植物生产生物可降解塑料PHB的研究：真养产碱杆菌H16的phbB和phbC的基因克隆、植物表达载体构建和转基因马铃薯植株的获得

利用聚合酶链式反应(PCR)技术从Alcaligenes eutrophus H16染色体DNA中扩增并克隆了调控聚-3-羟基丁酸(poly-3-hydroxy-butyrate，PHB)生物合成的两个关键酶基因：依赖NADPH的乙酰乙酰CoA还原酶基因(phbB)和PHB合成酶基因(phbC)。限制性内切酶图谱和核苷酸序列分析证实了克隆结果，并表明克隆的基因与国外所报道的有很高的同源性。经过基因拼接，构建了块茎特异性表达的高等植物表达载体pPSAGB（嵌合phbB）、pBIBGC(嵌合phbC)和pPSAGCB（嵌合phbB和phbC）。并以试管薯(microtuber)为外植体经Agrobacterium介导转化了虎头、京丰、Bintje、Favorita、高原4号和88-5共6个马铃薯品种，获得49个株系。经PCR检测导入phbB的株系共有44个，对其中30个株系进行DNA dot blot分析，结果表明phbC导入呈阳性的株系有20个。深入的鉴定工作还在进行中。

高赖氨酸蛋白基因的克隆及其转基因水稻植株的获得

水稻、玉米、小麦和大麦等许多主要禾本科作物的第一限制性氨基酸是赖氨酸。本文将一个来源于四棱豆的高赖氨酸蛋白基因导入水稻，以研究通过转基因改善蛋白质的可能，获得有经济价值和社会意义的转基因作物。 构建了含有高赖氨酸蛋白基因（Lys）、gus基因及植物选择标记潮霉素磷酸转移酶基因（hpt）的植物表达载体pBRLys;在pBRLys中，该高赖氨酸蛋白基因由目前已知最强的单子叶植物启动子玉米Ubiquitin 1启动子调控。用基因枪轰击法将pBRLys导入水稻幼胚或幼胚诱导的愈伤组织。共得到36株潮霉素抗性再生植株，经分子检测有22株为转基因植株。 实验中对影响水稻转化、再生和移栽一些条件进行了研究。从潮霉素筛选浓度、愈伤组织干燥处理、光照对分化的影响、多效唑的影响和移栽环境等做了一些简化和改善。 PCR检测、PCR-Southern杂交和Southern杂交表明潮霉素基因和Lys基因已经整合到转基因水稻的基因组中，外源基因在转基因水稻基因组中以1个拷贝以上的形式存在。同时，GUS组织化学染色表明转基因水稻植株的叶、茎和根中都有gus基因的表达。 初步对5株转基因植株进行赖氨酸含量测定，结果表明：与非转化对照相比，有两棵植株赖氨酸含量提高，分别增加6.0%和12.4%。对更多抗性转化植株的分子检测、GUS分析和赖氨酸含量测定正在进行之中。

不同灌水量和灌水周期对滴灌马铃薯生长及产量的影响

通过对不同灌水量及不同灌水间隔时间的马铃薯生长状况进行大田滴灌试验,研究马铃薯适宜的灌水定额及灌水周期,以求达到节水、增产的目的。试验结果表明:马铃薯滴灌时,灌水量越大,灌水周期越短,株高越高;茎粗开始衰减的时间比株高要早十几天,且衰减幅度比株高要大。灌水周期最短的处理茎粗却并不是最大,在180 m3/hm2的灌水定额下,灌水周期为5天的处理茎粗值最大。在相同的灌水量下,灌水间隔时间越短的处理马铃薯淀粉含量越高。灌水定额越小,灌水周期对产量的影响就越大;而当灌水定额一定时,灌水周期越短,产量越高;灌水定额为90 m3/hm2,灌水周期为3天的处理产量最高,为28 260 kg/hm2,比7天1灌的处理每公顷产量高出达10 350 kg。

马铃薯Y病毒外壳蛋白基因的导入以及转基因马铃薯植株的大田攻毒

应用四种不同的马铃薯试管微型薯诱导体系生产试管微型薯，通过比较建立了—种有效的试管微型薯诱导系统。这种诱导系统使用液体培养基，具有试管微型薯发生频率高、薯块体积大和微型薯形成早的特点。同时，此系统使用的培养基成分成本低、方法简便以及所用设备简单，适用于容器内大批量生产马铃薯试管微型薯以及马铃薯种质资源的保存。 对银离子在马铃薯叶片组织培养过程中对愈伤组织诱导或芽分化和再生的影响作了研究。结果表明银离子通过抑制叶片组织培养过程中形成的乙烯与其受体的结合从而促进芽再生，但是其对叶片愈伤组织的诱导无显著效果。银离子的这些作用在通过同时应用2，4-D而明显表现出来。2，4-D通过促进乙烯的生物合成而降低银离子的促进作用，两者则通过对乙烯的调节而影响马铃薯叶片的愈伤组织诱导和芽分化再生。 将马铃薯Y病毒外壳蛋白基因通过根癌农杆菌双元载体系统导入马铃薯品种Desiree、K4和Favorita，获得了若干转基因株系。除了K4品种中—转化株系具有非正常生长形态外，其余转基因植株都生长发育正常。由此表明以根癌农杆菌介导的马铃薯转化中，构建于双元载体上的外源目的基因是随机进入并整合到受体细胞的染色体上。具有畸形生长性状的转基因植株的产生说明了PVY CP基因的整合可能干扰了控制正常生长发育、尤其是形态建成的基因表达。 在转化试验中，应用了试管微型薯薄片、茎切段和叶片三种外植体作为转化材料。对转化过程中农杆菌对外植体的侵染时间、共培养时间、外植体的类型以基因型对转化频率的影响作了比较研究。发现以试管微型薯薄片和茎切段作为受体的最佳侵染时间是十分钟，而叶片则为五分钟，三种外植体的最佳共培养时间皆为四天。在各种处理的最佳条件下，Desiree比K4具有相对较高的转化频率，表明马铃薯Desiree比K4在转化反应上更温和或顺从。 通过比较几种由不同统计得出的农杆菌介导的转化频率，认为使用“净转换频率”(Net Transformation Frequency)能更精确地表达马铃薯的转化效率。而在以前的报导中还没有—种统一的、并且能被广泛接受和使用的表达转化效率的参数或指标。． 以叶片作为起始材料的转化具有较高的转化频率。在转化外植体的植株再生过程中应用了2，4-D和AgN03两种乙烯调节剂分别于愈伤组织诱导和芽分化再生阶段，使其产生高频的植株再生。尤其是它的净化频率明显高于其它外植体的转化频率，并且无显著品种之间的差异，具有高效马铃薯转化系统的特征。 以聚合酶链式反应(PCR)检测转化再生植株得到的结果与DNA杂交(Southern blot analysis)的鉴定结果比较，结论是相同的。由此表明在以农杆菌介导的马铃薯转化试验中，PCR可被用于证实外源目的DNA的导入，它以简便、迅速的特点帮助节省时间以及提供及时的转化证据。 对三个马铃薯品种的一系列转基因株系在大田条件下进行了攻毒试验．最后从Favorita 品种中筛选出了两个抗性较强的无性系，它们具有明显较低的病毒侵染发生频率以及正常的生长发育性状，具有很大潜力成为生产上推广应用的抗病新品种。

Enhanced resistance to Aeromonas hydrophila infection and enhanced phagocytic activities in human lactoferrin-transgenic grass carp (Ctenopharyngodon idellus)

Human lactoferrin (hLF) is an iron-binding protein with antimicrobial and immunomodulatory activities. hLF cDNA was transferred into grass carp via electroporated sperm. The production of transgenic fish was as high as 55% tinder the best parameters. 2(11) pulses and 20-min incubation. The expression of the transgene was demonstrated by the detection of hLF mRNA by RT-PCR. We also investigated the response of G(0) transgenic grass carp to Aeromonas hydrophila infection. Serum lysozyme activities (P>0.05) and phagocytic activities of kidney cells (P<0.05) were measured in transgenic individuals. The transgenic fish not only cleared A. hydrophila significantly faster than the control carp (P<0.05), but also showed enhanced phagocytic activities. The result shows that hLF has immunomodulatory activities in hLF-transgenic grass carp. The transgenic grass carp exhibited enhanced immunity to A. hydrophila infection. These results reveal that the mechanisms of disease resistance are different between hLF-transgenic plants and hLF-transgenic grass carp. (C) 2004 Elsevier B.V. All rights reserved.