两个雌核发育白鲢群体同工酶分析及遗传标记的确定

取源于武汉两个不同渔场两尾白鲢的卵子，经紫外照射遗传物质失活的鲤鱼精子刺激雌核发育和热休克诱导第二极体保留的基因组操作技术，获得了两个不同的人工雌核发育白鲢群体。采用聚丙烯酰胺垂直板电泳技术，分析了这两个不同人工雌核发育白鲢群体（分别称为Hy－G1和Hy－G2）内不同个体的肝脏、肌肉组织以及红细胞中乳酸脱氢酶（LDH）、苹果酸脱氢酶（MDH）、酯酶（EST）、超氧化物歧化酶（SOD）等几种同工酶的表达谱式，并与普通繁殖的同龄白鲢进行了比较。结果表明，各个雌核发育白鲢群体内不同个体间的酶谱表现出很大程度的一

四类不同倍性鲫鱼在胚胎发育期间同工酶基因表达的比较分析

用聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳比较分析了单倍体、二倍体、三倍体和复合四倍体4类不同倍性鲫鱼以及单倍体和二倍体鲤鱼在胚胎发育时期4种同工酶(EST,LDH,MDH,SOD)酶谱。结果表明,单倍体鲫鱼和单倍体鲤鱼胚胎与各自的二倍体胚胎相比,同工酶酶谱看不出差异;天然三倍体银鲫胚胎的MDH和SOD同工酶酶谱与二倍体鲫相似,但EST和LDH同工酶比二倍体增多了酶带,有的酶带如EST5和EST6还可在鲤鱼胚胎中找到相应的表达产物,提供了天然雌核发育三倍体银鲫杂交起源的证据;复合四倍体由于含有鲤鱼的一个外来基因组,其胚胎的

鲂成体组织及胚胎发育过程中同工酶表达的研究

采用淀粉凝胶电泳方法分析鲂成体不同组织（脑、眼、肌、心、肝、肾）和早期发育阶段9种同工酶（LDH、MDH、ADH、IDH、GTDH、IDDH、G3PDH、SOD、EST）的分化表达模式。鲂同工酶的表达具有明显的组织特异性。早期发育阶段LDH、IDH、IDDH、SOD和EST具有不同的发育变化谱式,而MDH、ADH、GTDH和G3PDH酶谱在整个早期发育阶段均无明显变化。上述结果可以为鲂种群遗传结构分析、种群演化以及鲂类的系统发育问题提供基础资料。

鲢的远缘杂交子代和人工三倍体的同工酶表达

用聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳分析了鲢×鳙、鲢×团头鲂的二倍体和异源三倍体杂种,以及同源三倍体鲢及其亲本种的8种蛋白质和同工酶的表型。二倍体杂交子代的基因表达是多样的,这些多样的表达可能与双亲的这些蛋白质和同工酶的表型差异有关。如与二倍体杂交子代相比,鲢×鳙异源三倍体的肌肉蛋白和血清蛋白有较一致的表型。此外在两种异源三倍体中EST和MDH同工酶的表型接近母本。这些结果表明异源三倍体由于增加了一套母本染色体组,基因的表达较接近母本或趋向一致。同源三倍体鲢与二倍体鲢的肌肉蛋白、血清蛋白、G3PDH、MDH和LDH同

复合四倍体异育银鲫个体间遗传异质性的研究

用聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳,分析比较了4个不同的银鲫雌核发育系、红鲤和复合四倍体异育银鲫鳍的5种不同的同工酶(EST、LDH、SOD、IDHP、MDH)及蛋白表型的差异,表明复合四倍体异育银鲫表型上的差异主要是来自银鲫种内的遗传差异(不同的雌核发育系)。来源于同一个银鲫雌核发育系的复合四倍体异育银鲫,个体间的EST同工酶出现差异,并与父本红鲤的EST同工酶的多态性相关,因此,复合四倍体异育银鲫个体间的异质性也包含了来自父本的遗传影响。在所检测的6个指标中,鳍中的蛋白和EST同工酶可作为鉴别不同复合四倍体异育

鳙鱼同工酶发育遗传学研究

采用淀粉或聚丙烯酰胺凝胶电泳法分析鳙鱼早期发育阶段(从未受精卵到卵黄吸尽期)及成体不同组织(脑、眼、心、肌、肾、肝)中六种同工酶(LDH,MDH,IDH,ADH,SDH,EST)的分化表达模式。鳙鱼同工酶基因的表达具有明显的组织特异性。早期发育阶段,ADH和SDH均无染色活性;LDH、MDH和IDH具有不同的发育变化谱式,而EST酶谱在整个早期发育阶段均无明显变化。与鲢、草鱼相比,鳙鱼早期发育过程中胚胎Ldh-A基因激活的时间被推迟。上述结果可为鳙鱼种群的生化遗传结构分析以及鳙鱼的人工育种提供基础资料。

雌核发育系红鲤8305的产生及其生物学特性

于1981年,以经过γ射线或紫外线处理的近类精子作为激活源,成功地诱发兴国红鲤(cyprinus carpio)卵子的雌核发育。经两代连续雌核发育的部分后代个体进行人工转性,使之成为“生理雄性”,并以“生理雄性”个体与其同胞姐妹交配所产后代为遗传特性纯一的个体——红鲤8305。检查了LDH,EST,MDH,SOD,IDH及运铁蛋白(transferrin)的座位,发现同一个系的不同个体之间等位基因没有差别,而且各座位的等位基因都是纯合的。血清学试验表明,控制红鲤8305雌核发育系的红细胞表面抗原的基因纯合

团头鲂的胚胎及成体组织中八种同工酶系统的研究

用垂直的淀粉凝胶电泳方法分析了胚胎发育阶段(0—105小时)和成体6种组织中的乳酸脱氢酶(LDH)、苹果酸脱氢酶(MDH)、谷氨酸脱氢酶(GDH)、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)、醇脱氢酶(ADH)、异柠檬酸脱氢酶(IDH)、酯酶(EST)和碱性磷酸酶(AKP)等8种同工酶系统的酶带。共约有23个基因座位在其胚胎发育期和成体组织中表达。所分析的大多数同工酶在团头鲂个体发生过程中表达的情况大致可分为3种类型:①胚胎发育期间持续存在的同工酶类,它们在成体组织中无特异性分布;②到胚胎发育后期才开始表达的同工

草鱼同工酶基因座位多态性的初步研究

采用垂直淀粉凝胶电泳及特异性组织化学染色技术研究了25尾草鱼的6种同工酶系统[ LDH ,MDH ,ADH, GDH, IDH, EST )约18—23个基因座位的遗传变异型。有7个基因座位(s-Mdh-A,Adh-B,Gdh-1,Gdh-2,Est-1,Est-6,Est-14)具有多态性,在其中4个基因座位(s-Mdh-A,Adh-B,Gdh-1,Est-1)上观察到的基因型频率与Hardy-Weinberg定律相符。实验表明草鱼的同工酶基因座位具有明显的多态性。这一结果为草鱼的人工选种和定向育种的可

草鱼同工酶发育遗传学研究——Ⅰ.不同组织器官的同工酶分析

采用垂直淀粉凝胶电泳及特异性组织化学染色技术,研究了草鱼成体脑、眼、心、肾、肌、肝等6种组织中的6种同工酶系统(LDH、MDH、GDH、ADH、LDH、EST)的分化表达谱式。结果表明,草鱼的同工酶系统具有明显的组织特异性。与绝大多数硬骨鱼类相比,草鱼的LDH、m-MDH和ADH同工酶具有特殊的表达谱式:m-MDH和ADH均由两个基因座位编码;肾脏在LDH-A_3B与LDH-A_2B_3之间多出1条LDH酶带(LDH-X)。本文还讨论了草鱼同工酶的遗传基础和亚基组成,以及本实验的某些结果与其他作者的结果不

草鱼同工酶发育遗传学研究——Ⅱ.早期发育过程中的同工酶分析

采用淀粉凝胶电泳技术研究了草鱼早期发育过程中(受精后0—200小时)6种同工酶系统(LDH、MDH、GDH、ADH、IDH、EST)的表达谱式。除了ADH以外,其余5种同工酶系统均具有明显的发育变化谱式。根据早期发育过程中同工酶的变化谱式及其组织分布,草鱼的同工酶可分为三大类型:(1)在未受精卵及早期发育过程中一直存在,并常有较广泛的组织分布;(2)未受精卵及早期发育过程中均不存在,一般仅分布于少数几种组织中;(3)未受精卵及胚胎发育早期不存在,直到早期发育过程中某一特定时期才开始出现。

鲮鱼冷休克及其死亡的某些生化因素

采用分光光度法和淀粉凝胶电泳法初步研究了鲮鱼冷休克前后脑乙酰胆碱酯酶(AchE)活力和三种酶的同工酶类的动态变化。并根据鲮鱼在冷休克期间(7—6℃)脑AchE活力显著降低和肝脏组织乳酸脱氢酶(LDH)同工酶活性明显升高以及苹果酸脱氢酶(MDH)、酯酶(EST)同工酶类出现酶活性变化的情况,讨论了导致鲮鱼耐寒能力差的某些生化因素。同时提出脑AchE可以作为评定鲮鱼冷休克期间中枢神经系统受害程度的一种生化指标。

几种罗非鱼乳酸脱氢酶和苹果酸脱氢酶同工酶的电泳研究

用淀粉凝胶垂直平板电泳比较分析了三种口孵类型罗非鱼的6种组织的乳酸脱氢酶(LDH)和苹果酸脱氢酶(MDH)同工酶谱及其相对迁移特性,发现这两种同工酶在各个种内表现出组织的分布特异性,而在各个种间又具有明显的差异。利用LDH同工酶的F基因和MDH同工酶的A、B、C、D基因作为遗传标志,能够将亲缘关系相近的这三种罗非鱼区别开来,从而为形态分类学提供了新的生化证据,并且对于以育种为目的的亲本选择,具有一定的实用意义。

Artificial interspecific hybridization between Macrobrachium species

Viable F-1 hybrids were obtained from crosses of female Macrobrachium nipponense and male Macrobrachium hainanense involving spermatophore transfer and artificial insemination. This represents the first successful known case of hybridization of two Macrobrachium species by means of artificial insemination. The hatching rate was over 90%. About 20-60% of newly hatched larvae metamorphosed to postlarvae. The morphological characteristics of the hybrids resembled a combination of features of both parents. Malate dehydrogenase (MDH) and esterase (EST) isozyme electrophoresis indicated parents and F-1 hybrids showed co-dominant expression of the paternal and maternal alleles controlling the isozymes and confirmed the hybridization. (C) 2004 Elsevier B.V. All rights reserved.

酶电极的制备

酶电极是生物传感器领域发展最早，最活跃的部分，理论上有许多问题需要探索，应用上有极为广阔的领域面临开拓，本文着重于电化学信号为基础的酶电极的研究，共分以下几个部分：1、文献综述-酶电极总论。概括介绍了酶电极的概念，原理，分类及应用前景，尤其对酶电极的特点进行了较为细致的评述。2、醇脱氢酶电极的研制。通过化学交联法，将ADH固定在玻碳电极表面，使用PMS和K_3Fe(CN)_6为介体，间接测定酶促反应中生成的NADH，使测定电位大大降低，从而提高测定的重现性和选择性。3、以铁氰化钾为介体的L-乳酸传感器。以PMS和氰化钾为介体，间接测定酶促反应中生成的NADH，工作电位由+0.8V降为+0.3V vs.SEC.，酶电极的线性范围为0.08～3.0mmol/L。响应时间30s，电极具有良好的选择性与重现性。4、以铁氰化钾为介体的L-苹果酸传感器。以PMS和铁氰化钾为介体，间接测定酶促反应中生成的NADH，由于使用Zn~(2+)激活MDH，电极的响应时间大约60s，比以往报道过的L-MDH电极的响应时间要快的多。电极测定的线性范围为25～300ummol/L。电极具有良好的选择性和重现性。5、介体型双酶D-氨基酸传感器采用一步法用Eastman AQ-55同时将D-氨基酸氧化酶，辣根过氧化物酶，1，1’-二（α-羟基乙基）二茂铁固定在玻碳电极表面，操作简单，电极具有响应快，灵敏度高的特点。6、以AQ膜中沉积铂的玻碳电极为基底的葡萄糖传感器在涂有EastmanAQ的玻碳电极上，电化学沉积铂，制成AQ膜中沉积铂的化学修饰电极，用戊二醛通过化学交联法将葡萄糖氧化酶固定在修饰电极表面，制成酶电极。AQ膜的选择渗透性可以防止电活性物质如抗坏血酸，尿酸等的干扰，同时可以防止大分子物质对电极的污染。镀铂电极具有对过氧化氢响应快，灵敏度高的特点，在空气饱和的情况下，葡萄糖的测定上限可达15mmol/L，响应时间50s，电极可以使用600次。7、以Nafion修饰的镀铂电极为基底的半乳糖传感器。在镀铂的玻碳电极表面，修饰一层全氟代磺酸酯（Nafion）膜，制成基底电极。化学交联法将半乳糖氧化酶固定在基底电极表面，制成半乳糖传感器，和光亮铂电极相比，镀铂电极对过氧化氢有更高的响应。Nafion膜可以消除抗坏血酸，尿酸等对测定的干扰，提高了酶电极测定的选择性。D-半乳糖测定的线性范围为0.25～4.25mmol/L，响应时间小于30s，酶电极连续使用300次无明显的电流变化。8、以聚邻苯二胺修饰的镀铂玻碳电极为基底的葡萄糖传感器。在镀铂的玻碳电极表面，电聚合邻苯二胺，制成基底电极，化学交联法将葡萄糖氧化酶固定在基底电极表面，制成葡萄糖传感器。聚邻苯二胺膜具有选择渗透性，可以防止抗坏血酸，尿酸等电活性物质对电极表面的污染，提高了电极的选择性和使用寿命。电极保留了葡萄糖氧化酶电极灵敏度高，响应快，线性宽的优点。9、以氟离子选择电极为基底的半乳糖传感器。用戊二醛和牛血清白蛋白将半乳糖氧化酶固定在80目尼龙网上，制成酶膜，将酶膜和氟电极上起构成半乳糖传感器，当底液中含有20U/mL的辣根过氧化物酶的0.001mol/L的对氟苯酚时，该传感器可以用来测定D-半乳糖，在pH6左右，测定的线性范围为1.2 * 10~(-4) ～ 1.2 * 10~(-3) mol/L，根据底物浓度的不同，响应时间在5 ～ 8min，酶电极具有良好的重现性和选择性，电极寿命10天左右。