3 resultados para |Nested-PCR

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Corynebacterium pseudotuberculosis o agente etiolgico da linfadenite caseosa em ovinos e caprinos, uma doena infectocontagiosa crnica caracterizada por abscessos em linfonodos superficiais ou internos. Os animais acometidos podem apresentar leses internas ou externas, o que representa perdas econmicas graves na caprinovinocultura, como o comprometimento da produo de l em ovinos, deficincia reprodutiva, condenao da carne ou morte do animal. Uma vez estabelecida a infeco no rebanho, torna-se difcil sua erradicao. Com o objetivo de avaliar a variabilidade gentica intra-espcie em C. pseudotuberculosis, 31 isolados provenientes de seis municpios do Estado de Pernambuco, sendo 23 de caprinos e oito de ovinos, tiveram os seus DNAs genmicos extrados e analisados por reao em cadeia da polimerase e anlise de polimorfismos por tamanho de fragmentos de restrio (PCR-RFLP). Os locis escolhidos foram os genes pld e rpoB, cujas seqncias dos oligonucleotdeos amplificaram fragmentos de 924 e 447 pares de bases (pb), respectivamente. Os produtos da amplificao foram digeridos com as enzimas Pst I e Msp I (gene pld) e HpyCh4 IV e Msp I (gene rpoB). Os fragmentos de restrio foram corridos em gel de poliacrilamida a 15%, os quais foram corados com brometo de etdeo. Para o gene pld, digerido com a enzima Pst I, foram obtidos fragmentos de 566, 195, 91 e 72 pb; e com a enzima Msp I, fragmentos de 395, 369, 108 e 52 pb. O gene rpoB digerido com a enzima HpyCh4 IV apresentou fragmentos de 235, 126 e 86 pb; e com a enzima Msp I apresentou fragmentos de 222, 93, 78 e 54 pb. O padro de bandas obtido para os 31 isolados de C. pseudotuberculosis, analisados neste estudo, foi monomrfico, no havendo, portanto, polimorfismo entre os diferentes isolados, independentes da espcie hospedeira ou da rea geogrfica estudada, o que corrobora com o padro homogneo da infeco para a regio.

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A introduo de Trypanosoma vivax na Amrica Latina ocorreu por meio de gado zebu importado do Senegal para Guiana Francesa e Antilhas, e no Brasil, o primeiro registro desse hemoprotozorio foi feito no Estado do Par (SHAW; LAISON, 1972). At recentemente, a distribuio de T. vivax estava restrita regio Norte do pas. Entretanto, em 1995, Silva et al. (1995) diagnosticaram esse hemoparasito em um rebanho bovino do Pantanal do Estado de Mato Grosso, municpio de Pocon. Posteriormente, a tripanossomase por essa espcie de Trypanosoma foi diagnosticada em Mato Grosso do Sul, no Pantanal do municpio de Miranda e da Nhecolndia (PAIVA et al., 2000; DVILA et al., 2003). Neste trabalho, foram avaliadas PCRs anteriormente descritas por Masake et al. (1997) e Geysen et al. (2003) e uma outra que utiliza primers, que tem seqncias complementares ao gene que codifica a protena de transporte da glicose, desenvolvida no Laboratrio de Biologia Molecular da Embrapa Gado de Corte. O objetivo foi identificar a PCR de maior sensibilidade com relao ao exame parasitolgico e analisar a eficincia da extrao de DNA da camada de leuccitos adsorvidos em papel com a metodologia usual que est baseada no fenol/clorofrmio.