Estudo da função da proteína Mob1 na estrutura dos centrossomas

Dissertação de Mestrado, Oncobiologia - Mecanismos Moleculares do Cancro, Departamento de Ciências Biomédicas e Medicina, Universidade do Algarve, 2016

A proteína hsMob1 faz parte de uma família reguladora de cinases altamente conservada de levedura até ao Homem. Em termos de função a proteína hsMob1 parece ser a mais distante do resto da família, pois as proteínas da sua família regulam a mitose e citocinese, enquanto a proteína hsMob1 está implicada em processos de tráfego vesicular. Resultados preliminares do laboratório apontam uma função mitótica à proteína hsMob1, mais concretamente como sendo importante para estrutura dos centrossomas e fuso mitótico. Esses resultados também apontam para a função do hsMob1 na localização da CENP-A. A proteína CENP-A é a proteína que dá identidade ao centrómero e a partir da qual o cinetócoro se monta. Para perceber melhor a função do hsMob1, realizaram-se ensaios de RNAi e imunofluorescência para estudar os fenótipos e possíveis proteínas cuja localização poderia estar alterada. Antes do estudo dos fenótipos realizou-se uma experiência de localização, a qual revelou que a proteína é centrossomal ao longo do ciclo celular. Os fenótipos mitóticos observados sugerem que a proteína hsMob1 é importante para o alinhamento dos cromossomas, para a estrutura do fuso mitótico e para a localização da γ-tubulina nos centrossomas. A proteína hsMob1 não parece importante para a localização de proteínas Plk1 e Aurora B, que estão envolvidas na correção de erros entre os cinetócoros e microtúbulos evitando assim cromossomas desalinhados. Por outro lado, a proteína hsMob1 parece afetar a proteína centromérica CENP-C, que é uma proteína essencial na estabilização da CENP-A e importante para o recrutamento de outras proteínas que constituem o cinetócoro. Estes resultados sugerem que a proteína é importante para a normal progressão da mitose através do papel que desempenham na estrutura dos centrossomas e na possível montagem do cinetócoro.

The hsMob1 protein belongs to a family of kinase regulators that is highly conserved family of kinases from yeast to man. In terms of function hsMob1 protein seems to be the most divergent from the rest of the family, because this family of proteins regulates mitosis and cytokinesis, while hsMob1 is implicated in vesicle traffic processes. Preliminary laboratory results point to a mitotic function of hsMob1 protein, specifically as being important to the structure of the centrosome and the mitotic spindle. These results also point to a role of hsMob1 in the location of the CENP-A. The CENP-A protein is a protein that gives the identity to the centromere and determines the starting point from which the kinetochore is assemble. To understand better the function of hsMob1 RNAi assays and immunofluorescence were held to study the phenotypes and possible proteins which location could be altered. A location experiment revealed that the protein is centrossomal throughout the cell cycle. The mitotic phenotypes observed suggest that the hsMob1 protein is important for the alignment of chromosomes, the structure of mitotic spindle and the location of gamma-tubulin to centrosomes. The hsMob1 protein does not appear to be important to the location of Plk1 and Aurora B proteins, which are involved in the error correction between the kinetochores and microtubule, avoiding misaligned chromosomes. Furthermore, the protein hsMob1 appears to affect the centromeric protein CENP-C, which is a protein responsible for the stabilization of CENP-A and important for the recruitment of other proteins that constitute the kinetochore. These results suggest that the protein is important for normal progression of the cell cycle, through the role that hsMob1 play in the structure of centrossomes and possible assembly of the kinetochore.