盐角草（Salicornia europaea L.）SePSY和SeLCY基因克隆及功能分析

盐角草（Salicornia europaea L.）是一种叶片退化而茎肉质化，不具有盐腺和盐囊泡的真盐生植物，可以在1020 mM NaCl下生存。其特殊的形态适应特点使其成为研究植物抗盐性的良好实验材料。但目前与盐角草抗盐机理相关的生理和分子方面的研究还非常有限。本文以盐角草为材料，首先探讨了盐分和渗透胁迫对其光合作用和渗透平衡的影响，在此基础上进一步克隆了盐角草类胡萝卜素合成途径中的两个关键酶，八氢番茄红素合成酶（SePSY）和番茄红素β-环化酶（SeLCY）基因，并进行了功能分析。该研究对于了解类胡萝卜素在植物抗盐性中所起的作用具有重要意义。 盐分和渗透胁迫对其光合作用和渗透平衡影响的实验结果表明：200 mM NaCl是盐生植物盐角草生长的最适盐浓度，在该盐度下盐角草中叶绿素a/b的比值和光饱和点升高，植株的光合作用表现出增强的效应，植株生长最佳。而27％ PEG-6000所模拟的渗透胁迫显著降低了盐角草中叶绿色a/b的比值，抑制其光合作用和生长。200 mM NaCl下，Na+的含量显著增加，但脯氨酸含量保持不变，说明Na+对盐角草渗透平衡的作用要强于脯氨酸。同时盐角草中液泡H+-ATPase（V-H+-ATPase）活性增强，而盐角草Na+/H+逆向转运蛋白基因（SeNHX1）在盐分和渗透胁迫下却表现为组成型表达;我们因此推断在盐分胁迫下，Na+的吸收是由于液泡H+-ATPase活性的增强，而不是诱导SeNHX1基因的表达。同时Na+的吸收可能进一步诱导了与光合作用相关基因的表达。 盐分对植物的影响涉及植物体内包括光合作用和活性氧代谢在内的多个代谢过程。在植物中，类胡萝卜素是植物捕光天线复合体（LHC）和光系统反应中心叶绿素结合蛋白的重要组成部分。植物体内类胡萝卜素能够清除植物叶绿体，线粒体和过氧化物体在电子传递过程中产生的活性氧。同时类胡萝卜素是植物激素ABA的前体。200 mM NaCl虽然增加了盐角草细胞的渗透势，但并没有对其造成氧化胁迫和离子毒害，相反提高了其光合能力。类胡萝卜素作为植物活性氧的淬灭剂和光系统的组成成分，可能在盐角草抗盐机理中发挥着比较重要的作用。在过去的十年中，类胡萝卜素研究大多集中在其生物合成和提高作物中类胡萝卜素含量方面，可是，在植物对非生物逆境（如氧化和盐分胁迫）的适应机制中，类胡萝卜素合成途径究竟发挥什么作用目前还不是很清楚。为了了解盐角草中类胡萝卜素合成途径在植物逆境的适应机制中所发挥的作用，本文采用RACE的方法克隆了盐角草类胡萝卜素合成途径中的两个关键酶基因 SePSY和SeLCY，将它们构建到植物表达载体SN1301中，转化拟南芥，并对它们进行了初步的功能分析。 研究发现盐角草SePSY基因全长1655 bp，编码419个氨基酸，推测分子量为47.2 kDa，等电点为8.92。其蛋白在1-65个氨基酸处有一个信号肽。在1-19和242-264氨基酸处有2个跨膜区。盐角草SeLCY基因全长1937 bp，编码498个氨基酸，推测分子量为56.1 kDa，等电点为8.41。其蛋白在1-37个氨基酸处有一个信号肽。在79-96，367-385和454-474氨基酸处有3个跨膜区。SePSY和SeLCY基因过量表达均促进转基因拟南芥的生长，转SePSY基因拟南芥次生根数目比野生型拟南芥明显增多。SePSY和SeLCY基因的过量表达还使转基因拟南芥对百草枯的抗性得到提高;SePSY基 因的过量表达增强了植株体内抗氧化保护酶过氧化物酶（POD），超氧化物歧化酶（SOD）活性，但过氧化氢酶 （CAT）的变化不显著;转SeLCY基因株系POD，SOD，CAT的活性都有所增强，但转SePSY基因株系中POD活性明显高于 转SeLCY基因株系。转SePSY和SeLCY基因拟南芥叶片中丙二醛（MDA）和H2O2含量均降低，但转SePSY基因株系中MDA和H2O2含量明显低于转SeLCY基因株系。说明转基因拟南芥对氧化胁迫的抗性得到了提高，同时使得光系统II（PSII）和细胞膜的结构和功能不被破坏。而转SePSY基因株系对盐分和氧化胁迫的抗性明显高于转SeLCY基因株系。SePSY和SeLCY基因的过量表达还提高了转基因拟南芥的光合效率，气孔导度和Fv/Fm比值。 SePSY和SeLCY基因转化拟南芥及其功能分析的初步结果表明，SePSY和SeLCY基因的过量表达提高了转基因拟南芥对体内活性氧（ROS）的清除能力，增强了拟南芥的光合能力，进而提高了拟南芥的抗盐性。

现代黄河三角洲湿地景观变化及其对水禽生境的影响

本文研究的开展主要源于国家海洋局海洋公益性行业科研专项经费项目“渤海典型区域的海洋多过程数据整合研究”课题支撑。在湿地日益退化丧失的全球背景下，本文选择沉积年代较轻、生态环境比较脆弱，且当前人类活动不断加剧的现代黄河三角洲为研究区，采用1999、2001、2004和2008年的Landsat5 TM遥感影像，选择丹顶鹤和黑嘴鸥为指示物种，结合野外实地调查和历史数据资料的整理和分析，以及黄河三角洲自然保护区对鸟类的监测记录结果，开展现代黄河三角洲湿地景观变化及其对水禽生境的影响研究。 论文的主要研究结果如下： 1、建立了服务于黄河三角洲湿地水禽生境保护的湿地景观分类体系 在系统分析研究区域湿地水禽生活习性和生态分布特征的基础上，从鸟类生境选择的概念出发，建立了服务于黄河三角洲湿地水禽生境保护的湿地景观分类体系。该分类体系一共分为4级，其中，第三级分类系统下天然湿地的划分是从鸟类选择的“大生境”角度出发，即根据区域地表类型，进一步将海洋/海岸湿地和内陆三角洲湿地划分成浅海水域、潮间淤泥滩、潮沟、河口水域、潮间盐沼、河流湿地和沼泽湿地7类。而第四级分类系统下天然湿地的划分则是从鸟类选择的“小生境”（即对水、食物、隐蔽物、干扰等的需求）角度出发，并按照水文和典型植被类型，进一步将天然湿地的三级类型划分为碱蓬沼泽、芦苇沼泽、柽柳灌丛沼泽等33类。 2、系统研究了现代黄河三角洲湿地景观格局的动态变化和影响因素 根据景观生态学理论，选取用于分析的景观格局指数，并从湿地景观类型的组成特征变化、面积变化、形状特征变化、空间配置特征变化四个方面分析在黄河断流前到其恢复正常行水至今的时间里三角洲湿地景观格局的动态变化，研究结果表明：在1999~2008年的9年间，天然湿地构成了现代黄河三角洲景观的主体，约占研究区域景观总面积的65%~75%，决定了该地区湿地的主要结构和功能。但随着人类对土地资源利用方式的不断改变和强度的提高，天然湿地景观呈萎缩退化趋势，9年内共减少338.44 km2，约占研究区景观总面积的8.90%。与此同时，盐田、养殖池塘等人工湿地和耕地等非湿地面积不断扩张，人工湿地面积增加量约为242.08km2，约占研究区景观总面积的6.37%，非湿地面积增加量约为96.36 km2，约占研究区景观总面积的2.53%。从一些重要的景观指数的计算结果来看，研究区域整体景观斑块数量呈增加趋势，平均斑块大小随之减小，景观边界密度大小、聚集度指数也呈下降趋势，表明从1999到2008年研究区域整体景观被边界分割的程度加深，整体景观中的斑块在空间分布上隔离程度加重，开始由大片连续分布向小块离散分布转变，景观的破碎化程度加重。 湿地景观格局变化的驱动机制分析表明，影响研究区湿地景观变化的主要因素包括三个方面，即：黄河水沙条件的驱动力、湿地自身演替驱动力和人为驱动力。在1999~2008年的9年间，黄河虽然恢复正常行水，不再断流，但入海泥沙量的明显减少使得除现行河口处沙嘴继续向海缓慢延伸外，黄河三角洲总体上处于侵蚀状态。湿地自身的演替主要体现在湿地由裸露淤泥质滩涂向发育典型湿地植物群落的顺向演替，以及发育有典型湿地植物群落的湿地向裸露淤泥质滩涂逆向演替两个方面。在1999~2008年间9年里，湿地顺向发育演替面积约130.64 km2，而逆向发育演替面积约为99.51 km2。人类活动一直以来都是影响黄河三角洲湿地景观变化不可忽视的营造力。大规模的滩涂围垦和养殖、农业用地的不断开垦和扩张，以及密集的油田开发活动不仅缩减了原本生长着芦苇茅草等植物的天然湿地资源，而且加重了三角洲湿地景观的破碎程度。 3、在整个研究区域尺度上深刻分析了丹顶鹤和黑嘴鸥潜在生境的适宜性 根据黄河三角洲自然保护区关于鸟类的监测记录资料，在深入分析湿地水禽生活习性和分布特征的基础上，选择丹顶鹤和黑嘴鸥为指示物种，从鸟类生境选择自身的特征出发，确定地表类型、水、食物、隐蔽物和干扰为影响两种鸟类类群进行生境选择的因素，并构建生境适宜性评价模型，在整个研究区域尺度上对两种鸟类类群的潜在生境进行适宜性评价和动态变化分析。研究结果表明，在不考虑居民地、油田作业用地和道路等干扰因子对生境产生的破碎化效应影响时，适宜丹顶鹤和黑嘴鸥生存的生境类型在1999~2008年间占研究区整体景观总面积的比重均在30%以上，其中天然湿地约占适宜生境类型面积的95%，可利用的人工湿地比重极小，但呈缓慢增加趋势，且由于可利用的天然湿地生境类型的逐年减少使得适宜两种鸟类类群的生境类型总面积总体上呈萎缩趋势。在考虑居民地、油田作业用地和道路等干扰因子对生境产生的破碎化效应影响时，适宜丹顶鹤和黑嘴鸥生存的生境类型在1999~2008年间占研究区域整体景观总面积的百分比由之前接近40%下降到20%以下，面积减少量均在600 km2以上。 4、系统分析了研究区湿地景观变化对水禽生境的影响 从研究区湿地景观基质的面积变化、形状和空间邻接关系变化、破碎化等三个方面分析了研究区湿地景观变化对丹顶鹤和黑嘴鸥两种鸟类类群生境的影响，结果表明，湿地景观基质中天然湿地的变化与丹顶鹤、黑嘴鸥适宜生境的大小和空间分布密切相关。在1999~2008年间，随着天然湿地面积的减少，适宜以上两种鸟类类群的生境面积也随之减少，两者呈正相关关系；在1999~2008年间，研究区天然湿地和人工湿地景观基质整体的形状指数均在1.0附近，表明湿地景观基质整体上的边缘效应较小，但建设用地、农林用地等非湿地景观与丹顶鹤和黑嘴鸥适宜生境类型中的主导类型——潮间淤泥滩、潮间盐沼和沼泽湿地等三种景观类型的频繁邻接，对于保护两种鸟类类群十分不利，应积极采取相应的措施加强保护力度；在1999~2008年间，研究区景观整体，以及湿地景观基质结构的破碎化，导致鸟类可利用的天然湿地和人工湿地景观内部斑块之间的连接程度下降，从而使得丹顶鹤、黑嘴

Assessment of cattle genetic introgression into domestic yak populations using mitochondrial and microsatellite DNA markers

Hybridization between yak Poephagus grunniens and taurine Bos taurus or indicine B. indicus cattle has been widely practiced throughout the yak geographical range, and gene flow is expected to have occurred between these species. To assess the impact of cattle admixture on domestic yak, we examined 1076 domestic yak from 29 populations collected in China, Bhutan, Nepal, India, Pakistan, Kyrgyzstan, Mongolia and Russia using mitochondrial DNA and 17 autosomal microsatellite loci. A cattle diagnostic marker-based analysis reveals cattle-specific mtDNA and/or autosomal microsatellite allele introgression in 127 yak individuals from 22 populations. The mean level of cattle admixture across the populations, calculated using allelic information at 17 autosomal microsatellite loci, remains relatively low (mY(cattle) = 2.66 +/- 0.53% and Q(cattle) = 0.69 +/- 2.58%), although it varies a lot across populations as well as among individuals within population. Although the level of cattle admixture shows a clear geographical structure, with higher levels of admixture in the Qinghai-Tibetan Plateau and Mongolian and Russian regions, and lower levels in the Himalayan and Pamir Plateau region, our results indicate that the level of cattle admixture is not significantly correlated with the altitude across geographical regions as well as within geographical region. Although yak-cattle hybridization is primarily driven to produce F-1 hybrids, our results show that the subsequent gene flow between yak and cattle took place and has affected contemporary genetic make-up of domestic yak. To protect yak genetic integrity, hybridization between yak and cattle should be tightly controlled.

福尔马林固定云南鲴的DNA提取及其细胞色素b基因序列分析

鱼类是脊椎动物中最原始而在种属数量又最占优势的一个类群. 其分布广泛, 起源复杂, 阐明其系统进化途径, 历来是令人感兴趣的课题. 随着分子生物学向经典分类学领域渗透, 现在已可以通过 DNA 序列的比较来探讨生物的系统发育. 对于鱼类, 已有不少学者作了尝试. 由于受技术的制约, 用以研究的材料, 常常都要求新鲜. 但由于自然环境的变迁和人类的过度捕捞, 许多在系统进化研究中有代表意义的物种, 已非常稀少, 甚至濒临灭绝, 这给获取新鲜标本, 造成困难, 而许多标本馆, 由于多年的积累, 收藏的标本较齐全, 且绝大多数保存于4%-10%的福尔马林中。

树鼩PD-1基因的分离、鉴定及表达分析

cDNA序列.序列分析显示树鼩PD-1 cDNA 的开放阅读框编码一个由242个氨基酸组成的跨膜蛋白,并且和人类、灵长类和啮齿类中的同源基因有高度相似性.组织分布分析表明在所检测的几种组织中PD-1基因只在脾中表达.此外,淋巴细胞刺激实验显示,利用PMA和ionomycin刺激新鲜分离的树鼩外周血单核细胞(PBMCs)能够诱导PD-1 mRNA水平上的表达.我们的结果为将来进一步探讨树鼩的免疫功能提供了良好的基础.