Vrios estudos de riscos j foram realizados por uma das empresas contaminadoras, no entanto, ainda h muita incerteza e controvrsias sobre os riscos sade da população. Objetivo: Avaliar o incremento de risco de cncer no tempo de vida para população exposta por meio de uma avaliao probabilstica. Mtodo: Foram utilizados dados secundrios das contaminaes obtidos nos estudos de riscos efetuados pela empresa produtora de pesticidas organoclorados e tambm em documentos oficiais dos rgos de sade e meio ambiente do Estado de So Paulo, resultantes do monitoramento da gua e do solo na rea residencial no perodo de 1997 a 2012, para 335 substncias. Foram selecionadas substncias carcinognicas presentes na gua subterrnea e solo com melhor conjunto de dados. Para a avaliao probabilstica foi empregado o mtodo de simulao de Monte Carlo, por meio do software comercial ModelRisk. Foram utilizados os mtodos recomendados pela United States Environmental Protection Agency para a avaliao de risco de exposio drmica e de incremento de riscos de cncer para substncias mutagnicas. Foram consideradas a ingesto de gua e solo, e contato drmico com gua. Resultados: O incremento de risco de cncer no tempo de vida (IRLT) foi de 4,7x10-3 e 4,1x10-2 para o percentil 50% e 95%, respectivamente. As rotas de exposio mais importantes foram ingesto e contato drmico com a gua subterrnea, seguido da ingesto de solo. O grupo etrio que apresentou maior risco foi o das crianas de 0 a 2 anos de idade. Concluso: Os riscos estimados so superiores aos valores considerados tolerveis. A avaliao realizada foi conservativa, mas ressalta-se que a restrio do uso da gua subterrnea deve ser mantida e que a população deve ser devidamente informada dos riscos envolvidos na rea, em especial, relacionados ao solo contaminado
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O objetivo dessa pesquisa foi avaliar aspectos genticos que relacionados produo in vitro de embries na raa Guzer. O primeiro estudo focou na estimao de (co) varincias genéticas e fenotpicas em caractersticas relacionadas a produo de embries e na deteco de possvel associao com a idade ao primeiro parto (AFC). Foi detectada baixa e mdia herdabilidade para caractersticas relacionadas produo de ocitos e embries. Houve fraca associao genética entre caractersticas ligadas a reproduo artificial e a idade ao primeiro parto. O segundo estudo avaliou tendncias genéticas e de endogamia em uma população Guzer no Brasil. Doadoras e embries produzidos in vitro foram considerados como duas subpopulaes de forma a realizar comparaes acerca das diferenas de variao anual genética e do coeficiente de endogamia. A tendncia anual do coeficiente de endogamia (F) foi superior para a população geral, sendo detectado efeito quadrtico. No entanto, a mdia de F para a sub- população de embries foi maior do que na população geral e das doadoras. Foi observado ganho gentico anual superior para a idade ao primeiro parto e para a produo de leite (305 dias) entre embries produzidos in vitro do que entre doadoras ou entre a população geral. O terceiro estudo examinou os efeitos do coeficiente de endogamia da doadora, do reprodutor (usado na fertilizao in vitro) e dos embries sobre resultados de produo in vitro de embries na raa Guzer. Foi detectado efeito da endogamia da doadora e dos embries sobre as caractersticas estudadas. O quarto (e ltimo) estudo foi elaborado para comparar a adequao de modelos mistos lineares e generalizados sob mtodo de Mxima Verossimilhana Restrita (REML) e sua adequao a variveis discretas. Quatro modelos hierrquicos assumindo diferentes distribuies para dados de contagem encontrados no banco. Inferncia foi realizada com base em diagnsticos de resduo e comparao de razes entre componentes de varincia para os modelos em cada varivel. Modelos Poisson superaram tanto o modelo linear (com e sem transformao da varivel) quanto binomial negativo qualidade do ajuste e capacidade preditiva, apesar de claras diferenas observadas na distribuio das variveis. Entre os modelos testados, a pior qualidade de ajuste foi obtida para o modelo linear mediante transformao logartmica (Log10 X +1) da varivel resposta.
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A seleo fenotpica o mtodo de seleo tradicional utilizado nos estgios iniciais de seleo na maioria dos programas de melhoramento gentico de cana-de-acar aps o desenvolvimento de uma população segregante. A maioria das variedades comerciais utilizadas atualmente deriva deste mtodo. Recentemente tem sido propostas estratgias de seleo baseada na avaliao de famlias em geraes precoces em diversos programas de melhoramento de cana-de-acar ao redor do mundo, como o objetivo de melhora a resposta seleo, bem como reduzir o tempo e custo necessrios para o desenvolvimento de novas variedades. No presente estudo foram avaliadas 110 famlias de cana-de-acar em um delineamento em blocos ao acaso com duas repeties, no ano agrcola de 2012/2013, na Estao Experimentas da empresa CanaVialis, localizada em Conchal, SP. As parcelas consistiram de um sulco de 50 m, contendo 96 plantas (\"seedlings\"). Os seguintes caracteres foram avaliados no estgio de cana planta: dimetro do colmo (DIA), altura do colmo (ALT) nmero de colmos por touceira (NCP), nmero de colmos por touceira na parcela total (NCT); teor de slidos solveis (BRIX), teor de acar no laboratrio (POL) toneladas de cana por hectare (TCH) e toneladas de acar por hectare (TPH). Os resultados indicaram que a população tem grande variabilidade genética entre mdias de famlias bem como dentro de famlias. Foram detectadas correlaes genotpicas positivas entre TCH e os outros caracteres, bem como entre TPH e os outros caracteres. Com base nestes resultados discute-se uma estratgia de seleo com base na seleo para TPH aplicada nas mdias de famlias, seguido da seleo fenotpica para ALT, DIA e NCP dentro das famlias selecionadas, priorizando NCP.
Resumo:
A obteno de gentipos superiores no melhoramento de plantas depende da existncia de variabilidade genética. A existncia de colees de germoplasma representativas e a utilizao de um tamanho adequado de amostra so fundamentais para a preservao das frequncias allicas e genotpicas, diminuindo a perda de variabilidade genética e postergando o aparecimento dos efeitos da deriva genética. Assim, teve-se como objetivo avaliar os efeitos da deriva genética em caracteres quantitativos em subpopulaes de milho. Este estudo foi realizado a partir das populaes originais BR-105 e BR-106, das quais 10 subpopulaes foram obtidas em cada um dos cinco ciclos sucessivos de amostragem com tamanho efetivo reduzido, totalizando 50 subpopulaes para cada população original, as quais foram posteriormente autofecundadas, gerando um nvel a mais de endogamia. Os tratamentos foram constitudos de 10 amostras da população original sem autofecundao, 10 amostras com autofecundao, 50 subpopulaes obtidas da população original e 50 subpopulaes autofecundadas, totalizando 120 tratamentos para cada população, avaliados separadamente. Utilizou-se o delineamento em blocos casualizados no esquema de parcelas subdivididas em faixas hierrquico, em quatro ambientes com duas repeties por ambiente. Os caracteres avaliados foram produo de gros (PG), prolificidade (PROL), comprimento e dimetro de espigas (CE e DE), nmero de fileiras por espiga (NFE), nmero de gros por fileira (NGF), altura de planta e espiga (AP e AE), florescimento masculino e feminino (FM e FF) e nmero de ramificaes do pendo (NRP). Foram estimados os efeitos da deriva genética entre as mdias das subpopulaes nos dois nveis de endogamia e os efeitos da depresso por endogamia nas subpopulaes dentro dos ciclos. Posteriormente, realizaram-se anlises de regresso linear para as subpopulaes nos dois nveis de endogamia, separadamente, e em conjunto. Foi verificada uma grande variao nas mdias das subpopulaes ao longo dos ciclos, indicando que a deriva genética causou diferenciao entre as mesmas e que estas se diferenciaram das populaes originais. Detectaram-se efeitos significativos da deriva genética nas populaes no autofecundadas para todos os caracteres avaliados, em maior nmero para PG, j que este carter mais sensvel deriva genética por possuir maior grau de dominncia que os demais. Houve diminuio no nmero de estimativas de deriva significativas para as populaes autofecundadas, incluindo mudanas na magnitude e no sinal das mesmas em relao s populaes no autofecundadas. Para as estimativas de depresso por endogamia, os caracteres PG, NGF, FM e FF apresentaram maior quantidade de estimativas significativas que os demais. Para a maioria dos caracteres, a regresso linear explicou a maior parte da variao encontrada com o aumento dos coeficientes de endogamia. As populaes BR-105 e BR-106, por terem estruturas genéticas distintas, apresentaram performances diferentes quanto aos efeitos da deriva genética. Enfim, como a deriva genética interfere na integridade genética das populaes, torna-se importante considerar seus efeitos na coleta e manuteno dos bancos de germoplasma e nas populaes utilizadas no melhoramento gentico de plantas.
Resumo:
A infeco por papilomavirus a principal causa de desenvolvimento de neoplasias intraepiteliais cervicais (NIC) e cncer do colo do tero (CCU). Estudos epidemiolgicos tm demonstrado que a persistncia do genoma viral encontra-se associado a variantes moleculares especficas de papilomavirus humano (HPV) de alto risco. As molculas HLA de classe II tm um importante papel na resposta imune. Associaes entre HLA e CCU ou infeco por HPV tem sido demonstrado em diferentes populaes. O nosso objetivo foi verificar se a variabilidade de HLA-DRB1 e DQB1 estavam associada ao CCU e NIC III em mulheres de Belm, uma população formada pelos 3 principais grupos tnicos humanos e uma rea de alto risco para o CCU no Norte do Brasil. Foi investigada a existncia de diferenas na distribuio de alelos HLA entre mulheres com CCU e NIC III portadoras de diferentes variantes de HPV-16 e mulheres citologicamente normais. Os genes HLA DQB1 e DRB1 foram tipados pelo mtodo de PCR-SSO em 95 casos e 287 controles de mulheres com citologia normal atendidas em um centro de preveno do colo do tero na mesma cidade. As variantes de HPV-16 foram tipadas por sequenciamento de um fragmento da regio controladora do genoma viral (LCR). O polimorfismo na posio 350 do gene E6 foi tipado baseado em um protocolo de hibridizao em pontos, para identificar a alterao na posio 350T→G. A magnitude das associaes foi estimada por odds ratio (OR) e os respectivos intervalos de confiana (IC), ajustados para potenciais fatores de confuso. Uma associao positiva foi observada entre CCU e os hapltipos DRB1* 150 l-DQB1*0602, DRB1*04-DQB1*0301 e DRB1*1602-DQB1*0301. Ao contrrio, DRB1*01-DQB1*0501 mostrou um efeito protetor. Os alelos DRB1*0804, DQB1*0402 apresentaram efeito protetor contra positividade por HPV. O alelo DQB1*0502 e o grupo DRB1*15 foram positivamente associados. Os nossos resultados mostram que as associaes positivas de DRB1*1501 e DRB1*1602 podem ser atribudas a variantes asitico-americanas quando comparado a variantes europias. O risco conferido a DRB1*1501 foi encontrado associado tanto a variantes E6350G quanto a variantes E6350T, entretanto, o maior efeito foi devido s variantes E6250T. A associao positiva de DRB1*1602 foi significativa somente no grupo de mulheres positivas para E6350G. Estes resultados esto de acordo com a composio tnica da população estudada bem como um maior potencial oncognico de certas variantes. Nossos dados sugerem que a contribuio dos alelos HLA na susceptibilidade genética ao CCU difere de acordo com a distribuio das variantes de HPV em uma dada regio geogrfica ou grupo tnico.
Resumo:
A infeco pelo HEV reconhecida como um considervel problema de sade pblica em diversas regies do mundo. Embora caracterizada como uma infeco benigna com um curso evolutivo autolimitado, recentes estudos tm mostrado sua evoluo para cronicidade em indivduos imunocomprometidos. Alm disso, tem sido verificado que nesses indivduos a infeco crnica pelo HEV pode evoluir para fibrose heptica progressiva, culminando com o desenvolvimento de cirrose. No existem dados acerca da prevalncia da infeco pelo HEV em pacientes infectados pelo HIV no Brasil, onde a circulao deste vrus tem sido demonstrada em diversos grupos de indivduos imunocompetentes e, at mesmo, em alguns animais provenientes de diferentes regies do pas. Com base nisso, este trabalho teve como objetivo estimar a prevalncia de marcadores sorolgicos e moleculares da infeco pelo HEV, bem como a padronizao de uma PCR em tempo real para a deteco e quantificao da carga viral do HEV na população de soropositivos da cidade de So Paulo. Foram includos neste estudo soro e plasma de pacientes infectados pelo HIV (n=354), que foram divididos em grupos de acordo com a presena ou ausncia de coinfeco pelos vrus das hepatites B (HBV) e C (HCV). Essas amostras foram coletadas entre 2007 e 2013. Anticorpos anti-HEV IgM e IgG foram pesquisados pela tcnica de ELISA (RecomWell HEV IgM/ IgG - MIKROGEN), e, em alguns casos, confirmados por Immunoblotting (RecomLine HEV IgM/ IgG - MIKROGEN). Todas as amostras foram submetidas pesquisa de HEV RNA atravs da PCR em tempo real padronizada. Cerca de 72% dos indivduos avaliados pertenciam ao sexo masculino. A mdia de idade entre a população analisada foi de 48,4 anos. Os anticorpos anti-HEV IgM e IgG foram encontrados em 1,4% e 10,7% dos indivduos dessa população, respectivamente. Apenas dois pacientes apresentaram positividade simultnea para anti-HEV IgM e IgG. No houve diferena estatisticamente relevante quanto presena de marcadores sorolgicos nos grupos de estudo. Alm disso, foi detectado o HEV RNA em 10,7% das amostras analisadas, entre as quais, seis apresentaram simultaneamente algum marcador sorolgico (5 anti-HEV IgG e 1 IgM). A presena deste marcador foi predominante no grupo de pacientes com coinfeco pelo HCV. Atravs deste trabalho pde-se constatar, portanto, que o HEV circulante entre a população de infectados pelo HIV em So Paulo, e que o seguimento desses pacientes se faz necessrio dado a possibilidade de progresso para infeco crnica e cirrose
Resumo:
Introduo: O deslocamento ativo tem estreita relao com problemas de sade pblica da atualidade e sua promoo pode contribuir para melhorias quanto mobilidade urbana, estado de sade e proteo do meio ambiente. Entretanto, a maior parte das pesquisas sobre o tema tem sido desenvolvida em pases de renda alta. A presente tese busca ampliar a investigao sobre o deslocamento ativo no Brasil. Objetivos: i) Descrever a frequncia, a distribuio e a variao temporal de indicadores do deslocamento ativo em populaes brasileiras; ii) Avaliar o impacto de mudanas no padro de transporte da população sobre o deslocamento ativo, o tempo sedentrio e desfechos de sade em populaes brasileiras. Mtodos: Tese composta por sete manuscritos. O primeiro apresenta reviso sistemtica de estudos com informaes sobre a prtica de deslocamento ativo na Amrica Latina e Caribe; o segundo descreve estimativas representativas da população brasileira sobre a prtica de deslocamento ativo para o trabalho; o terceiro e o quarto descrevem a frequncia e tendncia temporal do deslocamento ativo na Regio Metropolitana de So Paulo (ciclistas e escolares); o quinto discute a questo da mobilidade urbana e do direito cidade em So Paulo; o sexto e o stimo avaliam o impacto de mudanas no padro de mobilidade da metrpole paulistana sobre a prtica de deslocamento ativo, tempo no-ativo de deslocamento e tempo total de deslocamento, bem como sobre a poluio do ar e sade da população. Resultados: A prevalncia mediana de deslocamento ativo encontrada em diferentes locais do Brasil foi de 12 por cento , variando entre 5,1 por cento em Palmas (Tocantins) a 58,9 por cento em Rio Claro (So Paulo) (Manuscrito 1). Um tero dos homens e das mulheres desloca-se a p ou de bicicleta de casa para o trabalho no pas. Em ambos os sexos, esta proporo diminui com o aumento da renda e da escolaridade e maior entre os mais jovens, entre os que residem em reas rurais, e na regio Nordeste. Em todas as regies metropolitanas estudadas, o quinto das pessoas de menor renda apresenta uma maior frequncia de deslocamento ativo (Manuscrito 2). Entre os anos de 2007 e 2012, observamos reduo no nmero de ciclistas em So Paulo e diferenas expressivas na proporo de ciclistas entre homens e mulheres (9,7 por mil habitantes versus 1,4 por mil habitantes em 2012) (Manuscrito 3). Tambm verificamos uma queda na proporo de crianas que se deslocam ativamente para a escola entre os anos de 1997 e 2012 (Manuscrito 4). O cenrio epidemiolgico do deslocamento ativo no pas resultante da disputa pelo direito cidade, com repercusses na transio de mobilidade humana e na sade e qualidade de vida da população, como podemos observar no caso de So Paulo (Manuscrito 5). A construo de uma So Paulo mais inclusiva, com menores distncias para os deslocamentos cotidianos e maior frequncia de caminhada e bicicleta, levaria substancial reduo do tempo total e do tempo sedentrio despendidos nos deslocamentos, sem diminuir a durao do deslocamento ativo (Manuscrito 6). Traria tambm ganhos sade da população, sobretudo pelo aumento da prtica de atividade fsica e da reduo da poluio do ar (Manuscrito 7). Concluses: A prtica de deslocamento ativo no Brasil apresenta marcadas diferenas segundo regio e caractersticas sociodemogrficas. De um modo geral, esta prtica vem diminuindo no pas, o que deve contribuir negativamente para a sade da população. A promoo de cidades mais inclusivas e compactas, com o favorecimento a modos ativos de deslocamento, pode contribuir para reverter esta preocupante tendncia.
Resumo:
Parcela considervel de pacientes com distrbios de crescimento no tm a causa de seus quadros clnicos estabelecida, incluindo aproximadamente 50% dos pacientes com diagnstico clnico de sndrome de Silver−Russell (SRS) e 10-20% dos pacientes com sndrome de Beckwith-Wiedemann (BWS). O objetivo deste estudo foi investigar as causas genéticas e epigenéticas de distrbios de crescimento, de etiologia desconhecida, numa contribuio para o entendimento de mecanismos que regulam o crescimento. O estudo compreendeu: (1) a investigao de microdesequilbrios cromossmicos, por aCGH; (2) a anlise do perfil de expresso alelo-especfica de genes sujeitos a imprinting (IG), por pirossequenciamento (PSQ) ou sequenciamento de Sanger; (3) a investigao do padro de metilao global em pacientes com restrio de crescimento, utilizando microarray de metilao. A casustica constituiu-se de 41 pacientes no aparentados, com distrbios de crescimento, de etiologia desconhecida: (1) 25, com hiptese diagnstica de SRS; (2) seis, com restrio de crescimento intrauterino e peso ao nascimento abaixo do 10 percentil, associados a outros sinais clnicos; (3) sete, com hiptese diagnstica de BWS; e (4) trs, com macrossomia pr-natal ou ps-natal, associada a outros sinais. A investigao de microdesequilbrios cromossmicos foi realizada em 40 pacientes. Foram detectadas 58 variantes raras em 30/40 pacientes (75%): 40 foram consideradas provavelmente benignas (18 pacientes, 45%), 12, com efeito patognico desconhecido (11 pacientes, 27,5%), duas, provavelmente patognicas (um paciente, 2,5%) e quatro, patognicas (trs pacientes, 7,5%). Essas frequncias so comparveis quelas descritas em estudos que investigaram CNV em grupos de pacientes com distrbios de crescimento e outras alteraes congnitas, incluindo SRS, e mostram a importncia da investigao de microdesequilbrios cromossmicos nesses pacientes. A diversidade dos microdesequilbrios cromossmicos identificados reflexo da heterogeneidade clnica das casusticas. Neste estudo, muitos dos pacientes com hiptese diagnstica de SRS e BWS apresentavam sinais clnicos atpicos, explicando a ausncia neles das alteraes (epi)genéticas que causam essas sndromes. A identificao de CNV caractersticas de outras sndromes reflete a sobreposio de sinais clnicos com BWS e SRS. A anlise do perfil de expresso alelo-especfica de IG foi realizada em um subgrupo de 18 pacientes com restrio de crescimento. Trinta IG com funo em proliferao celular, crescimento fetal ou neurodesenvolvimento foram inicialmente selecionados. Aps seleo de SNP transcritos com alta frequncia na população, genotipagem de pacientes, genitores e indivduos controle, determinao da expresso dos IG em sangue perifrico e seu padro de expresso (mono ou biallico), 13 IG, expressos no sangue, tiveram a expresso alelo-especfica avaliada, sete deles por PSQ e seis por sequenciamento de Sanger. Alteraes no perfil de expresso de dois genes, de expresso normalmente paterna, foram detectadas em 4/18 pacientes (22%). Este estudo o primeiro a utilizar pirossequenciamento e sequenciamento de Sanger na avaliao do perfil de expresso alelo-especfica de IG, em pacientes com restrio de crescimento. Apesar de terem limitaes, ambas as tcnicas mostraram-se robustas e revelaram alteraes de expresso allica interessantes; entretanto, a relao dessas alteraes com o quadro clnico dos pacientes permanece por esclarecer. A investigao da metilao global do DNA foi realizada em subgrupo de 21 pacientes com restrio de crescimento e em 24 indivduos controle. Dois tipos de anlise foram realizados: (1) anlise diferencial de grupo e (2) anlise diferencial individual. Na primeira anlise, em que foi comparado o padro de metilao do grupo de pacientes com quadro clnico sugestivo de SRS (n=16) com o do grupo controle (n=24), no houve indicao de hipo ou hipermetilao global no grupo SRS. Na segunda anlise, foi comparado o padro de metilao de cada um dos 21 pacientes com restrio de crescimento e dos 24 indivduos controle, com o padro de metilao do grupo controle. O nmero mdio de CpG hipermetilados e de segmentos diferencialmente metilados (SDM) foi significativamente maior nos pacientes. Foram identificados 82 SDM hipermetilados, estando 57 associados a gene(s) (69,5%), em 16 pacientes, e 51 SDM hipometilados, 41 deles associados a gene(s) (80,4%), em 10 pacientes. A anlise de ontologia genética dos 61 genes associados aos SDM hipo ou hipermetilados nos pacientes destacou genes que atuam no desenvolvimento e na morfognese do sistema esqueltico e de rgos fetais, e na regulao da transcrio gnica e de processos metablicos. Alteraes de metilao em genes que atuam em processos de proliferao e diferenciao celulares e crescimento foram identificadas em 9/20 dos pacientes (45%), sugerindo implicao clnica. No foi detectada alterao epigenética comum aos pacientes com diagnstico clnico de SRS, explicvel provavelmente pela heterogeneidade clnica. A investigao de metilao global, utilizando microarray, produziu novos dados que podem contribuir para a compreenso de mecanismos moleculares que influenciam o crescimento pr- e ps-natal. Na translocao aparentemente equilibrada - t(5;6)(q35.2;p22.3)dn, detectada em paciente com suspeita clnica de SRS, a interrupo de um gene, pela quebra no cromossomo 6, pode ser a causa do quadro clnico; alternativamente, a translocao pode ter impactado a regulao de genes de desenvolvimento localizados prximos aos pontos de quebra. A anlise de expresso em sangue perifrico mostrou que os nveis de cDNA do gene, interrompido pelo ponto de quebra da translocao, estavam reduzidos metade. Alm de sinais tpicos da SRS, a paciente apresentava algumas caractersticas clnicas sugestivas de displasia cleidocraniana. Assim, a translocao t(5;6) pode ter alterado a interao de genes de desenvolvimento e seus elementos reguladores, levando desregulao de sua expresso espao-temporal, e resultando num fentipo atpico, com caractersticas sobrepostas de mais de uma sndrome genética
Resumo:
Neste trabalho, anticorpos anti-IgGh foram conjugados s nanopartculas de prata (NPAg) para detectar imunoglobulina G humana (IgGh). Um imunoensaio colorimtrico baseado na diminuio da agregao devido ao aumento da repulso eletrosttica aps a interao ligante-alvo. A agregao induzida pela variao da fora inica e uma mudana da colorao da suspenso coloidal de amarelo para vermelho pode ser observada. Na presena de IgGh, a agregao inibida e a colorao da suspenso coloidal no se altera. As nanopartculas foram obtidas por meio de cinco procedimentos diferentes e caracterizadas por espectroscopia UV-Vis, espalhamento dinmico de luz, difrao de raios-X e microscopia eletrnica. Glicose e borohidreto de sdio foram utilizados como agentes redutores, enquanto CTAB e β-ciclodextrina foram utilizados como estabilizantes. Citrato de sdio foi utilizado como agente redutor e/ou estabilizante. Nanoesferas de carbono foram obtidas por tratamento hidrotrmico de uma soluo aquosa de glicose e tambm foram utilizadas no preparo das nanopartculas. As nanopartculas foram funcionalizadas com cido mercaptossuccnico e a conjugao ocorreu devido interao entre grupos aminas e grupos carboxlicos ionizados, presentes no anticorpo e agente de acoplamento, respectivamente. A estabilidade dos conjugados e o efeito da adio de IgGh foram avaliados para todos os sistemas preparados. As nanopartculas de prata preparadas com borohidreto de sdio e citrato de sdio foram selecionadas para serem aplicadas no desenvolvimento do imunoensaio e as condies experimentais foram avaliadas. Em condies timas, observou-se uma correlao linear entre a diminuio da agregao do sistema (NPAg-anti-IgGh) e a concentrao de IgGh (0 a 200 ng mL-1). O limite de deteco foi estimado em 25 ng mL-1. O mtodo colorimtrico apresentou boa seletividade para a deteco de IgGh. Alm disso, foi obtido um resultado satisfatrio ao aplicar o mtodo para determinao do fator IX de coagulao. Foi desenvolvido tambm um mtodo para determinao de ATP baseado na agregao de nanopartculas de ouro. Aptmeros foram utilizados como elemento de reconhecimento. Em princpio, o mtodo pode ser aplicvel determinao de outros analitos, por meio da substituio do aptmero utilizado neste trabalho pelo oligonucleotdeo especfico para o alvo de interesse.
Resumo:
A cardiomiopatia hipertrfica (CMH) uma doena geneticamente determinada, caracterizada por hipertrofia ventricular primria, com prevalncia estimada de 0.2% na população geral. Qualquer portador tem 50% de chance de transmitir esta doena para seus filhos, o que torna cada vez mais relevante a importncia do estudo gentico dos indivduos acometidos e de seus familiares. J foram descritas diversas mutaes genéticas causadoras de CMH, a maioria em genes que codificam protenas do sarcmero, e algumas mutaes mais raras em genes no sarcomricos. O objetivo desse estudo sequenciar as regies exnicas de genes candidatos, incluindo os principais envolvidos na hipertrofia miocrdica, utilizando o sequenciamento de nova gerao (Generation Sequencing); testar a aplicabilidade e viabilidade deste sistema para identificar mutaes j confirmadas e propor as provveis novas mutaes causadoras de CMH. Mtodos e resultados: 66 pacientes no aparentados portadores de CMH foram estudados e submetidos coleta de sangue para obteno do DNA para analisar as regies exmicas de 82 genes candidatos, utilizando a plataforma MiSeq (Illumina). Identificou-se 99 mutaes provavelmente patognicas em 54 pacientes includos no estudo (81,8%) relacionadas ou no a CMH, e distribudas em 42 genes diferentes. Destas mutaes 27 j haviam sido publicadas, sendo que 17 delas descritas como causadoras de CMH. Em 28 pacientes (42,4%) identificou-se mutao nos trs principais genes sarcomricos relacionados CMH (MYH7, MYBPC3, TNNT2). Encontrou-se tambm um grande nmero de variantes no sonminas de efeito clnico incerto e algumas mutaes relacionadas a outras enfermidades. Concluso: a anlise da sequencia dos exnos de genes candidatos, demonstrou ser uma tcnica promissora para o diagnstico gentico de CMH de forma mais rpida e sensvel. A quantidade de dados gerados o um fator limitante at o momento, principalmente em doenas geneticamente complexas com envolvimento de diversos genes e com sistema de bioinformtica limitado.
Resumo:
The micronutrient selenium is essential to human physiology. As the amino acid selenocysteine, it is inserted into selenoproteins with a wide range of functions including antioxidant capacity, thyroid hormone metabolism, improvement of immune system, brain function, fertility and reproduction. Low selenium status has been associated with increased risk for chronic diseases, such as cancer, type-2 diabetes and cardiovascular disease. In this context, several studies have been conducted in order to investigate if selenium supplementation could reduce the risk of such diseases. However, genetic variations may interfere in the response of individuals to a dietary intervention and must be considered as a important source of inter-individual variation. Therefore, this study was conducted was conducted to investigate the influence of genetic variations in selenoproteins genes on the response to an intervention with Brazil nuts, the richest source of selenium known in nature. The study included 130 healthy volunteers with both genders, aged 20 to 60 years old selected in University of So Paulo. They received nuts for 8 weeks, eating one nut a day, and did a washout period for more 8 weeks. All volunteers had a blood sampling collection every 4 weeks during 4 months, in a total of 5. The following analysis were done: anthropometric measurements, lipid profile, plasma malondialdehyde, plasma and erythrocyte Se, selenoprotein P, plasma and erythrocyte GPx activity, gene expression of GPX1, SEPP1, SELS and SEP15. The volunteers were also genotyped for SNPs rs1050450, rs3811699, rs1800699, rs713041, rs3877899, rs7579, rs34713741 and rs5845. Each unit of Brazil nut provided an average of 300 µg of selenium. All 130 volunteers completed the protocol. The concentrations of total cholesterol and glucose decreased after 8 weeks of supplementation. Moreover, HDL concentrations were higher for carriers of the variant T allele for GPX4_rs713041. The frequencies of the variant genotypes were 5,4% for rs1050450, rs3811699 e rs1088668, 10% for rs3877899, 19,2% for rs713041 e rs7579, 11,5% for rs5845 and 8,5% for rs34713741. The levels of the five biomarkers increased significantly after supplementation. In addition, erythrocyte GPx activity was influenced by rs1050450, rs713041 and rs5845; erythrocyte selenium was influenced by rs5845 and plasma selenium by rs3877899. Gene expression of GPX1, SEPP1 and SEP15 were higher after supplementation. The SNP rs1050450 influenced GPX1 mRNA expression and rs7579 influenced SEPP1 mRNA expression. Therefore, it can be concluded that the supplementation with one of Brazil nut for 8 weeks was efficient to reduce total cholesterol and glucose levels and to increase the concentrations of the main biomarkers of selenium status in healthy adults. Furthermore, our results suggest that GPX4_rs713041 might interfere on HDL concentrations and GPx1 activity, GPX1_rs1050450 might interfere on GPx1 activity, SEP15_rs5845 might interfere on GPx1 activity and erythrocyte selenium and SEPP1_3877899 might interfere on plasma Se levels. Therefore, the effect of genetic variations should be considered in future nutritional interventions evaluating the response to Brazil nut supplementation.
Resumo:
A cetamina uma droga amplamente utilizada e o seu uso inadequado tem sido associado graves consequncias para a sade humana. Embora as propriedades farmacolgicas deste agente em doses teraputicas sejam bem conhecidas, existem poucos estudos sobre os efeitos secundrios induzidos por doses no-teraputicas, incluindo os efeitos nos estados de ansiedade e agressividade. Neste contexto, os modelos animais so uma etapa importante na investigao e elucidao do mecanismo de ao a nvel comportamental. O zebrafish (Danio rerio) um novo organismo-modelo, interessante e promissor, uma vez que apresenta alta similaridade fisiolgica, genética e neuroqumica com seres humanos, respostas comportamentais bem definidas e rpida absoro de compostos de interesse em meio aquoso alm de apresentar uma srie de vantagens em relao aos modelos mamferos tais como manuteno de baixo custo, prtica e executvel em espaos reduzidos. Nesse sentido, faz-se necessrio a execuo de ensaios comportamentais em conjunto com anlises estatsticas robustas e rpidas tais como ANOVA e Mtodos Multivariados; e tambm o desenvolvimento de mtodos analticos sensveis, precisos e rpidos para determinao de compostos de interesse em matrizes biolgicas provenientes do animal. Os objetivos do presente trabalho foram a investigao dos efeitos da cetamina sobre a ansiedade e a agressividade em zebrafish adulto empregando Testes de Claro-Escuro e Testes do Espelho e mtodos estatsticos univariados (ANOVA) e multivariados (PCA, HCA e SIMCA) assim como o desenvolvimento de mtodo analtico para determinao da cetamina em matriz biolgica proveniente do animal, empregando Extrao Lquido-Lquido e Cromatografia em Fase Gasosa acoplada ao Detector de Nitrognio-Fsforo (GC-NPD). Os resultados comportamentais indicaram que a cetamina produziu um efeito significativo dose-dependente em zebrafish adulto na latncia rea clara, no nmero de cruzamentos entre as reas e no tempo de explorao da rea clara. Os resultados das anlises SIMCA e PCA mostraram uma maior similaridade entre o grupo controle e os grupos de tratamento expostos s doses mais baixas (5 e 20 mg L-1) e entre os grupos expostos s doses de 40 e 60 mg L-1. Na anlise por PCA, dois componentes principais responderam por 88,74% de toda a informao do sistema, sendo que 62,59% da informao cumulativa do sistema foi descrito pela primeira componente principal. As classificaes HCA e SIMCA seguiram uma evoluo lgica na distribuio das amostras por classes. As doses mais altas de cetamina induziram uma distribuio mais homognea das amostras enquanto as doses mais baixas e o controle resultaram em distribuies mais dispersas. No Teste do Espelho, a cetamina no induziu efeitos significativos no comportamento dos animais. Estes resultados sugerem que a cetamina modulador de comportamentos ansiosos, sem efeitos indutores de agressividade. Os resultados da validao do mtodo cromatogrfico indicaram uma extrao com valores de recuperao entre 33,65% e 70,89%. A curva de calibrao foi linear com valor de R2 superior a 0,99. O limite de deteco (LOD) foi de 1 ng e o limite de quantificao (LOQ) foi de 5 ng. A exatido do mtodo cromatogrfico manteve-se entre - 24,83% e - 1,258%, a preciso intra-ensaio entre 2,67 e 14,5% e a preciso inter-ensaio entre 1,93 e 13,9%.
Resumo:
A obesidade comum atualmente um dos problemas de sade pblica mais importante no mundo, frequentemente associada a outros distrbios tais como hipertenso, diabetes, doenas cardiovasculares e cncer. Apesar da alta prevalncia de obesidade em diversas populaes, muitos dos estudos relacionados aos seus fatores de risco genticos foram realizados com indivduos de ascendncia europeia ou asitica, mas foram poucos os realizados com populaes de origem africana ou nativas americanas. Nosso trabalho tem por objetivo geral investigar potenciais fatores de risco genticos associados ao sobrepeso e obesidade em populaes afrodescendentes remanescentes de quilombos do Vale do Ribeira - SP, comunidades rurais semi-isoladas, previamente bem caracterizadas do ponto de vista clnico, genealgico e gentico-populacional. Nossa amostra constituiu-se de 759 indivduos, pertencentes a doze populaes de remanescentes de quilombos (Abobral, So Pedro, Galvo, Ivaporunduva, Pedro Cubas, Andr Lopes, Nhunguara, Sapatu, Piles, Maria Rosa, Poa e Reginaldo), dos quais foram obtidos amostras de DNA, dados clnicos, informaes genealgicas e medidas antropomtricas. A investigao dos fatores de risco genticos associados ao sobrepeso/obesidade foi realizada por duas abordagens: (1) estudo de associao baseado em famlias (N = 584, 59 famlias) e (2) estudo de associao populacional com indivduos no aparentados (N=305). Foram selecionados para estudo nove polimorfismos em oito genes candidatos: LEP rs2167270, LEPR rs1137101, ADRB2 rs1042713, PPARG rs1801282, PLIN1 rs2289487, RETN rs1862513, INSIG2 rs7566605, FTO rs1121980 e FTO rs1421085. As anlises de associao baseadas em famlia indicaram que, nessas populaes, apenas o polimorfismo PLIN1 rs2289487 est associado significativamente com o grupo de risco em relao razo cintura-quadril (RCQ >=0,85 para mulheres e >=0,90 para homens; P=0,013). Aparentemente no existem trabalhos anteriores que verificaram a associao deste polimorfismo com a obesidade por essa metodologia. As anlises do estudo populacional com indivduos no aparentados mostraram associao significativa entre: (i) o alelo G no polimorfismo LEPR rs1137101 e a variao do ndice de massa corporal (IMC; P=0,027); (ii) o alelo G do polimorfismo LEPR rs1137101 e o fentipo de sobrepeso/obesidade (IMC>=25 Kg/m; P=0,027); (iii) o alelo G no polimorfismo ADRB2 rs1042713 e o fentipo de risco (IMC>=25 Kg/m; P=0,029); (iv) o polimorfismo PLIN1 rs2289487 (gentipo GG) e os menores valores do IMC (P=0,025); (v) o polimorfismo FTO rs1121980 (alelo G) e o fentipo de risco (IMC>=25 Kg/m), assim como a variao do IMC (P=0,037 e P=0,022 respectivamente); e (vi) o alelo A no polimorfismo FTO rs1421085 e maiores valores da circunferncia da cintura (Cc; P=0,016) e da razo cintura-quadril (RCQ; P=0,030). Tomados em conjunto, nossos resultados sugerem a participao dos genes LEP, LEPR, ADRB2, PLIN1 e FTO no aumento da predisposio ao sobrepeso e obesidade nas populaes remanescentes de quilombos. Por fim, as elevadas estimativas de herdabilidade dos trs fentipos investigados (IMC=33%, Cc=33% e RCQ=70%) reforam a relevncia do papel dos fatores genticos no acmulo de gordura corporal. O trabalho apresentado resultado de uma investigao cuidadosa sobre os componentes genticos associados regulao do peso corporal em uma população brasileira afrodescendente (com caractersticas histricas, ambientais e genéticas peculiares), corroborando a hiptese de que a obesidade comum nas populaes quilombolas do Vale do Ribeira condicionada por um mecanismo polignico modulado por fatores ambientais importantes como o sedentarismo e a transio nutricional
