D2-4放线菌的筛选及其抗生物质研究

利用有益微生物及其代谢产物来防治植物病害，已成为一个十分活跃并具有巨大应用前景的领域。本论文采用土壤预处理等特殊方法，从长白山不同高度的土壤中筛选出1068株放线菌。通过对峙培养法和杯碟法，筛选出D1-1等10株对蔬菜病害菌具有抑制作用的菌株。离体叶片实验中发现D2-4发酵液对黄瓜、辣椒、番茄等蔬菜真菌病害具有一定的防治效果。以水和常用化学农药作为空白和药物对照，对D2-4发酵液进行了盆栽实验，结果对番茄灰霉、辣椒根腐和黄瓜枯萎病的防治效果分别为70.65％、63.27％、65.04％，初步显示出良好的防治效果。通过单因素和均匀设计实验，优化了DZ-4菌发酵培养基的组成，考察了培养时间、接种量、菌龄等对抑菌活性的影响。确定了最佳发酵培养基成分：黄豆饼粉1.10％、葡萄糖2.71％、蔗糖1.00％、NaCl0.10％、酵母膏0.10％、发酵培养基初始pH为6.61。最佳发酵时间为96h左右，培养20～24h的种子液以7％的接种量转接有利于提高抑菌活性。经发酵培养基和发酵条件的优化，发酵液抑菌活性达到了6588 u／ml，比原始发酵培养基（3678 u／ml）活性提高了79.12％。经发酵液的预处理、离子交换层析、吸附柱层析、高效液相色谱纯化等步骤，对D2-4抗生素进行了分离纯化研究。通过纸层析、纸电泳等试验最后确定该农用抗生素为弱碱性水溶性抗生素。对D2-4抗生素纯品进行了红外吸收光谱、紫外吸收光谱等理化性质的研究。