A contribuição de Cited2 na reprogramação de fibroblastos primários de ratinho em células pluripotentes

Dissertação de Mestrado, Engenharia Biológica, , 2016

A senescência celular continua a ser um dos maiores obstáculos quando se pretende obter células estaminais através da reprogramação celular, uma vez que reduz a eficiência do seu processo. Em seres humanos, a maioria das células que se encontram disponíveis para colheita, tais como fibroblastos provenientes da pele, provavelmente já passaram por várias divisões celulares e poderão já estar senescentes. Portanto, é crucial descobrir novas maneiras de ultrapassar as limitações atuais da reprogramação associadas à senescência. Já foi descrito que CITED2 inibe a expressão de p16, p19 e p21, genes associados à senescência celular. Também foi descrito que CITED2 promove a expressão dos principais fatores de transcrição envolvidos na manutenção da pluripotência em células estaminais embrionárias, tais como Nanog, Klf4 e Tbx3. Estas observações fazem de CITED2 um bom candidato para pesquisa relacionada à reprogramação e senescência celular no geral. O principal objetivo deste trabalho foi verificar se a sobrexpressão de Cited2, associada à sobrexpressão de Klf4, Oct4, Sox2 e c-Myc, melhora a eficiência e a qualidade da reprogramação de fibroblastos embrionários primários e pré-senescentes de ratinho. Foi possível mostrar que as células onde foi sobrexpresso Cited2 foram reprogramadas com sucesso, deram origem a um maior número de colónias de iPSC a partir do dia 14 e os seus níveis endógenos de Oct4, Nanog, Sox2 e Rex1 foram mais homogéneos entre amostras comparativamente aos controlos. Também foi possível detetar uma pequena percentagem de células controlo que não conseguiu reprogramar com sucesso em iPSC, expressando genes quer de células pluripotentes naïve ou primed. A sobrexpressão de Cited2 nestas células que falharam a reprogramação não conseguiu fazer com que estas conseguissem reprogramar com sucesso. Este trabalho indica que a utilização de Cited2 poderá ser uma boa estratégia para ultrapassar alguns obstáculos associados à reprogramação celular.