金环蛇蛇毒中的一种新型胰蛋白酶抑制剂

目的:从金环蛇蛇毒中分离纯化名为bungaruskunin 1的一种新型胰蛋白酶抑制剂,并从其毒腺的cDNA文库中克隆出该胰蛋白酶抑制剂的cDNA全序列.方法:通过Sephadex G-50, CM-Sephadex C-25, HPLC, RP-HPLC (C4 column)方法分离纯化bungaruskunin 1.样品的丝氨酸蛋白酶抑制剂活性则是在室温条件下50mmol·L-1 Tris-HCl, pH 7.8的缓冲液中通过对显色底物的水解抑制作用来检测的.金环蛇毒腺RNA用TRIZOL提取,并用SMARTM PCR cDNA synthesis kit (Clontech)建成cDNA文库.根据其信号肽的保守区域合成引物从该文库中扩增出bungaruskunin 1的cDNA全序列,进行胶回收,酶连到pMDl8-T载体中转化测序.结果:bungaruskunin 1的前体由83个氨基酸组成,其中信号肽含有24个氨基酸,成熟肽即:bungaruskunin 1合有59个氨基酸.bungaruskunin 1的cDNA序列与从红腹伊澳蛇Pseudechis porphyriacus中分离纯化得到的丝氨酸蛋白酶抑制剂blackelin的cDNA序列的相似性高达64%.bungaruskunin 1是一种含有保守Kunitz端的Kuntiz蛋白酶抑制剂家族的一员,从而能够抑制蛋白酶和弹性酶的活性.在cDNA文库中,我们同时还筛选到了2种新的β-bungarotoxin B链的序列.结论:这些发现很好地证明了蛇中Kunitz/BPTI胰蛋白酶抑制剂和毒性神经的家族可能起源于共同的祖先.

非晶状体βγ-晶状体蛋白的研究进展

βγ-晶状体蛋白是主要分布于脊椎动物眼睛晶状体内的水溶性结构蛋白.非晶状体βγ-晶状体蛋白从微生物到高等哺乳动物都的过报道.微生物中发现的非晶状体βγ-晶状体蛋白主要作为环境胁迫应急蛋白,在恶劣环境中发挥对细菌的自我保护作用,如Protein S.在哺乳动物中,非晶状体βγ-晶状体蛋白被推测能够参与胚胎的皮肤发育与分化调节,具有肿瘤抑制等重要的生理功能,如黑色素瘤缺失蛋白.但是,对于它们的生化特性、生理功能和作用机制知之甚少.本文从蛋白结构、基因起源和生物学功能等方面简要介绍目前非晶状体βγ-晶状体蛋白的相关研究进展.

无指盘自蛙皮肤分泌液中促胰岛素释放肽的分离纯化与活性初步研究

通过葡聚糖 Sephadex G-50凝胶过滤和反相高压液相层析等手段,对无指盘臭蛙皮肤分泌液进行分离纯化,得到了高纯度的多肽分离峰.分别采用体外培养的大鼠胰岛和INS-1胰岛β细胞系检测分离峰的促胰岛素释放活性.结果表明,所得多肽既可促进原代培养的大鼠胰岛分泌胰岛素,又可以促进INS-1细胞胰岛素释放;运用飞行质谱仪测定该促胰岛素释放肽的相对分子质量,其大小为1 868.此外,利用鸡胚尿囊绒毛膜(CAM)体内模型检测,发现该多肽还具有显著的抑制血管生成活性.

人精液凝固蛋白SgI-52的表达与抗菌活性研究

以人精囊腺cDNA为模板,用嵌套式PCR技术扩增出编码成熟人精液凝固蛋白I(semenogelin I,SgI)第85-136位氨基酸(SgI-52)的核苷酸序列并将其插入载体pMAL-p2X,成功构建的表达载体pMAL-p2Z/SgI-52转化大肠杆菌DH5 α后,重组融合蛋白诱导表达于大肠杆菌周质中.经第X因子剪切及超滤处理,得到表达的重组SgI-52.质谱分析结果证明重组SgI-52为目的肽.重组人SgI-52对大肠杆菌ATCC 25922标准株以及耐氨苄标准株ML-35P的最低抑制浓度MIC分别为32.45以及46.30μg/mL.我们的结果及相关研究提示在人精液液化过程中人精液凝固蛋白I的不同降解产物可能行使不同的生物学功能,值得进行深入研究.

从中华硬蜱神经节中分离出两种神经肽

从中华硬蜱神经节中分离出两种神经肽a和b,其序列分别为Leu-Val-Val-Tyr-Pro-Trp-Thr-Lys和Trp-Glu-Lys-Leu-Gly-Ser-Met-Glu-Thr-Leu.热板实验结果表明,神经肽a具有很强的镇痛活性,并且其镇痛作用随其剂量递增而增强;神经肽b有一定的肌舒张活性.这些神经肽可能参与硬蜱下调宿主防御反应的过程.

大蹼铃蟾皮肤白蛋白的胰蛋白酶抑制活性研究

通过离子交换层析和凝胶过滤层析,在大蹼铃蟾(Bombina maxima)皮肤中得到其白蛋白.该蛋白有强烈抑制胰蛋白酶水解小肽底物的活性,但对其它丝氨酸蛋白酶如凝血酶、糜蛋白酶、弹性蛋白酶及枯草杆菌蛋白酶无抑制.它以1∶1摩尔比同胰蛋白酶形成稳定结合的复合物.经测定发现,该蛋白对温度、pH值及还原剂二硫苏糖醇的耐受性较强,三种因素对其胰蛋白酶抑制活性影响不大.说明大蹼铃蟾皮肤白蛋白具有稳定的胰蛋白酶抑制活性,可能在大蹼铃蟾防御天敌捕食的过程中发挥重要作用.

Radical Scavenging and Antimicrobial Activities of Methanol Extracts of Two Kinds of Formicary

对两种不同的蚂蚁窝进行甲醇提取,并对提取物进行了急性毒性、抗自由基,酚含量、还原能力和抗菌活性的检测。二苯基三硝基肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)自由基的清除能力的检测表明:两种蚂蚁窝甲醇提取物都具有显著的自由基清除能力,并呈现出剂量依赖性,而且,在高浓度时(5~10mg·mL-1),它们的自由基清除能力甚至显著地高于二丁基羟基甲苯(butylated hydroxyl toluene,BHT)。酚的含量和还原能力分别用福林酚试剂和铁氰化钾还原反应来测定,统计分析显示两种蚂蚁窝的抗氧化能力和其酚含量、还原能力都存在着正相关。两种蚂蚁窝甲醇提取物都具有抗革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌的活性,但它们却对真菌没有作用。

血清白蛋白的功能及应用

血清白蛋白是脊椎动物血浆中含量最丰富的蛋白质.人血清白蛋白是由585个氨基酸组成的单链蛋白质,分子量为67 kDa.成熟的人血清白蛋白是一个心形分子,由3个结构相似的α-螺旋结构域组成.不同来源的血清白蛋白的氨基酸序列及其空间结构非常保守,它具有结合和运输内源性与外源性物质,维持血液胶体渗透压,清除自由基,抑制血小板聚集和抗凝血等生理功能.最近研究发现,蟾蜍血清白蛋白可能与其皮肤呼吸有关.人血清白蛋白目前已广泛应用于临床.

昆虫先天性免疫信号通路研究进展

：昆虫体内形成了强大的免疫肪御系统，其被各种微生物攻击时能依靠病原相关分子模式识别蛋白时 感染进行区分和激活体内信号通路诱导如抗茵肤之类的效应分子昆虫体内控雠先天性免疫的信号通路分 别是．T01l通路、IMD通路和JAS／sTAT通路，这3条通路在信号传递过程中存在协作，井且，这些通路与脊椎 动物体内某些通路存在惊人相似、在免疫调控通路方面存在共同的进化起源．遣揭示了先天性免疫在动物体 内存在的普遍-胜和机体抵御病原感染的重要性．

两栖类动物皮肤分泌物及其生物学适应意义--大蹼铃蟾皮肤分泌物蛋白质多肽组的启示

以大蹼铃蟾(Bombina maxima)为代表性物种,揭示了两栖类皮肤分泌物蛋白质多肽组丰富的分子和功能多样性.目前在大蹼铃蟾已发现的分子包括3类不同的抗菌肽、缓激肽、缓激肽增强肽和缓激肽拮抗肽、缓激肽基因相关肽、富含脯氨酸铃蟾肽及其基因相关肽、神经调节素U、Bv8肽、三叶型蛋白和蛋白酶抑制剂等.抗菌肽分子多样性及其形成机制、缓激肽及其基因相关肽功能和表达模式的多样性都较好地揭示了在多样的生态条件下,两栖类皮肤活性肽环境适应的分子基础及生物合成的调控机制.富含血红素辅基的白蛋白广泛分布在大蹼铃蟾皮肤外皮层细胞膜上和真皮海绵层内,表明它在皮肤的生理功能,如在呼吸、物质交换和渗透压调节中有重要作用.两栖类皮肤分泌物蛋白质多肽组,由于其分子结构的多样性、新颖性和哺乳类同系物的存在,在生物医学研究和天然药物开发中具有独特和不可替代的价值;同时,两栖类皮肤功能基因组具有多样性丰富、快速重组突变的特征,是探讨生物适应的基因基础、基因形成机制和进化特性等生物学基本问题的优秀模型.

竹叶青蛇毒L一氨基酸氧化酶的纯化、诱导细胞凋亡和抗菌作用

经过分子筛层析和离子交换层析，我们从竹叶青(n妇删l黜3蚴堍g矾)蛇毒中纯化得到了竹叶青蛇毒L 氨基酸氧化酶(聊．L旧)。实验表明，7IsV．LAO是一种糖蛋白，其分子由非共价连接的两个相同的亚基组成， SDS-聚丙烯酰氨凝胶电泳一个亚基的表观分子量为58 kDa。俗v．LA0酶比活力为1100 U／IIlg，其分子脱掉糖基 化成分后不影响酶活力。聊．LA0在浓度为1．0隅／ⅡlL以上时可以诱导C8166细胞凋亡。7rsv．uLo对实验病原 微生物具有选择性抗生作用并具有明显的量效关系，对白色念珠菌(A-I℃c2002)、金黄色葡萄球菌(A，I℃c2592)和 短小芽孢杆菌(cMccBll207)的最小抑菌浓度分别是0．3，O．4和1．0∥nlL，即使在最高实验浓度10彬rIlL，’Isv- LA0对其它实验菌株也未显示抑菌作用。

中国对虾PC2 Ⅲ系列抗菌肽的分离纯化及活性

以我国主要经济海产品中国对虾( Penus chinensis ) 为研究对象, 通过Sephadex G250 、RP2HPLC 等 技术分离纯化到PC2 Ⅲ系列中国对虾天然抗菌肽。经初步鉴定, 该系列抗菌肽对革兰氏阴性和革兰氏阳性菌都 表现出程度不一的抑菌活性, 且不同程度地影响小白鼠离体回肠肌收缩, 但无丝氨酸蛋白酶抑制剂活性。用 MALDI2TOF 质谱对样品进行分析, 检测到分子量分别为1 071 Da 和1 311 Da 的两种抗菌肽。这些抗菌肽对对虾 抵御微生物的侵袭具有重要的作用

大蹼铃蟾皮肤膜联蛋白Ⅱ相关蛋白的分离纯化及活性

通过阴离子交换、凝胶过滤和阳离子交换层析, 从大蹼铃蟾皮肤中纯化到一个表观分子量为33 kDa 的单链蛋白。N - 末端序列比较分析显示, 该蛋白与来自非洲爪蟾、红色原鸡和人膜联蛋白Ⅱ的N - 末端序列 相同的氨基酸分别占70 %、64 %和56 %。该蛋白具有以钙依赖的方式抑制专一性血小板膜糖蛋白Ⅵ受体激动剂 ———Stejnulxin 诱导洗涤人血小板聚集的生物学功能, 最大抑制率达48 %。结合其N - 末端序列BLAST 搜索结 果及其活性的钙依赖性, 推测该蛋白是与膜联蛋白Ⅱ相关的一类蛋白质。

非洲爪蟾血清白蛋白的分离纯化及胰蛋白酶抑制活性

通过凝胶过滤层析及两步阴离子交换层析, 从非洲爪蟾( Xenopus laevis ) 的血清中获得了其68 kDa 的血清白蛋白。与大蹼铃蟾血清白蛋白相似, 非洲爪蟾血清白蛋白也具有抑制胰蛋白酶的活性, 但其抑制活力 相对较低, 180 nmol/L 的非洲爪蟾血清白蛋白能抑制84 %的胰蛋白酶活性(30 nmol/L) 。经表面等离子共振法 获得了其与胰蛋白酶的结合动力学常数, 解离平衡常数KD = 1144 ×10 - 6 mol/L 。经Western blot 分析发现, 非洲 爪蟾的皮肤中也分布有血清白蛋白。推测两栖类动物血清白蛋白具有的胰蛋白酶抑制活性可能是其抵御天敌捕 食的一种防御措施。

中华硬蜱凝血酶抑制剂的分离纯化与活性

通过凝胶过滤和反相高压液相层析, 从200 只半饱吸血的中华硬蜱( Ixodide sinesis ) 唾液腺中分离 纯化得到一凝血酶抑制剂。用飞行质谱测定其分子量为61356 kDa , 与其他蜱类来源的凝血酶抑制剂分子量不 同, 提示为一新蛋白分子。该抑制剂对凝血酶有强烈的抑制活性, 对激活的第X 因子和胰蛋白酶有微弱的抑制 活性。其发现将为发展疫苗、生物控制中华硬蜱提供资料和目标抗原。