联合固氮菌Enteroabcter gergoviae 57-7氮代谢相关基因的克隆和泌氨工程菌的构建

从构建具有稳定泌氨能力的联合固氮工程菌的目的出发，首先构建Enterobacter gergoviae57-7 (E57-7)基因文库并与所筛选的泌氨突变株进行遗传互补实验，得到可互补 泌氨特性的克隆，经Southern杂交后推测其中包含与glnA、amtB基因无关的另一类与泌 氨相关的基因。同时根据铵载体基因amtB的已知序列设计两对简并性引物，经PCR从 E57-7 DNA中扩增得到约340bp的片段，序列分析和Blast序列同源性比较后确定为amtB 基因片段，申报并获得序列号AJ132232，最终从基因库中筛选到两个包含E57-7 amtB 基因的克隆。 用K. pneumoniae的glnA基因片段为探针，通过Southern杂交从E57-7基因库中筛选到包含有glnAntrBC基因的克隆，经亚克隆后对包含有这个操纵元的4316bp片段进行了全序列分析，申报GenBank获得序列号AF072440。在体外实验中构建了Km-cassette 插入glnA的重组质粒pA，将此质粒转入E57-7野生型菌株后经筛选同源重组子获得glnA 突变的具有稳定泌氨能力的菌株15、I9。并进行了盆栽玉米接种实验，确定在灭菌上壤实验体系下I5对玉米幼苗有显著促生效应。 利用绿色荧光蛋白(GFP-S65T，V68L，S72A)基因建立分子生物学研究手段，构建了新 型克隆载体pGreenLD，建立了绿白斑筛选重组质粒的的技术。构建组成型表达gfp的质粒载体研究了E57-7在玉米根际的定殖模式;构建nifH-gfp表达载体，确定在与植物联合生活时其固氮酶结构基因nifHDK的表达与碳源物质供应密切相关。利用不同抗性基因和gfp基因片段构建出在E57-7中组成型表达抗性和GFP的质粒载体，建立了监测接种菌在土壤中释放的双标记系统。 最后克隆了E57-7 glg cluster并测定部分glgCA和glgP基因序列，申报后获得序列号AJ132233和AJ132234，这是首例从联合固氮菌中克隆得到glg cluster的报道。

棉花抗黄萎病基因工程研究和防卫反应相关基因的克隆

系统获得性抗性(Systematic acquired resistance, SAR)是植物抵御病原菌侵染的最有效手段，利用基因工程技术导入SAR信号发生过程中的关键基因后，植物的SAR基因表达量提高并且对病原菌侵染的反应速度加快，因此植物的抗病性得以增强，与传统的抗病基因工程技术相比它对病原菌没有专一性，许多学者称之为广谱抗病基因工程，该领域已成为目前抗病基因工程研究的热点和前沿。 NDR1和NPR1基因在植物的SAR发生中起着重要的作用，前者功能定位在ROS(reactive oxygen species)的激活和随后的水杨酸(SA)诱导合成之间，突变株病原菌诱导后SA合成能力降低，SAR发生减弱，目前还没有对该基因进行过量表达分析的报道;后者功能定位在SAR信号转导级联反应之中的SA积累和随后的SAR基因表达之间。该突变株在病原菌侵染时不产生病程相关蛋白(PRs)，表现为感病，而对照抗病;过量表达该基因的转基因拟南芥对多种病原菌的侵染产生抗性，PR1等PRs蛋白的表达量也提高，异源表达该基因的水稻对白叶枯病的抗性也提高。本研究利用RT-PCR方法从拟南芥中克隆了这两种基因，序列分析表明拟南芥Wassilewskija生态型的NDR1基因与Columbia生态型相比，共有7处碱基不同，引起编码氨基酸变化4处，而NPR1基因与报道的Wassilewskija生态型来源的NPR1基因完全相同。 我们构建了35S启动子驱动的NDR1和NPR1基因的植物组成型高效表达载体，利用农杆菌介导法转化烟草，PCR和Southern鉴定外源基因已经整合到植物基因组中。抗病性分析显示过量表达NDR1和NPR1基因的烟草对晚疫病和赤星病的抗性都有明显提高，说明这两个基因的在其它植物中异源表达后，都能提高植物对多种病原菌的抗性。 本论文提出了利用这两个基因来培育抗黄萎病棉花的设想，一方面为解决这个“世纪性”难题积累新的资料，另一方面也为其它作物的抗病基因工程提供新的经验。利用35S启动子驱动的NDR1和NPR1基因的植物组成型表达载体分别对陆地棉品种石远321进行花粉管通道法转化。同时，还探讨了这两个基因在棉花中的共转化实验，希望它们的“协同增效”能进一步提高棉花的抗病性。对其中2001年夏天在南京注射所获得的5,000粒种子在三亚进行100 g/ml卡那霉素筛选，初步鉴定分别获得转NDR1和NPR1基因株系26和24棵，PCR进一步鉴定其中分别有12和7棵为转基因阳性，转基因频率分别为0.50％和0.27％，目前利用营养钵蘸根法对其二代进行抗枯、黄萎病鉴定，结果显示有转基因植株对枯、黄萎病的抗性都明显增强，进一步的鉴定正在进行中。2002年初海南注射分别获得转NDR1和NPR1基因以及共转化种子22,000、10,500和12,500粒种子，2002年夏在中国农科院植保所黄萎菌病圃筛选抗黄萎病单株，并利用100 g/ml卡那霉素初步筛选出了一批抗性植株，每种转基因株系随机挑选5株进行PCR鉴定，结果显示为阳性。进一步的抗黄萎病鉴定和筛选以及分子分析正在进行中。 同时，本文还探讨了病原菌诱导型启动子在广谱抗病基因工程应用的可能性。根据烟草的Pr1-a启动子已知序列设计引物，PCR扩增启动子序列后,构建病原菌诱导型NPR1基因植物表达载体，并对棉花进行转化，获得种子11,500粒，利用同上的筛选方法，获得了一致的结果，目前抗黄萎病鉴定、分子检测以及生物学分析正在进行中。 最后，鉴于抗生素标记在转基因植物的应用引起了许多“安全性”争论的事实，还构建了无筛选标记的表达载体对抗虫棉进行转化，这样在生产上可以直接获得抗虫棉抗黄萎病棉花新材料，也为其它作物抗病基因工程积累经验。 本研究还提出了一种较为有效的提取高质量棉花总RNA的方法，与原来一些棉花RNA纯化方法相比，该方法所用都为常规试剂，易于重复，质量高。并且利用获得的总RNA构建了黄萎菌激发子诱导的cDNA文库，滴度测定为1╳107pfμ/μg，插入片段大小在5 00~2 000 bp范围内。 鉴于NPR1基因研究的重要性，本研究还利用简并引物PCR技术从海岛棉和陆地棉的基因组中都分离到了NPR1基因的同源片段，大小都为208 bp，与拟南芥NPR1基因的相应部分的同源性分别为66％和65％，它们之间的同源性为87％，目前该基因的全长正在分离鉴定中。 多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白(PGIPs)在植物的防御反应中起着重要的作用，通过分析已知20余种pgip基因序列的保守区，设计简并引物，PCR扩增海岛棉（Gossypium barbadense）7124 cDNA文库，得到一条长561 bp的片段，序列测定后分析确认为pgip基因的一部分。根据此序列和棉花病原菌诱导的cDNA文库载体中已知部分设计RACE引物，扩增后，5’和3’RACE分别得到666bp和906 bp的片段。序列分析表明它具有完整的编码框，产物为330 aa的蛋白质。序列分析该蛋白具有10个串联的LRR(leucine-rich repeat)区，与柑桔(Citrus)和枳(Poncirus)的pgip基因的同源性分别为69.2%和68.7%。进一步PCR扩增得到该基因的全长阅读框，并且获得了相应的基因组片段，序列分析发现该基因没有内含子。这是从棉属植物中克隆的第一个pgip基因。

分子调控咖啡酸-O-甲基转移酶（COMT）对木质素合成及植物生长发育的影响

本论文由两部分组成，一、构建来自小麦的COMT的反义表达载体，转化烟草，研究抑制内源COMT对植物木质素合成及其生长发育的影响;二、利用花粉管通道法，将正义和反义COMT基因转化小麦，获得转基因小麦，从而进一步分析。 一、 反义抑制COMT对植物木质素合成及其生长发育的影响 构建含有小麦的咖啡酸-O-甲基转移酶（COMT）cDNA的反义表达载体, 利用农杆菌法转化烟草。 PCR, PCR-Southern 检测显示目的基因片段成功转入烟草基因组。处于营养生长期的转基因植株表型与对照没有明显差异;而发育成熟的转基因植株的植株矮化，茎部木质素含量与对照差异不大，木质素的组成S/G比下降，部分木质部细胞发生变形。我们还发现转基因烟草种子发芽率提高，移栽2个月的子一代转基因植株光合速率、蒸腾速率有所增强。结果表明通过反义抑制COMT将影响木质素合成,并在不同的发育阶段，影响着植物的生长发育。 二、 利用花粉管通道法获得转基因小麦 将构建好的含有Bar基因的正义和反义COMT表达载体利用花粉管法转化两个小麦品种（H4564和C6001），共获得转基因处理的种子1117颗，重新播种后，发育成苗分别为321株，总成苗率为28.7%。通过除草剂PPT筛选，分别获得PPT抗性植株31株。PCR检测抗性植株，获得PCR检测阳性植株5株，总阳性率为0.45%。阳性植株分别为H4564反义处理株1株，C6001的正义和反义处理株各2株。对小麦的植株高度，分蘖数等生理性状的分析发现，转基因小麦的分蘖数减少，植株高度降低。这些生理性状的改变与COMT基因转化的关系将有待于进一步验证。

神农架植被及其生物多样性与垂直分布格局-兼论中国中、北亚热带植被带的划分

本文主要通过样线法和样方法相结合，进行了大量的群落学调查和分析，分别从植物区系、物种多样性的垂直分布格局和森林群落类型三个方面分析了神农架植被的基本特征及其物种多样性，结果表明： 1．神农架地区具有很高的物种丰富度，有高等植物3，479种，隶属于1，010属，202科。 其中，蕨类植物305种，80属，32科;种子植物3，174种，930属，170科，其中裸子植物32种，19属，6科，被子植物3，142种，911属，164科;单子叶植物501种，175属，21科，双子叶植物2，641种，736属，143科。植物区系属的分布区类型中北温带分布型最多，其次为东亚分布、泛热带分布、东亚北美间断分布、旧世界温带分布以及热带亚洲分布。中国特有成分占5.65%，较全国的8.12%低。温热比(温带分布型(8-11)属数与热带分布型(2-7)属数的比值）为1.200，比全国(0.385)高。 调查样方中共出现高等植物784种，隶属于454属，144科，其中蕨类植物41种，32属，16科;种子植物743种，422属，128科，其中裸子植物20种，14属，5科，被子植物723种，408属，123科;单子叶植物86种，58属，11科，双子叶植物637种，350属，112科。属的分布区类型中北温带分布型最多，其次为东亚分布、泛热带分布、东亚北美间断分布、旧世界温带分布以及热带亚洲分布。温热比为1.52，草本层>乔木层>灌木层分别为2.18、1.76和1.14。 2．神农架植被类型多样，具有常绿阔叶林、常绿落叶阔叶混交林、落叶阔叶林、针阔混交林、亚高山针叶林、硬叶常绿阔叶林和亚高山灌丛草甸等自然植被类型。本文，依据乔木物种的重要值将神农架地区的森林植被划分出了69个类型。用Twinspan将调查的森林群落划分为32组，能基本上反映群落间相似的关系。 3．神农架地区具有完整的植被垂直带谱：海拔900 (1300) m以下为常绿阔叶林带;海拔900 (1300) m～1500 (1800)ⅡI为常绿落叶阔叶混交林带;海拔1500 (1800) m-2000 (2200)m为落叶阔叶林带;海拔2000 (2200) m～2400 (2600)m为针阔混交林带：海拔2400 (2600)m以上为亚高山针叶林带。神农架地区植被的垂直带的分化从总体上比较显著，但由于小生境的异质性和人为干扰，垂直带谱又具有一定的模糊性和次生性。南北坡具有一定的差异，但不十分明显，也说明神农架植被的过渡性。 4．神农架物种多样性的垂直分布格局。神农架的物种多样性与海拔的关系，类似于“中间膨胀”规律(mid-altitude bulge)，在中低海拔处生物多样性最高。通过二次多项式回归拟合，得到如下拟合曲线： 1)海拔与总体物种数：y= _14.445x2+ 34.74lx+42.07，Xd=1.203km; 2)海拔与乔木层物种数：y=-6.9707x2+ 21.334x+0.2004，Xdrl.530km; 3)海拔与灌木层物种数：y=-6.1599x2+ 9.9747x+30.991，Xd=0.8 lOkm: 4)海拔与草本层物种数：y= _3.9907x2+ 10.455x+15.35，Xd-1.308km; 5）海拔与乔木层Shannon-Wiener指数：y=_0.3337x2+ 0.9877x+0.2537，Xd' 1.480km; 6)海拔与灌木层Shannon-Wiener指数：y=-0.1938xz+ 0.422lx+1.2103，Xd=1.089km： 7)海拔与草本层Shannon-Wiener指数：y=_0.1072x2+ 0.294lx+0.9954，Xd=1.372km; x为海拔( km)，y为各物种多样性指标，Xd为物种多样性的最大时的海拔。 从这些拟合曲线中可以看出：总体物种多样性在海拔1200m左右的常绿落叶阔叶混交林带最高：乔木层物种多样性在海拔1500m左右的常绿落叶阔叶混交林带与落叶阔叶林的过渡带最高;灌木层物种多样性在海拔800-llOOm左右的常绿阔叶林与常绿落叶阔叶混交林带的过渡带最高;草本层物种多样性在海拔1300-1400m左右的常绿落叶阔叶混交林带最高。 但物种多样性随海拔变化有许多的起伏和波动。这些波动有些反映了群落的垂直带谱随海拔梯度变化的特点，在垂直带谱的过渡区物种多样性往往较高;有些波动反映了一些特殊的生境，有些反映了人为活动的影响，造成了神农架植被的次生性。因此，影响神农架物种多样性垂直分布的因素有：植被本身的性质和特点、过渡带的特点、生境的异质性和人为活动。 5．神农架植被水平地带性的过渡性。海拔1300m以下的植物属的分布区类型的温热比南坡总是比北坡小，而且相差十分显著，反映了神农架作为植被分界线的价值。神农架南坡的基带植被是常绿阔叶林，因此南坡属于中亚热带。北坡的基带植被，虽然也有常绿树种的零星分布，甚至有小块的常绿阔叶林，完全由于小生境所至，分布的主要类型是常绿落叶阔叶混交林，应属于北亚热带。因此，神农架是中、北亚热带重要的过渡地带。神农架地区中北亚热带的具体分界线宜按照分长江干流和汉水的水岭来划界，即猴子石、大窝坑、神农架、神农顶、老君山一线，南坡属于中亚热带，北坡属于北亚热带。 总之，神农架处于我国中、北亚热带的过渡带，具有过渡带的性质，具有很高的物种多样性，拥有完整的植被垂直带谱，具有多种多样的植物群落及其组成的生态系统。而且，具有我国许多特有植物和珍稀濒危保护植物和许多资源植物。因此，神农架植被在我国植被体系中具有重要的地位，是我国生物多样性最丰富的地区之一，是生物多样性保护的关键地区，也应是生物多样性研究的热点地区。 另外，调查分析了黄山和万朝山植被及其物种多样性与垂直分布格局，结果表明： 6．黄山样方中共出现高等植物259种，隶属于263属，110科，其中蕨类植物14种，II属，8科，种子植物345种，152属，105科，其中裸子植物9种，8属，6科，被子植物336种，144属，99科，其中单子叶植物37种，27属，6科，双子叶植物299种，117属，90科。属的分布区类型中北温带分布最多，其次为东亚分布和泛热带分布，再次为东亚北美间断分布、热带亚洲分布以及旧世界温带分布，与神农架和万朝山也较相似，但热带分布的属更多一些。温热比为1.1875，灌木层>草本层>乔木层，分别为1.3818、1.2609和1.2143。 黄山的森林植被类型有针叶林、常绿阔叶林、常绿落叶阔叶混交林、针阔混交林、落叶阔叶林和竹林。Twinspan将调查的森林群落划分为22组，反映群落间相似的关系，比较清楚和适用。依据乔木物种的重要值将森林植被划分出了34个类型。黄山物种多样性的与海拔的关系不十分明显。黄山植被的垂直带谱不是十分明显，将其垂直带谱划分为：海拔1300m(1500m)以下为常绿阔叶林带;海拔1300m(1500m)-1500m(1600m)常绿落叶阔叶混交林 带;1500m(1600m)以上为落叶阔叶林、黄山松林、山地灌木草丛带。垂直带谱在不同坡向上有差别，东、南、西坡的相似性较大，而北坡与其差别较大。 7．万朝山样方中共出现高等植物490种，隶属于339属，124科，其中蕨类植物21种，18属，11科，种子植物469种，321属，113科，其中裸子植物9种，7属，4科，被子植物460种，314属，109科，其中单子叶植物47种，37属，11科，双子叶植物413种，277属，98科。植物属的分布区类型中，北温带分布所占最多，其次为泛热带分布、东亚分布、东亚北美间断分布、旧世界温带分布以及热带亚洲分布，。温热比为1.3366，草本层>乔木层>灌木层，分别为1.5429、1.4063和1.0645。 万朝山的植被类型包括针叶林、落叶阔叶林、针阔混交林和常绿落时阔叶混交林，但没有典型的常绿阔叶林。依据乔木物种的重要值将森林植被划分出了20个类型。万朝山物种多样性与海拔的关系则不十分明显。万朝山的人为干扰比较强，植被的次生性很大，南、北坡物种多样性随海拔升高的起伏较大。

Chromosome painting between human and lorisiform prosimians: Evidence for the HSA 7/16 Synteny in the primate ancestral karyotype

Multidirectional chromosome painting with probes derived from flow-sorted chromosomes of humans (Homo sapiens, HSA, 2n = 46) and galagos (Galago moholi, GMO, 2n = 38) allowed us to map evolutionarily conserved chromosomal segments among humans, galagos, a

人猿超科和旧大陆猴7种高等灵长类FKN全基因序列的测定及进化分析

测定人猿超科(人、黑猩猩、大猩猩、红毛猩猩和长臂猿)和旧大陆猴(猕猴和叶猴)7种高等灵长类FKN全基因序列,探讨其系统进化分析.用简并引物PCR(Degenerated PCR)法分别扩增FKN的3个外显子,其产物经琼脂糖凝胶回收、纯化后测序,然后用BioEdit软件剪切拼接FKN基因全序列,用DNAStar比对后比较基因和氨基酸序列同源性,Mega软件重构FKN基因进化树,应用Datamonkey分析FKN的负选择位点.序列分析发现人猿超科较旧大陆猴FKN基因除了有散在的点突变外,还有一明显的30 bp的核苷酸缺失突变;人FKN基因序列与黑猩猩、大猩猩、红毛猩猩、长臂猿、猕猴和叶猴的同源性分别是99.2%、98.4%、98.1%、96.5%%、95.95和93.8%,由此推导的氨基酸序列同源性分别是98.5%、98.0%、97.7%、94.7%、93.7%和90.5%;FKN基因进化树表明人与黑猩猩关系更近,FKN基因进化和通常认为的物种进化一致;Datamonkey分析结果显示FKN存在3个负选择位点53Q.84D、239N.成功获得人、黑猩猩、大猩猩、红毛猩猩、长臂猿、猕猴和叶猴7种高等灵长类物种FKN全基因序列,为后续探讨FKN在高等灵长类物种进化过程中免疫学功能演变及其结构与功能的关系奠定基础. 作 者： 洪晓武 张亚平 储以微 高海峰 蒋正刚 熊思东 HONG Xiao-Wu ZHANG Ya-Ping CHU Yi-Wei GAO Hai-Feng JIANG Zheng-Gang XIONG Si-Dong 作者单位： 洪晓武,储以微,高海峰,蒋正刚,熊思东,HONG Xiao-Wu,CHU Yi-Wei,GAO Hai-Feng,JIANG Zheng-Gang,XIONG Si-Dong(复旦大学上海医学院免疫学系,免疫生物学研究所,上海,200032) 张亚平,ZHANG Ya-Ping(中国科学院昆明动物研究所细胞与分子进化开放实验室,昆明,650223) 刊 名： 遗传 ISTIC PKU 英文刊名： HEREDITAS 年，卷(期)： 2008 30(5) 分类号： Q94 关键词： 人猿超科 旧大陆猴 FKN 测序 进化分析 机标分类号： R5 S86 机标关键词： 大陆灵长类全基因序列测定系统进化分析phylogenetic analysis基因进化树黑猩猩序列同源性长臂猿物种进化猕猴红毛负选择氨基酸琼脂糖凝胶基因全序列序列分析位点软件重构 基金项目： 国家自然科学基金，复旦大学校科研和教改项目 DOI：

乳腺增生病p53基因第7外显子突变检测

目的探讨p53基固在乳腺癌发生早期的作用及早期诊断乳晾瘟的分子病理指标。方法用PCR—sso 法检测36例乳腺单纯性增生、31例不典型增生、14例原位癌和16例程润癌中p53基因第7外显子突变，井用叭A 直接测序技术确定突变的碱基及其所在的密码子。结果乳腺单纯性增生、不典型增生、原位癌、浸润癌中|】53基 因第7外显于的突变率分别为0％、6 5％(2／31)、21 4％(3／14)、18．8％(3／16)。8例突变中，3例发生于251密码 子，4例发生手248密码子，I例发生于236密码子。表现为碱基替换(5例)、缺失(2例)、插入(J例)共二种突变方 式。并在I例原位瘟中首次发现了251密码子的同义突变(ATC斗ATr，异亮氨酸一异亮氮酸)。结论乳腺癌不典 型增生中存在053基因第7外显子突变，该突变可能在乳腺不典型增生发展到乳腺癌的过程中起霞要作用，可作为 早期诊断乳腺癌的辅助指标。

7种长蠹科昆虫的线粒体DNA ND4基因序列比较分析

长蠹科昆虫严重危害林木和仓贮物品。该文应用非损伤性DNA测序技术测定了来自不同国家的长蠹科害虫的线粒体DNAND4基因的部分序列。在获得的 2 0 4bp的序列中 ,7种昆虫的序列变异丰富 ,多数变异发生在密码子的第 3位点上。将实验结果与形态学特征比较分析 ,探讨 7个种的形态差异与基因序列的差异 ;结果表明 ,7种昆虫不仅在外形特征上存在差异 ,而且在ND4基因序列上的差异程度也很显著 ,平均为 2 1 94%。这为分类鉴定提供了充分的证据。

Attention deficit/hyperactivity disorder children with a 7-repeat allele of the dopamine receptor D4 gene have extreme behavior but normal performance on critical neuropsychological tests of attention

An association of the dopamine receptor D4 (DRD4) gene located on chromosome 11p15.5 and attention deficit/hyperactivity disorder (ADHD) has been demonstrated and replicated by multiple investigators. A specific allele [the 7-repeat of a 48-bp variable number of tandem repeats (VNTR) in exon 3] has been proposed as an etiological factor in attentional deficits manifested in some children diagnosed with this disorder. In the current study, we evaluated ADHD subgroups defined by the presence or absence of the 7-repeat allele of the DRD4 gene, using neuropsychological tests with reaction time measures designed to probe attentional networks with neuroanatomical foci in D4-rich brain regions. Despite the same severity of symptoms on parent and teacher ratings for the ADHD subgroups, the average reaction times of the 7-present subgroup showed normal speed and variability of response whereas the average reaction times of the 7-absent subgroup showed the expected abnormalities (slow and variable responses). This was opposite the primary prediction of the study. The 7-present subgroup seemed to be free of some of the neuropsychological abnormalities thought to characterize ADHD.

Phylogenetic studies of pantherine cats (Felidae) based on multiple genes, with novel application of nuclear beta-fibrinogen intron 7 to carnivores

The pantherine lineage of the cat family Felidae (order: Carnivora) includes five big cats of genus Panthera and a great many midsized cats known worldwide. Presumably because of their recent and rapid radiation, the evolutionary relationship among pantherines remains ambiguous. We provide an independent assessment of the evolutionary history of pantherine lineage using two complete mitochondrial (mt) genes (ND2 and ND4) and the nuclear beta-fibrmogen intron 7 gene, whose utility in carnivoran phylogeny was first explored. The available four mt (ND5, cytb, 12S, and 16SrRNA) and two nuclear (IRBP and TTR) sequence loci were also combined to reconstruct phylogeny of 14 closely related cat species. Our analyses of combined mt data (six genes; approximate to 3750 bp) and combined mt and nuclear data (nine genes; approximate to 6500 bp) obtained identical tree topologies, which were well-resolved and strongly supported for almost all nodes. Monophyly of Panthera genus in pantherine lineage was confirmed and interspecific affinities within this genus revealed a novel branching pattern, with P. tigris diverging first in Panthera genus, followed by P. onca, P. leo, and last two sister species P. pardus and P. uncia. In addition, close association of Neofelis nebulosa to Panthera, the phylogenetic redefinition of Otocolobus manil within the domestic cat group, and the relatedness of Acinonyx jubatus and Puma concolor were all important findings in the resulting phylogenies. The potential utilities of nine different genes for phylogenetic resolution of closely related pantherine species were also evaluated, with special interest in that of the novel nuclear beta-fibrinogen intron 7. (c) 2005 Elsevier Inc. All rights reserved.

5，6-二羟基-2-（4-羟苯基）-4-酮-4H-1-苯并吡喃基-7-羟基-β-D-葡萄糖醛酸在制药中的应用

本发明提供化合物5，6-二羟基-2-(4-羟苯基)-4-酮-4H-1-苯并吡喃基-7-羟基-β-D-葡萄糖醛酸在制备抗艾滋病药物中和在制备逆转录酶抑制剂药物中的应用。

毛蕊异黄酮-7-氧-β-D-吡喃葡萄糖苷或其盐在抗艾滋病中的应用

本发明属于医药技术领域，公开了毛蕊异黄酮-7-氧-β-D-吡喃葡萄糖苷或其盐的新的医药用途。经药理试验证明，毛蕊异黄酮-7-氧-β-D-吡喃葡萄糖苷或其盐具有抗艾滋病毒作用，可治疗艾滋病，可在制备抗艾滋病药物中应用。

Przewalskin A: A new C-23 terpenoid with a 6/6/7 carbon ring skeleton from Salvia przewalskii maxim

Przewalskin A (1), a novel C-23 terpenoid with a 6/6/7 carbon ring skeleton, was isolated from Salvia przewalskii. Its structure was determined by comprehensive 1D NMR, 2D NMR, and MS spectroscopic analysis and subsequently confirmed by a single-crystal X

The Anti-HIV Actions of 7-and 10-Substituted Camptothecins

Camptothecin (CPT), a traditional anti-tumor drug, has been shown to possess anti-HIV-1 activity. To increase the antiviral potency, the anti-HIV activities of two CPT derivatives, 10-hydroxy-CPT and 7-hydroxymethyl-CPT, were evaluated in vitro. The therapy index (TI) of CPT, 10-hydroxy-CPT and 7-hydroxymethyl-CPT against HIV-1(IIIB) in C8166 were 24.2, 4.2 and 198.1, and against clinical isolated strain HIV-1(KM018) in PBMC were 10.3, 3.5 and 66.0, respectively. While the TI of CPT, 10-hydroxy-CPT and 7-hydroxymethyl-CPT against HIV-2(CBL-20) were 34.5, 10.7 and 317.0, respectively, and the TI of the three compounds against HIV-2(ROD) showed the similar values. However, when the antiviral mechanisms were considered, we found there was no inhibition of 7-hydroxymethyl-CPT on viral cell-to-cell transmission, and was no inhibition on reverse transcriptase, protease or integrase in cell-free systems. 7-Hydroxymethyl-CPT showed no selective killing of chronically infected cells after 3 days of incubation. In conclusion, 7-hydroxymethyl-CPT showed more potent anti-HIV activity, while 10-hydroxy-CPT had less efficient activity, compared with the parent CPT. Though the antiviral mechanisms remain to be further elucidated; the modification of -OH residues at C-7 of CPT could enhance the antiviral activity, while of -OH residues at C-10 of CPT had decreased the antiviral activity, which provides the preliminary modification strategy for anti-viral activities enhancement of this compound.