4 resultados para NA TRANSPORTERS
em Biblioteca Digital de Teses e Dissertações Eletrônicas da UERJ
Resumo:
Introduo: o xido ntrico (NO) um gs inorgnico com uma meia-vida curta e tem um papel crtico na manuteno da homeostase vascular e fluidez sangunea. O NO sintetizado a partir do aminocido L-arginina por uma famlia de enzimas NO sintases (NOS). Estudos tm mostrado que eritrcitos expressam NOS endotelial (eNOS) funcional, que serve como uma fonte de NO intraluminal. Alm disso, eritrcitos participam da defesa antioxidante removendo os radicais livres e prevenindo o dano oxidativo s membranas biolgicas e a destruio do NO. Dietas hiperlpidicas esto associadas a um risco aumentado de doena cardiovacular e sndrome metablica, mas os exatos mecanismos no esto completamente esclarecidos. O objetivo deste estudo foi investigar os efeitos de diferentes dietas hiperlpidicas na via L-arginina-NO e o estresse oxidativo em eritrcitos de camundongos. Metodologia: camundongos machos C57BL/6 de trs meses de idade receberam diferentes dietas por 10 semanas: dieta normolipdica ou dieta hiperlipdica contendo banha de porco (HB), leo de oliva (HO), leo de girassol (HG) ou leo de canola (HC). Foram analisados o transporte de L-arginina mediado pelos transportadores catinicos y+ e y+L, a atividade da NOS, a expresso da eNOS e da NOS induzvel (iNOS), a formao de substncias reativas ao cido tiobarbitrico (TBARS) e a atividade das enzimas antioxidantes catalase (CAT) e superxido dismutase (SOD). Resultados: o transporte total de L-arginina estava aumentado no grupo HO em comparao aos controles e aos outros grupos com dieta hiperlipdica. Quando o transporte foi fracionado, o sistema y+ estava mais ativado no grupo HO em relao aos controles e outros grupos que receberam dieta hiperlipdica. O transporte de L-arginina via sistema y+L estava maior nos grupos HO, HG e HC comparados aos grupos controle e HB. Adicionalmente, a atividade basal da NOS e a expresso de eNOS estavam aumentadas em eritrcitos independente do tipo de dieta hiperlpidica insaturada. Observou-se uma maior expresso da iNOS no grupo HO comparado ao controle. Em contraste, o grupo HB apresentou uma inibio da via L-arginina-NO. A anlise da peroxidao lipdica, atravs da formao de TBARS, e da atividade da enzima antioxidante CAT no revelou diferenas entre os grupos, ao contrrio do grupo HO, que induziu uma ativao de outra enzima antioxidante, a SOD. Concluses: o presente estudo proporciona a primeira evidncia de que os sistemas y+ e y+L regulam o transporte aumentado de L-arginina em eritrcitos de camundongos do grupo HO. Alm disso, todas as dietas hiperlipdicas insaturadas induzem um aumento da atividade basal da NOS associada a uma expresso elevada da eNOS. possvel que diferentes mudanas na composio lipdica da membrana plasmtica induzidas pelas dietas possam afetar transportadores e enzimas nos eritrcitos. Alm disso, a inibio da via L-arginina-NO no grupo HB pode contribuir para o desenvolvimento da aterosclerose, enquanto dietas hiperlipdicas insaturadas podem ter um efeito protetor via aumento da gerao de NO.
Resumo:
O crebro infantil humano submetido hipxia-isquemia (HI) apresenta perda de oligodendrcitos, hipomielinizao, astrogliose, alteraes no desenvolvimento cortical e no comportamento motor, incluindo a paralisia cerebral. O cerebelo desempenha um importante papel no controle motor e diversos danos vm sendo observados em humanos e animais que sofreram HI. A excitotoxicidade glutamatrgica frequentemente associada HI e junes celulares podem ser responsveis pela transferncia de molculas capazes de modular os danos decorrentes. Dados prvios de nosso grupo utilizando um modelo de HI pr-natal em ratos demonstraram danos permanentes na estrutura cerebelar, indicando que os efeitos deletrios da HI pr-natal podem ser mantidos at a vida adulta. O objetivo deste trabalho foi caracterizar os nveis de conexinas, receptores e transportadores de glutamato ao longo do desenvolvimento do cerebelo HI, e avaliar a configurao das junes celulares em culturas de astrcitos derivadas do cerebelo de ratos submetidos a esse modelo. Ratas no 18 dia de gestao, aps anestesia, tiveram as quatro artrias uterinas obstrudas por 45 minutos (Grupo HI). Animais controle tiveram os teros expostos sem sofrer a obstruo (Grupo SH). A gestao prosseguiu e apenas filhotes nascidos a termo foram utilizados. Os animais foram decapitados aos 2 (P2), 9 (P9), 16 (P16),23 (P23), 30 (P30), 45 (P45) e 90 (P90) dias ps-natal. Os cerebelos foram submetidos tcnica de Western blotting utilizando os anticorpos anti-NR2B, anti-GluR3, anti-EAAT1, anti-GFAP e anti-Cx43. Para a cultura de astrcitos foram utilizados cerebelos de animais P2. Aps terem atingido confluncia, as clulas foram fixadas e imunomarcadas com os anticorpos anti-Cx43, anti-GFAP, anti-nestina e anti-A2B5. Nossos resultados demonstram diferenas nos nveis de GluR3 durante o desenvolvimento do cerebelo SH e HI, havendo uma reduo significativa da expresso desta subunidade no grupo HI em P9. Por outro lado, no foram verificadas alteraes nos nveis de NR2B e de GFAP entre os grupos nas diferentes idades. Observou-se reduo significativa de Cx43 em animais HI em P2 bem como nos astrcitos HI em cultura, os quais tambm apresentaram alteraes morfolgicas e diferenas na expresso do marcador A2B5. A alterao referente a GluR3 no grupo HI pode ser causada pela reduo da arborizao das clulas de Purkinje e pela reduo no nmero de precursores de oligodendrcitos no cerebelo de animais HI em P9, j observadas em nosso laboratrio. A diminuio de Cx43 indica que a passagem de substncias por canais astrocitrios pode estar reduzida e contribuir para a expanso dos danos persistentes descritos em HI. Alteraes morfolgicas e na expresso de marcadores da diferenciao de astrcitos podem refletir os potenciais efeitos de HI sobre a maturao destas clulas a longo-prazo. Nossos resultados apontam que a HI sistmica pr-natal pode ser responsvel por alteraes que caracterizam a excitotoxicidade glutamatrgica. Ressaltamos tambm a importncia da comunicao entre astrcitos como estratgia neuroprotetora nesta leso.
Resumo:
Adolescentes humanos frequentemente associam o fumo do tabaco ao consumo de bebidas alcolicas. A despeito desta associao, pouco se sabe sobre a neurobiologia bsica da coexposio no crebro adolescente. No presente estudo, avaliamos os efeitos da exposio, que ocorreu do 30 ao 45 dia de vida ps natal (PN30 a PN45), nicotina e/ou ao etanol durante a adolescncia (PN38-45) e da retirada (PN50-57) na memria visuoespacial atravs do Labirinto Aqutico de Morris (LAM: 6 sesses + 1 prova, 3 tentativas/sesso, latncia = 2 min), em 4 grupos de camundongos Suos machos e fmeas: (1) exposio concomitante NIC [soluo de nicotina free base (50 μg/ml) em sacarina a 2% para beber] e ETOH [soluo de etanol (25%, 2 g/kg) injetada i.p. em dias alternados]; (2) exposio NIC; (3) exposio ao ETOH; (4) veculo (VEH). Uma vez que os resultados comportamentais podem sofrer a interferncia de alteraes motoras, avaliamos (a) a atividade locomotora no Teste de Campo Aberto (sesso nica, 5 min) e (b) a coordenao e o equilbrio no Teste de Locomoo Forada sobre Cilindro Giratrio (5 tentativas, latncia = 2 min). Para os efeitos da exposio NIC e/ou ao ETOH na eficincia do transporte de aminocidos excitatrios, avaliamos a captao de [3H] D-aspartato no hipocampo. A expresso do transportador glial GLAST/EAAT1 foi avaliada por Western-blot. Durante a exposio, animais ETOH e NIC+ETOH apresentaram dficits de memria nas sesses de teste e de prova no LAM enquanto, na retirada, os grupos NIC e NIC+ETOH apresentaram prejuzos na reteno. No houve diferenas significativas entre os grupos de tratamento em nenhum dos parmetros testados em ambos os testes motores, tanto na exposio quanto na abstinncia. Os grupos NIC, ETOH e NIC+ETOH tiveram uma diminuio significativa na captao de [3H] D-aspartato ao final do perodo de exposio, com uma normalizao da atividade dos EAATs na retirada das drogas. O tratamento com NIC e ETOH reduziu ainda a expresso de GLAST/EAAT1 no hipocampo em ambas as idades testadas. O uso de etanol na adolescncia causa prejuzos memria de camundongos, com um efeito negativo mais acentuado quando associado nicotina. Contudo, a retirada da nicotina apresentou um efeito mandatrio nos danos encontrados. Ambas as drogas, isoladamente ou na coexposio, alteram os nveis de atividade e expresso dos EAATs, sugerindo que os resultados bioqumicos estejam implicados nas alteraes comportamentais encontradas.
Resumo:
A obesidade, doena resultante do acmulo excessivo de gordura corporal, importante fator de risco para diabetes mellitus tipo 2, dislipidemias e doenas cardiovasculares, doenas de alta prevalncia em todo o mundo. O processo de transio nutricional decorrente da globalizao contribuiu para o crescente nmero de indivduos com obesidade, principalmente pela modificao nos hbitos alimentares da populao, com ampla incluso de produtos industrializados ricos em gordura saturada, sal e acar, denominada dieta ocidental. Os mecanismos pelos quais a obesidade induzida por dieta leva ao desenvolvimento de doenas cardiovasculares ainda no esto completamente esclarecidos na literatura, porm sabe-se que a obesidade leva ao comprometimento da funo cardaca e do metabolismo energtico, aumentando a morbidade e mortalidade. Em grande parte dos estudos relacionados obesidade, o metabolismo energtico celular comprometido associa-se disfuno mitocondrial. Neste contexto, torna-se importante avaliar a funo mitocondrial na obesidade, visto que as mitocndrias so organelas com funes-chave no metabolismo energtico. No presente estudo, avaliamos inicialmente o efeito obesognico da dieta ocidental em camundongos Swiss por 16 semanas a partir do desmame. Para tal, analisamos a ingesto alimentar, evoluo da massa corporal, ndice de Lee, peso das gorduras epididimal e retroperitoneal, peso e morfologia do fgado, relao entre o peso do fgado/massa corporal, peso do ventrculo esquerdo (VE)/massa corporal, glicemia de jejum e teste intraperitoneal de tolerncia glicose. Avaliamos tambm o consumo de oxignio das fibras cardacas atravs da respirometria de alta resoluo. Alm disso, o contedo das protenas envolvidas no metabolismo energtico: Carnitina Palmitoil Transferase 1 (CPT1), protena desacopladora 2 (UCP2), Transportadores de glicose 1 e 4 (GLUT1 e GLUT4), protena quinase ativada por AMP (AMPK), protena quinase ativada por AMP fosforilada (pAMPK), receptor de insulina β (IRβ) e substrato do receptor de insulina 1 (IRS-1) foi determinado por western blotting. Nossos resultados confirmaram o carter obesognico da dieta ocidental, visto que os camundongos submetidos a esta dieta (GO), apresentaram-se hiperfgicos (P<0,001) e obesos (72,031,82, P<0,001), com aumento progressivo no ganho de massa corporal. Alm do aumento significativo dos parmetros: ndice de Lee (362,902,44, P<0,001), gorduras epididimal e retroperitonial (3,310,15 e 1,610,11, P<0,001), relao entre o peso do fgado/massa corporal (0,060,003, P<0,001) e peso de ventrculo esquerdo (VE)/massa corporal (0,080,002, P<0,01), hiperglicemia de jejum (192,1014,75, P<0,01), intolerncia glicose (P<0,05, P<0,01) e deposio ectpica de gordura no fgado. A respirometria de alta resoluo evidenciou disfuno mitocondrial cardaca no grupo GO, com reduzida capacidade de oxidao de carboidratos e cidos graxos (P<0,001) e aumento do desacoplamento entre a fosforilao oxidativa e a sntese de ATP (P<0,001). Os resultados de western blotting evidenciaram aumento nos contedos de CPT1 (1,160,08, P<0,05) e UCP2 (1,080,06, P<0,05) e reduo no contedo de IRS-1 (0,600,08, P<0,05). No houve diferena significativa nos contedos de GLUT1, GLUT4, AMPK, pAMPK, pAMPK/AMPK e IRβ. Em concluso, o consumo da dieta ocidental resultou no desenvolvimento de obesidade com disfuno mitocondrial associada a alteraes no metabolismo energtico.
