丙型肝炎病毒基因和蛋白结构研究进展

　估计全球约有117 亿人口感染丙型肝炎,是一种严重影 响人类健康的传染病。丙型肝炎的病原为丙型肝炎病毒 (Hepatitis C Virus ,HCV) 。1989 年Choo 等人首先获得HCV 基因组的cDNA 全序列,使HCV 成为病毒学史上第一个首先 通过基因克隆技术确认的病毒〔1 ,2〕。此后,HCV 的分子生物 学研究进展迅速。现将HCV 病毒分子结构的最新研究状况 做一综述。

白氏文昌鱼FADD的克隆及功能研究

Fas死亡结构域相关蛋白(Fas-associated death domain protein,FADD)是死亡信号转导通路中的连接蛋白,在脊椎动物中其结构和功能都很保守。本文首次克隆了头索动物白氏文昌鱼(Branchiostoma belcheri)FADD(bbFADD)的cDNA和基因组DNA序列。bbFADDcDNA全长1239 bp,编码217个氨基酸。与脊椎动物的FADD一样,bbFADD含有N端的死亡效应结构域(Death Effector Domain,DED)和C端的死亡结构域(Dea

病毒感染草鱼胸腺的EST分析和免疫相关基因的鉴定

以感染草鱼(Ctenopharyngodon idellus)出血病病毒(GCHV)的草鱼胸腺为材料,构建了草鱼胸腺的SMARTcDNA文库。筛选文库获得到1933条有效EST序列。BLASTX分析显示,583条序列在公共数据库中能找到同源基因(E-value≤1.00E10-3,Identities≥30%),另外1350条序列则找不到显著同源性。已知基因按具体功能可划分为6类,大部分与细胞内的各种生理过程、细胞结构以及免疫防御相关。研究结果从分子水平上表明鱼类的胸腺在机体感染病毒的免疫反应中发挥重要作

4龄中华鲟垂体的EST分析(英文)

表达序列标签(Expressed sequencetag,EST)是鉴定基因表达规律和发现新基因的一种有效的分子生物学手段。为了能在中华鲟(Acipenser sinensis Gray)中发现与生长和生殖内分泌调控相关的基因,我们构建了中华鲟垂体的SMARTcDNA质粒文库。垂体是调节生长和生殖内分泌的重要器官。在本研究中,通过测序筛选得到了944个EST克隆,将所得EST与GenBank数据库中的序列进行比对,结果表明,802(84.96%)个克隆可以找到同源序列,共代表461个基因,其中含132个已

福尔马林灭活柱状黄杆菌对草鱼免疫相关基因表达的影响

在本研究中,将福尔马林灭活的柱状黄杆菌菌苗(FKG4)经腹腔注射免疫草鱼,以注射灭菌PBS作对照,分别在免疫后1、7、15和28d,提取受免鱼和对照鱼肝脏、脾脏和头肾3种组织中的总RNA并反转录成cDNA,利用Real-time PCR方法对不同组织中C-反应蛋白(CRP)、主要组织相容性复合体I(MHCⅠ)、肿瘤坏死因子(TNFα)、白介素1(IL-1β)、白介素8(IL-8)、Ⅰ型干扰素(IFNⅠ)等6种免疫相关基因的表达进行定量分析。结果发现CRP在受免鱼肝脏中的表达于免疫后1、7d显著高于对照鱼,

银鲫HIRA多克隆抗体的制备及组织特异性表达分析

Hir/Hira基因家族的成员广泛存在于多种生物体中,但有关其在生物体发育过程中的具体功能还不甚清楚。对果蝇的研究表明,dHira基因产物可能在受精时精核的解凝过程和雄性原核的正常形成过程中起重要作用。本研究组前期已经分别克隆出雌核发育银鲫和两性生殖彩鲫的Hira基因(cagHira和caHira),本实验在银鲫cagHira基因的特异区域,设计一对引物,以银鲫成熟卵母细胞总RNA逆转录出的cDNA为模板,扩增出cagHira的特异片段。再将该片段克隆到原核表达载体pET-32a上,转化BL21(DE3)

草鱼免疫球蛋白M重链基因的克隆及表达

用RACE-PCR方法扩增出草鱼免疫球蛋白M(immunoglobulin M,IgM)分泌型的重链全长cDNA。其cDNA全长为1 940nt,包含5′非编码区20nt,3′非编码区189nt,开放阅读框1 731nt,编码576个氨基酸。序列比对分析表明草鱼IgM与鲤的相似性高达68%,与斑马鱼、斑点叉尾鱼回、鳜以及大西洋鳕的相似性分别为61%、43%、33%和30%。ClustalX比对结果显示:草鱼IgM中存在半胱氨酸和色氨酸的保守位点。进化分析表明,草鱼IgM与斑马鱼的IgM聚为一枝。荧光定量P

乌鳢(Channa argus)干扰素刺激基因Viperin和ISG15及其启动子的克隆与特征分析

应用抑制差减杂交、末端快速扩增和基因步移技术,克隆并鉴定了乌鳢干扰素刺激基因Viperin和ISG15及其启动子序列.Viperin cDNA全长1474nt,包含1059nt的开放阅读框,编码352个氨基酸.除N末端70个氨基酸外,Viperin蛋白氨基酸序列在鱼类和哺乳类具有高度的保守性.ISG15 cDNA全长758nt,包含468nt的开放阅读框,编码155个氨基酸,含有两个泛素样(UBL)结构域,C末端具有保守的UB偶联结构(LRGG).Viperin和ISG15启动子区存在保守的干扰素刺激反应

牙鲆HRI多克隆抗体的制备及病毒诱导的组织表达分析

血红素调节的eIF2α激酶HRI是一种丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,在血红素缺乏和热休克等胁迫存在时,通过磷酸化底物eIF2α调控真核细胞的蛋白合成。牙鲆PoHRI是在鱼类鉴定的第一个HRI基因。PCR克隆编码PoHRI蛋白1-200氨基酸的cDNA片段,定向插入pET32a构建表达载体。IPTG诱导,随后利用Ni2+-NTA亲和层析柱纯化,成功获得预期大小的融合蛋白。将纯化的融合蛋白免疫小鼠获得抗PoHRI多克隆抗体,抗体中和实验进一步证实了抗PoHRI多克隆抗体对PoHRI蛋白的特异性识别。在健康的牙鲆组织

彩鲫hira基因片段的克隆及表达分析

hir/hira基因最先作为组蛋白基因表达的一种负调节因子从酵母中被鉴定出来。现已证实,HIRA包含一组保守的蛋白家族,广泛存在于低等真核生物、无脊椎动物和脊椎动物等多种生物体当中,为生命发育所必需。关于hira基因在动物发育过程中的具体作用研究还不是很多,为了进一步探讨hira基因在鱼类发育过程中的作用,作者根据已知hira基因保守序列设计一对简并引物,分别以彩鲫基因组DNA和卵巢cDNA为模板克隆了彩鲫hira基因(Cahira)片段,该片段基因组序列为2181bp,基因组片段含有6个内含子,长度分别

鲤鱼肌肉生长抑制素基因(MSTN)的克隆及其组织表达特征

肌肉生长抑制素(Myostatin,MSTN)是动物肌肉发育和生长过程中的负调控因子,对MSTN的研究将有助于促进动物生产。鲤鱼是我国的主要淡水养殖对象之一。因此,我们采用RT-PCR方法克隆了鲤鱼MSTN cDNA(No.EF551058)的部分序列,长度为921bp,编码306个氨基酸残基。鲤鱼MSTN具有MSTN的共同特征,有蛋白酶水解位点RIRR和9个保守的半胱氨酸残基。多重序列比较发现其与斑马鱼GDF8有极近的亲缘关系,96.7%的氨基酸序列同源。不同组织的RT-PCR分析发现鲤鱼MSTN主要在

银鲫pou2基因在胚胎发育过程中的时空表达图式

用RACE-PCR方法从原肠期SMART文库中扩增到银鲫pou2基因的全长cDNA,其全长为2421bp,开放阅读框为1416bp,编码471个氨基酸,与斑马鱼pou2基因的氨基酸序列一致性高达91.0%。我们用RT-PCR和整体原位杂交的方法研究了银鲫pou2基因在胚胎发育过程中的时空表达图式。RT-PCR结果显示,银鲫pou2基因有母源转录本,其合子基因在高囊胚期强烈表达,在50%下包期和90%下包期也有高量的转录本,但在100%下包期表达量急剧降低,至体节期时已经完全检测不到其转录本。胚胎整体原位杂

泥鳅肌肉生长抑制素基因片断的克隆及其表达

肌肉生长抑制素(myostatin,MSTN)是动物肌肉生长发育的负调控因子。以泥鳅肌肉cDNA为模板,采用RT-PCR方法克隆了泥鳅MSTN基因的主要片段,其长度为815bp,编码271个氨基酸残基。泥鳅MSTN具有MSTN的共同特征,有蛋白酶水解位点RIRR和保守的半胱氨酸残基。RT-PCR分析表明该基因在肌肉中显著表达,在眼中也有微弱表达,而在其他所检测组织(脑、鳃、心脏、肝脏、肠、精巢、卵巢)未见表达。此结果表明泥鳅MSTN基因除对肌肉生长发育有调控作用以外,还可能在眼的发育中有一定作用。

猪囊尾蚴铜/锌超氧化物歧化酶(Cu/ZnSOD)基因的克隆和表达

目的克隆猪囊尾蚴胞质含铜/锌的超氧化物歧化酶基因(Cu/ZnSOD),并比较其与其它寄生蠕虫相应基因结构的相似性。方法通过获取其它生物Cu/ZnSOD基因的保守区域,设计保守引物,用于扩增该寄生虫的Cu/ZnSOD基因。结果Cu/ZnSOD基因编码一15.6kDa的蛋白,该蛋白的推导序列中含有这类酶的活性和二级结构所需要的所有保守的氨基酸残基,并且与其它寄生虫的相应序列有高达70.6%的相似度。抑制剂研究试验表明所克隆的SOD属于Cu/ZnSOD,该蛋白在大肠杆菌中得以成功表达,表达产物具有SOD活性。免

鲢(Hypophthalmichthys molitrix)IL-10基因的克隆及表达分析

白细胞介素10(IL-10)是一种作用广泛的抗炎细胞因子,主要功能是限制和最终终止炎症反应．用RACE(rapid amplification of cDNA ends)-PCR方法扩增出鲢白细胞介素10(IL-10)的 cDNA,其全长为1248nt,包含5’非编码区156 nt,3’非编码区552nt,开放阅读框540nt．鲢IL- 10的开放阅读框编码179个氨基酸,其中包含构成两对二硫键的4个保守半胱氨酸．RT-PCR结果显示鲢IL-10 mRNA主要在脾脏、鳃、头肾和肌肉中表达．将鲢IL-10完