小麦幼苗阶段体内同化产物的运输和分配

用14C示踪法研究了冬小麦（Triticum aestivum L.）在整个冬前分蘖期内各个叶龄期主茎各叶位叶片同化产物的运输方向和供应范围，同时测定了主茎各叶位叶片净同化量对主茎叶片总同化量的贡献及其同化产物的运转率，对于各个分蘖出现后不同叶龄期接受主茎输出同化产物的量进行了定量的估计。得到以下主要结果： 1、整个冬前分蘖期，主茎一般维持有4-5片叶行使光合功能。其中顶部两片叶对植株同化产物的贡献最大。这两片叶的净同化量占主茎叶片总同化量的60%以上。主茎各叶位叶片在24小时内对标记同化产物的运转率在60%-85%之间。随着叶位下降，由于叶片衰老，不仅净同化量下降，而且叶片的同化物运转率也下降。整个分蘖期内，主茎叶片同化物的总运转率逐渐提高。 2、主茎叶片输出的同化物除主要供应主茎本身的顶端生长部位外，有相当大的一部分（约50%）供应给各分蘖，而不输入已经展开的主茎叶片。主茎顶部的两片主要功能叶主要供应主茎本身的顶端生长部位，0叶对主茎本身顶端生长部位的供应量始终保持在50%以上。随着叶位下降，对主茎本身的供应减少，而对分蘖的供应大大增加。 3、在向各分蘖的供应中，主茎顶部的三片主要功能叶集中供应正在出现（即正在长-1叶）的主茎一级分蘖和只有一片展开叶的主茎一级分蘖，对其它一级分蘖的供应，随蘖位降低，供应减少。其它主茎叶片都是主要供应本叶腋所包的上一节位的主茎一级分蘖，其次是本节位和上二节位的一级分蘖。每一主茎叶片的供应范围可分别达上、下两个节间距离。 4、各一级分蘖从主茎接受同化产物的量具有相同的变化规律。既分蘖在伸出叶鞘前和伸出后的早期（具有两片展开叶前）生长，从主茎接受相当大的部分同化物（约占主茎叶片总输出量的10-20%）;当分蘖具有两片展开叶时，从主茎接受同化物的量明显减少（占主茎叶片总输出量的10%）;当分蘖具有三片展开叶时，从主茎接受同化物已很少（5%以下）。作者认为，可以把具有两片展开叶的分蘖视为开始营养独立的分蘖。 5、主茎运向二级分蘖的同化物很少（5%以下）。主茎基部的一至两片叶对根系供应较多。但与地上部相比，主茎运往根系的同化物也比较少（10%以下）。 6、一级分蘖叶片的同化产物主要供应一级分蘖本身的生长部位和它所带的二级分蘖;一级分蘖叶片对二级分蘖的供应方式与主茎对一级分蘖的供应方式相同。一级分蘖的同化产物运向主茎和其它蘖群及分蘖很少。

芦笋抗氨基酸及氨基酸类似物突变体的筛选

由芦笋无菌苗诱导得到的愈伤组织，经甲基磺酸乙酯（EMS）诱变处理后，进行抗氧乙基半胱氨酸(AEC)和赖氨酸加苏氨酸(Lys十Thr)的突变体筛选工作，得到如下结果: ①AE C可抑制芦笋愈伤组织的生长，但此抑制作用可被赖氨酸或甲硫氨酸都分解除。利用AEC的抑制作用筛选得到抗0.5mMAEC的愈伤组织AR10并再生植株。AR10愈伤组织离开选择剂两代后仍保持对AE C的抗性。还发现抗性愈伤组织对2mM的半胱氨酸的抑制作用具有交叉抗性，对1mM的Lys+Thr的抑制作用有较弱的交叉抗性。AR10的再生植株一部分表出对A EC的抗性，另一部分则无抗性氨基酸分析表明，抗性愈伤组织内游离赖氨酸、苏氨酸、甲硫氨酸和异亮氨酸有所增加，而在开生植株中发现了半胱氨酸和赖氨酸的特异性增加（分别是对照的4•56和5 •39倍)。AR10的抗性机理目前尚不清楚。 ②2mM的Lys十Thr Lys+Thr对芦笋愈伤组织生长具有抑制作用。甲硫氨酸可部分解除.Ly s十Thr的抑制作用。用2mM的Lys+Thr筛选得到的抗性细胞系LTR2. LTR3，在离开选择压力一代，细胞增殖五倍的情况下仍保持对选择剂的稳定抗性。LTR2、L T R3愈价组织对A E C如仰制作用表现出部分的交叉抗性。另外还发现抗性系对苏氨酸(2mM )的生长抑制作用具有抗性，对赖氨酸(2mM)的生长抑制作用却无抗性，氨基酸分析表明。LTR2LTR3愈份组织内游离赖氨酸含量明显提高(分别是对照的2•18和2.67倍)，另发现一种峰值介于赖氨酸与游离氨之间的未知氨基酸增加更为显著(分别是对照的4•03和11•42倍)。这些结果表明抗性愈伤组织内氨基酸合成的某些关键酶可能发生了改变，对末端物的反馈抑制敏感性有所降低。

水稻富含甘氨酸蛋白在细胞中的定位及其基因调控元件的转基因分析

水稻Angrp-1基因编码富含甘氨酸蛋白质。氨基酸序列分析表明该蛋白在氨基端可能存在一个信号肽序列，其后为富含甘氨酸序列。亲水性指数显示AnGRP-1蛋白包含两个区域。第一个区域由氨基端的1到27氨基酸残基组成。为强疏水性区。该肽段的氨基端为带正电荷号肽特征。与水稻Osgrp-1和菜豆grp1.8基因编码的信号肽进行同源性比较，发现这三种信号肽具有alafLvLLNIg同源序列。AnGRP-1蛋白的第二区域由第28到183氨基酸残基组成。该区域富含甘氨酸，具轻度亲水性，并且含有15个Gly-Tyr-Gly基序，这些基序中的酷西安酸残基之间相互作用，有可能形成分子间或分子内的连接。 利用水稻原生质体瞬间表达系统，比较Angrp-1基因启动子283bp和－1020bp片段，以及Ubiquitin启动子、Actin启动子和35S启动子的活性。结果表明，在水稻原生质体瞬间表达中，Angrp-1基因的两个启动子片段活性较低，接近本底。三个对照的组成型启动子中，以Ubiquitin启动子的活性最强，Actin启动子次之， 35S启动子最弱。根据以上结果推测水稻Angrp-1基因的表达可能具有组织或发育特异异表达和特性。 为研究Angrp-1基因的稳定表达与调控特性，将Angrp-1基因的启动子缺失片段1020bp、941bp、568bp和182bp分别与GUS基因融合，得到pGRP6-121、pGRP7-121、pGRP8-121和pGRP9-121等4个克隆，进行烟草转化，获得转基因植株。GUS活性测定表明在－1020到－568之间，随缺失增多，启动子活性下降。当缺失至－182时，182bp的启动子片段活性高于568bp片段。因此，Angrp-1基因5'端－1020到－568之间存在正调控序列，在－568至－182之间存在负调控序列。对pGRP6-121的烟草转基因植株进行GUS组织染色和活性测发现，GUS基因在维管组织优先表达。在根、茎、叶三种器官中，叶和茎的表达量最高。营养生长期的表达量高于生殖生长期。用2283bp和1020bp的启动子片段分别与GUS基因融合，转化水稻，转化体的GUS组织学染色表明Gus基因具有维管束优先表达特性。因此，Angrp-1基因的表达具有较明显的组织、器官和发育特异性。 水稻AnGRP-1蛋白的免疫组织定位分析表明，Angrp-1基因产物主要定位于水稻的维管组织。利用免疫金方法对AnGRP-1蛋白进行超微结构定位，发现金颗粒主要分布于水稻细胞的细胞壁中。因此，可基本确定AnGRP-1蛋白为细胞壁蛋白。在细胞内的内质网和高尔基体上面或附近也有金颗粒的分布，表明至少有部分AnGRP-1蛋白经过内质网－高尔基体－质膜途径，最终达到细胞壁。 为研究Angrp-1基因编码的信号肽功能，将其信号肽与GUS的氨基端融合，分别置于35S启动子和Angrp-1基因1020bp启动子片段控制之下，得到克隆p35s-SP-GUS-121和pGRP6-SP-GUS-121，分别以pBI121和pGRP6-121作对照，进行烟草基因转化。转化体的GUS活性分析表明，在35S启动子控制下，加与不加信号肽对GUS活性影响不大。但是，在Angrp-1基因的1020bp启动子片段作用下，信号肽与GUS融合后的转化体中其本不表现GUS活性。利用免疫金方法进行的超微结构定位表明，在p35S-SP-GUS-121和pGRP6-SP-GUS-121转化的烟草植株中，均可在细胞壁中检测室GUS产物的存在，因此AnGRP-1的信号肽能引导GUS从细胞质分泌细胞壁中。 以Angrp-1基因5'端的－568到＋1作探针，发现Angrp-1基因以在水稻窄叶青和京系17两个亲本中存在多态性，并进一步将Angrp-1基因定位于水稻第10号染色体上。

莱州湾区域表层沉积物中多氯化萘、多溴联苯醚和氯化石蜡的研究

本研究建立了沉积物中氯化石蜡（CPs）的分析方法，对莱州湾和该区域主要河流的表层沉积物中多氯萘（PCNs），多溴联苯醚（PBDEs）和CPs进行了分析，获得了他们在研究区域的含量水平、空间分布和单体分布模式，并初步探讨了它们在环境中的来源和迁移规律，估算了这三类污染物在莱州湾表层沉积物中的储量，初步评估了莱州湾沿岸的工业排放与人类活动对海洋生态环境的影响。 莱州湾海洋和河流沉积物PCNs的含量分别为65-470 pg/g dw，52-5100 pg/g dw，平均值分别为260 pg/g dw，1100 pg/g dw。莱州湾沉积物中PCNs的含量较低，与发达国家的背景值相当，主要河流沉积物与其他地区的近海、海湾、湖泊沉积物的含量相当。该区域的PCNs主要以5-Cl和6-Cl为主，为工业来源，主要受化工行业的影响。石化工厂热过程产生的低氯组分可能也是该区域PCNs的一个重要来源。莱州湾的PCNs主要来自水体颗粒的输入，而大气沉降来源的贡献不明显。 河流沉积物ΣPBDEs（不包括BDE-209）的含量分别为0.01- 53 ng/g dw，BDE-209的含量为0.74- 280 ng/g dw，平均值分别为4.4 ng/g dw，51 ng/g dw。在组成上，BDE-209占绝对优势，比低溴代BDEs高1-2个数量级，这是由于我国市场上十溴联苯醚是最主要的溴代阻燃剂。ΣPBDEs与亚洲一些地区含量相当，比北美和欧洲一些地区要低；BDE-209含量含量高出北美和欧洲一些地区，处于较高的水平。河流沉积物中BDE-47与-99，BDE-183与-153、-154具有很好的相关性，而且这几种单体质量分数相当，说明莱州湾区域存在五溴和八溴两种工业BDE阻燃剂来源。海洋沉积物中ΣPBDEs的含量为nd- 0.66 ng/g dw，平均值为0.32 ng/g dw，处于较低水平，BDE-209的含量为0.66- 12 ng/g dw，平均值为5.1 ng/g dw，与欧美一些地区相当，主要来自水体颗粒的输入。 本研究用电子捕获低分辨质谱（ECNI-LRMS）建立了沉积物中CPs的分析方法。该方法基于ECNI质谱对SCCP的响应与其氯含量在一定范围内呈线性关系的特性，建立SCCP的总响应因子与氯含量的工作曲线，从而建立定量方法。重点改进了传统方法中由于SCCP标准品和样品中氯含量不同所造成的响应因子的差别，不再要求标准品的含氯量与样品一致，从而提高了SCCP的分析效率与方法准确性。实验发现，当SCCP的实际氯含量在51%-63%之间时，二者线性关系良好（r2>0.96）。用不同氯含量的标准参考品测试，误差为8%-43%。仪器检测限和方法检测限分别为25-400 μg/L，20 ng/g。类似地，建立了中链氯化石蜡（MCCP）的分析方法，工作曲线的实际氯含量范围为44-57%，仪器检测限40-600 μg/L，方法检测限为6 ng/g。通过对比样品与标准品的峰形特征，严格控制保留时间来辨别SCCP与MCCP，实验证明由于二者叠加导致的误差：SCCP为8%，MCCP为14%，总体来说，用该方法得到的CPs数据是可靠的。本文所使用的净化方法能实现CPs与大部分有机氯化合物的分离。 用该方法对莱州湾的沉积物的CPs进行定量，除了两个河流样品MCCP的计算含氯量低于工作曲线以外，其他样品的SCCP和MCCP的计算氯含量都在工作曲线的范围之内。河流沉积物中SCCP和MCCP的含量分别为1-1200 ng/g dw，1-3300 ng/g dw，MCCP/SCCP均值为1.2；含量分布变化较大，一些河段受到工业排放的影响，CPs浓度高出均值1-2个数量级，MCCP/SCCP值也显著高出平均值。莱州湾区域大部分河流的CPs含量与欧洲、北美和日本一些地区相当，而一些受到点源污染的河段则处于较高的水平。河流中SCCP的质量分布在不同的站位不一样，在受到点源影响的样品中，C13的质量分数明显增大，占优势地位，可能是由MCCP携带的SCCP组分所致。MCCP的质量分布在河流和海洋中没有区别，都是C14占绝对优势。从氯取代的组分来讲，所有样品都是以6-8氯取代为主。海洋沉积物中SCCP和MCCP的含量分别为3-18 ng/g dw，1-13 ng/g dw， MCCP/SCCP均值为0.68，显著低于河流沉积物；SCCP的质量分布较为一致，都是以C10和C11为主。研究发现莱州湾区域SCCP与MCCP来源相似，但迁移规律有的不同。海洋环境中的MCCP可能主要来自水体颗粒的输入，而溶解态输入也是海洋环境中SCCP的重要来源。 对这三类污染物在莱州湾表层沉积物中的储量估算得到PCNs、ΣPBDEs、BDE-209、SCCP和MCCP在莱州湾表层0-10 cm沉积物中的储量分别为0.20t，0.25t，3.95t，6.52t，4.30t。拥有10%的渤海海域面积的莱州湾ΣPBDEs和BDE-209的储量分别占渤海海区总量的18-23%，18-32%，远远超过渤海的平均值。

云南盐津乌鸡血液蛋白及同工酶遗传多态性研究

采用水平式淀粉凝胶电泳技术,对云南盐津乌鸡34只个体共计34个基因座位的血液蛋白及同工酶多态性进行研究,发现LAP、AKP-1、AKP-2、CKs-1、PEP-B 5个座位具有多态性,多态座位百分比和平均杂合度分别为P=0.1470,H=0.0586。对多态座位基因频率进行计算发现盐津乌鸡LAP~(B)、aKP-1、AKP-2、CEs-1~(A)、PEP-B~(A)频率较高。结果表明,云南盐津乌鸡遗传多样性程度较常见的外国鸡种高,且具有独特基因型,属选育程度低,选择潜力大的地方品种,具有较高的保种价值。

滇西北地区冬虫夏草和阔孢虫草的遗传分化研究

应用随机扩增多态性DNA(RAPD)技术对来自云南西北部高黎贡山和丽江玉龙雪山的6个冬虫夏草Cordyceps sinensis (Berk.) Sacc.,来自德钦地区三个地方的8个阔孢虫草C. crassispora Zang,Yang et Li以及来自云南昆明的一个蛹虫草C. militaris (Vuill) Fr.进行分析。18个随机引物获得的RAPD谱带清晰并呈现多态。遗传距离分析表明,冬虫夏草/阔孢虫草与蛹虫草之间存在显著的遗传差异。

Molecular evolution of growth hormone gene family in old world monkeys and hominoids

Growth hormone is a classic molecule in the study of the molecular clock hypothesis as it exhibits a relatively constant rate of evolution in most mammalian orders except primates and artiodactyls, where dramatically enhanced rate of evolution (25-50-fold) has been reported. The rapid evolution of primate growth hormone occurred after the divergence of tarsiers and simians, but before the separation of old world monkeys (OWM) from new world monkeys (NWM). Interestingly, this event of rapid sequence evolution coincided with multiple duplications of the growth hormone gene, suggesting gene duplication as a possible cause of the accelerated sequence evolution. Here we determined 21 different GH-like sequences from four species of OWM and hominoids. Combining with published sequences from OWM and hominoids, our analysis demonstrates that multiple gene duplications and several gene conversion events both occurred in the evolutionary history of this gene family in OWM/hominoids. The episode of recent duplications of CSH-like genes in gibbon is accompanied with rapid sequence evolution likely resulting from relaxation of purifying selection. GHN genes in both hominoids and OWM are under strong purifying selection. In contrast, CSH genes in both lineages are probably not. GHV genes in OWM and hominoids evolved at different evolutionary rates and underwent different selective constraints. Our results disclosed the complex history of the primate growth hormone gene family and raised intriguing questions on the consequences of these evolutionary events. © 2005 Elsevier B.V. All rights reserved.

不同渗透压的稀释液对猕猴精子低温冷冻保存的影响

以稀释液TTE (382 mOsm/ kg) 为对照, 研究了5 种渗透压(688 、389 、329 、166 、43 mOsm/ kg) 的TEST 稀释液(TEST、mTEST1、mTEST2、mTEST3、mTEST4) 在冷冻过程中对猕猴精子功能的影响。精液一 步稀释于含甘油的防冻液中, 甘油的终浓度为5 % (v/ v) 。在冷冻前后分别检测精子的运动度和质膜完整性, 后者用Hoechst 33342 和碘化丙锭双色标记流式细胞术分析。结果表明: 冷冻之前, 与鲜精相比, 用TEST 和 mTEST4 稀释的精子运动度和质膜完整性显著降低( P < 01001) , 其余组中除mTEST2 稀释的精子质膜完整性显 著降低( P < 0105) 外, 精子运动度无差异; 冷冻复苏后, TTE、mTEST3 和mTEST1 冻存精子的运动度和质膜 完整性最高, 其次是mTEST2 , TEST和mTEST4 冷冻效果最差( P < 0105) 。提示等渗、适当高渗或低渗的稀释 液适合猕猴精子的冷冻保存; 对精子产生高渗毒害作用是导致猕猴精子用TEST 冷冻存活率低的主要原因。