Desenvolvimento de métodos para quantificação de benzilpenicilina em medicamentos veterinários e seus resíduos em leite bovino e caprino por UFLC-DAD

The Benzylpenicillin (PENG) have been as the active ingredient in veterinary medicinal products, to increase productivity, due to its therapeutic properties. However, one of unfortunate quality and used indiscriminately, resulting in residues in foods exposed to human consumption, especially in milk that is essential to the diet of children and the ageing. Thus, it is indispensable to develop new methods able to detect this waste food, at levels that are toxic to human health, in order to contribute to the food security of consumers and collaborate with regulatory agencies in an efficient inspection. In this work, were developed methods for the quality control of veterinary drugs based on Benzylpenicillin (PENG) that are used in livestock production. Additionally, were validated methodologies for identifying and quantifying the antibiotic residues in milk bovine and caprine. For this, the analytical control was performed two steps. At first, the groups of samples of medicinal products I, II, III, IV and V, individually, were characterized by medium infrared spectroscopy (4000 – 600 cm-1). Besides, 37 samples, distributed in these groups, were analyzed by spectroscopy in the ultraviolet and near infrared region (UV VIS NIR) and Ultra Fast Liquid Chromatograph coupled to linear arrangement photodiodes (UFLC-DAD). The results of the characterization indicated similarities, between PENG and reference standard samples, primarily in regions of 1818 to 1724 cm-1 of ν C=O that shows primary amides features of PENG. The method by UFLC-DAD presented R on 0.9991. LOD of 7.384 × 10-4 μg mL-1. LOQ of 2.049 × 10-3 μg mL-1. The analysis shows that 62.16% the samples presented purity ≥ 81.21%. The method by spectroscopy in the UV VIS NIR presented medium error ≤ 8 – 12% between the reference and experimental criteria, indicating is a secure choice for rapid determination of PENG. In the second stage, was acquiring a method for the extraction and isolation of PENG by the addition of buffer McIlvaine, used for precipitation of proteins total, at pH 4.0. The results showed excellent recovery values PENG, being close to 92.05% of samples of bovine milk (method 1). While samples of milk goats (method 2) the recovery of PENG were 95.83%. The methods for UFLC-DAD have been validated in accordance with the maximum residue limit (LMR) of 4 μg Kg-1 standardized by CAC/GL16. Validation of the method 1 indicated R by 0.9975. LOD of 7.246 × 10-4 μg mL-1. LOQ de 2.196 × 10-3 μg mL-1. The application of the method 1 showed that 12% the samples presented concentration of residues of PENG > LMR. The method 2 indicated R by 0.9995. LOD 8.251 × 10-4 μg mL-1. LOQ de 2.5270 × 10-3 μg mL-1. The application of the method showed that 15% of the samples were above the tolerable. The comparative analysis between the methods pointed better validation for LCP samples, because the reduction of the matrix effect, on this account the tcalculs < ttable, caused by the increase of recovery of the PENG. In this mode, all the operations developed to deliver simplicity, speed, selectivity, reduced analysis time and reagent use and toxic solvents, particularly if compared to the established methodologies.

A Benzilpenicilina (PENG) é usada como princípio ativo em medicamentos veterinários, para aumentara produtividade pecuária, devido suas propriedades terapêuticas. Este antibiótico é indicado para controle de infecções em animais produtores de alimentos, como bovinos e caprinos. Porém, quando são de má qualidade e utilizados indiscriminadamente, resultam em resíduos nos alimentos expostos ao consumo humano, principalmente, no leite que é essencial para dieta das populações de crianças e idosos. Assim, é imprescindível que se desenvolvam novos métodos capazes de detectar os resíduos nesse alimento, em níveis que são nefastos a saúde humana, a fim de contribuir com a segurança alimentar dos consumidores e colaborar com as agências reguladoras numa fiscalização eficiente. Este trabalho oferece um novo método, para determinaçãode resíduos dos antibióticos. Aqui, mostramos duas etapas para controle analítico, na primeira é constatado, pelas medidas das propriedades físico-químicas, a identidade e qualidade desses fármacos, comercialmente distribuídos. Na segunda etapa, foi desenvolvido e validado um novo método para extração, identificação e quantificação de PENG utilizando Cromatografia liquida ultra-rápida acoplada a arranjo linear de fotodiodos (UFLC-DAD). Este método foi aplicado em amostras de leite ultrapasterizado bovino (método 1) e caprino (método 2). O método 1 apresentou limite de detecção (LD) 7,246 × 10-4µg mL-1. Limite de quantificação (LQ) 2,196 × 10-3µg mL-1. O método 2 apresentou LD de 8,251 × 10-4 µg mL-1. LQ de 2,5270 × 10-3 µg mL-1. Os resultados mostraram concordância com o limite máximo de resíduos (LMR)de 4 × 10-3 µg mL-1em 88% para leite bovino e 85% para leite caprino. Os métodos desenvolvidos se apresentam como uma excelente ferramenta a ser utilizada na investigação dos resíduos de antibióticos em leite. Sobretudo porque os procedimentos desenvolvidos apresentaram simplicidade, seletividade, reduzido tempo de análise e consumo de reagentes e solventes tóxicos, se comparados às metodologias já estabelecidas.