Expressão e regulação do ligando RANK na leucemia de células T

Dissertação de Mestrado, Oncobiologia, Departamento de Ciências Biomédicas e Medicina, Universidade do Algarve, 2016

A leucemia linfoblástica aguda de células T (LLA-T) é uma doença maligna agressiva, afetando principalmente crianças de 2 até 5 anos de idade. Esta doença manifesta-se no sangue e na medula óssea, podendo afetar vários órgãos do corpo, sendo fatal, na falta de um diagnóstico precoce e terapia apropriada. O RANKL é uma protéina membranar ou secretada que se demontrou ter capacidade estimuladora de metástases, através do aumento da motilidade celular de alguns tipos de células cancerosas. Este ligando tem a capacidade de ativar o recetor RANK e é expresso principalmente em timócitos e células T ativadas. O objetivo deste estudo foi de compreender o envolvimento da via de sinalização RANK/RANKL, na LLA-T. A estirpe de murganhos transgénicos TEL-JAK2, que desenvolve espontaneamente leucemia semelhante à LLA-T, foi utilizada para este estudo. Ao realizar RT-PCR quantitativo confirmámos que o gene que codifica a proteína RANKL é mais expresso em células leucémicas de murganhos transgénicos TEL-JAK2 que em timócitos normais. Para além disso, a análise da expressão do RANKL, por citometria de fluxo, em timócitos leucémicos TEL-JAK2, mostrou ser mais elevada no interior das células do que na sua superfície. Contrariamente, a linha celular de linfoma tímico EL4.2 apresentou expressão elevada de RANKL à superfície. A análise por citometria de fluxo a células colocadas em cultura com compostos indutores da via de sinalização do recetor de células T (TCR), mostrou que o forbol 12-miristato 13-acetato (PMA) e a Ionomicina em conjunto induzem um aumento da expressão do RANKL, tanto no interior como à superfície de células leucémicas TEL-JAK2, assim como à superfície de células EL4.2. A utilização de um inibidor da quinase IKK e o inibidor de transcrição, Actinomicina D, levaram à diminuição da indução do RANKL causada pelo tratamento com PMA e Ionomicina em células leucémicas TEL-JAK2. Neste estudo foram usados murganhos knockout condicionais para o gene Rank. Descobrimos que quando o recetor RANK está ausente de células epiteliais do timo, a expressão do RANKL aumenta em timócitos normais. Contudo, quando células leucémicas foram injetadas nesta estirpe, não se verificaram alterações significativas na expressão do RANKL naquelas células. Com estas experiências verificámos que a via de sinalização RANK/RANKL pode potencialmente contribuir para o desenvolvimento da LLA-T. No entanto, é necessário compreender como a possível interferência com o par recetor/ligando pode afetar o desenvolvimento da LLA-T antes de considerar a utilização desta via como potencial alvo terapêutico.