水溶性聚合物和两亲聚合物23.两亲聚合物PAMC_(16)S对螺口恶嗪化学和物理行为的影响

研究了两亲聚合物聚 (2 -丙烯酰胺基十六烷磺酸 ) (PAMC16S)存在下 1 -乙基 -3 ,3 -二甲基螺 [吲哚啉 -萘并口恶嗪 ](SO -E)在水溶液中的增溶作用及PAMC16S对SO -E化学和光化学性质的影响。PAMC16S明显增加了SO -E在水相的溶解性 ,SO -E的最大增溶浓度随PAMC16S浓度增加呈线性增加规律。在PAMC16S存在下 ,新配制的SO -E溶液显示可逆的光致变色性 ,显色体呈红色 ,最大吸收峰位于 5 2 0nm ,在室温下的消色反应速度明显慢于无PAMC16S存在下的兰色显色体。SO -E/PAMC16S溶液是不稳定的 ,配制后较长时间即失去SO -E的正常光致变色性质。盐酸具有与PAMC16S相似的作用 ,SO -E/PAMC16S体系的不稳定性可用氨水中和的方法解决。1H -NMR结果表明SO -E在酸性介质中发生了不可逆的化学反应。

稀土离子对人血清白蛋白动态结构性质影响的￣（23）NaNMR研究

利用￣（２３）Ｎａ作为探针磁核，通过弛豫分析发现：稀土离子与ＨＳＡ络合后使蛋白质分子体积膨胀，链段活动性增加，表现为相关时间（τ＿ｃ）减小；ＨＳＡ可能至少有了３个高亲和位点可络合稀土离子；稀土离子诱导的ＨＳＡ动态结构变化在某种程度上具有可逆性，即当高亲和位上的稀土离子被螯合剂在取后，膨胀伸展的结构趋于恢复原有状态。

具有抗HIV病毒活性的杂多酸HPA－23与谷胱甘肽的作用

以谷胱甘肽作为病毒包络蛋白的模拟物，用ＮＭＲ方法研究了与具有抗爱滋病病毒活性杂多酸ＨＰＡ－２３的作用．对不同配比的ＨＰＡ－２３和谷胱甘肽混合物的１Ｈ和１８３ＷＮＭＲ谱研究结果表明，还原型和氧化型谷胱甘肽均以Ｃ末端ＣＯＯ－与ＨＰＡ－２３骨架的钨原子配位，还原型谷胱甘肽侧链上的巯基（ＳＨ）也参加配位．ＣＯＳＹ谱证明了ＳＨ配位为慢交换反应．早在七十年代初，人们就发现杂多酸具有抗病毒活性［１，２］．最近报道［ＮＨ４］１８［ＮａＳｂ９Ｗ２１Ｏ８８］·２４Ｈ２Ｏ（结构代号为ＨＰＡ－２３）具有很高的抗爱滋病病毒活性，在法国已进入临床应用［３］．但从分子水平研究杂多酸化合物抗病毒的机理．目前尚未见到国内外报道．而作为病毒可以广义地看作由一个蛋白外壳包裹，内部则为核酸．爱滋病病毒同样由两层蛋白所包裹，与宿主细胞发生吸附作用主要是通过外层包络蛋白（ＧＰ１２０）［４］，该蛋白的活性组份是一个由８个氨基酸组成的Ｔ（Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｔｈｒ－Ｔｈｒ－Ｔｈｒ－Ａｓｎ－Ｔｙｒ－Ｔｈｎ）肽段［５］．我们以容易得到的三肽一谷胱甘肽作为病毒包络蛋白的模拟物，用ＮＭＲ方法研究杂多酸ＨＰＡ－２３与它的作用．结果表明还原型和氧化型谷胱甘肽均以Ｃ末端Ｃ

用NMR方法研究杂多酸HPA-23与谷胱甘肽的作用

早在70年代初,人们就发现杂多酸具有抗病毒活性.例如钨锑酸钠[NaSb_9W_(21)O_(86)]~(18-)有可能成为潜在的抗病毒化合物.非常有趣的是最近报道[NH_4]_(18)[NaSb_9W_(21)O_(86)]·24H_2O(结构代号为HPA-23)具有很高的抗爱滋病病毒活性,在法国已进入临床应用.但从分子水平研究杂多酸化合物抗病毒的机理,目前尚未见到国内外报道.而作为病毒可以广义地看作由一个蛋白外壳包裹,内部则为核酸.爱滋病病毒同样由两层蛋白所包裹,与宿主细胞发生吸附作用主要是通过外层包络蛋白(GP120),该蛋白的活性组分是一个由8个氨基酸组成

The construction of a cDNA library enriched for immune genes and the analysis of 7535 ESTs from Chinese mitten crab Eriocheir sinensis

Chinese mitten crab Eriocheir sinensis is one of the most important aquaculture crustacean species in China. A cDNA library was constructed from hemocytes of E. sinensis challenged with the mixture of Listonella anguillarum and Staphylococcus aureus, and randomly sequenced to collect genomic information and identify genes involved in immune defense response. Single-pass 5' sequencing of 10368 clones yielded 7535 high quality ESTs (Expressed Sequence Tags) and these ESTs were assembled into 2943 unigenes. BLAST analysis revealed that 1706 unigenes (58.0% of the total) or 4593 ESTs (61.0% of the total) were novel genes that had no significant matches to any protein sequences in the public databases. The rest 1237 unigenes; (42.0% of the total) were closely matched to the known genes or sequences deposited in public databases, which could be classed into 20 or 23 classifications according to "molecular function" or "biological process" respectively based on the Gene Ontology (GO). And 221 unigenes (7.5% of all 2943 unigenes, 17.9% of matched unigenes) or 969 ESTs (12.9% of all 7535 ESTs, 32.9% of matched ESTs) were identified to be immune genes. The relative higher proportion of immune-related genes in the present cDNA library than that in the normal library of E. sinensis and other crustaceans libraries, and the differences and changes in percentage and quantity of some key immune-related genes especially the immune inducible genes between two E. sinensis cDNA libraries may derive from the bacteria challenge to the Chinese mitten crab. The results provided a well-characterized EST resource for the genomics community, gene discovery especially for the identification of host-defense genes and pathways in crabs as well as other crustaceans. (C) 2009 Elsevier Ltd. All rights reserved.

中华绒螯蟹（Eriocheir sinensis）cDNA文库的构建、EST分析及其酚氧化酶系统关键基因的研究

中华绒螯蟹（Eriocheir sinensis）是我国的特色物种，具有重要的经济和科研价值。酚氧化酶系统作为节肢动物特有的免疫机制，在中华绒螯蟹的免疫反应中发挥重要作用。本研究构建了一个中华绒螯蟹的cDNA文库，利用表达序列标签 (Expressed Sequence Tag，EST) 技术，对中华绒螯蟹表达序列进行了大规模测序分析，并利用cDNA末端快速扩增（rapid amplification of cDNA ends，RACE）、实时定量PCR、原核重组和RNAi等技术研究了其酚氧化酶免疫系统的分子基础及其相应功能。 用鳗弧菌和金黄色葡萄球菌同时感染中华绒螯蟹，提取血细胞的RNA构建了一个库容为3.3×106 克隆cDNA文库。随机测序后获得7535条高质量的EST序列，其中在GenBank数据库中未发现同源序列的为4593 条，而具有较高同源性2942条可以分为20个功能类别，参与了23个生物学反应。 进一步分析发现，969 条（32.9% ）EST与免疫相关，可拼接成221个免疫基因。这个比例高于其它任何一个已公布的甲壳动物cDNA文库。在免疫相关EST中，抗菌肽比例最高，约占总数的20.1%（195条EST）。免疫基因的高比例和抗菌肽的高表达，证明细菌刺激是提高cDNA 文库中免疫基因丰度的有效方法。 EST序列的获得和免疫基因的富集，丰富了中华绒螯蟹的基因组信息，初步了解了中华绒螯蟹固有免疫系统的概况, 为进一步克隆和研究中华绒螯蟹免疫防御功能基因提供了序列基础。 本研究在EST分析的基础上，克隆获得了中华绒螯蟹酚氧化酶系统10个基因的cDNA全长序列, 它们分别是前酚氧化酶（EsproPO），丝氨酸蛋白酶同源物（EsSPH), 丝氨酸蛋白酶抑制剂pacifastin, serpin, PAPII (EsPLC, Es serpin, EsPAPII), 模式识别丝氨酸蛋白酶（EsPRSP），peroxinectin (Esperoxinectin)和3个前酚氧化酶激活酶 (EsPAP1, 2, 3)。它们与相近物种的酚氧化酶系统相应基因均具有较高同源性，并含有胰酶催化结构域，CLIP结构域，PLD结构域，KAZAL结构域，Serpin结构域以及酚氧化酶结构域等酚氧化酶系统相应基因典型的特征结构域。分析发现，PAPs的CLIP结构域和PRSP，Pacifastin，Proxinectin，proPO基因是节肢动物特有的，是酚氧化酶系统作为节肢动物特有免疫机制的分子基础。本研究从多个基因的3′UTR区发现了调控元件，如15-LOX-DICE，K-box和 Brd-Box。在所推断的蛋白中，EsPAP3和EsPAPII的等电点呈碱性，Esperoxinetin的为中性，而EsPRSP，EsSPH，EsproPO, EsPAPII, Esserpin，EsPAP1的等电点在酸性区间。健康中华绒螯蟹 EsPAP1，EsPAP2，EsPAPII基因在肌肉中的表达量最高，而在血细胞中的表达量相对较低；EsPAP3，EsproPO，EsPLC基因在血细胞中表达量较高，在肌肉中的表达量最低。其中，EsPAP3在血细胞中的表达量是其在肌肉组织中表达量的526.35倍。调控元件和多种激活酶与抑制剂的存在、组织分布和等电点的差异，说明中华绒螯蟹酚氧化酶系统在转录、翻译、激活等多个层次上受到了调控。在中华绒螯蟹受到鳗弧菌刺激后，EsPAP1，EsPAP2，EsPAP3，EsPLC和EsPAPII基因的表达量呈上升或下降的趋势，但表达量的极限值均出现在2小时和12小时，这一规律与EsproPO应激后的mRNA表达和酶比活力的变化特点相吻合，说明中华绒螯蟹酚氧化酶系统各因子相互协调共同参与中华绒螯蟹对入侵细菌的防御反应。同时EsPAP2，EsPAP3，EsproPO，EsPAPII，EsPLC在中华绒螯蟹受到鳗弧菌刺激后的表达呈现反复多次上升，表明酚氧化酶系统可能参与了多种免疫反应。研究还发现EsPAP1参与中华绒螯蟹血液凝集过程，而EsPAP3是蟹血细胞中的有效的前酚氧化酶激活因子。研究结果初步揭示了中华绒螯蟹酚氧化酶系统的分子基础、对微生物的响应机制及其调控机制和演化趋势，为节肢动物固有免疫系统研究奠定了良好基础。

SNAP-23蛋白在鲈鱼巨噬细胞白细胞介素1β分泌过程中的功能

SNARE蛋白家族是所有真核细胞胞吐及分泌作用中的关键因子，由其介导的运输囊泡膜与靶膜的锚靠、融合为胞内蛋白的运出提供了一条重要途径。体外试验表明，Syntaxin6-Syntaxin7-Vti1b，SNAP-23-Syntaxin4等SNARE核心蛋白之间精确的相互作用是哺乳动物巨噬细胞肿瘤坏死因子α (TNF-α)运输和分泌的必备条件，在机体非特异性免疫应答反应过程中起重要作用。 本研究受上述启示，旨在揭示SNARE蛋白在海洋鱼类免疫细胞内重要细胞因子白细胞介素1β (IL-1β)的分泌过程中的作用。参照Percoll密度梯度离心技术，从鲈鱼头肾组织分离纯化巨噬细胞进行稳定培养；利用RT-PCR方法克隆出鲈鱼t-SNARE蛋白SNAP-23和Syntaxin3的部分cDNA序列，再结合先前克隆的VAMP2和已知的鲈鱼IL-1β，TNF-α和IL-8的基因序列，设计特异性引物。利用Real-time PCR技术在mRNA水平上精确测定鲈鱼巨噬细胞中上述6种基因在革兰氏阴性菌脂多糖(LPS)分子刺激下的表达变化，发现SNAP-23基因与三种细胞因子基因的表达正相关；通过免疫印迹检测SNAP-23蛋白表达变化，利用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测IL-1β的分泌水平，在蛋白水平上验证了SNAP-23表达与IL-1β分泌的正相关性；利用5`RACE和3`RACE技术克隆出鲈鱼SNAP-23全长基因，结合定点突变策略和靶向PCR克隆手段，构建鲈鱼SNAP-23野生型融合质粒pEGFP-SNAP-23wt，Cys缺失突变融合质粒pEGFP-SNAP-23ΔCys和模拟E型肉毒神经毒素(BoNT/E)切割突变融合质粒pEGFP-SNAP-23ΔBoNT/E，以及鲈鱼IL-1β野生型融合表达质粒IL-1β-pEGFP和IL-1β-pEYFP。所有融合蛋白均在鲈鱼巨噬细胞内成功表达，结合ELISA实验结果发现，SNAP-23野生型的表达对IL-1β的分泌有促进作用，而Cys缺失突变体的表达则抑制IL-1β向胞外分泌。首次证实了鱼类巨噬细胞内SNAP-23蛋白在IL-1β分泌过程中的重要作用。此外通过与GFP共表达，定位了IL-1β分子在巨噬细胞内的分布，发现新合成的IL-1β分子很可能像TNFα一样经“内质网－胞质－伪足－胞外” 的分泌路径运出胞外。

栉孔扇贝凝集素家族基因研究

栉孔扇贝是我国北方重要的贝类养殖品种。自1997年以来爆发的栉孔扇贝大规模死亡，给地区经济造成了重大损失并且已经严重威胁扇贝养殖业的健康发展。然而，到目前为止，对扇贝免疫防御的分子机理了解还很少，深入研究扇贝免疫应答的分子机制是认识和了解病害发生和实现病害控制的关键问题之一。本研究采用了EST大规模测序结合cDNA锚定扩增的方法，从栉孔扇贝cDNA文库中克隆到五个C－型凝集素基因，并对其中部分基因进行了深入研究。 C－型凝集素CFLec－1的基因全长1785bp，其中含有5’非翻译区66bp，随后是666bp的开放阅读框；最后一条非常长的3’非翻译区1040bp，其中包含多个多聚腺甘酸加尾信号和polyA尾巴。栉孔扇贝CFLec－1编码221个氨基酸的蛋白，其N末端为15个氨基酸的信号肽。CFLec－1的成熟肽为206个氨基酸，其等电点为5.12，计算分子量为23.49kDa。SMART程序分析显示，C末端130氨基酸是一个标准的长型C－型凝集素结构域，其中四个半光胺酸（Cys104，Cys177，Cys193，Cys202）形成的两对二硫键维持了C－型凝集素的空间结构，而位于N末端的两个二硫键（Cys74，Cys85）构成了长型C－型凝集素结构域特有的一对额外二硫键。同源性分析表明，CFLec－1的C－型凝集素结构域与红原鸡的甘露糖受体中的C－型凝集素结构域有47％的相似度，与大西洋鲑的C－型凝集素受体C有31％的相似度。通过与其他同源的C－型凝集素结构域序列比对，发现了可能的糖结合位点EPD基域（Glu169-Pro170-Asp171）。通过RT－PCR研究CFLec－1在扇贝不同组织中的分布后发现，在健康扇贝中，CFLec－1在性腺中有中等程度的表达，在腮中有少量表达，在血淋巴和外套膜中有微量表达。经热处死的鳗弧菌刺激后，CFLec－1在几乎所有检测组织中的表达量都有明显的提高，其中，血淋巴中的表达量变化最为显著。这些结果说明CFLec－1是组成/诱导型基因，并且可能参与了黏膜防御。通过RT－PCR分析了CFLec－1在血淋巴中的表达特征后发现，在革兰氏阳性菌溶壁微球菌和革兰氏阴性菌鳗弧菌刺激后，CFLec－1的表达均显著高于对照组，并且成明显的随时间变化趋势。在大肠杆菌中表达的重组CFLec－1可以凝集革兰氏阴性菌大肠杆菌JM109，且凝集过程需要钙离子的参与。重组CFLec－1对大肠杆菌JM109有较弱的抑菌活性，对溶壁微球菌有明显的抑菌活性，对鳗弧菌没有抑菌活性。这一结果说明，CFLec－1可能不仅参与对入侵微生物的识别过程，而且可能作为效应分子起到了直接杀灭入侵微生物的作用。 CFLec-2的cDNA全长为708bp，其5’UTR为59bp。3’UTR为217bp。 CFLec-2的开放阅读框为432bp，编码160个氨基酸残基,其中包含5’信号肽17个残基。CFLec-2的编码区中含有一个C-型凝集素结构域。利用本研究中构建的原核表达载体，CFLec-2的成熟肽在大肠杆菌中被成功表达。 mCFLec-1的cDNA全长为2257bp，5’UTR17bp，3’UTR为713bp。mCFLec-1的开放阅读框为1527bp，编码508个氨基酸残基，其中包含17个氨基酸残基的信号肽序列。mCFLec-1的编码区含有三个串联的C-型凝集素结构域。利用本研究中构建的原核表达载体，mCFLec-2的成熟肽在大肠杆菌中被成功表达。 mCFLec-2的cDNA全长2086bp。其5’UTR长为18bp，3’UTR长为238bp。开放阅读框均为1776bp，编码609个氨基酸残基，其中包含N末端由18个氨基酸构成的信号肽。mCFLec-2的编码区包含四个C-型凝集素结构域。mCFlec-3的cDNA全长1897bp，其5’UTR和编码区与mCFLec-2几乎完全相同，只有个别碱基的差异。mCFlec-3的3’UTR为49bp。 本研究从扇贝机体本身的免疫机制入手，深入探讨其免疫机理，为进一步研究信号传导，了解扇贝先天性免疫的机制，为制定合理的研制策略提供坚实的理论基础；丰富和发展海水无脊椎动物免疫学的内容，为控制养殖生物疾病提供了新的思路；进一步通过高低等生物之间功能类似分子的同源性比对，为解释和阐明先天免疫这种已经存在数十亿年，从低等生物开始到人类仍旧保留且更加完善的免疫系统的奥秘和本质提供证据。

客户／服务器环境下的OS／22·1操作系统

ＯＳ／２２·１是当今客户／服务器计算模式的首选操作系统之一。本文对ＩＢＭＯＳ／２２·１操作系统所具备的，对客户／服务器计算模式的各种支持功能作了详细的介绍。