1 resultado para Rubisco small subunit gene ( rbcS) Promoter
em Universita di Parma
Resumo:
Metriti ed endometriti sono le patologie maggiormente responsabili delle perdite economiche negli allevamenti bovini da latte, specialmente nel periodo successivo al parto. Mentre le metriti coinvolgono e si sviluppano in tutto lutero e sono caratterizzate dalla presenza di sintomi sistemici, le endometriti consistono in una infiammazione che riguarda il solo endometrio, con la presenza di perdite purulente, distruzione della superficie epiteliale, congestione vascolare, edema stromale ed accumulo di linfociti e plasmacellule. Queste patologie, inoltre, possono causare, disfunzione ovarica, con conseguente infertilit e riduzione sia dellefficienza riproduttiva della vacca sia della produzione stessa di latte. Nonostante queste malattie siano, nella maggior parte dei casi, correlate allinstaurarsi di infezioni batteriche, che possono subentrare nellutero direttamente durante il parto, il ruolo di alcuni virus nello sviluppo di queste patologie stato recentemente approfondito e la correlazione tra l Herpesvirus Bovino 4 e linsorgere di metriti ed endometriti stata dimostrata. L Herpesvirus Bovino 4 (BoHV-4) un gamma-herpesvirus ed il suo genoma costituito da una molecola lineare di DNA a doppio filamento con una struttura genomica di tipo B, caratterizzata dalla presenza di ununica lunga sequenza centrale (LUR) fiancheggiata da multiple sequenze poli-ripetute (prDNA). BoHV-4 stato isolato sia da animali sani sia da animali con differenti patologie, tra cui malattie oculari e respiratorie, ma soprattutto da casi di metriti, endometriti, vaginiti o aborti. Generalmente, il ruolo svolto dal virus in questo tipo di patologie associato alla compresenza di altri tipi di patogeni, che possono essere virus, come nel caso del Virus Della Diarrea Virale Bovina (BVDV), o pi frequentemente batteri. Usualmente, liniziale difesa dellendometrio bovino nei confronti dei microbi si fonda sul sistema immunitario innato e lattivazione di specifici recettori cellulari determina la sintesi e la produzione di citochine e chemochine pro infiammatorie, che possono essere in grado di modulare la replicazione di BoHV-4. Il genoma di BoHV-4 possiede due principali trascritti per i geni Immediate Early (IE), trai quali ORF50/IE2 il pi importante ed il suo prodotto, Rta/ORF50, fortemente conservato tra tutti gli Herpesvirus. Esso responsabile della diretta trans-attivazione di numerosi geni virali e cellulari e pu essere modulato da differenti stimoli extracellulari. Precedentemente stato dimostrato come il TNF-, prodotto dalle cellule stromali e dai macrofagi allinterno dellendometrio, in conseguenza ad infezione batterica, sia in grado di aumentare la replicazione di BoHV-4 attraverso lattivazione del pathway di NFkB e direttamente agendo sul promotore di IE2. Per queste ragioni, risultato di forte interesse investigare quali potessero essere, invece, i fattori limitanti la replicazione di BoHV-4. In questo lavoro stata studiata la relazione tra cellule endometriali stromali bovine infettate con lHerpesvirus Bovino 4 e linterferon gamma (IFN-) ed stata dimostrata la capacit di questa molecola di restringere la replicazione di BoHV-4 in maniera IDO1 indipendente ed IE2 dipendente. Inoltre, la presenza di alcuni elementi in grado di interagire con l IFN-, allinterno del promotore di IE2 di BoHV-4, ha confermato questa ipotesi. Basandoci su questi dati, abbiamo potuto supporre lesistenza di uno stretto vincolo tra lattivazione dellasse dellinterferon gamma e la ridotta replicazione di BoHV-4, andando a porre le basi per una nuova efficiente cura e prevenzione per le patologie uterine. Poich il meccanismo corretto attraverso il quale BoHV-4 infetta lendometrio bovino non ancora ben compreso, stato interessante approfondire in maniera pi accurata linterazione presente tra il virus ed il substrato endometriale, analizzando le differenze esistenti tra cellule infettate e non, in termini di espressione genica. Basandoci su dati preliminari ottenuti attraverso analisi con RNA sequencing (RNAseq), abbiamo visto come numerosi geni risultino over-espressi in seguito ad infezione con BoHV-4 e come, tra questi, la Metalloproteasi 1 sia uno dei pi interessanti, a causa delle sue possibili implicazioni nello sviluppo delle patologie dellendometrio uterino bovino. Successive analisi, effettuate tramite westernblotting e real time PCR, sono state in grado di confermare tale dato, sottolineando lefficacia di un nuovo approccio sperimentale, basato sul RNAseq, per lo studio dellinsorgenza delle patologie.
