71 resultados para DNA Teses
Resumo:
Este trabalho busca investigar as condies de produo dos saberes psicolgicos contidos nas teses de doutoramento da Faculdade de Medicina do Rio de Janeiro no sculo XIX. Tal meta visa, a partir de conceitos diversos, obter os princpios norteadores das obras dos futuros doutores, tomando como ponto de partida o seu contexto scio-cultural. Dois conceitos, no entanto, sero privilegiados: os de paixo e afeto. Estes so conceitos que surgem em diversas teses, principalmente naquelas da primeira metade do sulo XIX perodo da maior parte das teses selecionadas nesta ocasio. Uma das principais questes levantadas diz respeito maneira como os autores das teses elaboram seus trabalhos: utilizam-se das mais diversas referncias para que possam corroborar aquilo que propem em seus trabalhos. Assim, freqentemente recorrem a textos de autores consagrados mesmo que, por vezes, no haja concordncia entre os autores escolhidos. Os contedos utilizados so dspares, mas, como so aparentemente concordantes com o que os mdicos produzem, so apropriados por estes. Esta apropriao vem a ser discutida a partir do trabalho de Michel de Certeau. Tambm vemos alguns elementos das teses sofrerem transformaes, num trabalho de bricolagem, tal como prope Claude Lvi-Strauss. inegvel que a apropriao e a bricolagem vo alm do que se verifica nas obras de Certeau e Lvi-Strauss: estes se referem cultura popular quando tratam daqueles temas, mas ao fazer uma incurso pelos escritos das teses, pode-se perceber que os mesmos fenmenos so caractersticos tambm de materiais que esto alm do que geralmente se chama de cultura popular, haja vista que teses de medicina no poderiam ser interpretadas como tal. Sendo o perodo pesquisado uma poca em que a psicologia ainda no se constituiu como cincia, os trabalhos mdicos tornam-se instrumentos privilegiados de difuso de saberes psicolgicos. Fazem parte de um material que impulsiona a produo de conhecimento sobre o homem em seus aspectos individuais, culturais, sociais, psicolgicos, indo alm das discusses fisiolgicas e orgnicas. Embora estas estejam presentes, formam um conjunto com o qual os autores das teses buscam verificar as vicissitudes humanas. Para realizar este estudo foi necessria uma pesquisa documental, onde as teses servem como fontes primrias para a execuo do trabalho. Atravs da anlise dos temas e termos constantes das teses, pretende-se constituir um mapa sobre o qual torna-se possvel articular as idias veiculadas nas teses com o contexto scio-cultural em que so produzidos os materiais dos escritos dos mdicos
Resumo:
Panulirus argus (Latreille, 1804) uma das principais espcies de lagosta no Atlntico, sendo um dos maiores recursos pesqueiros do Atlntico Ocidental, onde apresenta um alto valor comercial. A forte explotao da espcie resulta em uma grande presso sobre suas populaes. Recentemente, foi descoberto que sob o binmio P. argus esto contidas duas espcies crpticas que ocorrem em alopatria, uma na regio do Caribe e outra na costa brasileira. Esta tese tem como objetivo estudar como se estruturam geneticamente as populaes dessas duas espcies, com o propsito de fornecer mais informaes para a determinao de estoques e um correto manejo das espcies, e analisar os processos histricos evolutivos que moldaram suas histrias demogrficas. Para tal, foram estudados dois marcadores mitocondriais (regio controle e o gene da Citocromo Oxidase I) e loci de microssatlites de indivduos de 7 regies do Caribe (Florida, Bahamas, Turks e Caicos, Porto Rico, Cuba, Colmbia e Venezuela) e 11 estados do Brasil (Par, Maranho, Piau, Cear, Rio Grande do Norte, Pernambuco, Alagoas, Bahia, Esprito Santo, Rio de Janeiro e So Paulo). Dentro de cada espcie foram observadas duas linhagens mitocondriais diferentes, que co-ocorriam, de maneira homognea, ao longo de suas distribuies. Hipotetiso que essas linhagens foram formadas a partir de um evento de vicarincia com contato secundrio ou como consequncia de um efeito gargalo seguido de expanso. As duas linhagens so evidentes nas sequncias da regio controle mitocondrial, mas no gene da COI foram evidentes apenas em P. cf. argus do Caribe. As linhagens do Brasil se separaram h aproximadamente 233 - 288 mil anos e cada uma sofreu expanso em tempos diferentes, a primeira se expandiu h 100 mil anos e a segunda linhagem h 50 mil anos. As linhagens do Caribe se separaram cerca de 1 milho de anos atrs e possuem o mesmo tempo de expanso, 50 mil anos. Os microssatlites no revelaram subdiviso populacional para nenhuma das duas espcies, porm os marcadores, juntos, sugeriram um fluxo gnico diferenciado entre localidades expostas a diferentes correntes martimas. Considerando que essas lagostas so intensamente explotadas, importante ser cuidadoso no momento de definir estoques pesqueiros. Para a espcie do Brasil, dois estoques pesqueiros foram sugeridos, o primeiro do Par Bahia e o segundo do sul da Bahia a So Paulo. Para a espcie do Caribe, foi mantida e reforada a hiptese de quatro estoques sugerida pela FAO (Norte, Sul, Centro-Norte e Centro-Sul).
Resumo:
A chegada dos primeiros habitantes h cerca de 15.000 anos e de colonos portugueses e escravos africanos, desde o sculo 15, em sucessivas migraes na Amrica do Sul, levaram formao de populaes miscigenadas com razes consideravelmente diversificadas. notvel a heterogeneidade populacional decorrente dessas migraes e do processo de amalgamento de indgenas a partir dos contatos entre os diferentes grupos tnicos, iniciados com a colonizao da Amrica pelos europeus. A despeito da elevada miscigenao, ainda se pode encontrar no Brasil populaes que, majoritariamente, mantm a identidade gentica dos seus ancestrais mais remotos. O objetivo desse estudo foi caracterizar a ancestralidade da populao de Santa Isabel do Rio Negro, Amazonas, com fortes traos fenotpicos amerndios, e da tribo indgena Terena de Mato Grosso do Sul. Para isto, foram estudados marcadores uniparentais paternos ligados regio no recombinante do cromossomo Y e maternos presentes na regio controle do DNA mitocondrial (mtDNA). Em relao herana paterna, foram genotipados 31 indivduos de Santa Isabel do Rio Negro, sendo que os Terena j haviam sido estudados sob este aspecto. Quanto ao mtDNA, foram estudados 76 indivduos de ambos os sexos e 51 Indivduos do sexo masculino de Santa Isabel do Rio Negro e dos Terena, respectivamente. A anlise de marcadores Y-SNPs possibilitou a caracterizao de 55% dos cromossomos Y dos indivduos de Santa Isabel do Rio Negro como pertencentes ao haplogrupo Q1a3a*, caracterstico de amerndio. Atravs do mtDNA, foi verificado que o haplogrupo A o mais frequente nas duas populaes, com percentuais de 34% e 42% em Santa Isabel do Rio Negro e na tribo Terena, respectivamente, observando-se no tocante ancestralidade materna a no ocorrncia de diferenciao gentica significativa entre as duas populaes. Por outro lado, a anlise do cromossomo Y revelou a ocorrncia de distncia gentica significativa entre elas, o que pode ser resultante da diferena entre os tamanhos das amostras populacionais ou refletir diferenas entre rotas migratrias dos amerndios anteriormente colonizao. Os resultados mostram ainda que os genomas mitocondriais autctones foram melhor preservados, e que novos haplogrupos do cromossomo Y foram introduzidos recentemente na populao amerndia. , portanto, possvel concluir que a populao de Santa Isabel do Rio Negro e a tribo indgena Terena apresentam um significativo grau de conservao da ancestralidade amerndia, apesar do longo histrico de contato com europeus e africanos, os outros povos formadores da populao brasileira.
Resumo:
Petiveria alliacea L. uma planta pertencente famlia Phytolaccaceae, conhecida popularmente no pas como guin, erva-de-alho, erva-tipi ou amansa-senhor. Nativa da Regio Amaznica tem sido cultivada em muitas reas tropicais com propsito medicinal ou ritualstico. O objetivo desse trabalho foi (i) o desenvolvimento e a multiplicao de plantas de P. alliacea L. atravs de mtodos de cultura de tecidos, e monitoramento fitoqumico das culturas, e (ii) avaliao comparativa das potencialidades genotxica e antigenotxica entre plantas coletadas no campo e produzidas in vitro. Exemplares de diferentes populaes ocorrentes no estado do Rio de Janeiro foram utilizados como matrizes para a cultura. Foi estabelecido um protocolo para multiplicao das plantas em meio MS suplementado com BAP e ANA em diferentes concentraes e combinaes, que forneceu como melhor resultado em mdia 8 plantas por explante na concentrao de BAP 4,4 μM + ANA 0,54 μM. A anlise fitoqumica foi baseada em mtodos cromatogrficos de diferentes extratos de plantas de campo e plantas in vitro das populaes estudadas resultando em diferentes substncias identificadas nas amostras analisadas por cromatografia em camada delgada. Os extratos foram tambm avaliados por cromatografia gasosa acoplada espectrometria de massas, sendo identificadas diferentes substncias, entre as quais o dibenzil dissulfeto, um produto de degradao de tiosulfinatos com importantes atividades biolgicas na defesa das plantas. Os extratos aquosos das plantas de campo e daquelas estabelecidas in vitro foram submetidos avaliao da potencialidade genotxica e antigenotxica, usando-se como modelo o DNA plasmidial pUC 9.1. Os resultados demonstraram que as concentraes utilizadas do extrato aquoso foram capazes de induzir alteraes na conformao estrutural do DNA, indicando a ocorrncia de quebras simples e duplas nesta molcula. Observou-se tambm que as leses aumentaram, proporcionalmente ao aumento da concentrao dos extratos, caracterizando-se, assim, um efeito dose-resposta. Os dados tambm apontaram para um efeito protetor do extrato aquoso, em relao aos danos oxidativos causados pelo cloreto estanoso, indicando, tambm, uma potencialidade antigenotxica do extrato aquoso.
Resumo:
A Mata Atlntica (MA) est entre as regies com maior biodiversidade e mais ameaadas do planeta. Esforos em diversas reas do conhecimento tm sido feitos para que se tenha uma estimativa mais refinada da diversidade existente e sua organizao ao longo do bioma. O crescente nmero de estudos que buscam reconstituir a histria da diversificao da MA apontam para um cenrio espacial e temporal complexo, havendo ainda uma lacuna no conhecimento dos processos em pequena escala. Vertebrados em miniatura tm se mostrado uma boa ferramenta para estudos de processos evolutivos em pequena escala. Assim, o gnero Euparkerella, endmico de uma pequena regio da MA dos Estados do Rio de Janeiro (RJ) e Esprito Santo (ES), foi escolhido como modelo para este estudo. No primeiro captulo buscou-se descrever a diversidade existente dentro do gnero a partir de uma filogenia molecular. Para isso, utilizaram-se mtodos bayesianos para gerar genealogias de genes e de espcies a partir de um fragmento de gene mitocondrial e quatro fragmentos de genes nucleares. Os resultados obtidos apontaram para uma grande diversidade crptica no gnero. Foram identificadas seis unidades evolutivas significativamente divergentes para o RJ: duas em Euparkerella cochranae, trs em Euparkerella brasiliensis, e Euparkerella sp.. A espcie mais basal recuperada foi Euparkerella robusta, do ES, e estimou-se o incio da diversificao do gnero para o final do Mioceno. O segundo captulo descreve onze marcadores de microssatlites desenvolvidos para Euparkerella brasiliensis atravs do mtodo de pirosequenciamento de nova gerao 454. No terceiro captulo estudou-se apenas uma unidade evolutiva, Euparkerella brasiliensis da rea dos Trs Picos/ RJ. A partir de marcadores de evoluo rpida (microssatlites) e lenta (sequncias de DNA) buscou-se compreender a estrutura e a dinmica populacional desta unidade evolutiva em uma rea bastante pequena (aprox. 20 km) sob influncia de um gradiente ambiental altitudinal (40 m 1000 m). Foram identificadas, a partir dos microssatlites, duas subpopulaes geneticamente distintas nas bordas do gradiente. O fluxo gnico se deu predominantemente das bordas para a zona de contato, onde foi observado o maior efetivo populacional. Tais resultados indicam que pequenas variaes ambientais podem atuar no isolamento populacional em Euparkerella e corroboram o padro de formas microendmicas identificadas na filogenia. Futuros estudos devem ser feitos no sentido de buscar caracterizar morfologicamente as unidades evolutivas aqui identificadas; preencher as lacunas amostrais, especialmente no ES; e descrever os processos que atuam em pequena escala nas zonas de contato entre as unidades evolutivas e fatores limitantes a distribuio das mesmas.
Resumo:
A Deficincia Intelectual (DI) uma condio complexa, que acomete 2-3% da populao mundial, constituindo um importante problema de sade pblica. No entanto, uma parcela significativa dos casos de DI permanece sem um diagnstico definitivo, o que demonstra que muitos fatores etiolgicos associados a esta condio ainda precisam ser elucidados. H um consenso de que o nmero de homens com DI supera em 30% o nmero de mulheres, um achado atribudo presena de mutaes em genes localizados no cromossomo X. Dentre os genes presentes neste cromossomo que so expressos no crebro, o Jumonji AT-rich interactive domain 1C (JARID1C) foi identificado como um potencial candidato a estar relacionado DI ligada ao X (DILX). O gene JARID1C codifica uma desmetilase da lisina 4 da histona H3 (H3K4), imprescindvel para a regulao epigentica. To importante quanto o estudo do gene JARID1C em pacientes com DI a busca por variaes no nmero de cpias gnicas (VNCs) em regies cromossmicas subtelomricas. Genes relacionados ao desenvolvimento cerebral so enriquecidos em VNCs e as regies subtelomricas so mais susceptveis formao destes rearranjos. Diante do exposto, neste estudo, investigamos mutaes no gene JARID1C (exons 3, 4, 5, 8, 10, 14 e 23) em 148 homens portadores de DI pertencentes a famlias com padro de segregao sugestivo de DILX. Paralelamente, analisamos VNCs subtelomricas em 174 homens com DI familiar de etiologia idioptica, independente do padro de segregao. Para todos os indivduos selecionados, amostras de DNA genmico foram extradas a partir de sangue perifrico e alteraes genticas frequentemente relacionadas DI foram previamente excludas (expanses trinucleotdicas nos loci FRAXA e FRAXE e mutaes nos genes MECP2 e ARX). A anlise do gene JARID1C foi realizada pela tcnica de PCR, seguida da anlise dos produtos amplificados por sequenciamento. Foram identificadas quatro variantes silenciosas (c.564G>A, c.633G>C, c.1884G>A, c.1902C>A). Atravs da anlise in silico de sequncias exnicas acentuadoras de splicing (ESEs) localizadas nas posies das variantes encontradas, foi possvel classificar a variante c.1884G>A como neutra e as trs variantes restantes como possveis criadoras de ESEs. J para a investigao das VNCs subtelomricas, foi utilizada a metodologia de Multiplex Ligation-dependent Probe Amplification (MLPA), capaz de identificar microdelees e microduplicaes nas 46 regies subtelomricas. Para este fim, inicialmente, os indivduos foram investigados pelo kit de MLPA P036, enquanto que para aqueles que exibiram alteraes tambm foi utilizado o kit P070. A validao das VNCs encontradas foi realizada por PCR quantitativo em Tempo Real. A anlise por MLPA revelou um indivduo apresentando duas delees (9p e 13q), um indivduo apresentando duas amplificaes (1p e 2p), dois indivduos apresentando uma deleo e uma amplificao (18p e 18q; 4p e 8p), quatro indivduos portadores de uma deleo cada (10p, 20p, 3q e 22q) e dois indivduos com uma amplificao cada (7q e 20p). Algumas das alteraes subtelomricas encontradas (2,87%) representam VNCs de relevncia clnica para o estudo da DI, reforando a importncia do rastreamento de rotina de VNCs subtelomricas na DI familiar. Consideramos que a elucidao de novos genes ou mecanismos moleculares diretamente relacionados DI um caminho promissor e urgente para o estabelecimento de novas estratgias teraputicas possveis.
Resumo:
Este trabalho tem como objeto a anlise conceitual da produo acadmica de teses e dissertaes sobre o tema Aes Afirmativas (AAs) no Brasil, no perodo compreendido entre 1987 e 2010. A abordagem metodolgica utilizada foi pautada na pesquisa qualitativa de natureza bibliogrfica. A principal fonte de dados foi o Banco de Teses e Dissertaes da Capes/MEC. A escolha da amostra, composta de 206 textos acadmicos, se deu com base na utilizao do termo ao afirmativa como categoria de busca. Dessas amostras, foram analisados, por meio de mapas conceituais, 35 trabalhos completos, de modo a atender ao critrio de proporcionalidade entre o tema AAs e as demais categorias que emergiram da anlise do corpo de dados com utilizao software Atlas.ti. Incialmente foi realizada a leitura crtica e a seleo de categorias pertinentes ao tema, posteriormente utilizou-se o software para confirmar e/ou desconfirmar essas categorias. Com esse procedimento foi possvel no somente extrair o foco dado por cada trabalho acadmico, como a abordagem terica, a metodolgica, a posio dos autores em relao ao tema AAs, a populao alvo eleita por cada autor, como tambm identificar os autores/tericos recorrentes ao tema AAs utilizados para fundamentar esses trabalhos. Para demonstrar os resultados optou-se pela anlise dos mapas conceituais de modo descritivo e ainda por apresent-los no apndice II de modo ilustrativo. Como resultado identificou-se que a grande maioria dos trabalhos refere-se as AAs a partir da aplicao de polticas pblicas de reduo das desigualdades, como o sistema de cotas relacionado ao acesso da populao negra no sistema de ensino superior. Quanto ao posicionamento dos autores em relao a essas aes, foram raros os trabalhos que se posicionaram contra as AAs. De modo geral, os autores estudados entendem que esta uma forma de justia distributiva e de reparao social das desigualdades entre diferentes segmentos e grupos sociais. Considera-se que este estudo se faz importante na medida em que crescente no ensino superior no Brasil, nos ltimos anos, a utilizao deste recurso poltico de equalizao das desigualdades sociais. Este estudo mostra um diagnstico do perfil da produo acadmica e permite identificar as reas de estudo e os temas mais frequentemente associados s AAs. Pretende-se com ele, contribuir com um marco terico-conceitual para que novas pesquisas possam ser realizadas de modo a enriquecer o campo de estudos das cincias sociais, em especial sobre o tema AAs
Resumo:
Buscamos detectar evidncias da presena de genes envolvidos na produo de Enzimas Modificadoras de Aminoglicosdeos (EMAs), Beta-lactamases de espectro estendido (ESBLs) e Mecanismos Plasmidiais de Resistncia a Quinolonas (PMQRs) em cepas de K. pneumoniae, K. ozaenae e E. coli isoladas de amostras de gua de rios afluentes da Baa de Guanabara e de materiais clnicos de origem hospitalar, alm de avaliar o "status sanitrio" dos corpos aquticos abordados no tocante contaminao fecal recente e indicaes de contaminao hospitalar e por outros ambientes de alta seletividade. As cepas de materiais clnicos foram selecionadas entre Maio e Julho de 2010, a partir da semeadura em meio de cultura contendo 8g/mL de gentamicina. As amostras de gua foram coletadas em Abril e em Julho de 2009. Realizamos testes de colimetria, empregando para tal, a metodologia convencional e outra, na qual adicionamos 32g/mL de cefalotina e 8g/mL de gentamicina aos caldos Lactosado e Escherichia coli (caldo EC), a fim de detectar e quantificar coliformes resistentes. Para o isolamento das cepas empregamos meios de cultura contendo 32g/mL de cefalotina e 8g/mL de gentamicina. As cepas foram identificadas e submetidas a testes de susceptibilidade aos antimicrobianos (TSA), testes presuntivos para presena de ESBLs, extrao de DNA plasmidial e ensaios de Reao em Cadeia de Polimerase (PCR) para a deteco dos genes. A utilizao de agentes antimicrobianos nos testes de colimetria nos permitiu detectar a presena e quantificar coliformes totais e fecais resistentes nas amostras de gua analisadas nos diferentes pontos. O TSA das cepas isoladas de amostras de gua exibiu perfis de multirresistncia, compatveis com o de bactrias de origem hospitalar, semelhante ao encontrado nas cepas isoladas de materiais clnicos. Todas as cepas isoladas de amostras de gua e 90% das cepas de materiais clnicos apresentaram pelo menos uma banda plasmidial. Os ensaios de PCR evidenciaram a presena de produtos de amplificao para EMAs, ESBLs e PMQRs, sendo que 7,4% das cepas de amostras de gua e 20% das cepas de materiais clnicos apresentaram produtos de amplificao para as trs classes de antimicrobianos. A realizao de testes de colimetria empregando antimicrobianos, como gentamicina e cefalotina, pode ser uma ferramenta adicional importante ao teste convencional, quando o interesse for, o monitoramento e a preveno de contaminao ambiental, especialmente associada a microrganismos carreando genes de resistncia. O uso criterioso de antimicrobianos em atividades de cunho hospitalar e veterinrio e medidas no sentido de preveno de lanamento de esgoto e/ou tratamento dos efluentes, so fundamentais para o controle da disseminao de elementos genticos de resistncia transferveis entre os microrganismos. A deteco e identificao de microrganismos apresentando elementos de resistncia em ambiente extra-hospitalar como em gua e solo, em particular, o emprego de testes de colimetria empregando antimicrobianos, se faz necessria, como forma de preveno e controle de disseminao destes microrganismos com potencial de causar infeces em humanos e outros animais que eventualmente entram em contato com estes ambientes.
Resumo:
Aeromonas spp. so bastonetes Gram negativos amplamente distribudos nos ambientes aquticos, com relatos de isolamento em gua de abastecimento pblico e alimentos. Este micro-organismo possui potencial de causar doenas intestinais e extraintestinais cuja patogenicidade est associada a sua virulncia multifatorial. Diversos determinantes de virulncia de Aeromonas j foram identificados, incluindo sistemas de secreo de protenas. O sistema de secreo tipo VI (SST6) o mais recente sistema de secreo de protenas identificado em bactrias cuja presena em estirpes no gnero Aeromonas pode implicar atividades de citotoxicidade para o hospedeiro, pois esse sistema capaz de injetar molculas efetoras dentro da clula, interferindo diretamente nos processos celulares. A fim de determinar a presena e analisar a distribuio dos genes hcp e vgrG codificadores das protenas efetoras do SST6 em Aeromonas spp. o presente estudo examinou 119 cepas isoladas de diversas origens pela tcnica da PCR aps o desenho de oligonucleotdeos iniciadores especficos. Objetivamos ainda analisar a variabilidade gentica interespecfica dos genes hcp e vgrG a partir de dados de sequenciamento. Os resultados obtidos indicaram a distribuio dos genes vgrG e hcp em 46% das cepas de Aeromonas hydrophila e Aeromonas caviae de diferentes origens. Entre as cepas de A. hydrophila a maior frequncia foi observada nas cepas isoladas de humanos, onde todas foram positivas para os iniciadores que amplificaram um produto de 541 pb do gene vgrG e 418 pb do gene hcp. Entre as cepas de A. caviae, a incidncia de genes vgrG e hcp foi mais elevada nas cepas isoladas de alface (60%) e peixes (50%). As cepas analisadas de origem ambiental apresentaram ndice total de 36% de positividade, apresentando frequncia de 60% e 22% em A. hydrophila e A. caviae, respectivamente. Os dados obtidos da anlise de cepas de origem alimentar mostraram a presena dos genes vgrG e hcp em 67% (A. hydrophila) e 60% (A. caviae) das cepas isoladas de folhas de alface. Nas cepas isoladas de queijo os genes foram encontrados em 67% e 12,5% das cepas de A. hydrophila e de A. caviae, respectivamente. O alinhamento mltiplo entre as sequncias dos segmentos dos genes hcp e vgrG obtidas no sequenciamento indicou grau de identidade nucleotdica de 75 a 100% entre as sequncias de hcp e 80 a 100% entre as sequncias de vgrG. Em concluso, nossos resultados indicaram que os iniciadores desenhados foram capazes de detectar suas sequncias alvo em cepas de A. caviae e outras espcies de Aeromonas, sugerindo a existncia de homologia entre os genes nas diferentes espcies, confirmada aps sequenciamento de DNA. Os dados indicaram que esses genes esto distribudos em vrias espcies de Aeromonas e em cepas isoladas de diversas fontes. Ressaltamos a prevalncia de cepas de A. hydrophila PCR-positivas em isolados clnicos, sugerindo a participao do SST6 no complexo universo da virulncia multifatorial que permeia esse micro-organismo
Resumo:
Estima-se que a prevalncia global da populao mundial com hepatite C de 3%. Pouco se sabe sobre a resposta ao tratamento com respeito resistncia viral. Algumas mutaes no fragmento de 109 aminocidos da NS5B so associadas com resistncia ao interferon (IFN) e ribavirina (RBV). Estudos moleculares e clnicos identificaram fatores associados com o hospedeiro e vrus relacionados associada com a resposta ao tratamento, tal como o gene que codifica a IL-28B. Este estudo foi dividido em duas fases, cujos objetivos foram caracterizar a frequncia de mutaes que conferem resistncia ao HCV e avaliar a relevncia das mutaes em pacientes Respondedores (R) ou No Respondedores (NR) ao tratamento e caracterizar geneticamente as populaes sobre polimorfismos genticos nos SNPs da IL-28B em relao ao prognstico da resposta ao tratamento. As amostras dos pacientes foram submetidas a testes de genotipagem e carga viral. As sequncias geradas foram comparadas no BLAST e no banco de dados Los Alamos HCV. Realizamos o alinhamento das sequncias homlogas e as mutaes identificadas. Com base no gentipo e carga viral determinamos a classificao dos pacientes de acordo com a resposta terapia. O DNA genmico foi isolado a partir de sangue perifrico para a realizao da tipagem de SNPs de IL-28B. A metodologia utilizada foi de PCR em tempo real utilizando sondas TaqMan SNP especfico. A anlise dos dados foi realizada utilizando GraphPad Prism com qui-quadrado, risco relativo (RR), Odds Ratio (OR) e intervalo de confiana de 95%, com um nvel de significncia de P <0,05. Foi encontrado na primeira fase deste estudo uma taxa significativa mutaes associadas ao tratamento nas amostras estudadas. A prevalncia de mutaes associadas resistncia ao IFN e RBV bem como a novos medicamentos antivirais localizados no fragmento de 109 aminocidos da NS5B foi examinado em 69 indivduos infectados nave no Rio de Janeiro, Brasil. Na segunda fase, as mutaes foram clinicamente relevantes. Desde ento, procuramos observar as diferenas entre melhor ou pior prognstico de acordo com a imunogentica que mostrou diferenciao entre os grupos R e NR ao tratamento em relao ao prognstico da resposta teraputica. Quando as diferenas entre as sequncias da NS5B e a resposta ao tratamento foram consideradas verificou-se que associada a mutao R254K, estava a C316N que poderia conduzir a uma no resposta terapia no gentipo 1b. Os nossos dados tambm suportaram forte associao de IL-28B rs12979860, com elevada probabilidade de resposta terapia de IFN + RBV. Nossos dados evidenciam a presena de pacientes virgens de tratamento que abrigam mutaes de resistncia previamente descritas na literatura. A anlise dos fatores preditores de resposta virolgica mostrou que a predio de boa resposta ou no ao tratamento e ainda da progresso da doena dependente de uma importante interao entre a gentica viral e a do hospedeiro. Fato este importante para que no momento de avaliao de diagnstico e conduta teraputica, o mdico possa tomar medidas apropriadas para o tratamento de cada paciente individualmente independentemente do gentipo do HCV em questo.
Resumo:
Em diversos estados do Brasil, foram relatadas epidemias de infeces causadas por micobactrias de crescimento rpido (MCR) desde o ano 2000. A maioria dos casos foi principalmente associada ao clone BRA100 de Mycobacterium massiliense, recentemente renomeada para Mycobacterium abscessus subsp. bolletii, isolado de pacientes submetidos a procedimentos invasivos nos quais os instrumentos mdicos no foram adequadamente esterilizados e/ou desinfetados. Sendo as quinolonas uma opo no tratamento de infeces por MCR e sugerida para esquemas teraputicos para esses surtos, foram avaliadas nesse trabalho as atividades in vitro de quatro geraes de quinolonas para cepas clinicas e de referncia de MCR atravs da microdiluio em caldo. Tambm foram analisadas as sequncias peptdicas das regies determinantes da resistncia a quinolonas (RDRQ) das subunidades A e B da DNA gyrase (GyrA e GyrB) aps o seqenciamento de DNA seguido pela traduo da sequncia de aminocidos. Cinquenta e quatro cepas de M. abscessus subsp bolletii, incluindo o clone BRA100, isoladas em diferentes estados do Brasil, e 19 cepas de referncia de MCR foram caracterizadas. Todas as 54 cepas clnicas de M. abscessus subsp. bolletii foram resistentes a todas as geraes de quinolonas e mostraram o mesmo resduo nas RDRQ, incluindo Ala-83 em GyrA, Arg-447 e Asp-464 em GyrB, descritos como sendo responsveis por gerar um baixo nvel de resistncia a quinolonas em micobactrias. Porm, outras espcies de MCR apresentaram diferentes susceptibilidade e padres de mutaes contrrios aos classicamente j definidos, sugerindo que outros mecanismos de resistncia, diferentes de mutaes em gyrA e gyrB tambm possam estar envolvidos na alta resistncia a quinolonas.
Resumo:
Os recifes de corais so ecossistemas diversos com alta densidade de biodiversidade, o que leva a intensa competio entre as espcies. Estas espcies podem produzir substncias desconhecidas, muitas com valor farmacolgico. Chromonephthea braziliensis um coral mole invasor, originrio do Oceano Indo-Pacfico, que foi possivelmente transportado por plataformas de petrleo e cuja presena uma ameaa para a biodiversidade da regio de Arraial do Cabo (RJ). Esta espcie produz metablitos secundrios que so responsveis pela induo de danos para o ecossistema local. A finalidade deste estudo a busca de novas substncias para quimioterapia geral com base na estrutura de compostos bioativos. Extratos desse coral foram preparados a partir de colnias liofilizadas (solventes: hexano, diclorometano, acetato de etila e metanol). Realizaram-se anlises qumicas para a caracterizao dos extratos e avaliaram-se as atividades: mutagnicas e citotxicas, usando o ensaio de mutao reversa bacteriana (Salmonella/microssoma) com as linhagens TA97, TA98, TA100 e TA102; genotxicas, utilizando anlise da quebra do DNA e formao de microncleos na linhagem RAW 264,7 de macrfagos e; txicas para nuplios de microcrustceos Artemia salina. Observou-se citotoxicidade, na presena de S9 mix, dos extratos diclorometano para a linhagem TA102 na concentrao de 20 g/100 L/placa e metanol para a TA97 com 5 e 20 g/100 L/placa. Os extratos diclorometano, acetato de etila e metanol apresentaram genotoxicidade no DNA plasmidial em concentraes elevadas (250 g/mL), mas nenhum dano ao DNA foi observado no ensaio de microncleo. Todos os extratos foram txicos para os nuplios de microcrustceos em pelo menos uma das concentraes usadas (0,01 1000 g/mL), e a LC50 pode ser determinada apenas para os extratos hexano, diclorometano e acetato de etila.
Resumo:
Crassostrea (Sacco, 1897) o gnero mais importante do mundo de ostras de cultivo e consiste de 34 espcies distribudas pelas regies tropicais e temperadas do globo. C. gasar e C. rhizophorae so as duas espcies nativas que esto distribudas ao longo de toda a costa do Brasil at o Caribe. C. gasar tambm ocorre na costa da Africa. Ainda que sua distribuio seja extensa e com disponibilidade abundante, o cultivo de ostras nativas no Brasil ainda incipiente e a delimitao correta dos estoques mantm-se incerta. O sucesso do desenvolvimento da malacocultura, que recomendada internacionalmente como forma sustentvel de aquicultura, depende da resoluo desses problemas. Assim, com o objetivo de determinar geneticamente seus estoques no Atlntico como tambm estimar sua histria demogrfica, dois diferentes marcadores moleculares foram empregados: sequncias de DNA da regio controle mitocondrial e loci de microssatlites espcie-especifcos, desenvolvidos no presente estudo. Foram sequenciados fragmentos da regio controle de um total de 930 indivduos de C. gasar e C. rhizophorae coletados em 32 localidades que incluram o Caribe, a Guiana Francesa, a costa brasileira e a frica. Tambm foram realizadas genotipagens de 1178 indivduos, e ambas as espcies, com 9 e 11 loci de microssatlites para C. gasar e C. rhizophorae, respectivamente. Os dados genticos foram analisados atravs de diferentes abordagens (ndices de estruturao (FST) e de (Jost D), anlise molecular de varincia (AMOVA), anlise espacial molecular de varincia (SAMOVA), Bayesian Skyline Plots (BSP), anlise fatorial de correspondncia (AFC) e anlise de atribuio Bayesiana (STRUCTURE)). Os resultados indicaram um padro geral de estruturao, onde dois diferentes estoques foram detectados para ambas as espcies: grupos do norte e do sul, onde o Rio de Janeiro seria a regio limitante entre os dois estoques. Os maiores valores dos ndices de estruturao foram encontrados para C. gasar, indicando que esta espcie estaria mais estruturada do que C. rhizophorae. As anlises demogrficas indicaram uma provvel expanso das populaes durante o ultimo perodo glacial e uma possvel origem americana das populaes africanas. Todos os resultados sugeriram a existncia de uma barreira geogrfica prxima ao Rio de Janeiro, que poderia ser a cadeia de Vitria-Trindade e o fenmeno de ressurgncia que ocorre em Cabo Frio (RJ). Esses resultados sero de grande utilidade para estabelecer critrios para seleo de sementes para cultivo ao longo da costa do Brasil que permitir o manejo adequado dos estoques ostrecolas, prevenindo seu desaparecimento como j ocorrido em outros recifes no mundo.
Resumo:
Plasmdios so DNA extracromossmicos, com capacidade de se duplicarem de forma independente das clulas que os albergam, e so responsveis pela expresso de uma variedade de caractersticas, como fatores de virulncia. O material do presente estudo se constituiu da cepa receptora E. coli K12-R23, e de cepas de Klebsiella pneumoniae e de Escherichia coli, doadoras de plasmdios R e transconjugantes. O objetivo do presente estudo foi analisar os fentipos conferidos em cepas transconjugantes de ambas bactrias pela transferncia de plasmdios R de cepas doadoras para a receptora. Para a anlise dos fentipos, utilizaram-se, nas cepas do estudo, algumas variveis: sensibilidade a antimicrobianos e a ERO, aderncia a clulas HEp-2, e formao de slime e de biofilme. O marcador da presena de plasmdio, neste trabalho, foi a presena de resistnca gentamicina nas cepas doadoras. Os resultados indicaram que houve transferncia de plasmdio, pois as cepas transconjugantes de K. pneumoniae e de E. coli apesentaram este marcador (foram resistentes gentamicina); alm disso, as cepas transconjugantes mostraram perfis distintos da receptora em relao sensibilidade aos antimicrobianos, s ERO, aos padres de aderncia s clulas HEp-2 e formao de slime, apesar de a formao de biofilme nestas cepas no ter sofrido modificaes. Observou-se, contudo, que vrias caractersticas das cepas doadoras no foram encontradas nas cepas transconjugantes de E. coli e de K. pneumoniae.
Resumo:
A leishmaniose visceral (LV) ou calazar uma doena endmica, crnica, grave e de alta letalidade se no tratada. Os estudos apontam a protena Lectina Ligante de Manose (MBL), codificada pelo gene MBL2, como uma pea-chave na imunidade inata, dada a sua funo no reconhecimento microbiano, na eliminao, inflamao e morte celular. Neste trabalho realizamos um estudo do tipo caso-controle que teve como objetivo investigar a associao entre variantes no gene MBL2 e a suscetibilidade LV em indivduos residentes em reas endmicas da Ilha de So Lus-MA. A amostra foi constituda por 322 indivduos, sendo 161 casos com LV, no aparentados, de ambos os sexos, residentes em reas endmicas da doena na Ilha de So Lus e 161 controles saudveis, no infectados e no aparentados da mesma regio. A identificao dos casos de LV se deu por meio do contato constante com os principais hospitais e ambulatrios de referncia para a doena na cidade. Tambm foram feitas buscas de pacientes com LV em ambiente domiciliar, a partir de registros da FUNASA-MA. A anlise molecular consistiu na genotipagem de 6 variantes localizadas na regio promotora [posies -550 (C>G), -221(G>C), +4(C>T)] e codificadora [cdons 52 (C>T), 54 (G>A) e 57 (G>A)] do gene MBL2, atravs da reao em cadeia da polimerase e sequenciamento automtico. A dosagem da protena MBL no soro foi realizada pelo teste de ELISA. Verificamos que os fentipos MBL dependem do conjunto de alelos presentes no gene MBL2, sendo ntido o efeito que as variantes defectivas causam nos nveis da protena. No encontramos diferena significativa entre casos e controles em relao distribuio dos gentipos MBL2 e dos nveis sricos de MBL. As frequncias allicas das variantes exnicas na amostra total mostram que o alelo A o mais comum (74,8%) e que os alelos defectivos (B, C e D) se encontram principalmente em heterozigose (36,6%), o que refora a ideia de que alelos MBL2 defectivos so mantidos na populao por conferirem vantagem seletiva aos heterozigotos. Em relao aos 3 principais polimorfismos existentes na regio promotora, verificamos ser a variante -221G (Y) a mais frequente (88%) seguida de +4C (P) (73%) e de -550C (L) (67%). Identificamos oito hapltipos em MBL2 num total de 644 cromossomos avaliados, em 30 combinaes diferentes, sendo HYPA e LYQA os mais frequentes e HYPD e HYPB os mais raros. Todos os portadores de combinaes de hapltipos homozigotos para alelos defectivos apresentaram nveis sricos de MBL indetectveis. Os gentipos LYQA/LYQA e HYPA/HYPA apresentaram as maiores concentraes mdias de MBL no soro. A combinao entre SNPs no xon 1 e na regio promotora do gene MBL2 resulta em grande variao nas concentraes de MBL em indivduos saudveis. Consideramos que o conjunto de dados gerados uma contribuio valiosa que poder ser expandida para outros cenrios.
