Estudo do papel desempenhado pelo heterotetrâmero de anexina A2 em células de cancro da mama hipóxicas

Dissertação de Mestrado, Biologia Molecular e Microbiana, Faculdade de Ciências e Tecnologia, Universidade do Algarve, 2014

A principal característica que define uma célula cancerígena é a sua capacidade de escapar às barreiras impostas pelas células vizinhas invadindo os tecidos circundantes e estabelecendo metástases em locais distantes/ distintos do tumor primário. Após o crescimento inicial do tumor, este passa por uma fase em que ocorre um stress hipóxico o que conduz a alterações no seu metabolismo e a aquisição de características mais invasivas e metastáticas. A plasmina é uma das principais protéases de serina envolvida na fibrinólise, degradação da matriz extracelular, invasão e angiogénese. O heterotetrâmero de anexina A2 (AIIt) é um conhecido recetor de plasminogénio, responsável pela ativação de plasmina na superfície de diversos tipos de células. O papel desempenhado pelo AIIt em células cancerígenas durante a hipóxia ainda não foi investigado. Com este trabalho pretendeu-se contribuir para o esclarecimento do papel desempenhado pelo AIIt na promoção da ativação de plasmina à superfície de células de cancro da mama hipóxicas. Neste estudo foram comparados os níveis totais e extracelulares do AIIt em condições de normóxia versus hipóxia em duas linhas celulares distintas (MCF7 e MDA MB 231). De seguida, foram analisados a transcrição dos genes da anexina A2 e S100A10 por qRT-PCR de forma a esclarecer o tipo de regulação que levou ao aumento de expressão de S100A10 durante a hipóxia. Depois disso, investigou-se a capacidade de ativação da plasmina pelas células de cancro da mama hipóxicas na presença ou ausência de S100A10 (subunidade do AIIt que interage diretamente com o plasminogénio), utilizando as linhas celulares com o knockdown para o S100A10. Os resultados demonstraram que quando expostas a condições de hipóxia ocorre o aumento da transcrição de S100A10 e translocação de AIIt para a superfície celular em ambas as linhas celulares. Os ensaios de ativação da plasmina não mostraram um aumento de produção de plasmina em células do cancro da mama hipóxicas. No entanto, estudos futuros poderão vir a esclarecer os resultados obtidos.

The defining characteristic of a cancer cell is its ability to escape the constraints imposed by the neighbouring cells, invade the surrounding tissue and metastasize to distant sites. Early in the development of the tumour, cancer cells have to adapt to survive in a hypoxic environment due to the very rapid and uncontrolled cell growth in conjunction with a poor blood supply that leads to lack of both nutrients and oxygen. The hypoxia response leads to the activation of multiple cellular signalling pathways that promote cancer cell invasion and metastasis. The serine protease, plasmin is a key protease that participates in fibrinolysis, extracellular matrix degradation, invasion and angiogenesis. Annexin A2 heterotetramer (AIIt) is an important plasminogen receptor that contributes significantly to plasmin activation at the surface of a number of different cell types. Nevertheless, its contribution during tumor hypoxia has not been investigated. With this work I have proposed to investigate the role played by AIIt in the activation of plasmin at the surface of hypoxic breast cancer cells, due to its function as a plasminogen receptor. For this study I have used MCF7 and MDA MB 231 cell lines and compared the levels of total and cell surface AIIt in normoxic versus hypoxic conditions. I have also analysed annexin A2 and S100A10 transcription by qRT-PCR in order to clarify the type of regulation leading to increased expression of S100A10 during hypoxia. After that I have also investigated the capacity of hypoxic breast cancer cells to activate plasmin in the presence or absence of AIIt, using the S100A10 knockdown cell lines. The results have shown that when exposed to hypoxia there is an increase in transcription of S100A10 and cell surface translocation of AIIt in both cell lines. Plasmin assays did not show an increase in plasmin activation in hypoxic breast cancer cells. However, future studies might allow clarifying the results obtained.