Desacoplamento mitocondrial e estresse oxidativo em espermatozoides suínos resfriados

A espécie suína (Sus scropha domesticus) possui relevância nos âmbitos da pesquisa, da xenotransplantação e da produção de carnes. O resfriamento de sêmen é capaz de reduzir o metabolismo celular e possibilitar o armazenamento dos gametas, sendo auxiliar durante práticas de reprodução assistida. Contudo, os espermatozoides suínos são sensíveis ao estresse oxidativo gerado durante o processo de resfriamento. O 2,4 dinitrofenol (DNP) poderia gerar o desacoplamento mitocondrial reduzindo o estresse oxidativo e prolongando indiretamente a viabilidade e capacidade fertilizante de espermatozoides suínos resfriados pela diminuição de espécies reativas de oxigênio. O objetivo do presente estudo foi avaliar os efeitos do desacoplamento mitocondrial induzido pelo DNP e os efeitos desse desacoplamento sobre as de fluidez e integridade de membrana plasmática, funcionalidade de mitocôndria, motilidade espermática, além dos parâmetros de estresse oxidativo de lipoperoxidação e produção de espécies reativas de oxigênio, durante o resfriamento a 17 °C de 24 até 96 horas. Utilizou-se 22 ejaculados expostos ao diluente Betsville Thawing Solution (BTS) (controle) e ao mesmo diluente acrescido das concentrações de 0,01 µM (T1); 0,1 µM (T2); 1,0 µM (T3) e 10 µM (T4) de DNP. Através do teste de Shapiro-Wilk as variáveis que não apresentaram normalidade, tiveram suas médias comparadas pelo teste de KruskalWallis. As análises estatísticas demonstraram que o DNP não se diferiu do controle independente do tempo de armazenamento, para nenhuma das variáveis analisadas. Possivelmente, a falta de ação sobre as mitocôndrias, ou seja, a não promoção do desacoplamento mitocondrial foi o motivo principal para a falta dos efeitos do DNP. Acredita-se que a utilização do DNP em temperaturas mais elevadas por estas promoverem aumento da fluidez de membrana e/ou o aumento das concentrações de DNP poderiam gerar efeitos significativos sobre as mitocôndrias e demais variáveis analisadas. Finalmente, o DNP nas concentrações testadas não se diferiu do controle em todas as variáveis analisadas independente do tempo de armazenamento.

The swine spermatozoa are sensitive to oxidative stress generated during the cooling process. 2, 4 dinitrophenol (DNP) could generate mitochondrial uncoupling, reducing oxidative stress and thus, acting indirectly prolonging the viability and the fertilizing capacity of swine spermatozoa cooled. The aim of this study was to evaluate the effects of uncoupling mitochondrial induced by DNP and the effects of this uncoupling on the variables of fluidity and integrity of plasma membrane, mitochondrial functionality, sperm motility, beyond of oxidative stress parameters of lipid peroxidation and production of reactive oxygen species, in swine spermatozoa during cooling to 17°C from 24 up 96 hours. Was used 22 ejaculates exposed to extender Betsville Thawing Solution (BTS) (control) and at the same diluent increased concentrations of 0.01 mM (T1), 0.1 mM (T2), 1.0 mM (T3) and 10 mM (T4) of DNP. The Shapiro Wilk test indicated absence of normality, soon means were compared by the Kruskal - Wallis test. Statistical analysis showed that DNP does not differ from the control independent of storage time, for any of the variables. Possibly, the lack of action on the mitochondria, in other words, the inability to dissipate the proton gradient generated the inability of DNP to reflect on the remaining variables. It is believed that the DNP could produce significant effects if used in higher temperatures, due to increased membrane fluidity and/or the use of higher concentrations. Finally, the DNP in concentrations tested did not differ from control for all variables independent of storage time.