商陆抗真菌蛋白的基因克隆及其应用

商陆种子的7kD多肽被鉴定为一种抗真菌多肽，命名为PAFP（pokeweed antifungal protein）。它抑制Trichoderma viride, Fusatium及其它一些病原真菌的生长。本文构建了cDNA文库，而后从库中筛选和克隆PAFP基因。PAFP的编码序列－－201bp的DNA片段被扩增并插入pBluescript SK+载体。经酶切图谱分析和核苷酸顺序测定之后，这个片段与35S启动子连接并重组于双元载体pBin 19。此表达载体质粒转入农杆菌LBA 4404供转化植物之用。通过农杆菌介导的对西瓜的转化，所采用的基因还包括报告基因GUS和Bar，以及一种来自大麦的抗真菌蛋白的基因。以PCR扩增，GUS与NPT II活性检测，以及Southern杂交对转基因植物进行鉴定。

南海北部区域表层水微生物多样性及其分布特点研究

海洋中的微生物多样性是十分丰富的。南海北部区域表层水的微生物群落结构及物种多样性情况仍不十分清楚。本研究，采用构建基因克隆文库的方法，对该区域内表层水中的微生物多样性及分布特点进行研究。获得了8000多个细菌16S rDNA基因、真核微生物ITS 区基因及光合微型生物 psbA 基因单克隆。本研究结果表明：在南海北部区域表层水中存在两种不同微生物类群，即近海岸带海洋微生物类群和开阔海域海洋微生物类群。 16S rDNA基因克隆文库中，确定了507个OTUs。93.7% 的16S rDNA 序列定义在同一种水平上，1.4 %的16S rDNA序列定义在同一属的水平上，2.7%的16S rDNA序列定义在同一纲的水平上，1.2%的16S rDNA序列定义在同一门的水平上。值得一提的是有0.7%的南海表层水样品的16S rDNA 序列，属于目前数据库中的未知序列。系统育树分析表明这类序列可归属于4个不同的分枝群。与Venter’s Sorcerer II 海洋科考（马尾岛海域）的结果不同，南海北部区域表层水中，并没有发现SAR11分支细菌、丝状杆菌（Fibrobacter）和Rheinheimera细菌序列，但南海北部区域却发现了马尾岛海域未检测到的物种，如酸杆菌门、恐球菌-栖热菌门、厚壁菌门，硝化螺旋菌门，浮霉菌门以及疣微菌类细菌。除疣微菌外，其他5种细菌都是海洋环境样品中较为常见的细菌。变形菌门、蓝细菌及厚壁菌门细菌序列是南海北部表层样品16S rDNA基因克隆文库中的主要类群。 真核生物如浮游植物和海洋真菌是海洋表面生物质的主要组成部分之一。现有的研究多集中在环境样品的原核微生物的群落结构研究上，很少关注海洋微型真核生物的多样性及群落结构分布。本研究通过构建ITS基因克隆文库的方法，得到了3044条ITS序列，最终定义了1288个OTUs。其中，329个OTUs序列定义在同一种水平上，310个OTUs序列定义在同一属或纲的水平上，123个OTUs序列定义在同一门的水平上。值得注意的是有339个OTUs的序列，属于目前数据库中的未知序列。系统发育树分析表明它们分别归属于4个不同的分枝群。这表明以往对海洋真核微型生物的多样性仍知之甚少。盘菌亚门、体腔动物门和担子菌纲是南海北部表层样品ITS基因克隆文库中的主要类群。此外，在南海北部区域还发现了少数归属于绿藻、链形植物、定鞭金藻类、放射虫类、Stramenopiles、Typhlocoela、壶菌类、多孢囊霉目、子囊菌门、地位未定的物种、 酵母、领鞭毛虫门、不可培养的后生动物和海绵动物的ITS序列。 海洋初级生产力主要是依靠光合微型浮游生物进行光合作用完成的。利用新设计的psbA通用引物，对南海北部33个表层水样滤膜进行基因克隆文库建库分析，最终获得了南海北部区域表层水微生物多样性及其分布特点研究3062条部分psbA基因序列，并将其划分为957个 OTUs。其中蓝细菌和未培养的病毒序列在psbA基因库中的数量最多。本研究还发现了南海北部区域存在11个独立分支的新型psbA类群。研究证实psbA基因可以作为一种研究海洋光合微型浮游生物群落结构的指示基因。 克隆文库相似性分析发现，在所有的16S rDNA克隆文库中没有任意两个站点的克隆文库相似性超过50%。虽然N401和N420站点的16S rDNA克隆文库相似性最大，但它们在地理位置上并不接近。一些地理位置接近的站点，其16S rDNA克隆文库之间相似性比较接近。比如，海南岛区域的克隆文库之间就比较相似，且在同一分支。大多数地理环境相似的站点的16S rDNA克隆文库都聚在同一大分支上。例如，来自于珠江口区域站点的克隆文库之间的相似性比较接近，而且分布在一个大分支中；开阔海洋区域的16S rDNA克隆文库，也大多聚类在同一分支中。但也有例外的情况：比如 N107 和N400 站点的16S rDNA克隆文库，就聚类到一起，分析发现这两个文库中所处的环境都是甲烷产生区，其中都含有相似的与甲烷代谢相关的菌群。不过从整体来看，整个南海北部的细菌群落，大致分为两大类：中国大陆近海岸微生物群落和开阔海域微生物群落。33个ITS克隆文库的相似性分析发现：相似性在10%以下的类群，可以分成两大分支，而且该分类，比细菌群落的分布情况更接近南海北部的地理环境特征。对psbA基因克隆文库的相似性分析也验证了在南海北部区域表层水中存在两种不同微生物生态系统。 此外，本研究针对分子生态专业软件DOTUR程序在处理大量克隆文库数据时所遇到的

矢量合成移相器

本发明涉及一种矢量合成移相器，包括正交分相器、相加器；在正交分相器和相加器之间串接有两个可反相电控衰减器；本发明的移相范围宽、相位分辨率高、输出信号幅度起伏小。

Construction, characterization and chromosomal mapping of bacterial artificial chromosome (BAC) library of Yunnan snub-nosed monkey (Rhinopithecus bieti)

We constructed a high redundancy bacterial artificial chromosome library of a seriously endangered Old World Monkey, the Yunnan snub-nosed monkey (Rhinopithecus bieti) from China. This library contains a total of 136 320 BAC clones. The average insert size of BAC clones was estimated to be 148 kb. The percentage of small inserts (50-100 kb) is 2.74%, and only 2.67% non-recombinant clones were observed. Assuming a similar genome size with closely related primate species, the Yunnan snub-nosed monkey BAC library has at least six times the genome coverage. By end sequencing of randomly selected BAC clones, we generated 201 sequence tags for the library. A total of 139 end-sequenced BAC clones were mapped onto the chromosomes of Yunnan snub-nosed monkey by fluorescence in-situ hybridization, demonstrating a high degree of synteny conservation between humans and Yunnan snub-nosed monkeys. Blast search against human genome showed a good correlation between the number of hit clones and the size of the chromosomes, an indication of unbiased chromosomal distribution of the BAC library. This library and the mapped BAC clones will serve as a valuable resource in comparative genomics studies and large-scale genome sequencing of nonhuman primates. The DNA sequence data reported in this paper were deposited in GenBank and assigned the accession number CG891489-CG891703.

血清白蛋白的功能及应用

血清白蛋白是脊椎动物血浆中含量最丰富的蛋白质.人血清白蛋白是由585个氨基酸组成的单链蛋白质,分子量为67 kDa.成熟的人血清白蛋白是一个心形分子,由3个结构相似的α-螺旋结构域组成.不同来源的血清白蛋白的氨基酸序列及其空间结构非常保守,它具有结合和运输内源性与外源性物质,维持血液胶体渗透压,清除自由基,抑制血小板聚集和抗凝血等生理功能.最近研究发现,蟾蜍血清白蛋白可能与其皮肤呼吸有关.人血清白蛋白目前已广泛应用于临床.

贵州福泉市草坪害虫区系调查

2005年7～8月以贵州省福泉市草坪与农田、灌草丛为2个调查样地,对采集的大量昆虫标本进行检索、分类、统计处理、区系分析.采集到昆虫标本50 320只,分隶于8目、29科、67属、70种,其中,草坪害虫有8目、19科、29属、32种;农田、灌草丛有8目、28科、56属、61种.研究发现,2个样地中害虫群落种类组成和结构基本相似;鳞翅目害虫(除地老虎等个别种外)是地面害虫的优势类群;鞘翅目害虫是地下害虫的优势类群;草坪害虫区系主要由周边农田,园林和其他天然植被中害虫的迁入形成.

微卫星及其应用

微卫星是广泛分布于真核生物基因组中的短串联重复序列(1-5bp),具有突变速率快、多态性高等特性。已被广泛应用于生物遗传作图、群体遗传研究、个体间亲缘关系鉴定等方面。简要论述了微卫星的突变、位点的分离、数据的收集、在生物学中的应用及其存在的缺陷。

A phylogeny of Chinese leaf monkeys using mitochondrial ND3-ND4 gene sequences

The phylogeny of Chinese leaf monkeys, especially the snub-nosed monkeys (Rhinopithecus), has not been thoroughly investigated using molecular sequence data, perhaps due to their rarity in the wild and their poor representation in institutional collections. Despite several proposed classifications, systematic relationships of these species remain poorly defined and this has hindered their conservation. To clarify the phylogenetic relationships of the leaf monkey clade in China, we sequenced the mitochondrial ND3, ND4L, ND4, tRNA(Arg), tRNA(His), tRNA(Ser), and tRNA(Leu) genes for Rhinopithecus bieti, R. roxellana, Trachypithecus francoisi, T. f. leucocephalus, and T. phayrei as well as Pygathrix nemaeus and Colobus guereza. We included a rotal of 2252 characters for each individual, excluding gaps in primary sequences. Our interpretation of the results from character- and distance-based phylogenetic analyses suggest that (1) Pygathrix nemaeus is sister to Rhinopithecus rather than to Trachypithecus though it is quite divergent from the former; (2) the Yunnan snub-nosed monkey, Rhinopithecus bieti, represents a valid species; (3) the white-headed leaf monkey is not a distinct species, but instead is a subspecies of Trachypithecus francoisi (T. f. leucocephalus), though it should still be considered a separate evolutionarily significant unit (ESU); and (4) because two individuals of the Phayrei's leaf monkey, T. phayrei, are genetically distinct from one another, a more extensive revision of the taxonomy of this putative species in China is needed. These results, plus ongoing work on the molecular systematics of the entire Asian leaf monkey radiation, can provide a sound basis for identifying the appropriate units of conservation for this endangered group of primates.

17种植物中蛋白质提取物的抗HIV-1活性

以化合物对ＨＩＶ１诱导Ｃ８１６６细胞形成合胞体的抑制实验和化合物对ＨＩＶ１感染细胞的保护实验作为初筛方法，筛选了来源于７科１７种植物的４７个样品，其中８个样品经测定是核糖体失活蛋白（ＲＩＰｓ），其余为粗提蛋白。进而测定了初筛有抗ＨＩＶ活性的化合物对共培养、急性和慢性感染的ＨＩＶ１ｐ２４抗原表达水平的影响，用间接荧光染色检测这些化合物对ＨＩＶ抗原阳性细胞率的影响，以确证其抗ＨＩＶ活性。天花粉蛋白（ＴＣＳ）、南方栝楼蛋白峰Ⅴ、南方栝楼蛋白峰Ⅵ均显著地抑制合胞体的形成；巴Ⅱ、丝瓜子蛋白、油瓜根蛋白、木盍藤子蛋白有一定的抑制作用。老鼠拖瓜蛋白、大叶木鳖子根蛋白、西双版纳根Ⅱ等粗提蛋白有显著的抑制作用。ＲＩＰｓ不能保护ＨＩＶ１感染细胞的死亡。ＴＣＳ显著地抑制了ＨＩＶ１急性感染中ｐ２４抗原的表达，减少了ＨＩＶ抗原阳性细胞数，但它们均不影响共培养细胞融合、ＨＩＶ１慢性感染中ｐ２４抗原表达水平。结果表明，除ＴＣＳ等已知ＲＩＰｓ外，还有一些新的ＲＩＰｓ具有不同程度的抗ＨＩＶ活性。

Recombination Yet Inefficient Selection along the Drosophila melanogaster Subgroup's Fourth Chromosome

A central goal of evolutionary genetics is an understanding of the forces responsible for the observed variation, both within and between species. Theoretical and empirical work have demonstrated that genetic recombination contributes to this variation by breaking down linkage between nucleotide sites, thus allowing them to behave independently and for selective forces to act efficiently on them. The Drosophila fourth chromosome, which is believed to experience no-or very low-rates of recombination has been an important model for investigating these effects. Despite previous efforts, central questions regarding the extent of recombination and the predominant modes of selection acting on it remain open. In order to more comprehensively test hypotheses regarding recombination and its potential influence on selection along the fourth chromosome, we have resequenced regions from most of its genes from Drosophila melanogaster, D. simulans, and D. yakuba. These data, along with available outgroup sequence, demonstrate that recombination is low but significantly greater than zero for the three species. Despite there being recombination, there is strong evidence that its frequency is low enough to have rendered selection relatively inefficient. The signatures of relaxed constraint can be detected at both the level of polymorphism and divergence.

全放牧婆罗门牛和BMY牛胚胎回收适期的探讨

选用婆罗门牛和BMY牛供体超数排卵,以第1次人工授精(AI)当日为0 d,分别在AI第6～6.5天、7～7.5天和8～8.5天回收胚胎,统计≤16细胞胚、桑椹胚、囊胚和孵化胚的数量,计算各发育阶段胚胎所占的百分率,分析婆罗门牛和BMY牛的胚胎回收适期.结果表明:婆罗门牛AI第6～6.5天的桑椹胚率比BMY牛高43.54个百分点(P＜0.01),AI第8～8.5天的孵化胚率比BMY牛高35.94个百分点(P＜0.05),胚胎发育速度比BMY牛较快.罗门牛和BMY牛在AI第6～6.5天回收胚胎的囊胚率低,而第8～8.5天的孵化胚率高,胚胎回收以AI第7～7.5天为宜.

兔抗人外周血单核细胞、兔抗猴脾脏淋巴细胞免疫血清的制备及其在分离人和猕猴胚胎内细胞团中的应用

采用梯度离心的方法用淋巴细胞分离液从浓缩的人白细胞悬液中分离人外周血单核细胞，从猕猴新 鲜脾脏中研磨分离猕猴脾脏淋巴细胞；分别将人外周血单核细胞和猕猴脾脏淋巴细胞作为免疫原，每次通过耳 缘静脉注射4×10s个细胞免疫日本大耳白兔，每周免疫一次，共免疫3次，制备兔抗人外周血单核细胞和兔抗 猕猴脾脏淋巴细胞免疫血清。体外培养人和猕猴胚胎至囊胚，采用制备的免疫血清，分离人和猕猴囊胚内细胞 团，用于建立人和猕猴胚胎干细胞系。结果如下：(1)用半微量细胞毒实验法测得兔抗人外周血单核细胞免疫 血清和兔抗猕猴脾脏淋巴细胞免疫血清的效价分别为1：320和1：640；(2)两种免疫血清成功地裂解了15个人 囊胚和33个猕猴囊胚的滋养层细胞，分离出了内细胞团，表明免疫血清的制备取得了成功，为建立人和猕猴 胚胎干细胞系奠定了基础。

云南滇池濒危特有种滇池金线鲃人工繁殖初报

滇池金线鲃(Sinocyclocheilus grahami)是滇池湖泊生态系统的指示物种和特有种.因水质污染和外来物种入侵等因素的影响,该鱼类自1986年起就从湖体中消失,仅有湖周围的少数龙潭中尚保存有少量滇池金线鲃.至2007年3月初,有两次繁殖试验取得了成功.先后试验了5尾雌鱼和6尾雄鱼,获得鱼卵约1 600粒,并实施干法受精.约有1 320粒受精,平均受精率为73%.孵化出鱼苗约480尾,平均孵化率为36%.经10天饲养,约有95%以上的鱼苗存活,体长达8-12 mm.滇池金线鲃人工繁殖成功的意义有三点:能有效保护该物种免于灭绝;繁殖的鱼苗放归湖泊合适水域,将有助于恢复滇池的土著生物多样性;有助于推动当地水产养殖业从非土著鱼类养殖向土著鱼类养殖的方向转变.