Doenças do metabolismo do colesterol: cromatografia de ester��is no diagn��stico de 25 casos em Portugal

Os ester��is desempenham um papel fundamental nos processos fisiol��gicos de praticamente todos os organismos vivos. O esterol mais abundante nos seres humanos �� o colesterol, o qual desempenha uma multiplicidade de fun����es desde a estrutural �� sinaliza����o. A extra����o e an��lise de ester��is no plasma �� complexa devido �� sua insolubilidade, sequestra����o dentro das lipoprote��nas e �� grande diferen��a entre cada tipo de esterol. Os autores apresentam a casu��stica referentes �� an��lise de 13 ester��is e fitoster��is em plasma e l��quido amni��tico.

Boletim Epidemiol��gico Observa����es: Vol. 5 (2016), N��mero Especial 7, Doenças Raras

N��mero Especial do Boletim Epidemiol��gico Observa����es dedicado ��s Doenças Raras. Observa����es �� uma publica����o cient��fica trimestral do INSA, IP, que visa contribuir para o conhecimento da sa��de da popula����o, os fatores que a influenciam, a decis��o e a interven����o em Sa��de P��blica, assim como a avalia����o do seu impacte na popula����o portuguesa. Atrav��s do acesso p��blico e gratuito a resultados cient��ficos gerados por atividades de observa����o em sa��de, monitoriza����o e vigil��ncia epidemiol��gica, �� dada especial aten����o �� dissemina����o r��pida de informa����o relevante para a resposta a temas de relevo para a sa��de da popula����o portuguesa, tendo como principal alvo todos os profissionais, investigadores e decisores intervenientes na ��rea da Sa��de P��blica em Portugal.

Next-generation sequencing of iron-metabolism related genes in Portuguese patients with iron overload: novel pathogenic genetic variants

Objective: In Southern European countries up to one-third of the patients with hereditary hemochromatosis (HH) do not present the common HFE risk genotype. In order to investigate the molecular basis of these cases we have designed a gene panel for rapid and simultaneous analysis of 6 HH-related genes (HFE, TFR2, HJV, HAMP, SLC40A1 and FTL) by next-generation sequencing (NGS). Materials and Methods: Eighty-eight iron overload Portuguese patients, negative for the common HFE mutations, were analysed. A TruSeq Custom Amplicon kit (TSCA, by Illumina) was designed in order to generate 97 amplicons covering exons, intron/exon junctions and UTRs of the mentioned genes with a cumulative target sequence of 12115bp. Amplicons were sequenced in the MiSeq instrument (IIlumina) using 250bp paired-end reads. Sequences were aligned against human genome reference hg19 using alignment and variant caller algorithms in the MiSeq reporter software. Novel variants were validated by Sanger sequencing and their pathogenic significance were assessed by in silico studies. Results: We found a total of 55 different genetic variants. These include novel pathogenic missense and splicing variants (in HFE and TFR2), a very rare variant in IRE of FTL, a variant that originates a novel translation initiation codon in the HAMP gene, among others. Conclusion: The merging of TSCA methodology and NGS technology appears to be an appropriate tool for simultaneous and fast analysis of HH-related genes in a large number of samples. However, establishing the clinical relevance of NGS-detected variants for HH development remains a hard-working task, requiring further functional studies.

Ferroportin Disease (Haemochromatosis-type IV): a case report

Introdution: Haemochromatosis-type IV, the ferroportin disease, is characterized by an autosomal-dominant transmission and early iron accumulation in macrophages. It is caused by mutations in the transmembrane iron exporter protein ferroportin1 (SLC40A1 gene). In form A (classic), ferroportin loss of function mutants are unable to export iron from cells leading to cellular iron accumulation with decreased availability of iron for serum transferrin (TS). We present a Portuguese rare clinical case of HH-IV. Materials and Methods: A 41-year-old woman with hyperferritinemia and normal TS. Causes of hyperferritinemia (inflammation, chronic alcohol consumption, metabolic syndrome, cell necrosis, non-alcoholic fatty liver disease and aceruloplasminemia) were assessed. Liver iron, evaluated by magnetic resonance imaging (MRI) was carried out. Screening for mutation in HFE and SCL40A1 genes were performed by Sanger sequencing. Baseline: Ferritin:708ng/ml; TS: 27%; MRI:85��mol/g; Hb:13,6g/dl. Therapy: weekly 450ml Therapeutic Phlebotomies (TP) until ferritin���50ng/ml. Results: Hyperferritinemia comorbidities and common genetic mutations for haemochromatosis were negative. However, sequencing of the patient SLC40A1 gene has revealed the presence in heterozygosity of the variant c.238G>A; p.Gly80Ser. Due to low tolerance to TP, we adopted smaller phlebotomies every three weeks. Conclusion: This patient has a rare autosomal-dominant Ferroportin disease due to a mutated ferroportin which is predicted to be defective in iron cellular export. In agreement, she presents hyperferritinemia, with normal TS and liver iron overload. The genotype/phenotype association allowed to diagnosis this rare FD case. Although a mild form A, we decided to start TP. Her father also has been treated for iron overload.

A desregula����o da homeostase do ferro: base molecular e patologias associadas

A homeostase do ferro requer um rigoroso processo de regula����o, uma vez que este �� um elemento essencial para alguns dos mecanismos celulares b��sicos mas, quando se encontra em excesso, origina profundos danos celulares e falha de ��rg��os. Dado que o organismo humano n��o possui um mecanismo ativo de excre����o de ferro, �� essencial que a sua homeostase seja estabelecida atrav��s de uma estreita comunica����o entre os locais de absor����o, utiliza����o e armazenamento. Esta interliga����o �� conseguida, essencialmente, atrav��s da a����o de uma hormona circulante, a hepcidina. A hepcidina �� sintetizada ao n��vel dos hepat��citos do f��gado, sendo a sua express��o aumentada pelos n��veis de ferro e inflama����o e suprimida pela eritropoiese e hipoxia. A hepcidina regula negativamente a absor����o duodenal do ferro proveniente da alimenta����o, a liberta����o pelos macr��fagos do ferro resultante da fagocitose dos gl��bulos vermelhos senescentes, assim como a liberta����o do ferro armazenado nos hepat��citos. A hemocromatose heredit��tria (HH) do tipo 1 �� uma doen��a de transmiss��o autoss��mica recessiva associada a muta����es no gene HFE (p.Cys282Tyr e p.His63Asp). �� a patologia humana mais comum de sobrecarga prim��ria em ferro, apresenta penetr��ncia incompleta, e �� um dos dist��rbios gen��ticos mais frequentes em caucasianos de ascend��ncia Norte-Europeia. Na hemocromatose, apesar de haver um excesso de ferro no organismo, este facto n��o �� refletido no n��vel de express��o da hormona hepcidina (cujos n��veis deveriam aumentar). Pelo contr��rio, o n��vel de express��o da hepcidina encontra-se diminu��do o que perpetua a constante absor����o do ferro a n��vel duodenal. Os sintomas associados �� doen��a iniciam-se geralmente na meia-idade e come��am por consistir em sintomas gerais de fadiga e dores articulares. No entanto, a progressiva acumula����o do ferro em v��rios ��rg��os (tais como f��gado, cora����o e p��ncreas) provoca a�� graves danos, tais como cirrose, carcinoma hepatocelular, cardiomiopatias e diabetes. Para al��m da HH do tipo 1, podem ocorrer outros tipos de hemocromatose por muta����es noutros genes relacionados com o metabolismo do ferro (tais como TFR2, HJV, HAMP, SLC40A1, etc). Muta����es em genes como HAMP e HJV associam-se a hemocromatoses mais graves, de in��cio ainda na juventude (hemocromatose juvenil). A implementa����o no nosso laborat��rio da nova metodologia de Next-Generation Sequencing permitiu-nos realizar a pesquisa de variantes simultaneamente em 6 genes relacionados com o metabolismo do ferro, em 88 doentes com fen��tipo de hemocromatose heredit��ria n��o-cl��ssica. Foram identificadas 54 variantes diferentes sendo algumas delas novas. Estudos in silico e estudos funcionais in vitro (em linhas celulares) permitiram-nos comprovar a patogenicidade de algumas das variantes novas e compreender os mecanismos moleculares subjacentes ao desenvolvimento da sobrecarga em ferro. Pelo contr��rio, no lado oposto do espetro das patologias relacionadas com o ferro, encontram-se as anemias por falta de ferro (anemias ferrop��nicas). A Organiza����o Mundial de Sa��de define anemia quando os n��veis de hemoglobina no sangue s��o menores do que 12 g/dL na Mulher e 13 g/dL no Homem. A hemoglobina �� a prote��na existente nos gl��bulos vermelhos do sangue, respons��vel pelo transporte de oxig��nio no organismo, e cuja mol��cula �� um tetr��mero formado por 4 cadeias polipept��dicas (as globinas) e 4 grupos heme que cont��m 4 ��tomos de ferro. A falta de ferro impede que se formem as mol��culas de hemoglobina a n��veis normais em cerca de 20% da popula����o portuguesa e isso �� devido a car��ncias alimentares ou a dificuldades na absor����o do ferro proveniente da alimenta����o. Entre os fatores gen��ticos moduladores desta ��ltima situa����o parecem estar algumas variantes polim��rficas no gene TMPRSS6, codificante da prote��na Matriptase-2, um dos agentes envolvidos na regula����o da express��o da hepcidina. Por outro lado, muta����es neste gene d��o origem a anemias ferrop��nicas graves, refrat��rias ao tratamento oral com ferro (Iron Refractory Iron Deficiency Anaemia - IRIDA). As Hemoglobinopatias s��o outro tipo de anemia heredit��ria. Estas n��o est��o relacionadas com o d��fice de ferro mas sim com defeitos nas cadeias glob��nicas, constituintes da hemoglobina (��2��2). As hemoglobinopatias que est��o relacionadas com um problema quantitativo, ou seja quando h�� aus��ncia ou diminui����o de s��ntese de uma cadeia glob��nica, denominam-se talass��mias: beta-talass��mia, alfa-talass��mia, delta-talass��mia, etc, consoante o gene afetado. Por outro lado, quando o problema �� de car��cter qualitativo, ou seja ocorre a s��ntese de uma cadeia glob��nica estruturalmente an��mala, esta �� denominada uma variante de hemoglobina. Enquadra-se neste ��ltimo grupo a Anemia das C��lulas Falciformes ou Drepanocitose. As hemoglobinopatias s��o das patologias gen��ticas mais frequentes no mundo, sendo que nalguns locais s��o um grave problema de sa��de p��blica. Em Portugal foram realizados estudos epidemiol��gicos que permitiram determinar a frequ��ncia de portadores na popula����o e foi implementado um programa de preven����o.

Diminui����o da express��o dos genes APP e CP em doentes de Alzheimer sugere altera����o da exporta����o de ferro celular nesta dem��ncia

Recentemente tem-se assistido a um acumular de evid��ncia sugerindo a implica����o de uma desregula����o do metabolismo do ferro (Fe) na fisiopatologia da doen��a de Alzheimer (DA). Neste trabalho, pretendemos esclarecer melhor os mecanismos moleculares subjacentes �� homeostasia deste metal na DA, particularmente ao n��vel do efluxo celular. Assim, mediu-se em c��lulas mononucleares do sangue perif��rico de 73 doentes com DA e 74 controlos a express��o de genes diretamente envolvidos na regula����o e exporta����o celular de Fe, utilizando a t��cnica de PCR quantitativo. Os resultados mostraram uma diminui����o significativa na express��o dos genes aconitase (ACO1; P=0,007); ceruloplasmina (CP; P<0,001) e prote��na precursora de beta amil��ide (APP; P=0,006) em doentes com DA comparativamente com os volunt��rios saud��veis. Estas observa����es apontam para uma diminui����o significativa da express��o dos genes associados com a exporta����o de Fe celular mediada pela ferroportina na DA. Assim, o presente estudo refor��a resultados anteriores que mostram altera����es no metabolismo do Fe e podem estar na origem da reten����o intracelular deste metal e aumento de stress oxidativo carater��sticos desta patologia.

Doenças cr��nicas e presentismo no local de trabalho: resultados de dois estudos sobre as rela����es entre o burnout, mobbing, bem-estar e presentismo

S��o apresentados os resultados de dois estudos realizados na mesma popula����o. O estudo de caso-controlo aninhado num estudo transversal analisa os determinantes do bem-estar em contexto laboral. O segundo usa uma abordagem de modelos de equa����es estruturais para analisar as interrela����es entre o bullying no trabalho, o burnout, o bem-estar e o presentismo.

Boas Pr��ticas no dom��nio da Promo����o da Sa��de e Preven����o de Doenças Cr��nicas na Europa: a experi��ncia atual do Projeto JA-CHRODIS

Objetivos do projeto: promover e facilitar um processo de interc��mbio e transfer��ncia de boas pr��ticas entre os pa��ses e regi��es da Europa; construir o caminho para a realiza����o de melhores pol��ticas de sa��de e interven����es para melhorar o bem-estar dos cidad��os.

Transplanta����o - Hist��ria e limites - Imunogen��tica, Doenças cr��nicas e Transplante

Enquadramento hist��rico e limites no dom��nio da transplanta����o de ��rg��o e tecidos humanos.

Promo����o da Sa��de em Doenças N��o Transmiss��veis: Projeto JA-Chrodis

Promo����o da Sa��de em Doenças N��o Transmiss��veis no ��mbito da A����o conjunta europeia sobre Doenças Cr��nicas e Promo����o Envelhecimento Saud��vel em todo o Ciclo de Vida, na qual Portugal participa.

Next-generation sequencing of hereditary hemochromatosis-related genes: novel likely pathogenic variants found in the Portuguese population

Hereditary hemochromatosis (HH) is an autosomal recessive disorder characterized by excessive iron absorption resulting in pathologically increased body iron stores. It is typically associated with common HFE gene mutation (p.Cys282Tyr and p.His63Asp). However, in Southern European populations up to one third of HH patients do not carry the risk genotypes. This study aimed to explore the use of next-generation sequencing (NGS) technology to analyse a panel of iron metabolism-related genes (HFE, TFR2, HJV, HAMP, SLC40A1, and FTL) in 87 non-classic HH Portuguese patients. A total of 1241 genetic alterations were detected corresponding to 53 different variants, 13 of which were not described in the available public databases. Among them, ���ve were predicted to be potentially pathogenic: three novel mutations in TFR2 [two missense (p.Leu750Pro and p.Ala777Val) and one intronic splicing mutation (c.967-1GNC)], one missense mutation in HFE (p.Tyr230Cys), and one mutation in the 5���-UTR of HAMP gene(c.-25GNA). The results reported here illustrate the usefulness of NGS for targeted iron metabolism-related gene panels, as a likely cost-effective approach for molecular genetics diagnosis of non-classic HH patients. Simultaneously, it has contributed to the knowledge of the pathophysiology of those rare iron metabolism-related disorders.