354 resultados para Óxido nítrico sintase Teses
Resumo:
O aumento de doenas cardiovasculares possui como fator primordial e, mais comum, o aumento da presso arterial (PA). Esta, pode gerar complicaes em outros rgos e acarretar diversas patologias, podendo levar a morte. A hipertenso uma sndrome multifatorial, cuja maior incidncia ocorre em indivduos obesos, sedentrios e consumidores em excesso de bebidas alcolicas e sal. O corpo carotdeo (CC) um rgo quimiorreceptor localizado na bifurcao da artria cartida, formado de estruturas bsicas chamadas glomus. Cada glomus carotdeo constitudo de clulas tipo 1 envoltas por clulas tipo 2 ou sustentaculares. Este trabalho teve como objetivo analisar as alteraes morfofuncionais que ocorrem no CC, causada por hipertenso arterial induzida pelo L-NAME, um inibidor da enzima xido nítrico sintase. Para isso, o estudo utilizou 20 ratos Wistar divididos em dois grupos: controle (C) e L-NAME (LN). Aps a administrao de 40mg/kg/dia de L-NAME por 45 dias, o CC foi coletado. Observou-se aumento significativo da presso arterial a partir da segunda semana de administrao de L-NAME. Anlise quantitativa mostrou uma reduo no nmero de ncleos do glomus carotdeo e o aumento na rea total do rgo no grupo LN. No foi encontrado diferena significativa no nmero de ncleos totais do corpo carotdeo entre os grupos. Na anlise morfolgica do grupo LN, observamos a formao de vacolos nas clulas tipo 1 do glomus, bem como uma reduo do nmero total de ncleos das clulas de cada glomus carotdeo. A anlise qualitativa sugeriu um aumento no nmero de fibras colgenas e fibras do sistema elstico na matriz extracelular e grnulos no grupo LN. Imunomarcaes com anticorpo anti VEGF e NF-kB e nNOS mostram-se aumentadas e dispersas por todo CC no grupo LN em relao ao grupo C. Alm disso, marcaes para Substncia-P tambm foram observadas em maior quantidade nas clulas tipo 1 do grupo LN. Quanto marcao para PGP 9.5, houve a reduo desta marcao caracterizada dentro do glomus carotdeo grupo LN comparado ao grupo C. O estudo sugere que o corpo carotdeo, em resposta hipertenso induzida pela inibio da enzima xido nítrico sintase, gera mudanas morfofisiolgicas semelhantes as encontradas em hipxia.
Resumo:
A obesidade atinge propores epidmicas em pases industrializados e est relacionada a uma srie de doenas metablicas e circulatrias. Nesse contexto, a atividade fsica, tratamento no farmacolgico da obesidade, acessvel a diversas populaes e est relacionada com a reduo do risco cardiovasvascular mesmo. O objetivo deste trabalho foi avaliar, aps mudana ou no da dieta, associao ou no a um programa de treinamento aerbico (PTA) durante 8 semanas, a possvel reversibilidade dos danos causados por uma dieta hiperlipdica por 12 semanas. Para tal, 120 hamsters machos da espcie Mesocricetus auratus, com massa corporal de 60 g, foram distribudos em quatro grupos, cada um subdividido em trs subgrupos, com dez animais para diferentes anlises. Os grupos Obeso Controle (OBC) e Obeso Exercitado (OBEX) receberam a rao hiperlipdica por 20 semanas, com adio do PTA ao grupo OBEX nas ltimas 8 semanas. Os Obeso Rao Padro (OBRP) e Obeso Rao Padro/Exerccio (OBRP/EX) tiveram a rao modificada para comercial padro e adio do PTA ao grupo OBRP/EX aps as 12 semanas iniciais. Para as anlises microcirculatrias, a bolsa da bochecha foi usada para determinao do nmero mximo de extravasamentos induzidos por 30 min de isquemia seguida de reperfuso e da reatividade microvascular aps a aplicao tpica de acetilcolina e nitroprussiato de sdio. No sangue coletado foi avaliado o perfil lipdico, glicemias quinzenais e leptina. As expresses de eNOS e iNOS foram determinadas na aorta por imunoblotting e a composio corporal avaliada nos tecidos adiposos visceral, urogenital e retroperitoneal, retirados no dia do experimento. Os resultados foram analisados com os mtodos o teste estatstico de anlise de varincia (One Way ANOVA - Teste de Kruskal-Wallis), seguido pelo ps-teste de Dunn. Resultados mostram que a modificao diettica, associada ou no ao PTA, reduziu significativamente a massa corporal (p<0,0001), comprimento naso-anal (p=0,0011) e tecido adiposo (visceral [p<0,0001], urogenital [p=0.0004] e retroperitoneal [p= 0,0083]). Nas anlises sanguneas no foram encontradas diferenas com relao ao perfil lipdico e glicemia, j na leptina houve uma reduo significativa (p=0,0039). A anlise da reatividade microvascular mostrou melhora significativa na vasodilatao endotlio-dependente nos grupos submetidos modificao diettica associada ou no ao PTA. Nas medidas de permeabilidade a macromolculas houve reduo significativa no nmero de extravasamentos nos grupos submetidos modificao diettica associada ou no ao PTA, (5 min [p= 0,0207] e 10 min [p= 0,0057]). Houve um aumento na expresso de eNOS nos grupos submetidos modificao diettica associada ou no ao PTA, em comparao ao grupo OBC (p=0,0352). Os resultados mostraram que a modificao diettica, associada ao protocolo de treinamento aerbico melhora a vasodilatao endotlio-dependente, aumenta a expresso da xido nítrico sintase endotelial e reduz o nmero de extravasamentos induzidos por isquemia e reperfuso, mesmo sem melhoras nos marcadores bioqumicos tradicionais como glicemia e perfil lipdico.
Resumo:
A diminuio do aporte de oxignio e nutrientes na vida perinatal resulta em danos, como astrogliose, morte de neurnios e de clulas proliferativas. Dficits cognitivos podem estar relacionados a danos no hipocampo. Neste trabalho avaliamos a citoarquitetura do giro dentado (DG) durante o desenvolvimento e a memria de ratos submetidos HI. Para tal, utilizamos a tcnica de imunohistoqumica para marcador de proliferao celular (KI67), neurnio jovem (DCX), de astrcitos (GFAP) e de xido nítrico sintase neuronal (NOSn). Para avaliar a memria de curta e de longa durao foi utilizado o teste de reconhecimento de objetos (RO). Ratas Wistar grvidas em E18 foram anestesiadas (tribromoetanol) e as quatro artrias uterinas foram ocludas com grampos de aneurisma (Grupo HI). Aps 45 minutos, os grampos foram removidos e foi feita a sutura por planos anatmicos. Os animais do grupo controle (SHAM) sofreram o mesmo procedimento, excetuando a ocluso das artrias. Os animais nasceram a termo. Animais com idades de 7 a 90 dias ps-natal (P7 a P90), foram anestesiados e perfundido-fixados com paraformaldedo a 4%, e os encfalos submetidos ao processamento histolgico. Cortes coronais do hipocampo (20m) foram submetidos imunohistoqumica para KI67, DCX, GFAP e NOSn. Animais P90 foram submetidos ao RO. Os procedimentos foram aprovados pelo comit de tica (CEA/019/2010). Observamos menor imunomarcao para KI67 no giro dentado de animais HI em P7. Para a marcao de DCX nesta idade no foi observada diferena entre os grupos. Animais HI em P15, P20 e P45 tiveram menor imunomarcao para DCX e Ki67 na camada granular. Animais P90 de ambos os grupos no apresentaram marcao para KI67 e DCX. Vimos aumento da imunomarcao para GFAP nos animais HI em todas as idades. A imunomarcao para NOSn nos animais HI foi menor em todas as idades. O maior nmero de clulas NOSn positivas foi visto em animais P7 em ambos os grupos na camada polimrfica. Em P15, animais HI apresentam clulas NOSn+ em todo o DG. Em P30 animais HI apresentam clulas NOSn+ nas camadas polimrfica e sub-granular. Animais adultos (P90) de ambos os grupos apresentam clulas NOSn positivas apenas nas camadas granular e sub-granular. Embora animais HI P90 no apresentaram dficits de memria, estes apresentaram menor tempo de explorao do objeto. Comportamento correspondente a dficits de ateno em humanos. Nossos resultados sugerem que HI perinatal diminui a populao de clulas proliferativas, de neurnios jovens, de neurnios NOSn+, alm de causar astrogliose e possivelmente dficits de ateno. O modelo demonstrou ser til para a compreenso dos mecanismos celulares das leses hipxico-isqumicas e pode ser usado para testar estratgias teraputicas.
Resumo:
A obesidade um distrbio metablico de etiologia multifatorial e elevada prevalncia no Brasil, que pode ser definida por um ndice de massa corporal (peso em quilogramas dividido pela altura em metros ao quadrado) maior ou igual a 30 kg/m2, e que est associada de forma independente a um elevado risco de morbidade e mortalidade cardiovascular devido aos eventos aterotrombticos. O xido nítrico (NO), uma pequena molcula gasosa, produzido atravs da converso do aminocido catinico L-arginina em L-citrulina e NO em uma reao catalisada por uma famlia de enzimas denominadas NO-sintases (NOS), e funciona como um protetor cardiovascular modulando por exemplo o relaxamento do msculo liso vascular e a funo plaquetria. O objetivo desta tese foi avaliar a via L-arginina-NO, bem como investigar a funo plaquetria, o estresse oxidativo, e a atividade da arginase em pacientes com obesidade. O transporte de L-arginina, a produo de guanosina monofosfato cclica (GMPc), a atividade e a expresso das isoformas da NOS (iNOS e eNOS), a atividade da arginase, o estresse oxidativo (produo de espcies reativas de oxignio EROs; atividade da superxido dismutase SOD; e atividade da catalase), bem como a funo plaquetria foram medidos nas plaquetas dos pacientes com obesidade. Nas hemcias, foram medidos o transporte de L-arginina e a atividade da NOS e da arginase. Os nveis de aminocidos e de marcadores inflamatrios (fibrinognio e protena C reativa) tambm foram medidos sistemicamente. Os resultados demonstram que o influxo de L-arginina via sistema y+L, a atividade da NOS e a produo de GMPc esto diminudos nas plaquetas dos pacientes obesos em relao aos controles saudveis, enquanto que no houve diferena na atividade da arginase. Alm disso, a expresso das isoformas da NOS bem como a agregao plaquetria em plaquetas de pacientes com obesidade mostrou-se aumentada em relao aos controles. Nas hemcias destes pacientes, observou-se elevado influxo de L-arginina via sistema y+ e y+L e atividade da NOS, e nenhuma diferena na funo da arginase. A concentrao plasmtica de L-arginina no foi afetada pela obesidade, mas j os marcadores inflamatrios estavam significativamente aumentados. A produo de EROs e a atividade da catalase nas plaquetas no estava alterada em pacientes com obesidade, enquanto que a atividade da SOD mostrou-se diminuida. Assim, apesar do aumento da produo de NO pelas hemcias, possvel que a baixa produo plaquetria de NO, alm do estado inflamatrio e um possvel estresse oxidativo, estejam contribuindo para a elevada atividade plaquetria observada na obesidade. As descobertas aqui apresentadas contribuem para uma melhor compreenso dos eventos cardiovasculares presentes na obesidade.
Resumo:
Os mecanismos envolvidos na ao vasodilatadora da clonidina ainda no foram completamente elucidados. Investigamos os mecanismos potencialmente envolvidos utilizando o leito arterial mesentrico (LAM) isolado de rato. No LAM pr-contrado, clonidina (10-300 pmol) induz relaxamento dose-dependente, que foi significativamente inibido pela remoo do endotlio (cido deoxiclico) e pelos inibidores do receptor α2-adrenrgico, ioimbina (1-3 μM) e rauwolscina (1 μM). A vasodilatao endotlio-dependente induzida pela clonidina foi reduzida pelo inibidor da oxido nítrico sintase (NOS), L-NAME (0.3 mM) e pelo inibidor da guanilato ciclase, ODQ (10 μM), mas no foi alterada pela indometacina (3-10 μM). Na presena do L-NAME, o efeito vasodilatador da clonidina foi adicionalmente reduzido pela soluo de potssio elevado (45 mM). Os inibidores dos canais de K<SUP>+</SUP> dependentes de clcio (K<SUB>ca</SUB>), caribdotoxina (ChTx; 0.1 μM) e apamina (0.1 μM) tambm reduziram a vasodilatao induzida pela clonidina, contudo, esta resposta no foi adicionalmente inibida na presena de L-NAME, como foi observado para acetilcolina (10 pmol). Na presena do bloqueador dos canais de K<SUP>+</SUP> dependentes de ATP, glibenclamida (10 μM), o efeito inibitrio da associao ChTx, apamina e L-NAME foi aumentado. Em contraste, a vasodilatao induzida pela clonidina no foi afetada pelo inibidor dos canais de potssio dependentes de voltagem (K<SUB>v</SUB>), 4-aminopiridina (4-AP, 1 mM). Concluindo, nossos resultados demonstram que clonidina ativa receptores α2-adrenrgicos no LAM e que a vasodilatao dependente de endotlio mediada pela ativao da via NO-GMPc e tambm envolve a ativao de canais de KC<SUB>a e K<SUB>ATP</SUB>. </SUB>Um fator hiperpolarizante derivado do endotlio (EDHF) tambm parece participar do efeito vasodilatador da clonidina.
Resumo:
O xido nítrico (NO) constitui um dos mais importantes mediadores intra e extracelulares e tem sido descrita sua participao tanto em processos biolgicos como patolgicos. Nosso objetivo foi verificar se o aumento ou a diminuio do xido nítrico apresenta um efeito benfico na proteo do tecido pulmonar no enfisema pulmonar induzido por fumaa de cigarro em camundongos. Para tanto, utilizamos o L-NAME (inibidor do NO), a L-arginina (substrato para a formao do NO) e os comparamos com a N-acetilcistena (utilizada no tratamento da DPOC). Foram utilizados 65 camundongos C57BL/6 machos. Cinquenta animais foram divididos em grupos controle, fumaa de cigarro (FC), fumaa de cigarro + L-NAME (FC+LN), fumaa de cigarro + L-arginina (FC+LA), fumaa de cigarro + N-acetilcistena (FC+NAC) (n=10, por grupo). Durante sessenta dias 40 animais foram expostos a 12 cigarros comerciais por dia, 3 vezes ao dia. Os grupos controle e FC foram submetidos gavagens orogstricas com o veculo. Os grupos FC+LN, FC+LA, FC+NAC receberam gavagens dirias de L-NAME (60 mg/kg), L-arginina (120 mg/kg) ou NAC (200 mg/kg) respectivamente. Quinze animais (n = 5, por grupo) foram expostos ao ar ambiente e tratados apenas com L-NAME, L-arginina e NAC. Realizamos a anlise do perfil das clulas do lavado broncoalveolar aps o sacrifcio. O pulmo direito foi removido para as anlises histolgicas do alargamento dos espaos areos determinado pela medida do dimetro alveolar mdio (Lm) e da densidade de superfcie (Sv) dos septos alveolares. Os pulmes esquerdos foram removidos e homogeneizados para a as anlises da atividade enzimtica (SOD, CAT e MPO) e do sistema glutationa (GSH/GSSG), para a anlise dos valores de nitrito e da expresso de 4-HNE, MMP-12, NE, TIMP-1, TIMP-2. Nossos resultados apontam que o L-NAME tem uma ao voltada para a matriz extracelular (via protease-antiprotease), enquanto que a L-arginina possui uma ao voltada para os oxidantes, assim como a NAC. Porm a NAC atua aumentando os nveis de glutationa, o que interfere diretamente nos oxidantes (via oxidante-antioxidante), enquanto a L-arginina interfere aumentando o burden oxidativo concomitante a um aumento da velocidade de ao dos oxidantes o que aumenta as clulas inflamatrias, mas diminui seu tempo de ao permitindo uma maior proteo. Conclumos que tanto o favorecimento para a produo e liberao do NOatravs da administrao da L-arginina quanto a inibio do NOpela utilizao do L-NAME foi eficiente na proteo do pulmo, apesar de no terem alcanado um resultado to bom quanto a NAC.
Resumo:
A aplicao tpica do hidrogel Pluronic F-127 (poli(xido de etileno)99-poli(xido de propileno)65-poli(xido de etileno)99, PEO99-PPO65-PEO99) contendo um doador de xido nítrico, a S-nitrosoglutationa (GSNO) conhecida por exercer efeitos benficos no reparo tecidual cutneo. O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito da aplicao tpica do hidrogel Pulronic F-127 contendo um doador de xido nítrico no reparo tecidual de leses isqumicas. Ratos Wistar machos foram submetidos a duas leses incisionais paralelas no dorso, a pele foi separada do tecido subjacente, as incises foram suturadas e uma leso excisional foi feita entre elas para criar uma condio isqumica ao redor da leso. Os animais foram separados em grupo controle, que recebeu a aplicao apenas do hidrogel sem doador de xido nítrico e grupo tratado, que recebeu a aplicao do hidrogel contendo o doador de xido nítrico. Os animais foram tratados por 7 dias consecutivos com uma aplicao diria dos hidrogis. O grupo tratado apresentou taxas mais altas de contrao e re-epitelizao, menor quantidade de clulas inflamatrias, um aumento na densidade e organizao de fibras colgenas e uma diminuio na neovascularizao 14 dias aps a leso, comparado ao grupo controle. Esses resultados indicam que a aplicao tpica do gel doador de xido nítrico eficaz no tratamento de leses isqumicas em ratos, levando a uma melhora significativa na cicatrizao. Consequentemente, a aplicao tpica de um hidrogel contendo doador de xido nítrico poder ter, futuramente, potencial para o tratamento teraputico de lceras venosas e decorrentes de diabetes.
Resumo:
As leishmanioses esto entre as mais importantes endemias brasileiras e encontram-se entre as doenas mais negligenciadas no mundo. O arsenal teraputico disponvel restrito, txico, caro e em algumas situaes ineficazes, devido ao surgimento de cepas resistentes do parasito. No Brasil so registrados anualmente mais de 20 mil casos de leishmaniose tegumentar e a Leishmania braziliensis a principal espcie causadora das formas clnicas cutnea e mucosa. Portanto tornam-se importantes estudos que conduzam ao desenvolvimento de novas alternativas teraputicas. O objetivo do presente estudo foi avaliar a atividade da pterocarpanoquinona denominada LQB118 sobre Leishmania braziliensis in vitro e in vivo usando hamsters como modelo experimental. O efeito antiparasitrio foi avaliado sobre o crescimento in vitro das formas promastigotas e sobre amastigotas intracelulares em macrfagos peritoneais de camundongos. Para avaliar o modo ao in vitro foi investigada a induo de apoptose usando marcao por TUNEL e Anexina V-FITC. O efeito sobre a modulao da ativao de macrfagos murinos foi analisada pela dosagem de xido nítrico (reagente de Griess) e de citocinas IL-12, TNF-alfa e IL-10 (por ELISA) nos sobrenadantes de macrfagos. In vivo a atividade teraputica da LQB 118 foi estudada em grupos de hamsters infectados com L.braziliensis na pata, tratados com a LQB118 pelas vias intralesional (100M/3x/semana) ou oral (0,5mg/5x/semana) aps 7 dias de infeco durante oito semanas. A ao teraputica foi analisada atravs do tamanho da leso. A resposta imune foi avaliada durante o tratamento, pela resposta de hipersensibilidade tardia (DTH) ao antgeno total de L. braziliensis. A ao da LQB118 in vitro foi dose-dependente tanto na forma promastigota inibindo 45%, 64,7% e 99,95%, quanto nas amastigotas intracelulares 22%, 72% e 81% nas concentraes de 5M, 10M e 20M, respectivamente para ambas as formas evolutivas. A LQB118 foi capaz de induzir a externalizao de fosfatidilserina em promastigotas (18,57% das clulas incubadas por 24 h e em 25,79% de clulas tratadas por 48h) e tambm promoveu aumento da fluorescncia nas duas formas evolutivas da Leishmania quando comparadas aos controles, demonstrando a induo de fragmentao do DNA do parasito. Esta substncia tambm foi capaz de modular a resposta dos macrfagos infectados por 24 horas aumentando de forma dose-dependente a IL-12 e NO, mantendo constante TNF-α. In vivo, na stima semana de tratamento, observamos uma reduo significativa do tamanho das leses nos animais tratados com LQB 118 intralesional (p<0, 001) e no grupo tratado pela via oral (p<0,05) quando comparado com o controle. Estes resultados demonstram que a atividade anti-Leishmania da LQB118 direta sobre o parasito pela induo de morte por apoptose, apresentando tambm uma ao moduladora da resposta dos macrfagos contribuindo para ao leishmanicida, sem alterar a morfologia da clula hospedeira e que a LQB 118 apresenta uma atividade teraputica no modelo hamster e pode ser uma importante molcula para o desenvolvimento de um novo frmaco.
Resumo:
A Hipxia-Isqumica (HI) pr-natal caracterizada por uma reduo no aporte de oxignio e nutrientes para o feto durante o perodo gestacional, que pode acarretar, a longo prazo, em dificuldade de concentrao e aprendizagem, hiperatividade e dficit de memria. Esses prejuzos podem persistir ou se agravar at a idade adulta, levando ainda ao aparecimento de doenas como epilepsia e paralisia cerebral (PC). A privao de oxignio e nutrientes, assim como o estresse materno, anemia, eclmpsia e uso de drogas durante a gestao, podem causar estresse oxidativo durante os perodos crticos do desenvolvimento, e pode ser a principal razo para as mudanas que levam a programao fetal. O objetivo deste estudo foi relacionar a gerao de espcies reativas e a consequente formao de estresse oxidativo nos animais adultos, com as alteraes da biodisponibilidade do xido nítrico de forma sistmica, alm de mudanas nos comportamentos motor e de ansiedade, manuteno da memria e aprendizado. Para a hipxia, foi utilizado o modelo de clampeamento das artrias uterinas das ratas no 18 dia gestacional por 45 min, analisando os filhotes aps 90 dias de nascidos. Foram utilizados os testes Open Field e labirinto em cruz elevada para a anlise comportamental, e anlises das enzimas glutationa peroxidase (GPx), superxido desmutase (SOD) e catalase, alm de quantificao de nitritos, TBARs e carbonilao de protenas para avaliao de mecanismos oxidantes e antioxidantes. Os resultados demonstraram que o insulto durante a gestao pode acarretar em reduo na formao da enzima GPx, alm de maior concentrao de nitritos analisados nos soros dos animais hipoxiados quando comparados aos controles, contribuindo para o dano oxidativo. Tambm foi observada reduo na memria de habituao e comportamento motor, alm de elevado comportamento ansioso em animais hipoxiados, diferentemente de controles. Conclumos assim que a hipxia isqumica pr-natal pode alterar permanentemente o estado oxidativo dos animais, alm de atuar na formao do comportamento motor, memria de habituao e ansiedade. As descobertas aqui apresentadas contribuem para ampliar o entendimento acerca do evento de hipxia isqumica pr-natal, alm de prover ferramentas para o desenvolvimento de mecanismos protetores e preventivos aos possveis danos por ela causados.
Resumo:
Esse estudo buscou investigar o papel do estresse oxidativo e nitrosativo no enfisema pulmonar induzido por elastase. Foram utilizados camundongos machos C57BL/6 submetidos a dois modelos de induo do enfisema por elastase pancretica suna (PPE): intratraqueal (i.t.) e intranasal (i.n.). No modelo intratraqueal a PPE foi instilada nas doses de 0,05 U ou 0,5 U/camundongo para avaliao temporal do enfisema 7, 14 e 21 dias aps instilao de PPE. Em outra etapa, o papel da iNOS foi avaliado atravs da sua inibio farmacolgica por aminoguanidina (AMG) 1% na gua de beber ou pela sua excluso gentica em camundongos deficientes em iNOS que tiveram o enfisema induzido por 0,5 U PPE i.t. aps 21 dias. No modelo intranasal a dose de PPE foi 3 U/camundongo para avaliao temporal do enfisema (1, 7, 14 e 21 dias aps PPE). O papel do estresse oxidativo e nitrosativo foi avaliado com diferentes tratamentos antioxidantes na gua de beber: tempol, apocinina+alopurinol, n-acetilcistena, vitamina C+E, e aminoguanidina durante os 21 dias de induo do enfisema. Os grupos controles foram submetidos instilao de salina. Lavado broncoalveolar, imunoensaios, anlises bioqumicas de estresse oxidativo e ensaios morfomtricos foram realizados nos pulmes dos animais. O enfisema foi histologicamente alcanado em 21 dias aps 0,5 U PPE i.t., evidenciado pelo aumento do dimetro alveolar mdio Lm e da densidade de volume dos espaos alveolares - Vvair em comparao ao grupo controle. TNF-α foi aumentado em 7 e 14 dias aps 0,5 U PPE comparados ao controle, concomitante com a reduo de IL-10 nos mesmos perodos, comparados ao controle. O estresse oxidativo foi observado na fase inicial do enfisema, com aumento dos nveis de nitrito, TBARS e superxido dismutase no grupo 7 dias aps 0,5 U PPE (i.t.) quando comparados ao controle ao passo que no modelo intranasal as alteraes tpicas do estresse foram vistas no grupo 1 dia aps 3 U de PPE. Atividade da glutationa peroxidase foi aumentada em todos os grupos PPE (i.t.). A exposio 0,5 U PPE induziu o aumento da iNOS, eNOS e nitrotirosina, sendo revertido no grupo PPE+AMG. Os animais tratados com AMG 1% e os deficientes em iNOS tiveram o enfisema atenuado histologicamente, mantendo o Lm e o Vvair semelhantes ao grupo controle. Os grupos tratados com n-acetilcistena e aminoguanidina no modelo i.n. tiveram reduo do Lm quando comparados ao grupo PPE. Esses resultados sugerem que as vias de estresse oxidativo e nitrosativo so disparadas pela produo de xido nítrico via iNOS no enfisema pulmonar. A modulao da iNOS parece uma estratgia promissora no estabelecimento do enfisema pulmonar
Resumo:
Leishmanioses so um grupo de doenas com um largo espectro de manifestaes clnicas, as quais variam desde leses cutneas at o envolvimento visceral severo, podendo levar ao bito. A leishmaniose , ainda hoje, uma doena negligenciada, estando entre os agravos prioritrios do programa de pesquisa sobre doenas da pobreza da Organizao Mundial da Sade (OMS). Alm de no haver vacinas disponveis, a terapia baseada em medicamentos injetveis que causam srios efeitos colaterais, tornando o tratamento invivel para muitos pases endmicos. Drogas derivadas de metal representam um novo arsenal teraputico antimicrobiano e anti-cncer. Os inibidores de peptidase/agentes quelantes tais como 1,10-fenantrolina e seus derivados, no estado livre de metal ou como ligantes com metais de transio, interferem com a funo de vrios sistemas biolgicos. Em trabalhos anteriores, nosso grupo descreveu que o parasito L. braziliensis produziu molculas gp63 sensveis a 1,10-fenantrolina. No presente trabalho, demonstramos a distribuio celular da molcula gp63 em uma cepa virulenta de L. braziliensis por meio de anlises bioqumicas e imuno-histoqumica. Depois disso, relatamos os efeitos inibitrios de trs compostos derivados da 1,10-fenantrolina, 1,10-fenantrolina-5,6-diona (phendio), [Cu(phendio)2] e [Ag(phendio)2], nas atividades metalopeptidases celulares e extracelulares produzidas por promastigotas de L. braziliensis, bem como as suas aes sobre a viabilidade do parasita e na interao com as clulas de macrfagos murinos. As molculas gp63 foram detectadas em compartimentos de parasitos, incluindo membrana citoplasmatica e bolsa flagelar. O tratamento de promastigotas de L. braziliensis durante 1 hora com 1,10-fenantrolina e seus derivados resultou numa inibio significativa da viabilidade celular e mostrou um mecanismo de ao irreversvel. Estes inibidores de metalopeptidases induziram apoptose em promastigotas de L. braziliensis, demonstrada atravs da marcao com anexina/iodeto de propdio e ensaio TUNEL. O pr-tratamento de promastigotas com os inibidores de metalopeptidases induziram uma diminuio na expresso de molculas de superfcie gp63, assim como uma reduo significativa no ndice de associao com macrfagos. Em paralelo, macrfagos infectados com L. braziliensis e tratados com 1,10-fenantrolina e seus derivados promoveram uma potente reduo sobre o nmero de amastigotas intracelulares. O tratamento de macrfagos com 1,10-fenantrolina e seus derivados no induziram o aumento de xido nítrico. A ao combinatria sobre a capacidade de crescimento entre os compostos derivados da 1,10-fenantrolina e Glucantime, quando ambos foram utilizados em concentraces sub-inibidoras, tambm foi observada. In vivo os compostos derivados da 1,10-fenantrolina e seus drivados foram capazes de controlar o tamanho das leses a partir da terceira semana de tratamento em relao ao controle no tratado em hamsters infectados quando administrado por via intraperitoneal. Os animais tratados com os compostos apresentaram maior resposta intradrmica (DTH) aos antgenos de L. braziliensis. Coletivamente, a 1,10-fenantrolina e seus derivados metlicos apresentam uma nova perspectiva de estudos para o desenvolvimento de novos frmacos anti-L. braziliensis
Resumo:
A disfuno ertil (DE) tem alta prevalncia entre hipertensos e tem sido considerada marcador precoce de risco cardiovascular. A presena e gravidade da DE bem como a resposta clnica aos inibidores da fosfodiesterase tipo 5 (PDE5) parecem depender da biodisponibilidade do xido nítrico (NO) endotelial e da extenso da doena aterosclertica. O objetivo deste estudo foi avaliar a resposta clnica da vardenafila usada em dois regimes teraputicos em hipertensos com DE vasculognica e sem doena cardiovascular maior, correlacionando a gravidade da DE e a eficcia da vardenafila com dados antropomtricos, laboratoriais, escore de risco cardiovascular e parmetros vasculares funcionais e estruturais. A resposta clnica vardenafila nos dois regimes foi avaliada conforme o percentual de respostas positivas questo 3 do Perfil do Encontro Sexual (PES3). Os parmetros vasculares considerados foram a espessura mdio-intimal (EMI) da cartida comum, a dilatao mediada pelo fluxo (DMF) da artria braquial e a dilatao nitrato-mediada (DNM). Foram includos 100 homens hipertensos com idade entre 50 e 70 anos, sendo 74 portadores de DE vasculognica e 26 com funo ertil normal que serviram de grupo controle. Nos pacientes com DE, o ndice de massa corporal, relao cintura-quadril, EMI da cartida, nveis sricos de triglicerdeos, colesterol total e LDL foram significativamente maiores que no grupo controle. Aps o uso de vardenafila on demand (fase 1), os pacientes com mais de 50% de respostas positivas ao PES3 ou 50% de respostas afirmativas e um incremento de 6 pontos ou mais em relao ao ndice Internacional de Funo Ertil (IIEF-FE) basal e/ou resposta positiva a Questo de Avaliao Global (QAG), foram considerados respondedores. O escore do IIEF-FE basal se correlacionou negativamente com a EMI da cartida (r=-0,48, P<0,001) e com o escore de Framingham (r= -0,41, P<0,001) no grupo com DE. Houve forte correlao positiva entre a resposta clnica vardenafila com a DMF (r= 0,70, P<0,001), que no se observou entre o sub-grupo de diabticos. Os 35 pacientes considerados no-respondedores na fase 1 foram randomizados e, em desenho duplo-cego, receberam vardenafila ou placebo diariamente durante cinco semanas, podendo usar 10 mg de vardenafila uma hora antes da atividade sexual (fase2). Houve resposta clnica positiva em 38,8% dos que receberam a vardenafila na fase 2 e esta resposta se correlacionou com a frequncia sexual (r= 0,68, P<0,01) e com o escore de Framingham (r= -0,65, P<0,01), com a EMI da cartida (r= -0,61, P=0,01) e com o LDL-colesterol (r= -0,64, P<0,01). A vardenafila foi bem tolerada em ambos os regimes teraputicos. Conclumos que nessa amostra de hipertensos, a gravidade da DE foi relacionada a parmetros vasculares estruturais (EMI), enquanto a resposta clnica vardenafila on demand foi mais diretamente dependente da funo vascular momentnea (DMF). Houve benefcio na utilizao de vardenafila diariamente com o objetivo de resgatar a eficcia do inibidor quanto melhora do desempenho sexual. A falta de eficcia clnica ao inibidor da PDE5 em ambos os regimes teraputicos pode servir como marcador clnico que identifica homens hipertensos com um risco cardiovascular aumentado.
Resumo:
Hipertensos tm rarefao capilar e disfuno endotelial microcirculatria, tornando-se mais vulnerveis a leses em rgos-alvo. O estudo buscou avaliar o efeito de seis meses de tratamento farmacolgico sobre densidade capilar e reatividade microvascular a estmulos fisiolgicos e farmacolgicos em hipertensos de baixo risco cardiovascular. Secundariamente testou-se a existncia de diversidade nas respostas a diferentes estratgias anti-hipertensivas. Foram recrutados 44 pacientes, com 46,71,3 anos e 20 normotensos com 48,01,6 anos. Avaliaram-se dados antropomtricos e laboratoriais e dosaram-se no soro o fator de crescimento vascular endotelial (VEGF), receptor Flt-1 para VEGF e xido nítrico (NO). A contagem capilar foi por microscopia intravital, captando-se imagens da microcirculao no dorso da falange do dedo mdio e contando os capilares com programa especfico. Repetia-se o procedimento aps hiperemia reativa ps-oclusiva (HRPO) para avaliar o recrutamento capilar. A reatividade vascular foi testada por fluxometria Laser Doppler, iontoforese de acetilcolina (Ach), HRPO e hiperemia trmica local (HTL). Os pacientes foram distribudos aleatoriamente para dois grupos de tratamento: succinato de metoprolol titulado a 100 mg dirios ou olmesartana medoxomila titulada a 40 mg dirios, empregando-se, se necessrio, a hidroclorotiazida. Os controles seguiram o mesmo protocolo inicial e aps seis meses todos os testes foram repetidos nos hipertensos. As variveis clnicas e laboratoriais basais eram semelhantes em comparao aos controles e entre os dois grupos de tratamento. Aps seis meses, havia pequenas diferenas entre os grupos na relao cintura-quadril e HDL. A densidade capilar antes do tratamento era significativamente menor que no grupo controle (71,31,5 vs 80,61,8 cap/mm2 p<0,001 e HRPO 71,71,5 vs 79,52,6 cap/mm2 p<0,05) e, com o tratamento, aumentou para 75,41,1 cap/mm2 (p<0,01) no estado basal e para 76,81,1 cap/mm2 HRPO (p<0,05). reatividade vascular, a condutncia vascular cutnea (CVC) em unidades de perfuso (UP)/mmHg era similar HTL nos controles e hipertensos e aumentou com o tratamento nos dois subgrupos (metoprolol:1,730,2 a 1,900,2 p<0,001 e olmesartana:1,490,1 a 1,870,1 p<0,001). A CVC mxima HRPO era menor nos hipertensos: 0,30(0,22-0,39) que nos controles: 0,39(0,31-0,49) com p<0,001. Aps tratamento, aumentou para 0,41(0,29-0,51) com p<0,001. O aumento foi significativo apenas no grupo olmesartana (0,290,02 a 0,420,04 p<0,001). A diferena entre o tempo para atingir o fluxo mximo HRPO aumentou no grupo metoprolol aps tratamento 3,0 (-0,3 a 8,8) segundos versus olmesartana 0,4 (-2,1 a 2,4) segundos p<0,001. iontoforese, a rea sob a curva de fluxo (AUC) era similar nos grupos e aumentou com o tratamento, de 6087(3857-9137) para 7296(5577-10921) UP/s p=0,04. O VEGF e receptor no diferiam dos controles nem sofreram variaes. A concentrao de NO era maior nos hipertensos que nos controles: 64,9 (46,8-117,6) vs 50,7 (42-57,5) M/dl p=0,02 e no variou com tratamento. Em concluso, hipertensos de baixo risco tm menor densidade e menor recrutamento capilar e ambos aumentam com tratamento. Apresentam tambm disfuno endotelial microcirculatria que melhora com a terapia.
Resumo:
As leishmanioses esto entre as mais importantes endemias brasileiras e encontram-se entre as doenas mais negligenciadas no mundo. O arsenal teraputico disponvel restrito, txico, caro e em algumas situaes ineficazes, devido ao surgimento de cepas resistentes do parasito. No Brasil so registrados anualmente mais de 20 mil casos de leishmaniose tegumentar e a Leishmania braziliensis a principal espcie causadora das formas clnicas cutnea e mucosa. Estudos prvios mostraram que o flavonide quercetina tem ao teraputica pela via oral em camundongos infectados com L. amazonensis. O objetivo do presente estudo foi avaliar a atividade do flavonide quercetina sobre Leishmania braziliensis in vitro e in vivo usando hamsters como modelo experimental. O efeito antiparasitrio da quercetina foi avaliado sobre o crescimento in vitro das formas promastigotas e sobre amastigotas intracelulares em macrfagos peritoneais de camundongos e hamsters. O efeito da quercetina sobre macrfagos foi avaliado pela dosagem de xido nítrico pelo mtodo de Griess nos sobrenadantes das culturas e espcies reativas de oxignio (EROs) intracelular atravs do H2DCFDA. In vivo a atividade teraputica da quercetina foi estudada em grupos de hamsters infectados com L.braziliensis na pata, tratados com quercetina pela via oral (2mg/ 5X / semana) aps 7 dias de infeco durante oito semanas.A ao teraputica foi analisada atravs do tamanho da leso. A resposta imune foi avaliada durante o tratamento, pela resposta de hipersensibilidade tardia (DTH) ao antgeno total de L. braziliensis. A quercetina no apresentou atividade sobre o crescimento de promastigotas em cultura em nenhuma das concentraes testadas. Em amastigotas intracelulares quercetina apresentou ao dose dependente em macrfagos de camundongos e hamsters inibindo 45% e 54% e 25% e 48 %, respectivamente nas concentraes de 50 e 100g/ml aps 48h de tratamento. O pr - tratamento dos macrfagos de camundongos e hamsters com quercetina foi capaz de inibir o crescimento de amastigotas intracelulares em 57, 58 e 74% e 49, 50, e 58% respectivamente, nas concentraes de 25, 50 e 100 g/ml, apresentado ao inibitria significativa em todas as concentraes testadas. No houve alterao na produo de NO pelos macrfagos, entretanto macrfagos pr tratados com a quercetina por 24 horas antes da infeco apresentaram um aumento significativo na produo de EROs, quando comparados aos controles. Macrfagos tratados antes e depois da infeco, apresentaram diminuio da produo de EROs. In vivo, a quercetina foi capaz de controlar o tamanho das leses a partir da terceira semana de tratamento em relao ao controle no tratado ( P< 0,05). Os animais tratados com quercetina apresentaram maior resposta intradrmica aos antgenos de L. braziliensis. Esses dados mostram que a quercetina tem atividade sobre L. braziliensis, inibindo amastigotas intracelulares in vitro e sendo capaz de controlar o tamanho das leses em hamsters infectados quando administrada pela via oral.
Resumo:
A hipxia isquemia (HI) pr-natal uma das principais causas de mortalidade e doenas neurolgicas crnicas em neonatos, que podem apresentar dficits remanentes como: retardamento, paralisia cerebral, dificuldade de aprendizado ou epilepsia. Estes prejuzos, provavelmente, esto relacionados com o atraso no desenvolvimento neural, astrogliose e com a perda de neurnios e oligodendrcitos. Dficits funcionais e cognitivos esto associados degenerao de vias dopaminrgicas e de estruturas hipocampais. A enzima tirosina hidroxilase (TH) a enzima limitante na sntese de dopamina e seus nveis so alterados em eventos de HI. O xido nítrico (NO) um gs difusvel que atua modulando diferentes sistemas, participando de eventos como plasticidade sinptica e neuromodulao no sistema nervoso central e produzido em grandes quantidades em eventos de injria e inflamao, como o caso da HI. O presente estudo teve por objetivos avaliar, utilizando o modelo criado por Robinson e colaboradores em 2005, os efeitos da HI sobre o comportamento motor e avaliar o desenvolvimento de estruturas enceflicas relacionadas a este comportamento como a substncia negra (SN) e o complexo hipocampal. A HI foi induzida a partir do clampeamento das artrias uterinas da rata grvida, por 45 minutos no dcimo oitavo dia de gestao (grupo HI). Em um grupo de fmeas a cirurgia foi realizada, mas no houve clampeamento das artrias (grupo SHAM). A avaliao do comportamento motor foi realizada com os testes ROTAROD e de campo aberto em animais de 45 dias. Os encfalos foram processados histologicamente nas idades de P9, P16, P23 e P90, sendo ento realizada imunohistoqumica para TH e histoqumica para NADPH diaforase (NADPH-d), para avaliao do NO. Nossos resultados demonstraram reduo da imunorreatividade para a TH em corpos celulares na SN aos 16 dias no grupo HI e aumento na imunorreatividade das fibras na parte reticulada aos 23 dias, com a presena de corpos celulares imunorreativos nesta regio no grupo HI. Demonstramos tambm aumento do nmero de clulas marcadas para NADPH-d no giro dentado nos animais HI, nas idades analisadas, assim como aumento na intensidade de reao no corno de Ammon (CA1 e CA3) aos 9 dias no grupo HI, e posterior reduo nesta marcao aos 23 e 90dias neste mesmo grupo. Nos testes comportamentais, observamos diminuio da atividade motora no grupo HI com uma melhora do desempenho ao longo dos testes no ROTAROD, sem entretanto atingir o mesmo nvel do grupo SHAM. Os animais HI no apresentaram maior nvel de ansiedade em relao ao grupo SHAM, descartando a hiptese das alteraes observadas nos testes de motricidade estarem relacionadas a fatores ansiognicos. O modelo de clampeamento das artrias uterinas da fmea se mostrou uma ferramenta importante no estudo das alteraes decorrentes do evento de HI pr-natal, por produzir diversos resultados que so similares aos ocorridos em neonatos que passam por este evento.
