栉孔扇贝(Chlamys farreri)Toll样受体及其信号传递相关基因的克隆与表达

扇贝是我国海水养殖的重要品种，但自1994年以来，养殖扇贝陆续爆发的大规模死亡，不但造成了巨大的经济损失，而且直接威胁到现有产业的生存和发展。引起扇贝大规模死亡原因是多方面的，其主要原因是养殖环境恶化、扇贝种质衰退和抗病力下降。因此，深入研究扇贝免疫防御机制，探讨提高机体抗病力的有效途径和方法，改良种质和培育抗病品系，无疑是解决目前困扰扇贝养殖业健康可持续发展的必经之路。 Toll样受体（TLRs）家族是新近发现的模式识别受体（PRRs），参与识别病原体相关的分子模式（PAMPs），在天然免疫系统中起着非常重要的作用。哺乳动物中Toll样受体信号通路还参与诱导树枝状细胞成熟、参与免疫耐受、参与凋亡发生发展、介导非感染性因素的识别等，被视为联系天然免疫和获得性免疫的桥梁。同时果蝇的Toll信号通路也是不具备获得性免疫的果蝇赖以抵御病毒、细菌和真菌感染，介导天然免疫反应的重要信号通路。 本研究采用大规模EST测序方法，结合Genome Walker库的构建和cDNA末端快速扩增技术，从栉孔扇贝克隆得到CfToll-1、CfMyd88、CfTRAF6和CfCactus这四个Toll样受体信号通路基因的全长cDNA，同时用荧光实时定量PCR技术检测了这些基因的组织分布及在脂多糖（LPS）和肽聚糖（PGN）刺激下的表达规律。 栉孔扇贝Toll样受体（CfToll-1）的cDNA序列全长4308 bp，包含5’非翻译区（UTR）211 bp，3597 bp的开放阅读框，500 bp的3’UTR，最后为18个腺嘌呤的ploy A 尾巴。开放阅读框编码1198个氨基酸的多肽，该多肽的估计分子量为137.41kd，估计的等电点为5.62，该多肽有信号肽，具有一个预测的跨膜区，因此是一种跨膜蛋白。经BLAST比对，CfToll-1基因与节肢动物多种Toll蛋白高度的相似性。SMART（Simple Modular Architecture Research Tool）软件分析，CfToll-1包含典型的Toll样受体的结构：富含亮氨酸的重复序列的胞外区（leucine-rich repeats, LRR），一段跨膜结构域，以及胞内区的TIR结构域（Toll/IL-1 receptor homologous region）。利用Real-time RT-PCR发现CfToll-1mRNA在扇贝体内普遍存在于血细胞、肌肉、外套膜、心、性腺和鳃组织中。利用体外培养的原代血细胞系研究不同浓度LPS刺激后CfToll-1的表达变化，结果显示低剂量（100ng.mL-1 ）LPS 使CfToll-1 mRNA表达量减小，该变化在1.5h、3h 和9h组差异显著，虽然在6h组表达量稍有恢复，但尚未达到对照水平；用1μg.mL-1LPS处理细胞时， 6h组CfToll-1表达量明显上调，约为对照水平的2倍。证实细菌结构脂多糖对CfToll-1基因的表达有影响，且这种影响有剂量依赖效应。 栉孔扇贝Myd88同源基因（CfMyd88）的cDNA序列全长1554bp，包含5’UTR 427 bp，1101bp的开放阅读框，最后为18个腺嘌呤的ploy A 尾。CfMyd88的开放阅读框可编码367个氨基酸的多肽，该多肽的估计分子量为42.37kD，估计的等电点为5.71。利用SMART程序分析发现CfMyd88编码了Death和TIR结构域, 这两个结构域是Myd88特征结构。BLAST程序发现扇贝的序列与数据库哺乳动物的Myd88基因高度同源。原代培养的扇贝血细胞在受到PGN刺激后，CfMyd88 mRNA表达在1.5小时开始下调，直到9小时下调至对照表达量的1/10，证实肽聚糖结构对CfMyd88基因的表达有影响。 栉孔扇贝TRAF6同源基因（CfTRAF6）的cDNA序列全长2510bp，包含5’UTR 337 bp，1965bp的开放阅读框，3’UTR 208bp，最后为21 个腺嘌呤的ploy A 尾巴。CfTRAF6开放阅读框编码655个氨基酸的多肽，该多肽的估计分子量为74.09kD，估计的等电点为6.01。InterPro Scan在线分析发现CfTRAF6有典型的TRAF蛋白家族的特征结构，包括的一个指环结构，两个锌指结构，一个MATH （the meprin and TRAF homology）结构域以及Coiled-coil区域。CfTRAF6的序列与数据库多物种的TRAF6高度同源，同源性最高的是乌贼序列（Identity＝68）和鼠类（Identity＝45%）。利用Real-time RT-PCR，发现CfTRAF6在各组织普遍存在，在性腺中的表达最高。原代培养的扇贝血细胞在受到不同浓度PGN刺激后，与CfMyd88的情况一样，CfTRAF6的表达量变化减少，且这种变化随剂量的增加更加明显。 栉孔扇贝Cactus同源基因（CfCactus）的cDNA序列全长2488bp，包含5’UTR 181 bp，840bp的开放阅读框， 3’UTR 1467bp，最后为19个腺嘌呤的ploy A 尾巴。CfCactus的开放阅读框编码279个氨基酸的多肽，该多肽的估计分子量为31.37 kD；估计的等电点为4.74，与果蝇的Cactus基因的等电点相近（4.5）。利用SMART程序分析发现CfCactus主要编码了ANK结构域（ankyrin repeats）。Cactus基因为哺乳动物NF-κB抑制蛋白IκB的同源分子，BLAST 程序发现扇贝的序列与数据库多物种的Cactus或IκB基因高度同源。同源性最高的是太平洋牡蛎（Identity=35%）和圆尾鲎（Identities = 44%）。对CfTCactus mRNA在扇贝的血细胞、性腺、 肠的组织表达进行分析，并同时与CfTRAF6和CfMyd88的表达量进行了对比，发现CfCactus的表达水平明显高于这两个基因，而且CfTRAF6的基因表达量也高于CfMyd88，表现出级联放大效应。正常情况下，三个基因在性腺的表达量最高，推测这条通路可能和发育等功能密切相关。 通过本研究我们首次在双壳类软体动物找得到与果蝇Toll蛋白家族高度同源的CfToll-1基因，同时发现其他三个在Toll样受体信号传递过程中起重要作用的基因，其中包括在软体动物中获得的第一个Toll样受体的接头分子－CfMyd88基因，该结果直接证明软体动物具有与哺乳动物和节肢动物高度类似Myd88依赖的Toll样受体信号通路。同时通过这些基因组织分布的研究以及细菌结构LPS和PGN对这条通路上基因表达的影响，证明扇贝Toll信号通路可能与在果蝇中一样，参与扇贝的发育和免疫防御等多种功能。

Historical changes in nutrient structure and its influences on phytoplantkon composition in Jiaozhou Bay

Due to the influence of human activities, nutrient concentrations, nutrient ratios and phytoplankton composition have notably changed in Jiaozhou Bay, China since the 1960s. From the 1960s to the 1990s, nutrient concentrations have increased 1.4 times for PO4-P, 4.3 times for NO3-N, 4.1 times for NH4-N and 3.9 times for DIN. The atomic ratio of DIN:PO4-P increased very rapidly from 15.9 +/- 6.3 for the 1960s, to 37.8 +/- 22.9 for the 1990s. SiO3-Si concentration has remained at a very low level from the 1980s to the 1990s. The high ratio of DIN: PO4-P and low ratios of SiO3-Si:PO4-P (7.6 +/- 8.9) and SiO3-Si:DIN (0.19 +/- 0.15) showed the nutrient structure of Jiaozhou Bay has changed from more balanced to unbalanced during the last 40 years. The possibility that DIN and/or PO4-P as limiting factors of Jiaozhou Bay phytoplankton has been lessened or eliminated and that of SiO3-Si limiting has been increased. The changes in nutrient structure may have led to the decrease of large diatoms and a shift of phytoplankton species composition. It is likely that there is a trend from large diatoms to smaller cells in Jiaozhou Bay. (C) 2001 Academic Press.

Classification of jinjiang oysters Crassostrea rivularis (Gould, 1861) from China, based on morphology and phylogenetic analysis

The jinjiang oyster Crassostrea rivularis [Gould, 1861. Descriptions of Shells collected in the North Pacific Exploring Expedition under Captains Ringgold and Rodgers. Proc. Boston Soc. Nat. Hist. 8 (April) 33-40] is one of the most important and best-known oysters in China. Based on the color of its flesh, two forms of C rivularis are recognized and referred to as the "white meat" and 11 red meat" oysters. The classification of white and red forms of this species has been a subject of confusion and debate in China. To clarify the taxonomic status of the two forms of C. rivularis, we collected and analyzed oysters from five locations along China's coast using both morphological characters and DNA sequences from mitochondrial 16S rRNA and cytochrome oxidase 1, and the nuclear 28S rRNA genes. Oysters were classified as white or red forms according to their morphological characteristics and then subjected to DNA sequencing. Both morphological and DNA sequence data suggest that the red and white oysters are two separate species. Phylogenetic analysis of DNA sequences obtained in this study and existing sequences of reference species show that the red oyster is the same species as C. ariakensis Wakiya [1929. Japanese food oysters. Jpn. J. Zool. 2, 359-367.], albeit the red oysters from north and south China are genetically distinctive. The white oyster is the same species as a newly described species from Hong Kong, C. hongkongensis Lam and Morton [2003. Mitochondrial DNA and identification of a new species of Crassostrea (Bivalvia: Ostreidae) cultured for centuries in the Pearl River Delta, Hong Kong, China. Aqua. 228, 1-13]. Although the name C. rivularis has seniority over C. ariakensis and C. hongkongensis, the original description of Ostrea rivularis by Gould [1861] does not fit shell characteristics of either the red or the white oysters. We propose that the name of C. rivularis Gould [1861] should be suspended, the red oyster should take the name C. ariakensis, and the white oyster should take the name C. hongkongensis. (C) 2004 Elsevier B.V. All rights reserved.

青藏铁路沿线植物生态资源调查初步报告

通过对格尔木至拉萨段铁路沿线目前生态环境和青藏铁路建设过程中产生的生态环境影响为期21d的调查，初步总结沿线主要植物种382个，主要呈现出5个生态分区，并提出青藏铁路后期建设的建议。

对国家春小麦西北旱地区域试验的几点认识

本文通过4 a的实地调查和对区域试验结果的统计分析,针对国家春小麦西北旱地区域试验存在问题的分析,提出在均衡布点的基础上,要加强区试点基础设施建设、提高管理水平、保持试验地块的稳定性、提高旱地试验出苗率、注意病虫害的防治、增加辅助对照品种和提高人员素质等.

植物生长季退化草毡寒冻雏形土CO2释放特征

对中国科学院海北高寒草甸生态系统定位站地区退化草毡寒冻雏形土CO2释放的全天候连续观测结果表明，退化草毡寒冻雏形土CO2的释放有明显的日变化和季节动态，日最大释放速率出现于12：00-14：00，最小释放速率出现于6：00-8：00；植物生长季的最大振幅为462.49mg·m^-2·h^-1（8月18日），最小振幅为114.97mg·m^-2·h^-1（5月9日），CO2释放速率白天大于夜晚。不同物候期CO2释放速率亦不同，草盛期>枯黄期>青期。最大日均值为480.76mg·m^-2·h^-1（8月18日），最小日均值为140.77mg·m^-2·h^-1（5月9日）。释放速率与气温、地表温度及土壤5cm地温均呈显著或极显著相关关系，表明温度是决定CO2释放速率季节变化的首要因素。

藏药1号与7号水提液对大鼠离体胸主动脉条收缩的抑制作用

目的 通过对比观察藏药1号与藏药7号水提液对大鼠离体胸动脉条收缩作用的影响，研究藏药1号与藏药7号的降压机制。方法 以生理盐水作为对照组，观察藏药1号与藏药7号水提液(6mg／ml)和维拉帕米(Ver 0．013 mg／ml)对高K~＋液引起的主动脉条收缩的时效影响，观察对KCl，NE及CaCl_2引起的大鼠主动脉条收缩的量效曲线的影响，以及对NE引起的依赖于细胞内钙及细胞外钙的收缩的影响。结果 藏药1号与藏药7号水提液抑制高K~＋液引起的主动脉收缩(P＜0．001)；而且可以使KCl，NE及CaCl_2引起的大鼠主动脉条收缩的量效曲线非平行右移，最大效应降低，呈非竞争性拮抗作用(P＜0．05)，与维拉帕米相似，并且对NE引起的依赖于细胞内钙及细胞外钙的收缩均有抑制作用(P＜0．05)。从pD'2值分析，藏药1号的药效作用要强于藏药7号，但比Ver的弱。结论 提示藏药1号与藏药7号的降压机制与钙离子通道拮抗剂一致，而且其作用效果比Ver延迟、平缓，其最大作用与Ver相近。而且藏药1号药效更加显著。

小型哺乳动物亲缘关系对其种群动态的作用

主要综述小型哺乳动物亲缘关系对其种群动态的作用及其研究进展。与非亲缘个体比较，亲缘个体间的相互作用趋于亲密、巢区共享程度高，亲缘关系水平对扩散有明显的作用。亲缘关系水平的差异可改变种群增长速率及种群统计学特征，对提高雌体存活率、后代断乳成功率、后代存活率及性比具有显著的作用。亲缘关系的分子生态学研究主要集中于亲权鉴定和种群遗传结构的分析。

青藏高原高寒灌丛生态系统二氧化碳通量研究

本论文以青藏高原东北部海北地区高寒灌丛（Alpine Shrub）生态系统为研究对象，利用微气象观测系统及涡度相关（Eddy Covariance）技术，自2003年1月1日至2005年12月31日对该类广布于青藏高原的典型高寒草地类型进行长期连续观测。在对生态系统CO2净交换（NEE）以及群落叶面积指数（LAI）、生物量等生物学指标和光合有效辐射（PAR）、温度、土壤水分、脉冲性降水事件等主要环境因子进行连续监测的基础上，重点分析和探讨了海北地区高寒灌丛生态系统净生态系统CO2交换(NEE)在时、日、月及年际尺度上的变化模式，生长季与非生长季高寒灌丛生态系统CO2净交换特征，高寒灌丛生态系统大气CO2源/汇年际差异，土壤温度、昼夜温差、光合有效辐射、脉冲性降水事件等主要环境因子影响。从而，揭示了不同时间尺度下的高寒灌丛生态系统NEE变化规律，阐明主要环境因子对生态系统NEE的影响，明确了该生态系统大气CO2源/汇状况及其季节分布模式；同时，也为青藏高原区域尺度的高寒草地生态系统CO2通量研究和碳收支的估算提供科学依据和基础数据，对进一步揭示我国乃至亚洲陆地生态系统的碳收支状况有着重要意义。主要研究结果概括为以下几个方面： 1、海北地区高寒灌丛生态系统净生态系统CO2交换时动态特征存在很大的季节性差异，暖季小时NEE变化振幅大，CO2净吸收的极值一般出现在午间，最大吸收量为1.7 g CO2 m-2 h-1左右。夜间为CO2净释放，净生态系统交换值较为稳定（0.5~ 0.9 g CO2 m-2 h-1）；冷季日变化振幅极小，除14:00~18:00时一定量CO2释放外，其余时段通量均很小。 2、从日平均净生态系统CO2交换来看，6~9月日平均NEE一般为负值（CO2净吸收），2003~2005年6~9 月间日平均NEE分别为-5.65 g CO2 m-2 d-1、-6.08 g CO2 m-2 d-1和-4.81 g CO2 m-2 d-1；而10~12月及翌年1~5月期间日平均NEE通常为正值（CO2净释放），该时段3年高寒灌丛日平均净生态系统CO2交换分别为1.91 g CO2 m-2 d-1、1.90 g CO2 m-2 d-1和2.19 g CO2 m-2 d-1。2003~2004年高寒灌丛生态系统CO2净释放维持天数分别为249 d、 254 d和264 d，2003年净释放维持天数最少，而净吸收维持天数2005年最少（101d）。2003、2004和2005年全年日平均CO2净吸收分别为0.611 g CO2 m-2 d-1、0.759 g CO2 m-2 d-1和0.167 g CO2 m-2 d-1。 3、就季节差异而言，2003、2004和2005年整个生长季节高寒灌丛平均CO2日净生态系统交换分别为-3.99 g CO2 m-2 d-1、-4.59 g CO2 m-2 d-1、-3.27 g CO2 m-2 d-1。7、8月生长季节CO2净吸收的最高，2003、2004、2005年7月和8月份高寒灌丛生态系统CO2净吸收分别为222 g CO2 m-2 和224 g CO2 m-2、355 g CO2 m-2和216 g CO2 m-2、263 g CO2 m-2和186 g CO2 m-2。在相对短暂的生长季节海北地区高寒灌丛生态系统表现出显著的大气CO2净吸收能力，2003、2004和2005年生长季节高寒灌丛生态系统CO2净吸收量分别为610 g CO2 m-2、701 g CO2 m-2和500 g CO2 m-2。相对于温度等环境因子，高寒灌丛生态系统生长季白昼NEE小时变化规律更受光合有效辐射变化的影响。 4、2003～2005年非生长季节日平均NEE分别为1.83 g CO2 m-2、2.01 g CO2 m-2和2.07 g CO2 m-2。4月和10月是非生长季节CO2净释放的最高月份，2003、2004和2005年全月净释放量为105 g CO2 m-2和77 g CO2 m-2、105 g CO2 m-2和117 g CO2 m-2及105 g CO2 m-2和138 g CO2 m-2，2003～2005年整个非生长季CO2净释放分别为CO2为388 g CO2 m-2、425 g CO2 m-2和439 g CO2 m-2。非生长季节海北地区高寒灌丛生态系统NEE小时变化与5 cm土壤温度存在极显著的正相关关联，表明在非生长季节土壤温度是影响青藏高原高寒灌丛生态系统NEE的重要环境因子。 5、从生态系统CO2源/汇特征来看，海北地区高寒灌丛生态系统2003、2004和2005年全年净CO2固定总量分别为223 g CO2 m-2 a-1、277 g CO2 m-2 a-1和61 g CO2 m-2 a-1，3年平均CO2值为187 g CO2 m-2 a-1。在为期3年的研究时段海北地区高寒灌丛生态系统表现为弱的大气二氧化碳的汇。 6、高寒灌丛群落表观光合量子产额（a）和表观最大光合速率（Pmax）受叶面积指数的影响。在6～9月份期间，由于LAI的不同，a和Pmax值差异明显，7、8月份较高而6月和9月明显较低。海北地区高寒灌丛生态系统a和Pmax值高于西藏当雄地区高寒草甸生态系统，但低于平原地区相关生态系统。 维持天数2005年最少（101d）。2003、2004和2005年全年日平均CO2净吸收分别为0.611 g CO2 m-2 d-1、0.759 g CO2 m-2 d-1和0.167 g CO2 m-2 d-1。 3、就季节差异而言，2003、2004和2005年整个生长季节高寒灌丛平均CO2日净生态系统交换分别为-3.99 g CO2 m-2 d-1、-4.59 g CO2 m-2 d-1、-3.27 g CO2 m-2 d-1。7、8月生长季节CO2净吸收的最高，2003、2004、2005年7月和8月份高寒灌丛生态系统CO2净吸收分别为222 g CO2 m-2 和224 g CO2 m-2、355 g CO2 m-2和216 g CO2 m-2、263 g CO2 m-2和186 g CO2 m-2。在相对短暂的生长季节海北地区高寒灌丛生态系统表现出显著的大气CO2净吸收能力，2003、2004和2005年生长季节高寒灌丛生态系统CO2净吸收量分别为610 g CO2 m-2、701 g CO2 m-2和500 g CO2 m-2。相对于温度等环境因子，高寒灌丛生态系统生长季白昼NEE小时变化规律更受光合有效辐射变化的影响。 4、2003～2005年非生长季节日平均NEE分别为1.83 g CO2 m-2、2.01 g CO2 m-2和2.07 g CO2 m-2。4月和10月是非生长季节CO2净释放的最高月份，2003、2004和2005年全月净释放量为105 g CO2 m-2和77 g CO2 m-2、105 g CO2 m-2和117 g CO2 m-2及105 g CO2 m-2和138 g CO2 m-2，2003～2005年整个非生长季CO2净释放分别为CO2为388 g CO2 m-2、425 g CO2 m-2和439 g CO2 m-2。非生长季节海北地区高寒灌丛生态系统NEE小时变化与5 cm土壤温度存在极显著的正相关关联，表明在非生长季节土壤温度是影响青藏高原高寒灌丛生态系统NEE的重要环境因子。 5、从生态系统CO2源/汇特征来看，海北地区高寒灌丛生态系统2003、2004和2005年全年净CO2固定总量分别为223 g CO2 m-2 a-1、277 g CO2 m-2 a-1和61 g CO2 m-2 a-1，3年平均CO2值为187 g CO2 m-2 a-1。在为期3年的研究时段海北地区高寒灌丛生态系统表现为弱的大气二氧化碳的汇。 6、高寒灌丛群落表观光合量子产额（a）和表观最大光合速率（Pmax）受叶面积指数的影响。在6～9月份期间，由于LAI的不同，a和Pmax值差异明显，7、8月份较高而6月和9月明显较低。海北地区高寒灌丛生态系统a和Pmax值高于西藏当雄地区高寒草甸生态系统，但低于平原地区相关生态系统。