Estudo da proteína humana centrossomal TBCCD1 em condições de stress oxidativo causado por H2O2 em estado estacionário

Dissertação para obtenção do grau de Mestre no Instituto Superior de Ciências da Saúde Egas Moniz

Nos últimos anos têm sido realizados inúmeros estudos sobre espécies reactivas de oxigénio (EROs), devido ao seu envolvimento em processos como o cancro e envelhecimento. Contudo, as EROs são subprodutos normais do metabolismo celular, podendo também ter origem em fontes exógenas à célula. As ERO, como o peróxido de hidrogénio (H2O2), são espécies muito instáveis e quimicamente bastante reactivas, com capacidade de causar vários danos graves nas diferentes biomoléculas. O H2O2 é in vivo um oxidante suave contudo, devido à sua permeabilidade através das membranas celulares tem sido alvo de grande interesse, estando implicado em processos de desencadeamento e modulação de vias de sinalização celulares. O interesse de estudar o H2O2 como um possível regulador de algumas proteínas centrossomais surgiu através de um estudo retrospectivo, em que foi verificada a associação entre altos níveis de H2O2, bolus addiction, e a hiperamplificação dos centrossomas e formação de fusos mitóticos multipolares. Posto isto, como consequência foi verificado um aumento de células multinucleadas, este que por sua vez está associado a vários processos patológicos. Face a estes resultados, propôs-se como hipótese que o H2O2 em baixas concentrações, semelhantes às encontradas fisiologicamente, poderia modelar os níveis de algumas proteínas centrossomais, como o TBCCD1 (de TBCC-domain containing protein 1), a γ-tubulina e a pericentrina. O TBCCD1 é um potencial regulador do posicionamento do centrossoma e por consequência da organização interna da célula. A γ-tubulina e a pericentrina desempenham funções específicas ao nível da nucleação dos microtúbulos. Neste estudo, foram usadas duas linhagens celulares (hTERT- RPE-1 e HeLa) as quais foram expostas, através do método de titulação de H2O2 em estado estacionário a uma concentração constante de 10 e 25μM de H2O2 , respectivamente, durante um determinado período de tempo. Os níveis das proteínas em estudo foram analisados por Western blotting. Como resultados, não foram identificadas alterações significativas nos níveis da proteína TBCCD1, em ambas as linhagens, e na γ-tubulina em h-TERT-RPE-1. No caso da pericentrina (hTERT- RPE-1 e HeLa), foi observada uma diminuição dos níveis proteicos, podendo estar relacionado com uma diminuição da capacidade nucleadora do centrossoma, uma vez que a pericentrina recruta os complexos γ- TuRC para esta estrutura.